一種利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物防治領(lǐng)域中抑制病原菌的方法，尤其涉及一種利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，包括：一、制備PDA平板，即將融化的PDA培養(yǎng)基冷卻倒板，直至培養(yǎng)基凝固；二、用無菌的打孔器在待測灰葡萄孢菌平板上取菌塊，并放入步驟一中的PDA平板內(nèi)；三、將無菌的濾紙片放在PDA平板蓋子的內(nèi)表面，在濾紙片上加入薰衣草精油；四、蓋好所述PDA平板的蓋子并將其封口，將所述PDA平板倒置，放入生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，觀察測量菌落直徑并計(jì)算抑菌效果；本發(fā)明提供的薰衣草精油熏蒸法處理灰葡萄孢菌，以低劑量，達(dá)到對(duì)薰衣草精油更有效的利用，同時(shí)降低果蔬采摘后由病原菌造成的損失；該發(fā)明操作簡單易行、低劑量、高效能，具有良好的應(yīng)用景及市場價(jià)值。
【專利說明】
一種利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物防治領(lǐng)域，涉及一種利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，具 體涉及薰衣草精油在抑制灰葡萄孢菌中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 葡萄是一種重要的經(jīng)濟(jì)作物，在農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)中的占主導(dǎo)地位。中國作為主要葡萄生 產(chǎn)國之一，種植面積和產(chǎn)量的居世界前列。但是，灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)作為一種 廣寄主性的、能夠引起200多種已知植物灰霉病的壞死營養(yǎng)型病原真菌，成為葡萄采后主要 的病原微生物，嚴(yán)重的縮短了葡萄采后的貯藏壽命，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，因此精油作為一 種天然無公害的抗菌素而被人們廣泛的挖掘和研究。
[0003] 薰衣草精油，存在于芳香植體內(nèi)的天然化合物，主要含有萜類化合物，包括芳樟 醇、乙酸芳樟酯、桉樹腦、B-羅勒烯(包括順式和反式）、萜-4-醇和樟腦。目前，其主要以干品 或精油形式應(yīng)用于臨床和化妝品行業(yè)。它可以被用于醫(yī)學(xué)、食品和化妝品行業(yè)，具有殺菌、 抗真菌、松弛平滑肌、鎮(zhèn)靜、抗抑郁等作用，同時(shí)對(duì)灰葡萄孢菌引起的灰霉病的病害也有有 效的抑制作用。
[0004]傳統(tǒng)上人們主要對(duì)薰衣草頭狀花序部分的精油進(jìn)行分析，最近的研究焦點(diǎn)轉(zhuǎn)移到 分析花的"香味"上，即只分析易揮發(fā)性成分而不是全部精油。對(duì)這些植物進(jìn)行典型香味分 析的結(jié)果證實(shí)，法國薰農(nóng)草和綿毛薰衣革的精油中樟腦含量較高，昆蟲驅(qū)避作用明顯;而狹 葉薰衣草和齒狀薰衣草精油中的樟腦含量則很低（<2% )。低樟腦含量的薰衣草屬植物中 往往萜烯（口水芹烯)和倍半萜烯(石竹烯）的含量較高。不同種薰衣草香味的微小差別是由 于所含精油成分的差異，特別是芳樟醇、乙酸芳樟酯和各種倍半萜的組成與含量不同，這種 差異將直接影響薰衣草精油對(duì)灰葡萄孢菌引起的灰霉病的抑制作用，而由于其組分的化學(xué) 及物理性質(zhì)，使采用直接接觸和熏蒸法的抑制效果明顯不同。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)中利用直接接觸法抑制灰葡萄孢菌中存在的抑制 率低的問題，提供一種利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法。
[0006] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種利用薰衣草精油抑制灰葡 萄孢菌的方法，用薰衣草精油對(duì)灰葡萄孢菌進(jìn)行熏蒸，所述熏蒸是將薰衣草精油與灰葡萄 孢菌共置于同一密閉空間中。
[0007] 上述一種利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，所述用薰衣草精油對(duì)灰葡萄孢 菌進(jìn)行熏蒸，具體包括如下步驟： 步驟一、制備PDA平板，即將融化的PDA培養(yǎng)基冷卻倒板，直至PDA培養(yǎng)基凝固； 步驟二、用無菌的打孔器在待測灰葡萄孢菌平板上取菌塊，并放入所述步驟一中的PDA 平板內(nèi)； 步驟三、將無菌的濾紙片放入所述roA平板蓋子的內(nèi)表面中并在濾紙片上加入薰衣草 精油； 步驟四、蓋好所述PDA平板的蓋子并將其封口，將所述PDA平板倒置； 步驟五、將所述倒置后的PDA平板放入生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，觀察抑菌效果。
