一種金葉水杉組培快繁方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)研究領(lǐng)域，具體涉及一種金葉水杉組培快繁方法。
【背景技術(shù)】
[0002]金葉水杉(Metasequoiaglyptostroboides ‘Gold Rush’)別名黃金杉，為杉科水杉屬植物，原產(chǎn)于日本，是近幾年發(fā)展起來的一個(gè)水杉栽培變種。金葉水杉樹形端莊、生長迅速，樹冠常年呈金色，葉片在春、夏、秋三季始終保持鮮艷亮麗的黃色。金葉水杉對環(huán)境小氣候及空氣濕度的要求不高，抗逆性強(qiáng)，耐寒耐熱，耐水濕，管理容易，是城市綠化不可多得的彩葉類大型喬木，在遼寧、浙江、四川等地均有引種，具有廣闊的發(fā)展前景。
[0003]目前，金葉水杉生產(chǎn)中一般采用扦插、嫁接和壓條的繁殖方法培育種苗，扦插繁殖易受扦插基質(zhì)、溫濕度和植物生長調(diào)節(jié)劑的影響，扦插苗和壓條苗根系均為不定根，吸收能力差，形成的樹體直立性差，頂端優(yōu)勢不明顯，生長緩慢；嫁接繁殖是現(xiàn)在金葉水杉主要的繁殖方法，但嫁接方法易受季節(jié)和地域限制，只能在春、秋兩季進(jìn)行，操作復(fù)雜，繁殖系數(shù)低，小苗生長速度不一，管理繁雜，不適宜批量、規(guī)模化繁殖。因此，在生產(chǎn)中如果能篩選出金葉水杉組培快繁方法，既可簡化繁殖過程，又可迅速擴(kuò)大苗木數(shù)量，滿足市場需求，國內(nèi)外有關(guān)金葉水杉組培研究鮮有報(bào)道，龔維紅等研究發(fā)現(xiàn)初代培養(yǎng)在春、秋兩季污染率達(dá)60%以上，夏季達(dá)85%以上，增殖系數(shù)只有1.8，遠(yuǎn)低于組培增殖系數(shù)3.5的常規(guī)要求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明提供一種金葉水杉組培快繁方法，目的在于解決現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，降低污染率，使增殖系數(shù)達(dá)到常規(guī)要求，其特征在于包括以下步驟:
1.一種金葉水杉組培快繁方法的步驟為:
(1)外植體采集及消毒:選取金葉水杉春季萌發(fā)的新稍幼莖，剪成4?5cm莖段用清水沖洗I?2h，轉(zhuǎn)入超凈工作臺(tái)中，用75%乙醇溶液消毒40s，無菌水沖洗5?6次，用2%次氯酸鈉溶液消毒12min，用無菌水沖洗5?6次；
(2)初代培養(yǎng):將經(jīng)步驟(I)消毒后的莖段剪成長約Icm莖段，接種至初代培養(yǎng)基進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)，溫度25± 1°C，光照12?14 h/d，光照強(qiáng)度1500?2000Lx，空氣相對濕度70% ?75% ；
(3)繼代培養(yǎng):將步驟(2)初代培養(yǎng)得到的叢生芽接種至繼代培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng)，溫度25± 1°C，光照12?14 h/d,光照強(qiáng)度1500?2000Lx，空氣相對濕度70%?75% ；
(4)生根壯苗培養(yǎng):將步驟(3)繼代培養(yǎng)中獲得的植株，選取2?3cm嫩梢從基部切下接種至生根壯苗培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)生根，溫度25 ± 1°C，光照12?14 h/d，光照強(qiáng)度2500?3000Lx，空氣相對濕度70%?75% ；
(5)馴化移栽:將苗高6?8cm的壯苗帶瓶移至溫度20?30°C、空氣相對濕度75?85%、光照強(qiáng)度3500?4000LX、通風(fēng)良好的環(huán)境下，逐漸打開瓶蓋，煉苗2?3天，取出組培苗，洗凈培養(yǎng)基后栽至苗床中，苗床基質(zhì)由腐殖土、蛭石、珍珠巖按體積比2:1:1混合而成；
2.前述的一種金葉水杉組培快繁方法，其中所述的初代培養(yǎng)基組成為:GD+1.0?
