一種液態(tài)復合生物多控殺菌劑及其制備方法與應用
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種液態(tài)復合生物多控殺菌劑，其特征在于，它是由如下重量份配比的原料組成：地衣芽孢桿菌的菌液5～20份，枯草芽孢桿菌的菌液5～20份，蠟樣芽孢桿菌的菌液5～20份，淡紫擬青霉菌的菌液5～20份，綠色木霉菌的菌液5～20份，哈茨木霉菌的菌液5～20份，禾粟鏈霉菌的菌液5～20份，灰產(chǎn)色鏈霉菌的菌液5～20份，吸水鏈霉菌的菌液5～20份，煙葉提取物5～25份，苦參提取物5～25份，蛇床子提取物5～25份，食用菌棒提取物5～25份。本發(fā)明的液態(tài)復合生物多控殺菌劑是一種高效、低毒、低殘留、對人和牲畜安全的生物多控殺菌劑,尤其對水稻、玉米、小麥、果樹及蔬菜殺菌效果顯著。
【專利說明】一種液態(tài)復合生物多控殺菌劑及其制備方法與應用
[0001]
技術領域
[0002]本發(fā)明涉及生物農藥技術領域，特別是一種用于水稻、玉米、小麥、果樹及蔬菜的生物多控殺菌劑及其制備方法與應用。
【背景技術】
[0003]隨著現(xiàn)代生物技術和基因工程的發(fā)展以及它們在農藥中的應用，生物農藥的興起已成為歷史發(fā)展的趨勢，而利用高效、低毒、無殘留的生物農藥進行生物防治已成為現(xiàn)代農業(yè)研究中最為活躍的領域之一。近十多年來，由于各國的重視，生物農藥研究和生產(chǎn)都有了很大的發(fā)展，目前化學農藥每年以2%的速度遞減，而生物農藥卻以5%的速度遞增。隨著人們對食品安全意識和環(huán)境保護意識的進一步提尚，尚毒、尚殘留殺菌劑的品種和范圍將會進一步受到限制，而高效、低毒、對環(huán)境友好且不易產(chǎn)生抗性的復合生物多控殺菌劑將會得到愈來愈廣泛的應用。在自然界，存在著許多對病害具有抑制或殺滅作用的藥用植物和微生物，利用這些藥用植物和微生物來防治作物病害是一種有效的生物防治方法。從這些有益微生物中篩選出施用方便、藥效穩(wěn)定、對人畜和環(huán)境安全的菌種，進行工業(yè)規(guī)?；纳a(chǎn)開發(fā)，從而制成微生物殺菌劑;從藥用植物中提取、分離新的天然活性化合物是開發(fā)新生物農藥的重要途徑。復合生物多控殺菌劑是生物科學與工程技術結合發(fā)展的產(chǎn)物，隨著現(xiàn)代生物工程技術的迅速發(fā)展，復合生物多控殺菌劑將有很大的開發(fā)前景。
[0004]目前，公開號為CN200710021724的發(fā)明專利，提供了一種丁香酚、蛇床子素復配生物殺菌劑，該復配殺菌劑由蛇床子素和丁香酚組成，丁香酚和蛇床子素的重量比例為1:1?8:1之間，復配物對人和環(huán)境安全。公開號為0吧00510017437的生物殺菌劑發(fā)明專利，具有高效、低毒、無公害、無污染、無毒副作用，抗菌譜廣，藥效長的優(yōu)點，對細菌引發(fā)的多種病害具有預防和治療雙重作用，可廣泛用于大田農作物、果林蔬菜的病害防治。公開號為CN200510117421的一種生物殺菌劑及其制備方法，其組分及含量為:玫瑰黃鏈霉菌(stretomyces.roseo flaves)的誘變菌株0116菌株發(fā)酵液93?96% ;苯乙基酸聚氧乙稀醚3?5%;醋酸鈉(CH3⑶0Na)0.3?I %。工藝流程包括:新菌種的斜面菌活化培養(yǎng)一搖床培養(yǎng)一種子罐培養(yǎng)一發(fā)酵罐培養(yǎng)一發(fā)酵液沉淀去除殘渣一添加穩(wěn)定劑一成品包裝。米用這種技術的配方及工藝生產(chǎn)的生物殺菌劑可以像一般農藥一樣方便使用。見效速度快，由于有效成份富含生化產(chǎn)物，可以直接作用于防治對象，所以一般情況下其作用效果快于活菌，使用時受環(huán)境影響較小，防治效果也就比普通生物農藥穩(wěn)定。公開號為CN200410034028的一種防治果蔬采后病害的生物殺菌劑及其專用菌株，它的活性成分是膜醭畢赤酵母(Pichiamenbranefaciens),能安全地用于果蔬采后病害的生物防治。公開號為CN200510136781的一種微生物殺菌劑及其制備方法，是一種用于防治植物葉部病害的生物農藥及其制備方法，其特征在于它是用于植物真菌病害生物防治的木霉菌T r O I。申請?zhí)枮镃N201410065238.2的一種生物殺菌劑及其制備方法，該生物殺菌劑為N-鄰氯苯乙酰-N-吩嗪-1-甲酰肼，由綠針假單胞菌屬菌株的遺傳改良菌株SN36在液體培養(yǎng)基中進行二級發(fā)酵培養(yǎng)制得，這種生物發(fā)酵產(chǎn)物對多種農作物真菌病害的防治具有顯著的防治效果。申請?zhí)枮镃N200910228004.4的一種芥末精油生物殺菌劑，其組分重量份數(shù)配比:芥末精油2?20份;包埋劑10?30份;載體5?30份;粘結劑5?20份;分散劑5?15份;填充劑I?20份。應用于多種果蔬貯藏保鮮，在包裝環(huán)境內形成保護氣體層，有效抑制或殺死采后主要病原菌，提高果蔬抗病性，減少貯藏過程中常見病原菌引起的腐爛，延長果蔬貯藏保鮮時間。公開號為CN02135876的一種以蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)98_I菌株制備微生物殺菌劑的生產(chǎn)方法，該菌株廣譜性好，抑菌活性高，且對多種植物有促生和促進種子發(fā)芽的作用，對植物有誘導抗性作用。不僅可防蔬菜、瓜類土傳病害，而且對花卉、草坪的土傳病害也有防治效果。公開號為CN200610066718的一種中草藥殺菌劑，含有如下重量份的原料制成的藥劑:蒼耳子50?70克，黃柏20?40克，蛇床子20?40克，苦參20?40克，白礬50?70克，露蜂房10?20克，金銀花10?20克，銀杏葉10?20克，白頭翁15?25克，細辛10?20克。該殺菌劑由于其具有廣譜抑菌活性，再加上其各個組分均為常用中藥，所以對人和植物高度安全，經(jīng)過進一步應用試驗和配方調整，應用范圍將進一步擴大到更多作物的更多病害，在A A級綠色食品生產(chǎn)中發(fā)揮更大作用。