專利名稱：飼用微生物添加劑制造方法及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及動(dòng)物微生態(tài)學(xué)，系利用從動(dòng)物體內(nèi)篩選出有益的、正常的芽孢桿菌，經(jīng)過(guò)一系列工藝流程制成活菌制劑，用于飼料添加劑的制造方法及用途，屬于化學(xué)的生物化學(xué)及微生物學(xué)領(lǐng)域。
我國(guó)的飼料工業(yè)是個(gè)新興行業(yè)，振興發(fā)展飼料工業(yè)的核心是飼料添加劑?，F(xiàn)在國(guó)內(nèi)外均大量采用賴氨酸、蛋氨酸、多種維生素及礦物質(zhì)添加劑、藥物添加劑(如抗生素和化學(xué)藥物)和營(yíng)養(yǎng)添加劑等，它們按不同畜禽的營(yíng)養(yǎng)需求進(jìn)行配制生產(chǎn)，成本高，而畜禽吸收利用率低，有的還有副作用，產(chǎn)生抗藥性、殘留、危害畜禽和人的健康。最近，也有利用微生物制造飼料添加劑的報(bào)道，但均未具體公開菌株，添加劑的制造方法及具體用途。
眾所周知，畜禽腸道微生物與飼料在畜禽體內(nèi)的消化吸收有密切關(guān)系，它不僅與碳水化合物、蛋白質(zhì)、脂肪及礦物質(zhì)的代謝有關(guān)，而且還影響到體內(nèi)維生素的合成。腸內(nèi)有益菌類正常時(shí)可預(yù)防畜禽感染疾病及拮抗有害菌，保持腸內(nèi)微生物群正?；?，產(chǎn)生乳酸、過(guò)氧化氫及抗菌物質(zhì);促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收等。本發(fā)明就是基于上述理論利用芽孢桿菌以孢子狀態(tài)進(jìn)入畜禽消化道后進(jìn)行生長(zhǎng)繁殖，一方面參與腸內(nèi)物質(zhì)代謝，幫助飼料的消化和吸收，另一方面刺激免疫系統(tǒng)的功能，保護(hù)腸內(nèi)微生物之間處于平衡狀態(tài)，結(jié)果達(dá)到提高畜禽生長(zhǎng)的目的。
本發(fā)明所采用的菌株為已知的芽孢桿菌。能通過(guò)正常渠道獲得，具體芽孢桿菌商品目錄，見《中國(guó)菌種目錄》(中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)編著、輕工業(yè)出版社出版。1983年10月)，書中對(duì)每株微生物均注明來(lái)源、特性、用途、文獻(xiàn)、培養(yǎng)基和培養(yǎng)溫度等。
本發(fā)明采用的芽孢桿菌及特征1.蠟狀芽孢桿菌(Bacilluscereus)革蘭氏染色陽(yáng)性、桿狀、芽孢中生、有鞭毛。孢內(nèi)具有β-羥基丁酸鹽顆粒、7%氯化鈉生長(zhǎng)，對(duì)葡萄糖、蔗糖產(chǎn)酸，而對(duì)阿拉伯糖和甘露醇不產(chǎn)酸、溶血試驗(yàn)陰性、硝酸鹽還原試驗(yàn)陽(yáng)性、大小為0.9×2.0u。
2.地衣芽孢桿菌(Bacilluslicheniformis)革蘭氏染色陽(yáng)性、桿狀、芽孢中生、孢囊不膨大、孢內(nèi)無(wú)β-羥基丁酸鹽顆粒，7%氯化鈉生長(zhǎng)，V-P反應(yīng)陽(yáng)性，淀粉水解陽(yáng)性，大小為0.6-0.7×2.8-3.0u3.環(huán)狀芽孢桿菌(Bacilluscirculans)G同原群，革蘭氏染色陽(yáng)性、桿狀。芽孢中生、孢囊不膨大、孢內(nèi)無(wú)β-羥基丁酸鹽顆粒，V-P反應(yīng)陰性，V-P液的終PH5.5，葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，阿拉伯糖不產(chǎn)酸，大小為0.9×2.1-3.10u4.枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)革蘭氏染色陽(yáng)性、桿狀、芽孢中生或偏中生，孢囊膨大但不顯著，7%氯化鈉生長(zhǎng)，PH5.7生長(zhǎng)、葡萄糖(+)、阿拉伯糖(±)、木糖(±)、淀粉水解、硝酸鹽還原試驗(yàn)陽(yáng)性、大小為0.7-0.8×2.0-3.0u5.堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌(Baillusfirmus)革蘭氏染色陽(yáng)性、芽孢中生或次端生、孢囊很少膨大。7%氯化鈉生長(zhǎng)、接觸酶陽(yáng)性，V-P反應(yīng)陰性、淀粉水解、葡萄糖和甘露醇產(chǎn)酸，大小為0.6-0.9×1.2-4.0u6.巨大芽孢桿菌(Bacillusmegaterium)革蘭氏染色陽(yáng)性、桿狀、芽孢中生或偏中生、孢囊膨大不明顯，V-P反應(yīng)陰性，接觸酶陽(yáng)性、淀粉水解、葡萄糖產(chǎn)酸、甘露醇(±)、阿拉伯糖和木糖產(chǎn)酸、硝酸鹽還原試驗(yàn)陽(yáng)性、大小為1.2-1.5×2.0-5.0u本發(fā)明飼用微生物添加劑的制造方法1.在種子罐內(nèi)的培養(yǎng)基中，按每毫升培養(yǎng)基接種2-3億個(gè)活性蠟狀芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、環(huán)狀芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌、環(huán)狀芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌6種中的1種，在32-37℃最好在37℃條件下，培養(yǎng)12-24小時(shí)。
2.當(dāng)種子罐內(nèi)培養(yǎng)基中每毫升含25-30億以上活性芽孢桿菌時(shí)，按每100毫升生產(chǎn)罐培養(yǎng)基中接種80-100億個(gè)活性芽孢桿菌的比例，將種子罐內(nèi)培養(yǎng)物轉(zhuǎn)入生產(chǎn)罐內(nèi)培養(yǎng)基中深層通氣攪拌培養(yǎng)24-48小時(shí)，培養(yǎng)溫度為28-32℃，攪拌次數(shù)每分鐘80-150次生產(chǎn)罐培養(yǎng)基組成及配制方法首先將凈化的自來(lái)水放入生產(chǎn)罐內(nèi)，再按水溶液重量添加蛋白胨2%、牛肉膏0.5%、葡萄糖0.3%、食用鹽0.5%、PH7-7.2、攪拌均勻，120℃溫度高壓滅菌40-60分鐘，再降溫至28-32℃即可使用。
3.當(dāng)生產(chǎn)罐內(nèi)芽孢生成率達(dá)85-95%時(shí)，即將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)入高速離心設(shè)備收集菌體，收集的菌體為灰白色，菌體按1比3-6的比例均勻混合于淀粉內(nèi)(也可將培養(yǎng)液直接與淀粉混合，而不經(jīng)離心收集菌體工序)經(jīng)70-80℃干燥和反復(fù)研磨，過(guò)80目篩制成菌粉，然后按菌粉(30%)、葡萄糖(10%)、淀粉(60%)的比列制成每克含5-8億個(gè)活性芽孢桿菌的飼用微生物添加劑。也可直接將生產(chǎn)罐內(nèi)的培養(yǎng)液或經(jīng)高速離心設(shè)備收集的菌體與葡萄粉、淀粉混合，干燥，配制成每克含5-8億個(gè)活性芽孢桿菌的飼用微生物添加劑。
使用上述制造方法即可分別制成蠟狀芽孢桿菌飼用微生物添加劑，地衣芽孢桿菌飼用微生物添加劑，環(huán)狀芽孢桿桿菌飼用微生物添加劑、枯草芽孢桿菌飼用微生物添加劑、堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌飼用微生物添加劑和巨大芽孢桿菌飼用微生物添加劑。各添加劑的用途及用量按畜禽的種類，發(fā)育階段，使用不同的菌種添加劑，添加量按飼料重量的0.1-0.15%比例添加。添加1種以上飼用微生物添加劑的各飼用微生物添加劑重量相同，總重量為飼料重量的0.1-0.15%1.仔豬的飼用微生物添加劑用地衣芽孢桿菌和蠟狀芽孢桿菌2種或只用蠟狀芽孢桿菌1種飼用微生物添加劑;
2.育肥豬的飼用微生物添加劑用蠟狀芽孢桿菌，枯草芽孢桿菌和堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌3種飼用微生物添加劑，或者用地衣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌2種飼用微生物添加劑;
3.鯉魚的飼用微生物添加劑用地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和環(huán)狀芽孢桿菌3種飼用微生物添加劑;
