一種營養(yǎng)液及其在鐵皮石斛莖段組培育苗中的應(yīng)用方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及組培種植技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種營養(yǎng)液及其在鐵皮石斛莖段組培育 苗中的應(yīng)用方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 鐵皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo)為蘭科石斛屬多年生附生 草本植物，具有滋陰補腎、潤肺生津、抗腫瘤、抗衰老、增強機體免疫力等功效，為我國傳統(tǒng) 名貴中藥材。道家醫(yī)學經(jīng)典《道藏》將鐵皮石斛列為"中華九大仙草"之首，民間稱其為"救 命仙草"。
[0003] 鐵皮石斛是我國的特有珍稀瀕危植物，野生分布于我國廣東、云南、貴州、廣西、浙 江、四川等地。對生境要求特殊，生長于高山峻嶺、懸崖峭壁及巖石縫隙之間，鐵皮石斛的種 子極小、無胚乳，自然條件下需與某些真菌共生才能萌發(fā)，很難用實生苗栽培，而傳統(tǒng)的分 株、扦插等方式的繁殖率極低，加上人們長期掠奪性、毀滅性的采挖與無計劃的消耗，破壞 了它們賴以生存的自然生態(tài)環(huán)境，致使其野生資源嚴重枯竭，被列為國家二級重點保護植 物。
[0004] 然而，目前鐵皮石斛的市場需求量不斷增長，供求矛盾進一步增大，將鐵皮石斛野 生變家種，利用快繁技術(shù)大規(guī)模地人工栽培以滿足市場需要就成了當務(wù)之急。近20年來， 我國開展了鐵皮石斛人工馴化栽培研宄，取得了一定的成果。但伴隨著產(chǎn)業(yè)化的迅猛發(fā)展， 我國的石斛種植還存在著諸多的突出問題，主要表現(xiàn)在：（1)種苗良莠不齊，組培苗分離， 退化。由于鐵皮石斛生產(chǎn)繁育基本依賴于種子擴繁的組培苗，采用種子做外植體生產(chǎn)的鐵 皮石斛試管苗，由于外植體材料遺傳背景差異和培養(yǎng)環(huán)境的影響，試管苗植株形態(tài)特征差 異明顯，且在組培室中繁育后，品種分離、退化現(xiàn)象嚴重，而本發(fā)明采用莖段作外植體生產(chǎn) 的試管苗，遺傳背景相同，植株形態(tài)特征一致，保持了種源穩(wěn)定性。（2)組織培養(yǎng)周期長，技 術(shù)尚需進一步突破。傳統(tǒng)的種子組培快繁法需要經(jīng)歷播種、誘導原球莖、原球莖增殖、生根 壯苗等步驟，時間長達1年以上，其中播種至原球莖耗時長達5個月以上，而采用傳統(tǒng)的莖 段無性繁殖法，則可以省去播種到原球莖的步驟，直接莖段誘導原球莖，縮短了組培擴繁的 時間。本發(fā)明通過改良培養(yǎng)基配方結(jié)合微波刺激法，可加快莖段誘導原球莖的進程，進一步 縮短了生產(chǎn)周期，解決產(chǎn)業(yè)化發(fā)展對種苗的大批量需求。（3)栽培時間長，成活率低。鐵皮 石斛瓶苗移栽成活率通常只有60%，栽培半年以上才可移栽至苗床中。若能通過改良的營 養(yǎng)液，使鐵皮石斛種苗直接在基質(zhì)苗床中進行馴化煉苗，就可以節(jié)約煉苗時間和成產(chǎn)成本。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為了克服上述技術(shù)缺陷，本發(fā)明提供了一種營養(yǎng)液及其在鐵皮石斛莖段組培育苗 中的應(yīng)用方法。本發(fā)明能保持母本優(yōu)質(zhì)性狀，加快繁殖速度，可以解決實際生產(chǎn)中種苗良莠 不齊，分離退化等問題，并提高種苗成活率及質(zhì)量，有效防止病蟲害。