公開號為CN200810215887的一種植物源天然殺菌劑，其特征在于由廣藿香精油和數(shù)種植物精油組合物在內的功效成分與溶劑混合配比而成，所述的功效成分由廣藿香精油以0.5?30.0%的比例與肉桂精油、紫蘇精油、桉葉精油、山蒼子精油和香茅精油混合而成；用于因植物病原菌造成的農作物病害的防治。與以往的殺菌劑相比，其具有很好的廣譜殺菌性，對非靶標生物安全，可生物降解的綠色、環(huán)保優(yōu)點。公開號為CN201310477047的一種協(xié)同增效復配生物殺菌劑及其應用，它是由丁子香酚和小檗堿組成的協(xié)同增效復配植物源殺菌劑，該復配殺菌劑安全、高效、低毒、低殘留、經(jīng)濟，防治葡萄霜霉病菌具有較高活性。它是植物源化合物丁子香酚與化學藥劑小檗堿有效成分以1: 50?50:1進行二元復配的復配劑，其1:5?10:1復配劑增效明顯，抑制葡萄霜霉病菌活性高。它在應用防治葡萄霜霉病方面表現(xiàn)突出，顯示出增效殺菌作用，并且相對用量少，對作物的安全性好。該復配制劑，具有廣闊的應用前景和開發(fā)價值。
[0005]盡管如此，研制一種新型的高效、低毒、對環(huán)境友好且不易產(chǎn)生抗性的復合生物多控殺菌劑具有重大意義。

【發(fā)明內容】

[0006]本發(fā)明的目的是提供一種液態(tài)復合生物多控殺菌劑。
[0007]本發(fā)明的另一個目的是提供一種液態(tài)復合生物多控殺菌劑的用途。
[0008]本發(fā)明的再一個目的是提供一種液態(tài)復合生物多控殺菌劑的制備方法。
[0009]本發(fā)明使用的微生物菌是中國普通微生物菌種保藏管理中心1997、2003和2012年版的菌種目錄中公開的菌種，編號和菌株名是:
菌種編號為CGMCCl.1216的地衣芽抱桿菌(Bacillus cereus Frankland)，菌種編號為CGMCC的1.895的蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)，菌種編號為CGMCCl.936的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis Cohn)，菌種編號為CGMCC3.4035的淡紫擬青霉菌(PaecilomycesIilacinus Samson)，菌種編號為CGMCC3.2942的綠色木霉菌(Trichoderma viridePersoon ex Fries)，菌種編號為CGMCC 3.6635的哈茨木霉菌(Trichoderma harzianumRifai)，菌種編號為CGMCC4.1114的吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus Waksmanet Henrici )，菌種編號為CGMCC4.1111 的禾粟鏈霉菌(Streptomyces graminearusPreobrazhenskaya)，菌種編號為 CGMCC 的 4.0892 灰產(chǎn)色鏈霉菌(Streptomycesgriseochromogenes Fukunaga)。
[0010]按照本發(fā)明所述的液態(tài)復合生物多控殺菌劑，其特征在于，它是由如下重量份配比的原料組成:
煙葉提取物5?25份、苦參提取物5?25份、蛇床子提取物5?25份、食用菌棒提取物5?25份、吸水鏈霉菌的菌液5?20份、灰產(chǎn)色鏈霉菌的菌液5?20份、禾粟鏈霉菌的菌液5?20份、哈茨木霉菌的菌液5?20份、綠色木霉菌的菌液5?20份、淡紫擬青霉菌的菌液5?20份、蠟樣芽孢桿菌的菌液5?20份、枯草芽孢桿菌的菌液5?20份、地衣芽孢桿菌的菌液5?20份。
[0011 ]按照本發(fā)明所述的液態(tài)復合生物多控殺菌劑，其特征在于，它是由如下重量份配比的原料組成:
煙葉提取物7?20份、苦參提取物7?20份、蛇床子提取物7?20份、食用菌棒提取物7?20份、吸水鏈霉菌的菌液5?15份、灰產(chǎn)色鏈霉菌的菌液5?15份、禾粟鏈霉菌的菌液5?15份、哈茨木霉菌的菌液5?15份、綠色木霉菌的菌液5?15份、淡紫擬青霉菌的菌液5?15份、蠟樣芽孢桿菌的菌液5?15份、枯草芽孢桿菌的菌液5?15份、地衣芽孢桿菌的菌液5?15份。
[0012]按照本發(fā)明所述的液態(tài)復合生物多控殺菌劑，其特征在于，它是由如下重量份配比的原料組成:
煙葉提取物10份、苦參提取物10份、蛇床子提取物10份、食用菌棒提取物10份、吸水鏈霉菌的菌液5份、灰產(chǎn)色鏈霉菌的菌液5份、禾粟鏈霉菌的菌液5份、哈茨木霉菌的菌液5份、綠色木霉菌的菌液5份、淡紫擬青霉菌的菌液5份、蠟樣芽孢桿菌的菌液10份、枯草芽孢桿菌的菌液1份、地衣芽孢桿菌的菌液1份。
[0013]按照本發(fā)明所述的液態(tài)復合生物多控殺菌劑，其特征在于，它是由如下重量份配比的原料組成:
煙葉提取物20份、苦參提取物7.5份、蛇床子提取物7.5份、食用菌棒提取物7.5份、吸水鏈霉菌的菌液1份、灰產(chǎn)色鏈霉菌的菌液10份、禾粟鏈霉菌的菌液1份、哈茨木霉菌的菌液1份、綠色木霉菌的菌液10份、淡紫擬青霉菌的菌液1份、蠟樣芽孢桿菌的菌液6份、枯草芽孢桿菌的菌液6份、地衣芽孢桿菌的菌液6份。
[0014]按照本發(fā)明所述的液態(tài)復合生物多控殺菌劑，其特征在于，它是由如下重量份配比的原料組成:
煙葉提取物7.5份、苦參提取物20份、蛇床子提取物7.5份、食用菌棒提取物7.5份、吸水鏈霉菌的菌液1份、灰產(chǎn)色鏈霉菌的菌液10份、禾粟鏈霉菌的菌液1份、哈茨木霉菌的菌液1份、綠色木霉菌的菌液10份、淡紫擬青霉菌的菌液1份、蠟樣芽孢桿菌的菌液5份、枯草芽孢桿菌的菌液5份、地衣芽孢桿菌的菌液5份。
[0015]按照本發(fā)明所述的液態(tài)復合生物多控殺菌劑，其特征在于，它是由如下重量份配比的原料組成:
