組蛋白去乙?；敢种苿┯诟淖兎渫鯘{中mrjp3蛋白質(zhì)的新穎用圖
【專利說(shuō)明】組蛋白去乙?；敢种苿┯诟淖兎渫鯘{中MRJP3蛋白質(zhì)的 新穎用途
[0001] 本申請(qǐng)是申請(qǐng)?zhí)枮?01010236081. 7、申請(qǐng)日為2010年7月22日，發(fā)明名稱為"組 蛋白去乙酰化酶抑制劑于改變蜂王漿中MRJP3蛋白質(zhì)的新穎用途"的發(fā)明專利申請(qǐng)的分案 申請(qǐng)。
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明涉及促進(jìn)蜂王子（蜂王幼蟲）、蜂王蛹和蜂王生長(zhǎng)的方法，所述方法是通過(guò) 以組蛋白去乙?；敢种苿℉DACi)或含有（一或多種）HDAC抑制劑的混合物或配方喂飼 年輕工蜂。具體來(lái)說(shuō)，經(jīng)喂飼HDACi的年輕工蜂所分泌的蜂王漿中，68kDa與64kDaMRJP3 蛋白質(zhì)間的比例發(fā)生改變。
【背景技術(shù)】
[0003] 蜜蜂是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)中最具價(jià)值的生物物種之一，其生產(chǎn)多種蜂產(chǎn)品，例如蜂王漿、 蜂蜜、蜂膠與花粉，而這些產(chǎn)品提供給人類豐富的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源（赫爾納（HellnerM.)等人， 2008)。因此，研究蜜蜂的生長(zhǎng)、演化與發(fā)育是相當(dāng)重要的課題。
[0004] 蜜蜂的社會(huì)屬于母系社會(huì)，且由蜂王所領(lǐng)導(dǎo)。在蜂群當(dāng)中，工蜂與蜂王均由受精卵 孵化而成；而雄蜂則是由無(wú)受精的卵子孵化生長(zhǎng)而成（溫斯頓（WinstonM.L.)，1987)。蜂 王將單一的卵產(chǎn)于蜂巢的個(gè)別巢房當(dāng)中，在三到四天內(nèi)，產(chǎn)下的卵可孵化出幼蟲。孵化出的 幼蟲由年輕工蜂負(fù)責(zé)喂食，并在巢房中經(jīng)由數(shù)個(gè)發(fā)育階段成長(zhǎng)。當(dāng)幼蟲進(jìn)入化蛹期間時(shí)，工 蜂會(huì)封閉巢房的開(kāi)口。通常蜂王會(huì)在16天內(nèi)自巢房羽化而出，而工蜂和雄蜂各需21天和 24天。蜂王個(gè)體較大，其壽命是一般工蜂的10-15倍。受精卵將發(fā)育為工蜂或蜂王，此受到 蜂群的調(diào)控。原則上，一群蜂只會(huì)有一只蜂王。此外，蜂王所食用的食物也有別于同一蜂群 中的其它蜂只；蜂王終其一生以蜂王漿為食物，而工蜂只在發(fā)育初期食用蜂王漿。部分學(xué)者 則認(rèn)為工蜂在發(fā)育期仍食用蜂王漿，只是其所食用的蜂王漿與蜂王所食用的蜂王漿化學(xué)組 成可能不同。無(wú)論如何，蜂王楽可視為是延續(xù)蜂群最重要的物質(zhì)（羅賓遜（RobinsonG.E.) 等人，1987)。
[0005] 蜂王漿是蜂王子與蜂王最重要的食物和養(yǎng)分來(lái)源，其由年輕工蜂的咽頭腺與大顎 腺所分泌。蜂王漿的化學(xué)組成可能會(huì)隨著蜂王子的不同發(fā)育階段而有所改變?？偟膩?lái)說(shuō)， 一般認(rèn)為前述蜂王漿的成份改變是源自糖類、而非蛋白質(zhì)組成的變化（派仁（PeirenN.) 等人，2005)。
