一種調(diào)控菊花插穗生根的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物插穗生根方法技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種調(diào)控菊花插穗生根的方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 菊花（CArjsa/?Mevma?azori/bJiiM?)是我國十大傳統(tǒng)名花，也是世界四大切花之 一，我國是栽培菊花的起源中心和菊屬種質(zhì)資源的分布中心，菊屬植物中40余種，在我國 分布的有20余種，栽培菊?qǐng)@藝品種達(dá)數(shù)千余個(gè)。菊花在我國有悠久的栽培歷史，常用的繁 殖方法有：種子(播種）繁殖、分株繁殖、組培繁殖和扦插繁殖。由于播種苗很難保持原有品 種的特性，分株繁殖的繁殖系數(shù)較低，組培繁殖需要建立無菌體系、快繁和煉苗等步驟，歷 時(shí)較長，因此菊花種苗生產(chǎn)中常用扦插繁殖進(jìn)行更新，扦插能夠保持品種的優(yōu)良性狀，繁殖 系數(shù)較高，成苗時(shí)間短，成為菊花大規(guī)模工廠化生產(chǎn)的最優(yōu)繁殖途徑。由于菊花品種眾多， 基因型差異較大，品種間生根能力不同，制約其產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用和工廠化生產(chǎn)。插穗不定根的發(fā) 生問題是其進(jìn)行工廠化育苗實(shí)踐的核心問題，在植物發(fā)育和形態(tài)建成等方面都有重要的研 究價(jià)值。
[0003] 銳皮留酮（ecdysterone，EDS)B卩 0 -蟲兌皮留酮，1954 年，Butenandt等從 500kg香 蛹中分離出250mg最初的昆蟲變態(tài)活性物質(zhì)銳皮酮（ecdysone)。此后，在許多種植物中分 離出多種類似的物質(zhì)。人們發(fā)現(xiàn)，蛻皮激素在植物界的分布不僅較動(dòng)物界高，而且廣，資源 豐富，如懷牛膝、川牛膝、桑葉、白毛夏枯草、澤瀉、羅漢松、紫杉、烏毛蕨及紫箕等藥用植物 中均含有其類似物，涉及到低等植物厥類、裸子植物、被子植物等80個(gè)科的植物類群中。動(dòng) 物實(shí)驗(yàn)表明EDS能促進(jìn)核酸及蛋白質(zhì)合成、調(diào)節(jié)糖代謝、促進(jìn)脂肪代謝、調(diào)芐基因表達(dá)、改 善免疫功能、影響中樞神經(jīng)及心血管系統(tǒng)和促進(jìn)細(xì)胞增殖、分化等，因此被認(rèn)為有"更生誘 導(dǎo)物質(zhì)（reviveinducer)"的作用。銳皮留酮易溶于乙醇，用乙醇很容易將其提取。研究 發(fā)現(xiàn)牛膝的醇提物以及醇提物的乙酸乙酯萃取物(主要成分為H)S)對(duì)成骨樣細(xì)胞有顯著 的促進(jìn)增殖作用（高曉燕，王大為，李發(fā)美，姜志.牛膝提取物對(duì)成骨樣細(xì)胞增殖的作用. 2000a，17 (3) : 201-213,高曉燕，王大為，李發(fā)美.牛膝中脫皮留酮的含量測(cè)定及促成骨樣 細(xì)胞增殖活性.藥學(xué)學(xué)報(bào)，2000b，35(11): 868-870)，在人表皮干細(xì)胞增殖過程中也有顯 著促進(jìn)作用，是促進(jìn)創(chuàng)面愈合的主要機(jī)制（李國芳.蛻皮留酮促進(jìn)人表皮干細(xì)胞增殖的初 步研究[D]，廣州：南方醫(yī)科大學(xué)，2009)。也有研究發(fā)現(xiàn)，DES可促進(jìn)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞 (HUVEC)由靜止期和(或)DNA合成前期進(jìn)入DNA合成期、由DNA合成期進(jìn)入DNA合成后期和 (或）分裂期，對(duì)HUVEC增殖具有促進(jìn)作用（吳旭.蛻皮留酮的內(nèi)皮保護(hù)作用及其機(jī)理研究 [D]，廣州：第一軍醫(yī)大學(xué)，2006)。