煙葉提取物7.5份、苦參提取物7.5份、蛇床子提取物7.5份、食用菌棒提取物20份、吸水鏈霉菌的菌液1份、灰產(chǎn)色鏈霉菌的菌液10份、禾粟鏈霉菌的菌液1份、哈茨木霉菌的菌液1份、綠色木霉菌的菌液10份、淡紫擬青霉菌的菌液1份、蠟樣芽孢桿菌的菌液7.5份、枯草芽孢桿菌的菌液7.5份、地衣芽孢桿菌的菌液7.5份。
[0016]按照本發(fā)明所述的液態(tài)復合生物多控殺菌劑，其特征在于，它是由如下重量份配比的原料組成:
煙葉提取物7.5份、苦參提取物7.5份、蛇床子提取物20份、食用菌棒提取物7.5份、吸水鏈霉菌的菌液15份、灰產(chǎn)色鏈霉菌的菌液15份、禾粟鏈霉菌的菌液15份、哈茨木霉菌的菌液15份、綠色木霉菌的菌液10份、淡紫擬青霉菌的菌液1份、蠟樣芽孢桿菌的菌液7.5份、枯草芽孢桿菌的菌液7.5份、地衣芽孢桿菌的菌液7.5份。
[0017]按照本發(fā)明所述的液態(tài)復合生物多控殺菌劑，其特征在于，它是由如下重量份配比的原料組成:
煙葉提取物7.5份、苦參提取物7.5份、蛇床子提取物7.5份、食用菌棒提取物7.5份、吸水鏈霉菌的菌液1份、灰產(chǎn)色鏈霉菌的菌液1份、禾粟鏈霉菌的菌液10份、哈茨木霉菌的菌液10份、綠色木霉菌的菌液15份、淡紫擬青霉菌的菌液15份、蠟樣芽孢桿菌的菌液7.5份、枯草芽孢桿菌的菌液7.5份、地衣芽孢桿菌的菌液7.5份。
[0018]按照本發(fā)明所述的液態(tài)復合生物多控殺菌劑的制備方法，其特征在于如下步驟:
A、煙葉提取物、苦參提取物、蛇床子提取物、食用菌棒提取物的制備方法:
a、苦參提取物的制備方法:
稱取苦參25公斤，加按照重量百分比60%的乙醇，600C水浴加熱3?4小時，過濾，離心，收集濾液;濾渣按照相同方法再提取二次，三次加按照重量百分比60%的乙醇量分別為300公斤、250公斤及200公斤，合并上述三次提取的濾液，真空減壓濃縮至25公斤，制得苦參提取物；
b、煙葉提取物的制備方法:
稱取煙葉25公斤，加按照重量百分比7.5%的氫氧化鈉溶液200公斤，60 °C水浴加熱3?4小時，過濾，離心，收集濾液;濾渣按照相同方法再提取二次，三次提取每次加按照重量百分比7.5%的氫氧化鈉溶液均為200公斤，合并上述三次濾液，真空減壓濃縮至25公斤，制得煙葉提取物；
c、蛇床子提取物的制備方法:
稱取蛇床子粉25公斤，置于提取罐中加水，蛇床子與水重量比為1:30，水浴100 °C下連續(xù)浸提3次，每次4?6小時，離心分離，合并3次提取液，真空減壓濃縮至25公斤，制得蛇床子提取物，置于4°C冷庫中保存；
d、食用菌棒提取物的制備方法:
稱取食用菌棒25公斤，置于提取罐中加水，食用菌棒與水重量比為1:15，水浴100°C下連續(xù)浸提3次，每次4?6小時，離心分離，合并3次提取液，真空減壓濃縮至25公斤，制得食用菌棒提取物，置于4°C冷庫中保存；
B、各種菌液的制備:
制備所述吸水鏈霉菌的菌液、灰產(chǎn)色鏈霉菌的菌液、禾粟鏈霉菌的菌液發(fā)酵方法:
a、斜面菌種活化培養(yǎng):取高氏一號合成液體培養(yǎng)基，接入一種上述微生物的斜面培養(yǎng)物，27?28°C條件下在搖床上振蕩培養(yǎng)96?120小時，攪拌轉速為60?120轉/分，然后轉接到相同的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，照此方法連續(xù)轉接3?5次，將獲得的培養(yǎng)液稀釋后涂布到平板固體培養(yǎng)基上，27?28°C條件下培養(yǎng)4?5天，待長出菌落后，挑取大菌落在同樣的固體平板培養(yǎng)基上劃線，挑選單菌落轉接到固體斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)得到馴化菌株，保存?zhèn)溆?b、二級搖瓶菌種培養(yǎng):取高氏一號合成液體培養(yǎng)基，接入一級斜面菌種，于27?28 °C下培養(yǎng)96?120小時，攪拌轉速為60?120轉/分，得二級搖瓶種子液;根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模，進一步采用種子罐進行種子的放大培養(yǎng)；
c、微生物菌液的發(fā)酵生產(chǎn):取高氏一號合成液體培養(yǎng)基，接入上述制備的發(fā)酵種子液，于pH7.2?7.4、溫度27?28°C，發(fā)酵4?5天，即得，作為生產(chǎn)菌液備用；
制備所述哈茨木霉菌的菌液、綠色木霉菌的菌液、淡紫擬青霉菌的菌液發(fā)酵方法:
a、斜面菌種活化培養(yǎng):取I3DA液體培養(yǎng)基，接入一種上述微生物的斜面培養(yǎng)物，25?28°C條件下在搖床上振蕩培養(yǎng)48?72小時，攪拌轉速為60?120轉/分，然后轉接到相同的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，照此方法連續(xù)轉接3?5次，將獲得的培養(yǎng)液稀釋后涂布到平板固體培養(yǎng)基上，25?28 °C條件下培養(yǎng)3?5天，轉速為60?120轉/分，待長出粗壯菌絲后，挑取粗壯菌絲在同樣的固體平板培養(yǎng)基上劃線，挑選粗壯菌絲轉接到固體斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)得到馴化菌株，保存?zhèn)溆茫?br> b、二級搖瓶菌種培養(yǎng):取PDA液體培養(yǎng)基，接入一級斜面菌種，于25?28°C下培養(yǎng)48?72小時，攪拌轉速為60?120轉/分，得二級搖瓶種子液;根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模，進一步采用種子罐進行種子的放大培養(yǎng)；
c、微生物菌液的發(fā)酵生產(chǎn):取PDA液體培養(yǎng)基，接入上述制備的發(fā)酵種子液，于pH7.0?