[0006] 已知蜂王漿包含多種可促進(jìn)人體健康的物質(zhì)，并具有多樣藥理特性（高木-土井 (Takaki-DoiS.)等人，2009 ;曼奴（MannoorM.K.)等人，2009 ;和咖思科（GasicS.)等人， 2007)。因此，蜂王漿已廣泛用于促進(jìn)人類健康的保健產(chǎn)品。最近的研究發(fā)現(xiàn)，蜂王漿可以促 進(jìn)免疫調(diào)控（維科威克（VuecvicD.)等人，2007)、抗菌（布卡（BoukraaL. )，2008)、滋養(yǎng)腦 神經(jīng)（橋本（HashimotoM.)等人，2005)、抗癌和抗氧化（古蒂（GouH.)等人，2008)。研究 發(fā)現(xiàn)蜂王漿為乳白色漿狀物質(zhì)，其組成為：約60-70 %的水分、12-15 %的蛋白質(zhì)、10-12 % 的糖類、3-5%的脂肪、和多種微量元素與礦物質(zhì)（斯卡塞利（ScarselliR.)等人，2005)。 在蛋白質(zhì)成份當(dāng)中，約有80-90%屬于水溶性蛋白質(zhì)，而其余為非水溶性蛋白質(zhì)。換句話說(shuō)， 蜂王漿中所含的蛋白質(zhì)成份多為水溶性蛋白質(zhì)。
[0007] 在上述水溶性蛋白質(zhì)中，以MRJP(主要蜂王漿蛋白質(zhì)，MajorRoyalJelly Proteins)家族（MRJP1-9)為主（斯密佐娃（SchmitzovaJ.)等人，1998)。所述MRJP蛋 白質(zhì)的氨基酸序列雖已經(jīng)分析，然而，其所負(fù)責(zé)的作用和功能尚待研究。
[0008] MRJPl在蜜蜂腦部被發(fā)現(xiàn)，其可能與蜜蜂行為有關(guān)。MRJPl占蜂王漿中水溶性蛋 白質(zhì)的44%，而且是所有MRJP家族蛋白質(zhì)中含量最高者（瑪勒科瓦（MalecovaB.)等人， 2003) 。目前針對(duì)MRJP3的研究居多，一般認(rèn)為其與免疫調(diào)控有關(guān)（科諾（KohnoK.)等人， 2004) 。MRJP3占蜂王漿中整體水溶性蛋白質(zhì)的12 %，而且其含量在所有MRJP蛋白質(zhì)（MRJPs 1-9)中居第二位。MRJP3的特點(diǎn)在于其抗過(guò)敏和抗發(fā)炎活性。此外，MRJP的高多態(tài)性基因 可導(dǎo)致MRJP3蛋白質(zhì)變異體（例如60-70kDa蛋白質(zhì)）的生成（斯特芬-艾爾伯特（Stefan Albert)等人，1999)。
[0009] MRJP蛋白質(zhì)提供豐富的必需氨基酸和其它營(yíng)養(yǎng)成份（古澤（FurusawaT.)等人， 2008)。蜂王漿是蜂王子唯一的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源，而MRJP蛋白質(zhì)則是蜂王漿中最重要的蛋白質(zhì)。因 此，需要研發(fā)具有特殊組成的蜂王漿。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明提供一種方法，經(jīng)所述方法培育的蜜蜂幼蟲相比于正常幼蟲，重量至少大 50%、大一倍（100% )、甚至大數(shù)倍；經(jīng)所述方法培育的蜂蛹相比于正常蜂蛹，重量至少大 50%、甚至大一至數(shù)倍；經(jīng)所述方法培育的蜂王相比于正常蜂王，重量至少大50%、甚至大 一至數(shù)倍。