4.草魚的飼用微生物添加劑用環(huán)狀芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌2種飼用微生物添加劑;
5.肉雞的飼用微生物添加劑用堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌和蠟狀芽孢桿菌2種飼用微生物添加劑;
6.肉鴨的飼用微生物添加劑用地衣芽孢桿菌和巨大芽孢桿菌2種飼用微生物添加劑。
7.牛、羊和兔的飼用微生物添加劑用地衣芽孢桿菌，枯草芽孢桿菌和蠟狀芽孢桿菌3種飼用微生物添加劑。
本發(fā)明制造的飼用微生物添加劑相比現(xiàn)有技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn)1.無(wú)毒副作用、無(wú)殘留、能保證肉食品衛(wèi)生和消費(fèi)者的健康;
2.提高畜禽生長(zhǎng)速度，提高飼料利用率。
3.菌種易得，制造方法簡(jiǎn)易，使用用途廣泛。
實(shí)施例一在種子罐內(nèi)注入肉湯培養(yǎng)基，按每毫升肉湯培養(yǎng)基接種2-3億個(gè)活性蠟狀芽孢桿菌在37℃條件下，培養(yǎng)12-24小時(shí)，當(dāng)檢測(cè)到培養(yǎng)液中每毫升含25-30億以上活性芽孢桿菌時(shí)，轉(zhuǎn)入生產(chǎn)罐內(nèi)培養(yǎng)，生產(chǎn)罐的培養(yǎng)基組成及配制方法為首先將凈化的自來(lái)水放入生產(chǎn)罐內(nèi)，再按水溶液重量添加蛋白胨2%、牛肉膏0.5%、葡萄糖0.3%、食用鹽0.5%、調(diào)PH7-7.2，攪拌均勻，120℃高壓滅菌40-60分鐘，降溫至30-32℃時(shí)即可使用。當(dāng)生產(chǎn)罐內(nèi)的培養(yǎng)溫度為28-32℃，攪拌次數(shù)每分鐘80-150次，培養(yǎng)24-48小時(shí)，檢測(cè)培養(yǎng)液中芽孢生成率達(dá)85-95%時(shí)，將生產(chǎn)罐內(nèi)培養(yǎng)液轉(zhuǎn)入15000轉(zhuǎn)/分高速離心設(shè)備分離，去掉上清液，收集菌體，然后將菌體按1比4的比例均勻混合于食用淀粉中，經(jīng)70-80℃干燥和反復(fù)研磨，過(guò)80目篩孔制成菌粉，再將菌粉(30%)、葡萄糖(10%)、淀粉(60%)比例制成每克含5-8億個(gè)活性蠟狀芽孢桿菌的飼用微生物添加劑。
使用上述方法同樣可制得枯草芽孢桿菌飼用微生物添加劑和堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌飼用微生物添加劑。
將蠟狀芽孢桿菌飼用微生物添加劑和枯草芽孢桿菌飼用微生物添加劑和堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌飼用微生物添加劑按1∶1∶1的比例混合，然后再按飼料重量的0.1-0.15%添加入飼料中混合，飼養(yǎng)育肥豬表明日增重比對(duì)照組提高10-12%，飼料利用率比對(duì)照組提高8-9%，在飼料低營(yíng)養(yǎng)水平下效果尤佳。
實(shí)施例二本實(shí)施例的制造方法與實(shí)施例一的制造方法的不同之處在于生產(chǎn)罐內(nèi)培養(yǎng)液不經(jīng)高速離心設(shè)備分離，也不經(jīng)與淀粉混合制成菌粉的工序，而直接將其培養(yǎng)液與葡萄糖，淀粉混合，干燥，制成每克含5-8億個(gè)活性芽孢桿菌飼用微生物添加劑粉劑，其余與實(shí)施例一的制造方法相同，本實(shí)施例具體制得地衣芽孢桿菌飼用微生物添加劑和枯草芽孢桿菌飼用微生物添加劑，然后按1∶1的比例混合后，再按飼料重量0.1-0.15%的比例加入飼料混合，用于飼養(yǎng)鯉魚，其結(jié)果表明試驗(yàn)組比對(duì)照組產(chǎn)量?jī)粼霰稊?shù)提高11.9-51.2%，降低餌料系數(shù)4.74-29.8%
權(quán)利要求