[0004] 通過對(duì)近五十年有關(guān)EDS的研究報(bào)道的總結(jié)發(fā)現(xiàn)，相關(guān)研究主要集中在分離鑒 定、化學(xué)結(jié)構(gòu)和對(duì)動(dòng)物的作用及其機(jī)制，另外在不同植物中的分布、積累和測(cè)定方法等方面 的研究也較多，而對(duì)植物本身的作用方面尚未見報(bào)道。緣于EDS在動(dòng)物上有促進(jìn)細(xì)胞增殖、 分化等的作用，本研究將其運(yùn)用到菊花插穗生根上，以期找到一種菊花插穗快速生根的方 法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明解決的技術(shù)問題是提供了一種調(diào)控菊花插穗生根的方法，所建立的菊花插 穗生根方法不僅生根快而且生根率高，根數(shù)較多，根長較長，易于移栽成活。
[0006] 本發(fā)明為解決上述技術(shù)問題采用如下技術(shù)方案，一種調(diào)控菊花插穗生根的方法， 其特征在于具體步驟為：春季5-6月份或秋季9-10月份，從田間選取生長一致的直徑為 0. 9-1.Ocm帶頂芽的菊花枝條，去掉已木質(zhì)化部分后留2葉1心截成8-10cm的段作為插穗； 用摩爾濃度為3ymol/L的蛻皮留酮溶液處理插穗基部后扦插于滅過菌的蛭石苗床上，然 后覆蓋塑料薄膜，控制溫度為23-25 °C，每天早中晚各霧狀噴水1次，每天11:00-14:30在塑 料薄膜上罩上遮陰網(wǎng)。
[0007] 進(jìn)一步優(yōu)選，所述的蛻皮留酮溶液處理插穗基部的時(shí)間為1-1. 5小時(shí)。
[0008] 進(jìn)一步優(yōu)選，所述的蛻皮甾酮溶液為藥用植物懷牛膝、川牛膝、桑葉、白毛夏枯草、 澤瀉、羅漢松、紫杉、烏毛蕨或紫箕的乙醇提取物。
[0009]目前菊花的生根大多采用萘乙酸粉劑，需要人工合成，生產(chǎn)工藝繁瑣，而蛻皮甾酮 來源于植物，存在于80個(gè)科的植物類群中，并且易于提取、定量。本發(fā)明操作相對(duì)簡單，所 投成本較低，省時(shí)省力，具有廣闊的應(yīng)用前景。
【具體實(shí)施方式】
[0010] 以下通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容做進(jìn)一步詳細(xì)說明，但不應(yīng)該將此理解為本 發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)施例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā) 明的范圍。
[0011] 實(shí)施例1 1材料和方法 I. 1材料 供試采料為藥用菊花品種'懷黃菊'azori/bJi?Ramat. 'Huaihuang'）。藥用菊花發(fā)源于河南，以產(chǎn)于古懷慶府(今河南焦作轄區(qū)溫縣、泌 陽、武陟、孟州）一帶的"懷菊花"最為有名，是著名的"四大懷藥"（懷山藥、懷菊花、懷地黃、 懷牛膝）之一。懷黃菊屬于菊科(Asteraceae)菊屬（L.)，是懷菊花中的優(yōu) 良種質(zhì)，是目前懷區(qū)主栽品種，久負(fù)盛名。
[0012] 1. 2試驗(yàn)方法 春季5-6月份或秋季9-10月份，從田間選取生長一致的帶頂芽的菊花枝條(直徑0. 9 -I. 0cm)，去掉已木質(zhì)化部分后留2葉1心截成8-10cm的段作為插穗；用懷牛膝、桑葉、 澤瀉等藥用植物的乙醇提取物一含l、3、5、7iimol/L的蛻皮留酮溶液分別處理插穗基部 1-1. 5小時(shí)后扦插于滅過菌的蛭石苗床上，然后覆蓋塑料薄膜，溫度控制為23-25°C，每天 早中晚各霧狀噴水1次，每天11:00-14:30在塑料薄膜上罩上遮陰網(wǎng)。三個(gè)重復(fù)，每個(gè)重 復(fù)60個(gè)插穗。以蒸餾水浸泡插穗基部1-1. 5小時(shí)為對(duì)照1，以本研究室前期常用的方法： 20mg/LNAA浸泡插穗基部10-15分鐘為對(duì)照2。扦插至21天統(tǒng)計(jì)生根率、根長、生根數(shù)。