[0011] 本發(fā)明提供一種培育相比于對(duì)照組幼蟲重量至少大50%、甚至大一倍（100% )的 蜜蜂幼蟲的方法；所述方法包括以一種HDAC抑制劑或數(shù)種HDAC抑制劑的混合物喂飼年輕 工蜂，并以所述年輕工蜂所分泌的蜂王漿喂飼幼蟲。其中對(duì)照組的幼蟲所食用的蜂王漿是 由未喂飼HDAC抑制劑或數(shù)種HDAC抑制劑的混合物的年輕工蜂分泌。
[0012] 本發(fā)明提供一種培育相比于對(duì)照組蜂蛹重量至少大50%的蜂蛹、或相比于對(duì)照組 蜂王重量至少大50%的蜂王的方法；所述方法包括以一種HDAC抑制劑或數(shù)種HDAC抑制劑 的混合物喂飼年輕工蜂，并以所述年輕工蜂所分泌的蜂王漿喂飼幼蟲，而獲得由所述幼蟲 發(fā)育而成的蛹或蜂王，其中對(duì)照組的蛹或蜂王由食用未喂飼HDAC抑制劑或數(shù)種HDAC抑制 劑混合物的年輕工蜂所分泌的蜂王漿的蜜蜂幼蟲發(fā)育而成。
[0013] 本發(fā)明另外提供一種蜂王漿，其所含68kDa與64kDaMRJP3蛋白質(zhì)的比例相比于 對(duì)照組蜂王漿有所改變。
[0014] 本發(fā)明另外提供一種調(diào)控工蜂mrjp3基因的表觀遺傳（epigenetics)的方法，其 包括以HDAC抑制劑喂飼工蜂以調(diào)控工蜂的mrjp3基因表達(dá)。
【附圖說(shuō)明】
[0015] 圖1顯示喂飼臺(tái)灣綠蜂膠萃取物的年輕工蜂分泌特殊蜂王漿，所述蜂王漿誘發(fā)幼 蟲的快速生長(zhǎng)。U-I和U-2 :對(duì)照組；A-I和A-2 :經(jīng)I. 25g/kg的臺(tái)灣綠蜂膠萃取物處理者； B-I和B-2 :經(jīng)2. 50g/kg的臺(tái)灣綠蜂膠萃取物處理者；C-I和C-2 :經(jīng)5.Og/kg的臺(tái)灣綠蜂 膠萃取物處理者。
[0016] 圖2顯示喂飼蜂膠素C的年輕工蜂分泌特殊蜂王漿，所述蜂王漿誘發(fā)幼蟲的快速 生長(zhǎng)。U-2 :對(duì)照組；C1-2 :經(jīng)50mg/kg的蜂膠素C處理者；C2-2 :經(jīng)100mg/kg的蜂膠素C處 理者。
[0017] 圖3顯示喂飼蜂膠素G的年輕工蜂分泌的蜂王漿中所鑒別出的水溶性蛋白質(zhì)的組 成。所述樣品在不同時(shí)間點(diǎn)收集。U-I:對(duì)照組；T-I:經(jīng)5.Og/kg臺(tái)灣綠蜂膠萃取物處理的 陽(yáng)性對(duì)照組；Gl-I:經(jīng)150mg/kg蜂膠素G處理者；G2-1 :經(jīng)300mg/kg蜂膠素G處理者；G3-1 : 經(jīng)600mg/kg蜂膠素G處理者。
[0018] 圖4顯示喂飼NBM-HD-I的年輕工蜂分泌的蜂王漿中所鑒別出的水溶性蛋白質(zhì)的 組成。所述樣品在不同時(shí)間點(diǎn)收集。U-I:對(duì)照組；T-I:經(jīng)5.Og/kg臺(tái)灣綠蜂膠萃取物處理 的陽(yáng)性對(duì)照組；Hl-I:經(jīng) 50mg/kgNBM-HD-I處理者；H2-1 :經(jīng) 100mg/kgNBM-HD-I處理者； H3-1 :經(jīng) 200mg/kgNBM-HD-I處理者。
[0019] 圖5顯示二維凝膠電泳分析的結(jié)果，其目的在于分析在72小時(shí)自經(jīng)NBM-HD-I 處理的組別的幼蟲萃取出的水溶性蛋白質(zhì)。L-I:MRJP1 ;L-2 :MRJP3 ;L-3