[0008] 上述一種利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，所述步驟二中的待測病原菌在 培養(yǎng)七天后方進(jìn)行取菌塊動(dòng)作，所述菌塊的直徑為5mm。
[0009] 上述一種利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，所述步驟五中的生化培養(yǎng)箱的 溫度為28 °C，培養(yǎng)時(shí)間為7天。
[0010] 上述一種利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，所述步驟一中的融化的PDA培 養(yǎng)基冷卻倒板溫度為45°C至60°C。
[0011] 本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明提供的這種利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法， 薰衣草精油熏蒸法處理灰葡萄孢菌，以低劑量達(dá)到對(duì)薰衣草精油更有效的利用，同時(shí)降低 果蔬采摘后由病原菌造成的損失；薰衣草精油作為一種廣譜高效、抑菌性強(qiáng)、安全無毒、性 能穩(wěn)定的天然抑菌物質(zhì)，自然成為生物防治研究的重要內(nèi)容;該發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:操作簡單 易行、低劑量、高效能，具有良好的應(yīng)用前景及市場價(jià)值。
【附圖說明】
[0012] 下面通過附圖并結(jié)合實(shí)施例具體描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和實(shí)現(xiàn)方式將會(huì)更加 明顯，其中附圖所示內(nèi)容僅用于對(duì)本發(fā)明的解釋說明，而不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的任何意義上的 限制。
[0013] 圖1是本發(fā)明中薰衣草精油的熏蒸法和直接接觸法處理灰葡萄孢菌的精油用量與 抑制率的對(duì)比折線圖。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 下面對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例作詳細(xì)說明：本實(shí)施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進(jìn)行 實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和具體的操作過程。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員 來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變型和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明保護(hù) 范圍。
[0015] 實(shí)施例1: 薰衣草精油熏蒸對(duì)灰葡萄孢菌菌落的抑制：用薰衣草精油對(duì)灰葡萄孢菌進(jìn)行熏蒸，所 述熏蒸是將薰衣草精油與灰葡萄孢菌置于同一密閉空間，所述薰衣草精油對(duì)灰葡萄孢菌進(jìn) 行熏蒸，具體包括如下步驟： 步驟一、制備兩組roA平板，即將融化的TOA培養(yǎng)基冷卻至50°C倒板，直至PDA培養(yǎng)基凝 固，兩組PDA平板分別命名為A組PDA平板和B組PDA平板，每組中設(shè)置三個(gè)PDA平板，分別為 A1、A2、A3和B1、B2、B3; 步驟二、用無菌的打孔器在培養(yǎng)7天的待測灰葡萄孢菌平板上打取六塊直徑均為5mm的 菌塊，并分別放入所述步驟一中的兩組PDA平板內(nèi)； 步驟三、取六片相同規(guī)格的無菌濾紙片，并分別放在所述兩組PDA平板的六個(gè)蓋子的內(nèi) 表面； 步驟四、在所述步驟三中的A組PDA平板內(nèi)的三片濾紙片上各加入lul薰衣草精油，B組 PDA平板內(nèi)的三片濾紙片上不加薰衣草精油； 步驟五、蓋好兩組TOA平板的蓋子并將其封口，將兩組TOA平板倒置，放入28°c的生化 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 步驟六、培養(yǎng)7天后，測量A組PDA平板內(nèi)Al、A2、A3和B組PDA平板內(nèi)Bl、B2、B3中各自的菌 落直徑，通過抑制率公式分別對(duì)應(yīng)計(jì)算抑制率，和抑制率的平均值，抑制率公式如下： 抑制率=(c-t)/cX100%， 其中，t為A組PDA平板中的菌落直徑，即經(jīng)過薰衣草精油熏蒸處理后的菌落直徑，c為B 組PDA平板中菌落直徑，即沒有經(jīng)過薰衣草精油熏蒸處理的菌落直徑。