[0013] 開始生根時(shí)間的觀察采取的方法為：按照上述方法處理插穗基部，在同樣的苗床 上另設(shè)實(shí)驗(yàn)區(qū)，扦插后第5d開始，每天上午檢查插穗的生根情況。每處理10個(gè)插穗，3個(gè)重 復(fù)。
[0014] 1. 3數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)處理用SPSS13.0。對(duì)平均生根數(shù)、平均根長和生根率進(jìn)行方差分析，采用 "Duncan"法進(jìn)行平均數(shù)多重比較。
[0015] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 不同濃度的蛻皮留酮溶液處理對(duì)'懷黃菊'插穗生根的影響見表1。
[0016] 表1不同濃度的蛻皮甾酮溶液處理'懷黃菊'插穗生根情況(扦插后21天）
注：同一時(shí)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果中同一列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示表示在/^ 0. 05水平上達(dá) 到顯著差異。
[0017] 由表1可以看出：與對(duì)照1相比，無論春季還是秋季，適宜濃度的蛻皮甾酮溶液處 理均能使'懷黃菊'快速生根，最早生根時(shí)間為扦插后7天，最晚生根時(shí)間為扦插后10天， 提前7-10天，達(dá)到和對(duì)照2 (NAA處理)一樣的提前效果，使其生根率保持在較高的水平，而 且顯著增加其平均根長和平均生根數(shù)，以3ymol/L蛻皮留酮處理效果為最佳。
[0018] 實(shí)施例2 1材料和方法 I. 1材料 供試材料為黃色觀賞藝菊兼食用菊品種'春日見山'（ Ramat. ^Chunrijianshan,)〇
[0019] I. 2試驗(yàn)方法 春季5-6月份或秋季9-10月份，從田間選取生長一致的帶頂芽的菊花枝條(直徑0. 9 -I. 0cm)，去掉已木質(zhì)化部分后留2葉1心截成8-lOcm的段作為插穗；用懷牛膝、桑葉、澤瀉 等藥用植物的乙醇提取物一含1、3、5、7ymol/L的蛻皮留酮溶液分別處理插穗基部1-1. 5 小時(shí)后扦插于滅過菌的蛭石苗床上，然后覆蓋塑料薄膜，溫度控制為23-25°C，每天早中晚 各霧狀噴水1次，每天11:00-14:30在塑料薄膜上罩上遮陰網(wǎng)。三個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)60個(gè) 插穗。以蒸餾水浸泡插穗基部1-1. 5小時(shí)為對(duì)照1，以本研究室前期常用方法：的20mg/L NAA浸泡插穗基部10-15分鐘為對(duì)照2。扦插至21天統(tǒng)計(jì)生根率、根長、生根數(shù)。
[0020] 開始生根時(shí)間的觀察采取的方法為：按照上述方法處理插穗基部，在同樣的苗床 上另設(shè)實(shí)驗(yàn)區(qū)，扦插后第5d開始，每天上午檢查插穗的生根情況。每處理10個(gè)插穗，3個(gè)重 復(fù)。
[0021] 1. 3數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)處理用SPSS13.0。對(duì)平均生根數(shù)、平均根長和生根率進(jìn)行方差分析，采用 "Duncan"法進(jìn)行平均數(shù)多重比較。
[0022] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 不同濃度的蛻皮留酮溶液處理對(duì)'春日見山'插穗生根的影響見表2。
[0023] 表2不同濃度的蛻皮甾酮溶液處理'春日見山'插穗生根情況(扦插后21天）
