一種新生兔透明骨骼標本的制作方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及標本制作方法技術領域，具體涉及一種新生兔透明骨骼標本制作方法。
【背景技術】
[0002]透明標本，可顯示用一般解剖方法難以觀察清楚的內(nèi)部結構。它可以在保持標本外形完整的情況下，顯示出體內(nèi)骨骼的功能位置關系和骨骼發(fā)育情況。廣泛應用于醫(yī)學解剖學、生物學、動物學、動物骨骼發(fā)育等專業(yè)的教學。其制作原理是用化學和物理的方法，先對動物的骨骼進行固定、染色，再使軟組織的折光率和透明劑的相近，達到軟組織透明，而使骨組織清晰顯現(xiàn)。透明骨骼標本不僅在“動物學”、“動物解剖學”、“動物影像學”等教學中作為直觀、形象的教具活躍課堂氣氛，增強學生的感知能力，而且在制作過程中可以讓學生參與，讓學生了解和掌握標本制作過程，同時培養(yǎng)學生的動手、動腦能力。在科學研究方面，動物骨骼標本可以不受時間、地點的限制，為科研提供研究材料。在科普宣傳方面，通過動物骨骼標本的陳列展覽，增強人們對野生動物的認識，有利于加強珍稀及瀕臨滅絕動物的保護工作。因此，對于教育和科研工作者來說，掌握動物骨骼標本制作的技術具有重要意義。
[0003]目前，透明骨骼標本制作方法一般包括以下步驟:取材、固定、脫水、脫脂、透明、染色、脫色和保存。其中通常采用80%乙醇、90%乙醇和無水乙醇由低濃度至高濃度對標本梯度脫水，脫水后變形嚴重。透明處理常用透明劑為氫氧化鉀或氫氧化鈉，氫氧化鉀和氫氧化鈉透明效果好，但腐蝕性強，當濃度超過3.5%或透明時間過長時，容易使標本骨骼脆裂、失去應有的色澤和完整性，造成制作失敗。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種安全無毒、成本低廉、透明效果好的新生兔透明骨骼標本的制作方法。
[0005]為解決上述技術問題，本發(fā)明所采用的技術方案是:一種新生兔透明骨骼標本制作方法，包括以下步驟:
步驟一、取新出生I天的兔，微創(chuàng)去除內(nèi)臟和腦組織，洗凈胸腔和腹腔，使其四肢呈自然伸張狀態(tài)，用4%的甲醛溶液固定10天或無水乙醇固定7天；
步驟二、用流水沖洗姿態(tài)固定的新生兔標本，再用5%過氧化氫溶液或1%氫氧化鉀溶液漂白7天；
步驟三、用乙醇由低濃度至高濃度對步驟二漂白處理后的新生兔進行梯度脫水，每個濃度梯度5-7天；
步驟四、先用質(zhì)量濃度為1%的氫氧化鉀溶液對步驟三脫水后的新生兔透明處理2天，之后再用甘油氫氧化鉀透明液中透明處理5天，所述甘油氫氧化鉀透明液中氫氧化鉀的質(zhì)量濃度為4.5%，甘油所占質(zhì)量百分百為40%，其余為水； 步驟五、依次用茜素紅染色液和阿利新藍染色液對透明處理后的新生兔進行染色，各染色7天，使骨骼、肌肉和軟骨著色；
步驟六、用1%氫氧化鉀溶液或20%銨甘油脫色劑對染色后的新生兔標本脫色5天，使肌肉脫去顏色，即得新生兔透明骨骼標本；
步驟七、將步驟六得到的新生兔透明骨骼標本依次用20%甘油溶液、30%甘油溶液、40%甘油溶液、50%甘油溶液、60%甘油溶液、70%甘油溶液和100%甘油梯度脫水，甘油在脫水的同時將肌肉未脫凈的顏色或脫色液殘留的銨脫去，然后將新生兔透明骨骼標本保存在甘油中。
[0006]進一步改進，步驟三所述乙醇由低濃度至高濃度依次為50%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、85%乙醇、90%乙醇、95%乙醇和無水乙醇。
[0007]進一步改進，步驟五所述茜素紅染色液為2%的茜素紅乙醇染液或含2%氫氧化鉀的0.04%的茜素紅染液；所述阿利新藍染色液由含0.2%阿利新藍的70%乙醇溶液、70%乙醇溶液與冰醋酸按體積比1:18:1的比例配制而成。
[0008]與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明采用50%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、85%乙醇、90%乙醇、95%乙醇和無水乙醇由低濃度至高濃度對漂白處理后的新生兔標本進行梯度脫水，增加了脫水梯度，并減小了梯度差，使脫水力度柔和而徹底，可以防止脫水過程中標本變形或變性；本發(fā)明采用氫氧化鉀與甘油兩種透明劑結合使用的方法，先用低濃度的氫氧化鉀溶液透明2天，透明較為柔和，不損傷標本，之后再轉移至甘油氫氧化鉀透明液中透明處理5天，由于甘油的存在，減弱了氫氧化鉀對標本的腐蝕，氫氧化鉀的濃度可提高到3.5%以上，提高透明效果；本發(fā)明使用了阿利新藍染液，使軟骨著色為藍色，透明骨骼標本色彩亮麗，更加美觀。