7.2、溫度25?28°C發(fā)酵3?5天，即得，作為生產(chǎn)菌液備用；
制備所述蠟樣芽孢桿菌的菌液、枯草芽孢桿菌的菌液、地衣芽孢桿菌的菌液發(fā)酵方法:
a、斜面菌種活化培養(yǎng):取牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基，接入一種上述微生物的斜面培養(yǎng)物，30?40°C條件下在搖床上振蕩培養(yǎng)20?48小時，轉速為60?120轉/分，然后轉接到相同的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，照此方法連續(xù)轉接3?5次，將獲得的培養(yǎng)液稀釋后涂布到平板固體培養(yǎng)基上，30?40°C條件下培養(yǎng)I?2天，轉速為60?120轉/分，待長出菌落后，挑取大菌落在同樣的固體平板培養(yǎng)基上劃線，挑選單菌落轉接到固體斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)得到馴化菌株，保存?zhèn)溆茫?br> b、二級搖瓶菌種培養(yǎng):取牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基，接入一級斜面菌種，于30?40°C下培養(yǎng)20?48小時，轉速為60?120轉/分，得二級搖瓶種子液;根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模，進一步采用種子罐進行種子的放大培養(yǎng)；
C、微生物菌液的發(fā)酵生產(chǎn):取牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基，接入上述制備的發(fā)酵種子液，于?!17.2?8.5、溫度30?40°C，發(fā)酵I?2天，即得，作為生產(chǎn)菌液備用；
C、液態(tài)復合生物多控殺菌劑的制備:
按照如上所述原料組分的重量份配比，將上述B步驟制備的各種菌液混合，制成復合菌劑，經(jīng)檢驗，使含總有效活菌數(shù)達2億個/毫升，每一種有效菌的數(shù)量不得少于2000萬個/毫升以上，符合國家標準GB-20287-2006，再按照如上所述原料組分的重量份配比，將上述步驟A制備的煙葉提取物、苦參提取物、蛇床子提取物、食用菌棒提取物與如上所述的復合菌劑混合均勻，即得。
[0019]按照本發(fā)明所述的液態(tài)復合生物多控殺菌劑的用途，其特征在于，它作為復合生物多控殺菌劑應用于水稻、玉米、小麥、果樹及蔬菜病害的防治。
[0020]本發(fā)明使用的原料組分具有殺菌作用如下:
枯草芽孢桿菌菌體生長過程中產(chǎn)生的枯草素、短桿菌肽等活性物質，對致病菌有明顯的抑制作用。
[0021]地衣芽孢桿菌可促使機體產(chǎn)生抗菌活性物質，殺滅致病菌，并具有獨特的生物奪氧作用機制，能抑制致病菌的生長繁殖。
[0022]蠟樣芽孢桿菌可提高作物對病菌和逆境危害引發(fā)體內產(chǎn)生氧的清除能力，調節(jié)細胞微生物環(huán)境，維持細胞正常的生理代謝和生化反應，提高作物的抗逆性，增加作物的保健作用，能促進作物生長，提高產(chǎn)量。
[0023]吸水鏈霉菌產(chǎn)生抑制革蘭氏陽性細菌、分枝桿菌、原蟲的潮霉素(hygromycin)，抑制分枝桿菌、病毒、腫瘤、絲狀真菌、酵母的吸水菌素(hygroscopin)，抑制革蘭氏陽性細菌、絲狀真菌、酵母的吸水制菌素(hygrostatin)等多種抗生素。
[0024]灰產(chǎn)色鏈霉菌的菌液，抑制環(huán)狀芽孢桿菌、大腸桿菌、啤酒酵母和稻瘟菌，產(chǎn)生滅瘟菌或殺稻瘟素。
[0025]禾粟鏈霉菌產(chǎn)生的堿性水溶性抗生素--禾粟霉素(Graminmycin)，對格蘭氏陽性菌和格蘭氏陰性菌有較強的抑制作用，對真菌的抑制作用也很強。大田實驗結果表明，禾粟鏈霉素對麥類作物赤霉病的防治效果顯著。
[0026]哈茨木霉菌產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物對多種農業(yè)致病菌有很好的抑菌效果。
[0027]綠色木霉菌是所產(chǎn)纖維素酶活性最高的菌株之一，纖維素酶對作物有降解非常好的作用;綠色木霉菌又是一種資源豐富的拮抗微生物，在植物病理生物防治中具有重要的作用，具有保護和治療雙重功效，可有效防治土傳性病害。
[0028]淡紫擬青霉菌屬于內寄生性真菌，是一些植物寄生線蟲的重要天敵，能夠寄生于卵，也能侵染幼蟲和雌蟲，可明顯減輕多種作物根結線蟲、胞囊線蟲、莖線蟲等植物線蟲病的危害;對多種農業(yè)致病菌也有很好的抑菌效果。
[0029]苦參提取物是由苦參SophorafIavescens豆科苦參屬的植物的干燥根、植株、果實經(jīng)乙醇等有機溶劑提取制成的生物堿，主要為苦參總堿，是一種低毒、低殘留、環(huán)保型農藥，具有殺蟲活性、殺菌活性、調節(jié)植物生長等多種功能。
[°03°]煙葉是前科煙草屬植物煙草Nicotiana tabacum L.的全草。秋季采收，陰干。煙葉提取物中含有豐富的茄尼醇、綠原酸、蕓香苷、生物堿等具有抑菌作用的活性物質，對金黃色葡萄球菌、溶壁微球菌有很好抑菌作用;對蘋果炭疽病、蘋果腐爛病、番茄枯萎病、棉花枯萎病、黃瓜枯萎病、水稻紋枯病等有很好的抑制作用。
[0031]蛇床子Cnidium monnieri(L.)Cuss.，別名野胡蘿卜子，為傘形科植物蛇床的干燥成熟果實。夏、秋二季果實成熟時采收，除去雜質，曬干。蛇床子提取物具有很好的活性，主要含蛇床子素，可防治各種蔬菜白粉病、霜霉病等病害。
[0032]食用菌棒是由白靈菇、金針菇、杏鮑菇、香菇、木耳等食用菌類生產(chǎn)時制備的，食用菌棒提取物，可有效滲透植物細胞內部，抑制病毒復制擴散，鈍化病毒，進而徹底殺滅病毒，同時可以平衡作物營養(yǎng)，促進植物細胞分裂與成長，使植物恢復正常生長。對番茄黃花曲葉病毒病，辣椒病毒病，煙草病毒病有良好治療效果。
[0033]本發(fā)明的液態(tài)復合生物多控殺菌劑是將各種菌液按所述原料比例混配制備的復合菌劑，能很好地保持其中的各菌群數(shù)量比例相對穩(wěn)定。復合菌劑與依靠自然環(huán)境進行分解的微生物菌群及與未經(jīng)單獨培養(yǎng)而混配的菌群相比，采用單獨培養(yǎng)后，再混配在一起的菌群，由于可以根據(jù)實際需要選擇合理的配比，更能充分地發(fā)揮復合菌劑中各菌群自身的生物特性與相互協(xié)同作用，所以，用其進行生物處理的適用范圍非常廣泛。