注：同一時(shí)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果中同一列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示表示在/^ 0. 05水平上達(dá) 到顯著差異。
[0024] 由表2可以看出：與對(duì)照1相比，無論春季還是秋季，適宜濃度的蛻皮留酮溶液處 理均能使'春日見山'快速生根，最早生根時(shí)間為扦插后10天，最晚生根時(shí)間為扦插后13 天，提前7-10天，達(dá)到和對(duì)照2 (NAA處理）一樣的提前效果，使其生根率保持在較高的水 平，而且顯著增加其平均根長和平均生根數(shù)，以3ymol/L蛻皮留酮處理效果為最佳。
[0025] 以上實(shí)施例描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征及優(yōu)點(diǎn)，本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該 了解，本發(fā)明不受上述實(shí)施例的限制，上述實(shí)施例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明的原 理，在不脫離本發(fā)明原理的范圍下，本發(fā)明還會(huì)有各種變化和改進(jìn)，這些變化和改進(jìn)均落入 本發(fā)明保護(hù)的范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種調(diào)控菊花插穗生根的方法，其特征在于具體步驟為：春季5-6月份或秋季9-10 月份，從田間選取生長一致的直徑為0. 9-1. Ocm帶頂芽的菊花枝條，去掉已木質(zhì)化部分后 留2葉1心截成8-10cm的段作為插穗；用摩爾濃度為3 ymol/L的蛻皮留酮溶液處理插穗 基部后扦插于滅過菌的蛭石苗床上，然后覆蓋塑料薄膜，控制溫度為23-25°C，每天早中晚 各霧狀噴水1次，每天11:00-14:30在塑料薄膜上罩上遮陰網(wǎng)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的調(diào)控菊花插穗生根的方法，其特征在于：所述的蛻皮留酮溶 液處理插穗基部的時(shí)間為1-1. 5小時(shí)。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的調(diào)控菊花插穗生根的方法，其特征在于：所述的蛻皮留酮溶 液為藥用植物懷牛膝、川牛膝、桑葉、白毛夏枯草、澤瀉、羅漢松、紫杉、烏毛蕨或紫箕的乙醇 提取物。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種調(diào)控菊花插穗生根的方法，屬于植物插穗生根方法技術(shù)領(lǐng)域，具體步驟為：春季5-6月份或秋季9-10月份，從田間選取生長一致的直徑為0.9-1.0cm帶頂芽的菊花枝條，去掉已木質(zhì)化部分后留2葉1心截成8-10cm的段作為插穗；用摩爾濃度為3μmol/L的蛻皮甾酮溶液處理插穗基部1-1.5小時(shí)后扦插于滅過菌的蛭石苗床上，然后覆蓋塑料薄膜，控制溫度為23-25℃，每天早中晚各霧狀噴水1次，每天11:00-14:30在塑料薄膜上罩上遮陰網(wǎng)。目前菊花的生根大多采用萘乙酸粉劑，需要人工合成，生產(chǎn)工藝繁瑣，而蛻皮甾酮來源于植物，存在于80個(gè)科的植物類群中，并且易于提取、定量。本發(fā)明操作相對(duì)簡單，所投成本較低，省時(shí)省力，具有廣闊的應(yīng)用前景。
【IPC分類】A01G1/00
【公開號(hào)】CN105027938
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510509981
【發(fā)明人】李金亭, 趙喜亭, 馬夢(mèng)丹, 蔣麗薇, 王燦, 朱玉婷, 王添樂
【申請(qǐng)人】河南師范大學(xué)
【公開日】2015年11月11日
【申請(qǐng)日】2015年8月19日