2.0mg/L 2，4-D +0.5 ?0.8mg/L NAA +4.0 ?7.0mg/L 6-BA +20 ?25g/L 蔗糖 +1.0 ?1.5g/L AC+5.5 ?7.0g/L 瓊脂，pH 為 5.6 ?5.8 ;
3.前述的一種金葉水杉組培快繁方法，其中所述的繼代培養(yǎng)基組成為:GD+0.8?1.0mg/L NAA+6.0 ?8.0mg/L 6-BA+20 ?25g/L 蔗糖 +1.0 ?1.5g/L AC +5.5 ?7.0g/L 瓊脂，pH 為 5.6 ?5.8;
4.前述的一種金葉水杉組培快繁方法，其中所述的生根壯苗培養(yǎng)基組成為:GD+0.8?1.0mg/L NAA+1.0 ?3.0mg/L IBA+20 ?25g/L 蔗糖 +1.0 ?1.5g/L AC +5.5 ?7.0g/L 瓊月旨，pH為5.6?5.8。
[0005]有益效果
本發(fā)明以春天萌發(fā)的嫩枝為外植體，經(jīng)過初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗移栽，可得到完整的再生植株。采用本方法得到的再生植株，植物學(xué)性狀穩(wěn)定，增殖系數(shù)達(dá)到4?6，生根率達(dá)72%，移栽成活率達(dá)96%，快繁方法穩(wěn)定性好，可用來快速、批量繁殖金葉水杉種苗。
【具體實(shí)施方式】
[0006]實(shí)施例1
1.外植體采集及消毒:選擇金葉水杉外植體時(shí)，早春材料比夏季和秋季材料褐變的程度弱，冬季的芽進(jìn)入深休眠狀態(tài)，不容易生長，所以最好選用早春的材料作為外植體，將春季選取的新稍幼莖剪成4?5cm莖段用清水沖洗I?2h，轉(zhuǎn)入超凈工作臺(tái)中，用75%乙醇溶液消毒40s，無菌水沖洗5?6次，用2%次氯酸鈉溶液消毒12min，用無菌水沖洗5?6次；
2.初代培養(yǎng):為了阻止褐變對外植體的影響，將經(jīng)步驟(I)消毒后的莖段剪成長約Icm莖段，放到空白瓊脂培養(yǎng)基中培養(yǎng)5-7天，使組織中的酚類物質(zhì)部分滲入培養(yǎng)基中，切口愈合后再轉(zhuǎn)移至初代培養(yǎng)基進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)，初代培養(yǎng)基組成為:⑶+1.0?2.0mg/L 2 A-D +0.5 ?0.8mg/L NAA +4.0 ?7.0mg/L 6-BA +20 ?25g/L 蔗糖 +1.0 ?1.5g/LAC+5.5?7.0g/L瓊脂，pH為5.6?5.8，環(huán)境條件為:溫度25±1°C，光照12?14 h/d，光照強(qiáng)度1500?2000Lx，空氣相對濕度70%?75% ；
3.繼代培養(yǎng):將步驟(2)初代培養(yǎng)得到的叢生芽接種至繼代培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)基組成為:GD+0.8 ?1.0mg/L NAA+6.0 ?8.0mg/L 6-BA+20 ?25g/L 蔗糖 +1.0 ?1.5g/L AC +5.5?7.0g/L瓊脂，pH為5.6?5.8，環(huán)境條件為:溫度25± I°C，光照12?14 h/d，光照強(qiáng)度1500?2000Lx，空氣相對濕度70%?75% ；
4.生根壯苗培養(yǎng):將步驟(3)繼代培養(yǎng)中獲得的植株，選取2?3cm嫩梢從基部切下接種至生根壯苗培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)生根，生根壯苗培養(yǎng)基組成為:⑶+0.8?1.0mg/LNAA+1.0 ?3.0mg/L IBA+20 ?25g/L 蔗糖 +1.0 ?1.5g/L AC +5.5 ?7.0g/L 瓊脂，pH 為5.6?5.8，環(huán)境條件為:溫度25±1°C，光照12?14 h/d，光照強(qiáng)度2500?3000Lx，空氣相對濕度70%?75%，采用此方法增殖系數(shù)可達(dá)4?6，幼苗生根率可達(dá)72% ；
5.馴化移栽:將苗高6?8cm的壯苗帶瓶移至溫度20?30°C、空氣相對濕度75?85%、光照強(qiáng)度3500?4000LX、通風(fēng)良好的移栽環(huán)境下，逐漸打開瓶蓋，煉苗2?3天，取出組培苗，洗凈培養(yǎng)基后栽至苗床中，苗床基質(zhì)由腐殖土、蛭石、珍珠巖按體積比2:1:1混合而成，最終幼苗移栽成活率達(dá)可達(dá)96%。
[0007]實(shí)施例2
方法及步驟與實(shí)施例1相同，不同的是:所述的初代培養(yǎng)基組成為:⑶+1.0mg/L 2，4-D+0.5mg/L NAA +4.0mg/L 6-BA +20g/L 蔗糖+1.0g/L AC+5.5g/L 瓊脂，pH 為 5.8 ;所述繼代培養(yǎng)基組成為:⑶+0.8mg/L NAA+6.0mg/L 6_BA+20g/L 蔗糖+1.0g/L AC +5.5g/L 瓊脂，pH 為 5.8 ;所述生根培養(yǎng)基組成為:⑶+0.8mg/L NAA+1.0mg/L IBA+20g/L 蔗糖 +L 0g/L AC+5.5g/L 瓊脂，pH 為 5.8。
[0008]實(shí)施例3