[0034]本發(fā)明的液態(tài)復合生物多控殺菌劑是一種高效、低毒、低殘留、對人和牲畜安全的生物多控殺菌劑，尤其對水稻、玉米、小麥、果樹及蔬菜殺菌效果顯著。
【具體實施方式】
[0035]以下各實施例僅用于對本發(fā)明進行解釋說明，并不構成對權利要求范圍的限定，本領域技術人員根據(jù)說明書內容可以想到的其它替代手段，均應在本發(fā)明權利要求的保護范圍之內。
[0036]本發(fā)明實施例采用的微生物菌種，選擇中國普通微生物菌種保藏管理中心1997、2003、2012年版的菌種目錄中公開的菌種，編號和菌株名是:
菌種編號為CGMCCl.1216的地衣芽抱桿菌(Bacillus cereus Frankland)，菌種編號為CGMCC的1.895的蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)，菌種編號為CGMCCl.936的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis Cohn)，菌種編號為CGMCC3.4035的淡紫擬青霉菌(PaecilomycesIilacinus Samson)，菌種編號為CGMCC3.2942的綠色木霉菌(Trichoderma viridePersoon ex Fries)，菌種編號為CGMCC 3.6635的哈茨木霉菌(Trichoderma harzianumRifai)，菌種編號為CGMCC4.1114的吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus Waksmanet Henrici )，菌種編號為CGMCC4.1111 的禾粟鏈霉菌(Streptomyces graminearusPreobrazhenskaya)，菌種編號為 CGMCC 的 4.0892 灰產(chǎn)色鏈霉菌(Streptomycesgriseochromogenes Fukunaga)。
[0037]實施例的制備方法為如下步驟:
A、煙葉提取物、苦參提取物、蛇床子提取物、食用菌棒提取物的制備方法:
a、苦參提取物的制備方法:
稱取苦參25公斤，加按照重量百分比60%的乙醇，600C水浴加熱3?4小時，過濾，離心，收集濾液;濾渣按照相同方法再提取二次，三次加按照重量百分比60%的乙醇量分別為300公斤、250公斤及200公斤，合并上述三次提取的濾液，真空減壓濃縮至25公斤，制得苦參提取物；
b、煙葉提取物的制備方法:
稱取煙葉25公斤，加按照重量百分比7.5%的氫氧化鈉溶液200公斤，60 °C水浴加熱3?4小時，過濾，離心，收集濾液;濾渣按照相同方法再提取二次，三次提取每次加按照重量百分比7.5%的氫氧化鈉溶液均為200公斤，合并上述三次濾液，真空減壓濃縮至25公斤，制得煙葉提取物；
c、蛇床子提取物的制備方法:
稱取蛇床子粉25公斤，置于提取罐中加水，蛇床子與水重量比為1:30，水浴100 °C下連續(xù)浸提3次，每次4?6小時，離心分離，合并3次提取液，真空減壓濃縮至25公斤，制得蛇床子提取物，置于4°C冷庫中保存；
d、食用菌棒提取物的制備方法: 稱取食用菌棒25公斤，置于提取罐中加水，食用菌棒與水重量比為1:15，水浴100°C下連續(xù)浸提3次，每次4?6小時，離心分離，合并3次提取液，真空減壓濃縮至25公斤，制得食用菌棒提取物，置于4°C冷庫中保存；
B、各種菌液的制備:
制備所述吸水鏈霉菌的菌液、灰產(chǎn)色鏈霉菌的菌液、禾粟鏈霉菌的菌液發(fā)酵方法:
a、斜面菌種活化培養(yǎng):取高氏一號合成液體培養(yǎng)基，接入一種上述微生物的斜面培養(yǎng)物，27?28°C條件下在搖床上振蕩培養(yǎng)96?120小時，攪拌轉速為60?120轉/分，然后轉接到相同的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，照此方法連續(xù)轉接3?5次，將獲得的培養(yǎng)液稀釋后涂布到平板固體培養(yǎng)基上，27?28°C條件下培養(yǎng)4?5天，待長出菌落后，挑取大菌落在同樣的固體平板培養(yǎng)基上劃線，挑選單菌落轉接到固體斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)得到馴化菌株，保存?zhèn)溆?b、二級搖瓶菌種培養(yǎng):取高氏一號合成液體培養(yǎng)基，接入一級斜面菌種，于27?28 °C下培養(yǎng)96?120小時，攪拌轉速為60?120轉/分，得二級搖瓶種子液;根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模，進一步采用種子罐進行種子的放大培養(yǎng)；
c、微生物菌液的發(fā)酵生產(chǎn):取高氏一號合成液體培養(yǎng)基，接入上述制備的發(fā)酵種子液，于pH7.2?7.4、溫度27?28°C，發(fā)酵4?5天，即得，作為生產(chǎn)菌液備用；
制備所述哈茨木霉菌的菌液、綠色木霉菌的菌液、淡紫擬青霉菌的菌液發(fā)酵方法:
a、斜面菌種活化培養(yǎng):取I3DA液體培養(yǎng)基，接入一種上述微生物的斜面培養(yǎng)物，25?28°C條件下在搖床上振蕩培養(yǎng)48?72小時，攪拌轉速為60?120轉/分，然后轉接到相同的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，照此方法連續(xù)轉接3?5次，將獲得的培養(yǎng)液稀釋后涂布到平板固體培養(yǎng)基上，25?28 °C條件下培養(yǎng)3?5天，轉速為60?120轉/分，待長出粗壯菌絲后，挑取粗壯菌絲在同樣的固體平板培養(yǎng)基上劃線，挑選粗壯菌絲轉接到固體斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)得到馴化菌株，保存?zhèn)溆茫?br> b、二級搖瓶菌種培養(yǎng):取PDA液體培養(yǎng)基，接入一級斜面菌種，于25?28°C下培養(yǎng)48?72小時，攪拌轉速為60?120轉/分，得二級搖瓶種子液;根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模，進一步采用種子罐進行種子的放大培養(yǎng)；
c、微生物菌液的發(fā)酵生產(chǎn):取PDA液體培養(yǎng)基，接入上述制備的發(fā)酵種子液，于pH7.0?