[0006] 本發(fā)明的一種營養(yǎng)液，由以下成分組成：500mg/L尿素、650mg/L硝酸鉀、370mg/L 硝酸H590mg/L磷酸二氫鉀、320mg/L硫酸鎂、85mg/L乙二胺四乙酸二鈉、60mg/L硫酸亞 鐵、35mg/L硫酸猛、20mg/L硼酸、8mg/L硫酸鋅、3. 6mg/L硫酸銅、I. 9mg/L鉬酸鈉、166mg/L 三十烷醇、26mg/L萘乙酸、42g/L殼寡糖、50g/L嘧菌酯、葉片超聲液和IL純水，EC值控制在 0.6左右，酸堿度pH值調(diào)至6.0 ;所述葉片超聲液為15g/L鐵皮石斛葉、5g/L金錢草、5g/L平 車前、7g/L側(cè)柏葉、10g/L茯苓、12g/L威靈仙粉碎后，加入0. 8g/L竹葉抗氧化物AOB，648W 超聲處理30min所得溶液，即用即加。
[0007] 本發(fā)明還提供了一種將本發(fā)明的上述營養(yǎng)液在鐵皮石斛莖段組培育苗中的應(yīng)用 方法，該方法按照如下步驟進行：
[0008] (1)莖段消毒滅菌：選取鐵皮石斛莖段，剝?nèi)ト~片及葉鞘，經(jīng)清水沖洗后，依次用 75%酒精、0. 1%氯化汞溶液進行表面消毒，并用無菌水沖洗，無菌濾紙吸干水份；
[0009] (2)原球莖誘導及增殖：將前述步驟（1)中處理后的莖段的芽點下方連帶莖段部 位一齊取出，接種于原球莖增殖培養(yǎng)基中；
[0010] (3)原球莖分化：將前述步驟（2)得到的原球莖接種于分化培養(yǎng)基中；
[0011] (4)生根壯苗培養(yǎng)：將前述步驟（3)中得到的分化出叢生苗的原球莖轉(zhuǎn)瓶于生根 培養(yǎng)基中；
[0012] (5)出瓶移栽：將前述步驟（4)中得到的生根的試管苗移入水苔基質(zhì)中，1個月后 移入苗床基質(zhì)中栽培，噴施所述營養(yǎng)液。
[0013] 優(yōu)選的，所述步驟（2)中，采用微波法誘導原球莖：將所述步驟（2)中的所述接 種于原球莖增殖培養(yǎng)基中的所述原球莖置于4°C環(huán)境中，暗培養(yǎng)3h，微波處理2min，功率 500W，再置于冰塊中l(wèi)h，然后轉(zhuǎn)移至25°C環(huán)境中，光照強度2000Lx下培養(yǎng)。
[0014] 優(yōu)選的，所述步驟（2)中的所述芽點下方連帶莖段部位一齊取出采用斜切方式。
[0015] 優(yōu)選的，所述步驟（2)中的所述原球莖誘導及增殖培養(yǎng)基由以下成分組成：1/2MS 基本培養(yǎng)基、0.51^/1萘乙酸、1.51!^/1苯基噻二唑基脲、10%芋頭汁、30%蔗糖和8 8/1瓊 脂。
[0016] 優(yōu)選的，所述步驟（3)中的所述分化培養(yǎng)基由以下成分組成：1/2MS基本培養(yǎng)基、 0. 51^/1萘乙酸、2.01!^/16-芐氨基腺嘌呤、10%芋頭汁、30%蔗糖和88/1瓊脂。
[0017] 優(yōu)選的，所述步驟（4)中的所述生根培養(yǎng)基由以下成分組成：1/2MS基本培養(yǎng)基、 1. Omg/L萘乙酸、2. Omg/L 6-芐氨基腺嘌呤、10%香蕉汁、30%蔗糖和8g/L瓊脂。
[0018] 優(yōu)選的，所述步驟（5)中的所述營養(yǎng)液的噴施方法如下：施肥頻率為一周一次，施 肥濃度為0. 3%，每株用量15mL。
[0019] 本發(fā)明還提供了一種能應(yīng)用于上述方法中的原球莖誘導及增殖培養(yǎng)基，由以下成 分組成：1/2MS基本培養(yǎng)基、0. 5mg/L萘乙酸、I. 5mg/L苯基噻二唑基脲、10%芋頭汁、30%蔗 糖和8g/L瓊脂。
[0020] 本發(fā)明還提供了一種能應(yīng)用于上述方法中的分化培養(yǎng)基，由以下成分組成：1/2MS 基本培養(yǎng)基、0.51^/1萘乙酸、2.01!^/16-芐氨基腺嘌呤、10%芋頭汁、30%蔗糖和8 8/1瓊 脂。
[0021] 本發(fā)明采用莖段作外植體生產(chǎn)的試管苗，遺傳背景相同，植株形態(tài)特征一致，保持 了種源穩(wěn)定性。本發(fā)明通過改良培養(yǎng)基配方結(jié)合微波刺激法，能在短時間內(nèi)誘導產(chǎn)生大量 原球莖，提高增殖系數(shù)大幅度提高，加快莖段誘導原球莖的進程，進一步縮短了生產(chǎn)周期， 解決產(chǎn)業(yè)化發(fā)展對種苗的大批量需求。本發(fā)明通過改良營養(yǎng)液配方，使得成活率提高至 97%以