方法及步驟與實(shí)施例1相同，不同的是:所述的初代培養(yǎng)基組成為:⑶+2.0mg/L 2，4-D+0.8mg/L NAA +7.0mg/L 6-BA +25g/L 蔗糖+1.5g/L AC+7.0g/L 瓊脂，pH 為 5.6 ;所述繼代培養(yǎng)基組成為:GD+1.0mg/L NAA+8.0mg/L 6_BA+25g/L 蔗糖 +1.5g/L AC+7.0g/L 瓊脂，pH 為 5.6 ;所述生根培養(yǎng)基組成為:⑶+1.0mg/L NAA+3.0mg/L IBA+25g/L 蔗糖 +L 5g/L AC+7.0g/L 瓊脂，pH 為 5.6。
[0009]最后應(yīng)說明的是:以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對其限制；盡管參照前述實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解:其依然可以對前述實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明實(shí)施例技術(shù)方案的精神和范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種金葉水杉組培快繁方法，其特征在于包括以下步驟: (1)外植體采集及消毒:選取金葉水杉春季萌發(fā)的新稍幼莖，剪成4?5cm莖段用清水沖洗1?2h，轉(zhuǎn)入超凈工作臺(tái)中，用75%乙醇溶液消毒40s，無菌水沖洗5?6次，用2%次氯酸鈉溶液消毒12min，用無菌水沖洗5?6次； (2)初代培養(yǎng):將經(jīng)步驟(1)消毒后的莖段剪成長約Icm莖段，接種至初代培養(yǎng)基進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)，溫度25± 1°C，光照12?14 h/d，光照強(qiáng)度1500?2000Lx，空氣相對濕度.70% ?75% ； (3)繼代培養(yǎng):將步驟(2)初代培養(yǎng)得到的叢生芽接種至繼代培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng)，溫度25± 1°C，光照12?14 h/d,光照強(qiáng)度1500?2000Lx，空氣相對濕度70%?75% ； (4)生根壯苗培養(yǎng):將步驟(3)繼代培養(yǎng)中獲得的植株，選取2?3cm嫩梢從基部切下接種至生根壯苗培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)生根，溫度25 ± 1°C，光照12?14 h/d，光照強(qiáng)度.2500?.3000Lx，空氣相對濕度70%?75% ； (5)馴化移栽:將苗高6?8cm的壯苗帶瓶移至溫度20?30°C、空氣相對濕度75?.85%、光照強(qiáng)度3500?4000LX、通風(fēng)良好的環(huán)境下，逐漸打開瓶蓋，煉苗2?3天，取出組培苗，洗凈培養(yǎng)基后栽至苗床中，苗床基質(zhì)由腐殖土、蛭石、珍珠巖按體積比2:1:1混合而成。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金葉水杉組培快繁方法，其特征在于步驟(2)所述的初代培養(yǎng)基組成為:⑶+1.0 ?2.0mg/L 2，4-D +0.5 ?0.8mg/L NAA +4.0 ?7.0mg/L 6-BA+20 ?25g/L 蔗糖 +1.0 ?1.5g/L AC+5.5 ?7.0g/L 瓊脂，pH 為 5.6 ?5.8。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金葉水杉組培快繁方法，其特征在于步驟(3)所述的繼代培養(yǎng)基組成為:GD+0.8 ?1.0mg/L NAA+6.0 ?8.0mg/L 6-BA+20 ?25g/L 蔗糖 +1.0 ?.1.5g/L AC +5.5 ?7.0g/L 瓊脂，pH 為 5.6 ?5.8。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金葉水杉組培快繁方法，其特征在于步驟(4)所述的生根壯苗培養(yǎng)基組成為:⑶+0.8?1.0mg/L NAA+1.0?3.0mg/L IBA+20?25g/L蔗糖+1.0?.1.5g/L AC +5.5 ?7.0g/L 瓊脂，pH 為 5.6 ?5.8。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種金葉水杉組培快繁方法，由于金葉水杉嫁接繁殖的繁殖系數(shù)低，扦插和壓條繁殖的苗木易老化，現(xiàn)有組培方法存在污染率高、繁殖系數(shù)低，方法不穩(wěn)定等問題，為了解決以上問題，金葉水杉組培快繁方法包括如下步驟：外植體消毒、初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根壯苗培養(yǎng)、煉苗移栽，在不同培養(yǎng)階段使用不同的培養(yǎng)基組成，并采用合理的煉苗措施，從而建立金葉水杉組培快繁技術(shù)體系。采用本方法得到的再生植株，植物學(xué)性狀穩(wěn)定，重復(fù)性良好，增殖系數(shù)達(dá)到4-6，生根率達(dá)72%，移栽成活率達(dá)96%，能進(jìn)行大規(guī)模商品化育苗生產(chǎn)。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號(hào)】CN105191795
【申請?zhí)枴緾N201510616670
【發(fā)明人】張桂玲, 溫四民
【申請人】臨沂大學(xué)
【公開日】2015年12月30日
【申請日】2015年9月25日