【具體實施方式】
[0009]以下結合具體實施例對本發(fā)明做作進一步詳細的說明。
[0010]實施例1
步驟一、取新出生I天的兔，微創(chuàng)去除內(nèi)臟和腦組織，洗凈胸腔和腹腔，使其四肢呈自然伸張狀態(tài)，用4%的甲醛溶液固定10天；
步驟二、用流水沖洗姿態(tài)固定的新生兔標本，再用1%氫氧化鉀溶液漂白7天；
步驟三、用乙醇由低濃度至高濃度對步驟二漂白處理后的新生兔進行梯度脫水，每個濃度梯度5-7天，所述乙醇由低濃度至高濃度依次為50%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、85%乙醇、90%乙醇、95%乙醇和無水乙醇；
步驟四、先用質(zhì)量濃度為1%的氫氧化鉀溶液對步驟三脫水后的新生兔透明處理2天，之后再用甘油氫氧化鉀透明液中透明處理5天，所述甘油氫氧化鉀透明液中氫氧化鉀的質(zhì)量濃度為4.5%，甘油所占質(zhì)量百分百為40%，其余為水；
步驟五、依次用茜素紅染色液和阿利新藍染色液對透明處理后的新生兔進行染色，各染色7天，使骨骼、肌肉和軟骨著色，所述茜素紅染色液為2%的茜素紅乙醇染液或含2%氫氧化鉀的0.04%的茜素紅染液；所述阿利新藍染色液由含0.2%阿利新藍的70%乙醇溶液、70%乙醇溶液與冰醋酸按體積比1:18:1的比例配制而成；
步驟六、用1%氫氧化鉀溶液對染色后的新生兔標本脫色5天，使肌肉脫去顏色，即得新生兔透明骨骼標本；
步驟七、將步驟六得到的新生兔透明骨骼標本依次用20%甘油溶液、30%甘油溶液、40%甘油溶液、50%甘油溶液、60%甘油溶液、70%甘油溶液和100%甘油梯度脫水，甘油在脫水的同時將肌肉未脫凈的顏色脫去，然后將新生兔透明骨骼標本保存在甘油中。
[0011]實施例2
步驟一、取新出生I天的兔，微創(chuàng)去除內(nèi)臟和腦組織，洗凈胸腔和腹腔，使其四肢呈自然伸張狀態(tài)，用4%的甲醛溶液固定10天；
步驟二、用流水沖洗姿態(tài)固定的新生兔標本，再用1%氫氧化鉀溶液漂白7天；
步驟三、用乙醇由低濃度至高濃度對步驟二漂白處理后的新生兔進行梯度脫水，每個濃度梯度5-7天，所述乙醇由低濃度至高濃度依次為50%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、85%乙醇、90%乙醇、95%乙醇和無水乙醇；
步驟四、先用質(zhì)量濃度為1%的氫氧化鉀溶液對步驟三脫水后的新生兔透明處理2天，之后再用甘油氫氧化鉀透明液中透明處理5天，所述甘油氫氧化鉀透明液中氫氧化鉀的質(zhì)量濃度為4.5%，甘油所占質(zhì)量百分百為40%，其余為水；
步驟五、依次用茜素紅染色液和阿利新藍染色液對透明處理后的新生兔進行染色，各染色7天，使骨骼、肌肉和軟骨著色，所述茜素紅染色液為2%的茜素紅乙醇染液或含2%氫氧化鉀的0.04%的茜素紅染液；所述阿利新藍染色液由含0.2%阿利新藍的70%乙醇溶液、70%乙醇溶液與冰醋酸按體積比1:18:1的比例配制而成；
步驟六、用20%銨甘油脫色劑對染色后的新生兔標本脫色5天，使肌肉脫去顏色，即得新生兔透明骨骼標本；
步驟七、將步驟六得到的新生兔透明骨骼標本依次用20%甘油溶液、30%甘油溶液、40%甘油溶液、50%甘油溶液、60%甘油溶液、70%甘油溶液和100%甘油梯度脫水，甘油在脫水的同時將肌肉未脫凈的顏色和脫色液殘留的銨脫去，然后將新生兔透明骨骼標本保存在甘油中。
[0012]實施例3
步驟一、取新出生I天的兔，微創(chuàng)去除內(nèi)臟和腦組織，洗凈胸腔和腹腔，使其四肢呈自然伸張狀態(tài)，用無水乙醇固定7天；
步驟二、用流水沖洗姿態(tài)固定的新生兔標本，再用5%過氧化氫溶液漂白7天；
步驟三、用乙醇由低濃度至高濃度對步驟二漂白處理后的新生兔進行梯度脫水，每個濃度梯度5-7天，所述乙醇由低濃度至高濃度依次為50%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、85%乙醇、90%乙醇、95%乙醇和無水乙醇；
步驟四、先用質(zhì)量濃度為1%的氫氧化鉀溶液對步驟三脫水后的新生兔透明處理2天，之后再用甘油氫氧化鉀透明液中透明處理5天，所述甘油氫氧化鉀透明液中氫氧化鉀的質(zhì)量濃度為4.5%，甘油所占質(zhì)量百分百為40%，其余為水；
步驟五、依次用茜