7.2、溫度25?28°C發(fā)酵3?5天，即得，作為生產(chǎn)菌液備用；
制備所述蠟樣芽孢桿菌的菌液、枯草芽孢桿菌的菌液、地衣芽孢桿菌的菌液發(fā)酵方法:
a、斜面菌種活化培養(yǎng):取牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基，接入一種上述微生物的斜面培養(yǎng)物，30?40°C條件下在搖床上振蕩培養(yǎng)20?48小時，轉速為60?120轉/分，然后轉接到相同的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，照此方法連續(xù)轉接3?5次，將獲得的培養(yǎng)液稀釋后涂布到平板固體培養(yǎng)基上，30?40°C條件下培養(yǎng)I?2天，轉速為60?120轉/分，待長出菌落后，挑取大菌落在同樣的固體平板培養(yǎng)基上劃線，挑選單菌落轉接到固體斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)得到馴化菌株，保存?zhèn)溆茫?br> b、二級搖瓶菌種培養(yǎng):取牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基，接入一級斜面菌種，于30?40°C下培養(yǎng)20?48小時，轉速為60?120轉/分，得二級搖瓶種子液;根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模，進一步采用種子罐進行種子的放大培養(yǎng)；
C、微生物菌液的發(fā)酵生產(chǎn):取牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基，接入上述制備的發(fā)酵種子液，于?!17.2?8.5、溫度30?40°C，發(fā)酵I?2天，即得，作為生產(chǎn)菌液備用； C、液態(tài)復合生物多控殺菌劑的制備:
按照實施例所述原料組分的重量份配比，將上述B步驟制備的各種菌液混合，制成復合菌劑，經(jīng)檢驗，使含總有效活菌數(shù)達2億個/毫升，每一種有效菌的數(shù)量不得少于2000萬個/毫升以上，符合國家標準GB-20287-2006，再按照實施例所述原料組分的重量份配比，將上述步驟A制備的煙葉提取物、苦參提取物、蛇床子提取物、食用菌棒提取物與如上所述的復合菌劑混合均勻，即得。
[0038]實施例1:由如下重量份配比的原料組成:
煙葉提取物10份、苦參提取物10份、蛇床子提取物10份、食用菌棒提取物10份、吸水鏈霉菌的菌液5份、灰產(chǎn)色鏈霉菌的菌液5份、禾粟鏈霉菌的菌液5份、哈茨木霉菌的菌液5份、綠色木霉菌的菌液5份、淡紫擬青霉菌的菌液5份、蠟樣芽孢桿菌的菌液10份、枯草芽孢桿菌的菌液1份、地衣芽孢桿菌的菌液1份。
[0039]實施例2:由如下重量份配比的原料組成:
煙葉提取物20份、苦參提取物7.5份、蛇床子提取物7.5份、食用菌棒提取物7.5份、吸水鏈霉菌的菌液1份、灰產(chǎn)色鏈霉菌的菌液10份、禾粟鏈霉菌的菌液1份、哈茨木霉菌的菌液1份、綠色木霉菌的菌液10份、淡紫擬青霉菌的菌液1份、蠟樣芽孢桿菌的菌液6份、枯草芽孢桿菌的菌液6份、地衣芽孢桿菌的菌液6份。
[0040]實施例3:由如下重量份配比的原料組成:
煙葉提取物7.5份、苦參提取物20份、蛇床子提取物7.5份、食用菌棒提取物7.5份、吸水鏈霉菌的菌液1份、灰產(chǎn)色鏈霉菌的菌液10份、禾粟鏈霉菌的菌液1份、哈茨木霉菌的菌液1份、綠色木霉菌的菌液10份、淡紫擬青霉菌的菌液1份、蠟樣芽孢桿菌的菌液5份、枯草芽孢桿菌的菌液5份、地衣芽孢桿菌的菌液5份。
[0041 ]實施例4:由如下重量份配比的原料組成:
煙葉提取物7.5份、苦參提取物7.5份、蛇床子提取物7.5份、食用菌棒提取物20份、吸水鏈霉菌的菌液1份、灰產(chǎn)色鏈霉菌的菌液10份、禾粟鏈霉菌的菌液1份、哈茨木霉菌的菌液1份、綠色木霉菌的菌液10份、淡紫擬青霉菌的菌液1份、蠟樣芽孢桿菌的菌液7.5份、枯草芽孢桿菌的菌液7.5份、地衣芽孢桿菌的菌液7.5份。
[0042]實施例5:由如下重量份配比的原料組成:
煙葉提取物7.5份、苦參提取物7.5份、蛇床子提取物20份、食用菌棒提取物7.5份、吸水鏈霉菌的菌液15份、灰產(chǎn)色鏈霉菌的菌液15份、禾粟鏈霉菌的菌液15份、哈茨木霉菌的菌液15份、綠色木霉菌的菌液10份、淡紫擬青霉菌的菌液1份、蠟樣芽孢桿菌的菌液7.5份、枯草芽孢桿菌的菌液7.5份、地衣芽孢桿菌的菌液7.5份。
[0043]實施例6:由如下重量份配比的原料組成:
煙葉提取物7.5份、苦參提取物7.5份、蛇床子提取物7.5份、食用菌棒提取物7.5份、吸水鏈霉菌的菌液1份、灰產(chǎn)色鏈霉菌的菌液1份、禾粟鏈霉菌的菌液10份、哈茨木霉菌的菌液10份、綠色木霉菌的菌液15份、淡紫擬青霉菌的菌液15份、蠟樣芽孢桿菌的菌液7.5份、枯草芽孢桿菌的菌液7.5份、地衣芽孢桿菌的菌液7.5份。
[0044]本發(fā)明實施例的液態(tài)復合生物多控殺菌劑使用方法及對比試驗結果:
采用本發(fā)明實施例的液態(tài)復合生物多控殺菌劑用于水稻、玉米、小麥、果樹及蔬菜的使用方法是:水稻、玉米、小麥每標準畝(667平方米)每次用本品500毫升，加水15公斤稀釋，蔬菜和果樹每畝(667平方米)每次用本品1000毫升，加水15公斤稀釋，稀釋后噴灑植物莖桿和葉面。
[0045]經(jīng)田間試驗結果如下:
采用本發(fā)明實施例的液態(tài)復合生物多控殺菌劑500毫升，30重量倍濃度下加水稀釋，均勾噴灑在本田的水稻秧苗的葉片、莖桿上，可有效預防水稻稻痕病、紋枯病和稻曲病的發(fā)生，防治效果可達95%;
采用本發(fā)明實施例的液態(tài)復合生物多控殺菌劑500毫升，30重量倍濃度下加水稀釋，均勻噴灑在本田小麥、玉米秧苗的葉片、莖桿上，可有效預防小麥赤霉病、白粉??；玉米小斑病、玉米大斑病的發(fā)生，防治效果可達100%;