1.一種飼用微生物添加劑的制造方法，用蠟狀芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、環(huán)狀芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌6種中的一種在種子罐、生產(chǎn)罐內(nèi)接種，培養(yǎng)繁殖，其特征在于當(dāng)罐內(nèi)芽孢桿菌繁殖生成的芽孢生成率達(dá)85%-95%時(shí)與淀粉混合、干燥、研磨過(guò)篩、制成菌粉后與葡萄糖、淀粉混合配制成每克含5-8億個(gè)活性芽孢桿菌的飼用微生物添加劑；或者直接用生產(chǎn)罐內(nèi)芽孢桿菌繁殖生成的芽孢培養(yǎng)液與葡萄糖、淀粉、混合、干燥配制成每克含5-8億個(gè)活性芽孢桿菌的飼用微生物添加劑。
2.按照權(quán)利要求1所述的飼用微生物添加劑的制造方法，其特征在于種子罐接種濃度為每毫升培養(yǎng)基中接種2-3億個(gè)活菌;生產(chǎn)罐接種濃度為每100毫升培養(yǎng)基中接種80-100億個(gè)活菌。
3.按照權(quán)利要求1、2所述的飼用微生物添加劑的制造方法，其特征在于種子罐內(nèi)的培養(yǎng)基為肉湯生產(chǎn)罐內(nèi)的培養(yǎng)基組成為蛋白胨2%、牛肉膏0.5%、葡萄糖0.3%、食用鹽0.5%、其余為水溶液，PH7-7.2。
4.按照權(quán)利3所述的飼用微生物添加劑制造方法，其特征在于芽孢桿菌采用罐內(nèi)深層通氣與攪拌同時(shí)發(fā)酵培養(yǎng)方式，種子罐培養(yǎng)溫度為32-37℃，生產(chǎn)罐培養(yǎng)溫度為28-32℃，生產(chǎn)罐內(nèi)每分鐘攪拌次數(shù)為80-150次。
5.按照權(quán)利要求1生產(chǎn)的飼用微生物添加劑，其用途按飼料重量的0.1-0.15%添加飼用微生物添加劑;添加1種以上飼用微生物添加劑的，各飼用微生物添加劑重量相同，總重量為飼料的0.1-0.15%A.仔豬的飼用微生物添加劑用地衣芽孢桿菌和蠟狀芽孢桿菌2種菌種或只用蠟狀芽孢桿菌1種菌種飼用微生物添加劑;B.育肥豬的飼用微生物添加劑用蠟狀芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌和堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌3種菌種，飼用微生物添加劑或者用地衣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌2種菌種飼用微生物添加劑;C.鯉魚的飼用微生物添加劑用地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和環(huán)狀芽孢桿菌3種菌種飼用微生物添加劑;D.草魚的飼用微生物添加劑用環(huán)狀芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌2種菌種飼用微生物添加劑;E.肉雞的飼用微生物添加劑用堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌和蠟狀芽孢桿菌2種菌種飼用微生物添加劑;F.肉鴨的飼用微生物添加劑用地衣芽孢桿菌和巨大芽孢桿菌2種菌種飼用微生物添加劑;G.牛、羊和兔的飼用微生物添加劑用地衣芽孢桿菌，枯草芽孢桿菌和蠟狀芽孢桿菌3種菌種飼用微生物添加劑。
全文摘要
本發(fā)明屬于化學(xué)的生物化學(xué)和微生物學(xué)領(lǐng)域，為利用蠟狀芽孢桿菌，地衣芽孢桿菌，環(huán)狀芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌制造飼用微生物添加劑的方法。具有制造工藝簡(jiǎn)單，菌種易得，成本低的特點(diǎn)。使用本發(fā)明制造的飼用微生物添加劑與飼料混合用于仔豬、育肥豬、魚、雞、鴨、牛、羊、兔等畜禽，無(wú)毒副作用，無(wú)殘留，能顯著提高畜禽生長(zhǎng)速度，提高飼料利用率，同時(shí)保證食品衛(wèi)生和消費(fèi)者的健康。
文檔編號(hào)A23K1/16GK1089442SQ9311088
公開日1994年7月20日 申請(qǐng)日期1993年1月3日 優(yōu)先權(quán)日1993年1月3日
發(fā)明者何明清 申請(qǐng)人:四川農(nóng)業(yè)大學(xué)