[0016] 實(shí)施例2: 在實(shí)施例1的基礎(chǔ)上，另制備四組PDA平板，每組均設(shè)置三個(gè)PDA平板，與實(shí)施例1不同之 處在，步驟四中，另制備的四組PDA平板中濾紙片上加入的薰衣草精油分別為2ul、3ul、4ul、 5ul，培養(yǎng)7天后分別與實(shí)施例1中的B組PDA平板進(jìn)行對(duì)比，并分別計(jì)算出另制備的四組PDA 平板中每一組分別對(duì)應(yīng)的抑制率和抑制率的平均值，五組PDA平板的試驗(yàn)結(jié)果如表1所示：
表1 實(shí)施例3: 直接接觸法處理灰葡萄孢菌的具體步驟如下： 融化的roA培養(yǎng)基冷卻到50°C左右，加入一定體積的薰衣草精油到培養(yǎng)基中使其充分 混合并倒板，制作5組PDA平板，其濃度分別為100ul/L、200ul/L、300ul/L、400ul/L、500ul/ L，每一濃度均準(zhǔn)備三個(gè)相同的PDA平板，待PDA平板內(nèi)的培養(yǎng)基凝固后，在每個(gè)PDA平板中央 放入直徑均為5mm的灰葡萄孢菌菌塊，另準(zhǔn)備三個(gè)培養(yǎng)基中不添加薰衣草精油的PDA平板為 對(duì)照，之后將所有TOA平板放入28°C生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7天后觀察抑菌效果，以實(shí)施例1步驟 六中的抑制率公式計(jì)算每一組抑制率和抑制率平均值，試驗(yàn)結(jié)果如表2所示：
表2 試驗(yàn)結(jié)論:熏蒸法中每個(gè)培養(yǎng)基的體積為30ml，添加薰衣草精油分別為lul、2ul、3ul、 4ul、5ul;直接接觸法中薰衣草精油加入培養(yǎng)基中配成濃度分別為100ul/L、200ul/L、 300ul/L、400ul/L、500ul/L的Η)Α平板，每個(gè)PDA平板的體積為30ml，經(jīng)換算每個(gè)Η)Α平板內(nèi) 添加薰衣草精油分別為3ul、6ul、9ul、12ul、15ul，即直接接觸法添加薰衣草精油為熏蒸法 的三倍，兩者抑菌效果對(duì)比折線圖如圖1所示，經(jīng)對(duì)比可知薰衣草精油熏蒸法能夠以低劑 量，高功效達(dá)到抑菌效果。
[0017]以上內(nèi)容是結(jié)合具體的優(yōu)選實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明所作的進(jìn)一步詳細(xì)說明，不能認(rèn)定 本發(fā)明的具體實(shí)施只局限于這些說明。對(duì)于本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在 不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干簡單推演或替換，都應(yīng)當(dāng)視為屬于本發(fā)明的 保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，其特征在于：用薰衣草精油對(duì)灰葡萄 孢菌進(jìn)行熏蒸，所述熏蒸是將薰衣草精油與灰葡萄孢菌共置于同一密閉空間中。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，其特征在于:所 述用薰衣草精油對(duì)灰葡萄孢菌進(jìn)行熏蒸，具體包括如下步驟： 步驟一、制備PDA平板，即將融化的PDA培養(yǎng)基冷卻倒板，直至PDA培養(yǎng)基凝固； 步驟二、用無菌的打孔器在待測灰葡萄孢菌平板上取菌塊，并放入所述步驟一中的HM 平板內(nèi)； 步驟三、將無菌的濾紙片放在所述PDA平板蓋子的內(nèi)表面，在濾紙片上加入薰衣草精 油； 步驟四、蓋好所述PDA平板的蓋子并將其封口，將所述PDA平板倒置； 步驟五、將所述倒置后的PDA平板放入生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，觀察抑菌效果。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，其特征在于:所 述步驟二中的待測灰葡萄孢菌在培養(yǎng)七天后方進(jìn)行取菌塊動(dòng)作，所述菌塊的直徑為5mm。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，其特征在于:所 述步驟五中的生化培養(yǎng)箱的溫度為28°C，培養(yǎng)時(shí)間為7天。5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，其特征在于:所 述步驟一中的融化的PDA培養(yǎng)基冷卻倒板溫度為45 °C至60 °C。
【文檔編號(hào)】A01N65/22GK105901023SQ201610291164
【公開日】2016年8月31日
【申請(qǐng)日】2016年5月5日
【發(fā)明人】任雪艷, 宋丹丹, 孔慶軍, 土麗丹, 江國山, 翟欣, 尹雪峰
【申請(qǐng)人】陜西師范大學(xué)