采用本發(fā)明實施例的液態(tài)復合生物多控殺菌劑1000毫升，30重量倍濃度下加水稀釋，均勻噴灑在保護地草莓秧苗的葉片、蔓上，可有效預防草莓白粉病、灰霉病的發(fā)生，防治效果可達90%;噴灑在辣椒、茄子及番茄的葉片、莖桿上，可有效防治辣椒疫病、茄子黃萎病和番茄灰霉病，防治效果可達85%。
[0046]采用本發(fā)明實施例的液態(tài)復合生物多控殺菌劑7500毫升，15重量倍濃度下加水稀釋，均勻噴灑在南果梨的葉片、樹干上，可有效預防南果梨黑星病、黑斑病的發(fā)生，防治效果可達90%。
【主權項】
1.一種液態(tài)復合生物多控殺菌劑，其特征在于，它是由如下重量份配比的原料組成: 煙葉提取物5?25份、苦參提取物5?25份、蛇床子提取物5?25份、食用菌棒提取物5?25份、吸水鏈霉菌的菌液5?20份、灰產(chǎn)色鏈霉菌的菌液5?20份、禾粟鏈霉菌的菌液5?20份、哈茨木霉菌的菌液5?20份、綠色木霉菌的菌液5?20份、淡紫擬青霉菌的菌液5?20份、蠟樣芽孢桿菌的菌液5?20份、枯草芽孢桿菌的菌液5?20份、地衣芽孢桿菌的菌液5?20份。2.根據(jù)權利要求1所述的液態(tài)復合生物多控殺菌劑，其特征在于，它是由如下重量份配比的原料組成: 煙葉提取物7?20份、苦參提取物7?20份、蛇床子提取物7?20份、食用菌棒提取物7?20份、吸水鏈霉菌的菌液5?15份、灰產(chǎn)色鏈霉菌的菌液5?15份、禾粟鏈霉菌的菌液5?15份、哈茨木霉菌的菌液5?15份、綠色木霉菌的菌液5?15份、淡紫擬青霉菌的菌液5?15份、蠟樣芽孢桿菌的菌液5?15份、枯草芽孢桿菌的菌液5?15份、地衣芽孢桿菌的菌液5?15份。3.根據(jù)權利要求1或2所述的液態(tài)復合生物多控殺菌劑，其特征在于，它是由如下重量份配比的原料組成: 煙葉提取物10份、苦參提取物10份、蛇床子提取物10份、食用菌棒提取物10份、吸水鏈霉菌的菌液5份、灰產(chǎn)色鏈霉菌的菌液5份、禾粟鏈霉菌的菌液5份、哈茨木霉菌的菌液5份、綠色木霉菌的菌液5份、淡紫擬青霉菌的菌液5份、蠟樣芽孢桿菌的菌液10份、枯草芽孢桿菌的菌液1份、地衣芽孢桿菌的菌液1份。4.根據(jù)權利要求1或2所述的液態(tài)復合生物多控殺菌劑，其特征在于，它是由如下重量份配比的原料組成: 煙葉提取物20份、苦參提取物7.5份、蛇床子提取物7.5份、食用菌棒提取物7.5份、吸水鏈霉菌的菌液1份、灰產(chǎn)色鏈霉菌的菌液10份、禾粟鏈霉菌的菌液1份、哈茨木霉菌的菌液1份、綠色木霉菌的菌液10份、淡紫擬青霉菌的菌液1份、蠟樣芽孢桿菌的菌液6份、枯草芽孢桿菌的菌液6份、地衣芽孢桿菌的菌液6份。5.根據(jù)權利要求1或2所述的液態(tài)復合生物多控殺菌劑，其特征在于，它是由如下重量份配比的原料組成: 煙葉提取物7.5份、苦參提取物20份、蛇床子提取物7.5份、食用菌棒提取物7.5份、吸水鏈霉菌的菌液1份、灰產(chǎn)色鏈霉菌的菌液10份、禾粟鏈霉菌的菌液1份、哈茨木霉菌的菌液1份、綠色木霉菌的菌液10份、淡紫擬青霉菌的菌液1份、蠟樣芽孢桿菌的菌液5份、枯草芽孢桿菌的菌液5份、地衣芽孢桿菌的菌液5份。6.根據(jù)權利要求1或2所述的液態(tài)復合生物多控殺菌劑，其特征在于，它是由如下重量份配比的原料組成: 煙葉提取物7.5份、苦參提取物7.5份、蛇床子提取物7.5份、食用菌棒提取物20份、吸水鏈霉菌的菌液1份、灰產(chǎn)色鏈霉菌的菌液10份、禾粟鏈霉菌的菌液1份、哈茨木霉菌的菌液1份、綠色木霉菌的菌液10份、淡紫擬青霉菌的菌液1份、蠟樣芽孢桿菌的菌液7.5份、枯草芽孢桿菌的菌液7.5份、地衣芽孢桿菌的菌液7.5份。7.根據(jù)權利要求1或2所述的液態(tài)復合生物多控殺菌劑，其特征在于，它是由如下重量份配比的原料組成: 煙葉提取物7.5份、苦參提取物7.5份、蛇床子提取物20份、食用菌棒提取物7.5份、吸水鏈霉菌的菌液15份、灰產(chǎn)色鏈霉菌的菌液15份、禾粟鏈霉菌的菌液15份、哈茨木霉菌的菌液15份、綠色木霉菌的菌液10份、淡紫擬青霉菌的菌液1份、蠟樣芽孢桿菌的菌液7.5份、枯草芽孢桿菌的菌液7.5份、地衣芽孢桿菌的菌液7.5份。8.根據(jù)權利要求1或2所述的液態(tài)復合生物多控殺菌劑，其特征在于，它是由如下重量份配比的原料組成: 煙葉提取物7.5份、苦參提取物7.5份、蛇床子提取物7.5份、食用菌棒提取物7.5份、吸水鏈霉菌的菌液1份、灰產(chǎn)色鏈霉菌的菌液1份、禾粟鏈霉菌的菌液10份、哈茨木霉菌的菌液10份、綠色木霉菌的菌液15份、淡紫擬青霉菌的菌液15份、蠟樣芽孢桿菌的菌液7.5份、枯草芽孢桿菌的菌液7.5份、地衣芽孢桿菌的菌液7.5份。9.一種權利要求1?8所述的液態(tài)復合生物多控殺菌劑的制備方法，其特征在于如下步驟: A、煙葉提取物、苦參提取物、蛇床子提取物、食用菌棒提取物的制備方法: a、苦參提取物的制備方法: 稱取苦參25公斤，加按照重量百分比60%的乙醇，600C水浴加熱3?4小時，過濾，離心，收集濾液;濾渣按照相同方法再提取二次，三次加按照重量百分比60%的乙醇量分別為300公斤、250公斤及200公斤，合并上述三次提取的濾液，真空減壓濃縮至25公斤，制得苦參提取物； b、煙葉提取物的制備方法: 稱取煙葉25公斤，加按照重量百分比7.5%的氫氧化鈉溶液200公斤，60 °C水浴加熱3?4小時，過濾，離心，收集濾液;濾渣按照相同方法再提取二次，三次提取每次加按照重量百分比7.5%的氫氧化鈉溶液均為200公斤，合并上述三次濾液，真空減壓濃縮至25公斤，制得煙葉提取物； c、蛇床子提取物的制備方法: 稱取蛇床子粉25公斤，置于提取罐中加水，蛇床子與水重量比為1:30，水浴100 °C下連續(xù)浸提3次，每次4?6小時，離心分離，合并3次提取液，真空減壓濃縮至25公斤，制得蛇床子提取物，置于4°C冷庫中保存； d、食用菌棒提取物的制備方法: 稱取食用菌棒25公斤，置于提取罐中加水，食用菌棒與水重量比為1:15，水浴100°C下連續(xù)浸提3次，每次4?6小時，離心分離，合并3次提取液，真空減壓濃縮至25公斤，制得食用菌棒提取物，置于4°C冷庫中保存； B、各種菌液的制備: 制備所述吸水鏈霉菌的菌液、灰產(chǎn)色鏈霉菌的菌液、禾粟鏈霉菌的菌液發(fā)酵方法: a、斜面菌種活化培養(yǎng):取高氏一號合成液體培養(yǎng)基，接入一種上述微生物的斜面培養(yǎng)物，27?28°C條件下在搖床上振蕩培養(yǎng)96?120小時，攪拌轉速為60?120轉/分，然后轉接到相同的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，照此方法連續(xù)轉接3?5次，將獲得的培養(yǎng)液稀釋后涂布到平板固體培養(yǎng)基上，27?28°C條件下培養(yǎng)4?5天，待長出菌落后，挑取大菌落在同樣的固體平板培養(yǎng)基上劃線，挑選單菌落轉接到固體斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)得到馴化菌株，保存?zhèn)溆?b、二級搖瓶菌種培養(yǎng):取高氏一號合成液體培養(yǎng)基，接入一級斜面菌種，于27?28 °C下培養(yǎng)96?120小時，攪拌轉速為60?120轉/分，得二級搖瓶種子液;根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模，進一步采用種子罐進行種子的放大培養(yǎng)； c、微生物菌液的發(fā)酵生產(chǎn):取高氏一號合成液體培養(yǎng)基，接入上述制備的發(fā)酵種子液，于?!17.2?7.4、溫度27?28°C，發(fā)酵4?5天，即得，可作為生產(chǎn)菌液備用； 制備所述哈茨木霉菌的菌液、綠色木霉菌的菌液、淡紫擬青霉菌的菌液發(fā)酵方法: a、斜面菌種活化培養(yǎng):取PDA液體培養(yǎng)基，接入一種上述微生物的斜面培養(yǎng)物，25?28°C條件下在搖床上振蕩培養(yǎng)48?72小時，攪拌轉速為60?120轉/分，然后轉接到相同的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，照此方法連續(xù)轉接3?5次，將獲得的培養(yǎng)液稀釋后涂布到平板固體培養(yǎng)基上，25?28 °C條件下培養(yǎng)3?5天，轉速為60?120轉/分，待長出粗壯菌絲后，挑取粗壯菌絲在同樣的固體平板培養(yǎng)基上劃線，挑選粗壯菌絲轉接到固體斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)得到馴化菌株，保存?zhèn)溆茫? b、二級搖瓶菌種培養(yǎng):取PDA液體培養(yǎng)基，接入一級斜面菌種，于25?28°C下培養(yǎng)48?72小時，攪拌轉速為60?120轉/分，得二級搖瓶種子液;根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模，進一步采用種子罐進行種子的放大培養(yǎng)； c、微生物菌液的發(fā)酵生產(chǎn):取I3DA液體培養(yǎng)基，接入上述制備的發(fā)酵種子液，于pH7.0?7.2、溫度25?28°C發(fā)酵3?5天，即得，作為生產(chǎn)菌液備用； 制備所述蠟樣芽孢桿菌的菌液、枯草芽孢桿菌的菌液、地衣芽孢桿菌的菌液發(fā)酵方法: a、斜面菌種活化培養(yǎng):取牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基，接入一種上述微生物的斜面培養(yǎng)物，30?40°C條件下在搖床上振蕩培養(yǎng)20?48小時，轉速為60?120轉/分，然后轉接到相同的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，照此方法連續(xù)轉接3?5次，將獲得的培養(yǎng)液稀釋后涂布到平板固體培養(yǎng)基上，30?40°C條件下培養(yǎng)I?2天，轉速為60?120轉/分，待長出菌落后，挑取大菌落在同樣的固體平板培養(yǎng)基上劃線，挑選單菌落轉接到固體斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)得到馴化菌株，保存?zhèn)溆茫? b、二級搖瓶菌種培養(yǎng):取牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基，接入一級斜面菌種，于30?40°C下培養(yǎng)20?48小時，轉速為60?120轉/分，得二級搖瓶種子液;根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模，進一步采用種子罐進行種子的放大培養(yǎng)； C、微生物菌液的發(fā)酵生產(chǎn):取牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基，接入上述制備的發(fā)酵種子液，于?!17.2?8.5、溫度30?40°C，發(fā)酵I?2天，即得，作為生產(chǎn)菌液備用； C、液態(tài)復合生物多控殺菌劑的制備: 按照權利要求1?8所述原料組分的重量份配比，將上述B步驟制備的各種菌液混合，制成復合菌劑，經(jīng)檢驗，使含總有效活菌數(shù)達2億個/毫升，每一種有效菌的數(shù)量不得少于2000萬個/毫升以上，符合國家標準GB-20287-2006，再按照權利要求1?8所述原料組分的重量份配比，將上述步驟A制備的煙葉提取物、苦參提取物、蛇床子提取物、食用菌棒提取物與如上所述的復合菌劑混合均勻，即得。10.一種權利要求1?8所述的液態(tài)復合生物多控殺菌劑的用途，其特征在于，它作為復合生物多控殺菌劑應用于水稻、玉米、小麥、果樹及蔬菜病害的防治。
【文檔編號】A01P3/00GK105831175SQ201610275374
【公開日】2016年8月10日
【申請日】2016年4月29日
【發(fā)明人】王禹博
【申請人】鞍山禾瑞生物科技有限公司