專利名稱：一種細(xì)菌滅幼蚊劑的雙菌協(xié)同發(fā)酵法的制作方法
專利說明 本發(fā)明是一種微生物滅幼蚊劑的生產(chǎn)方法，更確切說，是一種細(xì)菌滅幼蚊劑的雙菌協(xié)同發(fā)酵法。
目前，蘇蕓金桿菌血清型14(H14)和球形芽孢桿菌單獨(dú)用于滅幼蚊蟲已有重大突破，并已成為蚊蟲防治的重要手段之一，隨之上述兩菌的單菌種發(fā)酵方法已廣為人知。雖然上述兩種菌種的每種菌通過單獨(dú)菌種發(fā)酵制得的細(xì)菌滅幼蚊劑用于滅蚊幼蟲均有一定效果，但仍存在下述缺點(diǎn)(1)H14用于滅蚊幼蟲的致命缺點(diǎn)是無(wú)持效。(2)B.S存在殺蟲譜窄，特別對(duì)伊蚊的效果極差和毒效發(fā)揮慢的缺點(diǎn)。
經(jīng)檢索未見有B.S和H14兩菌混合發(fā)酵的報(bào)導(dǎo)。
本發(fā)明的目的是利用B.S與H14混合生長(zhǎng)的相容性，研究成功一種B.S與H14兩種菌種協(xié)同發(fā)酵方法，通過該發(fā)酵法使H14與B.S共生，進(jìn)而制成一種新的細(xì)菌滅幼蚊劑，使它既具有H14殺蟲譜廣，毒效發(fā)揮快和毒效高的優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)也具有B.S殘效長(zhǎng)(21天以上)的優(yōu)點(diǎn);而且也克服了H14無(wú)持效和B.S殺蟲譜窄、毒效發(fā)揮慢的局限性。
本發(fā)明的具體內(nèi)容本發(fā)明寵統(tǒng)地說是采取深層發(fā)酵工藝，具體說可分為“一級(jí)發(fā)酵工藝”和“二級(jí)發(fā)酵工藝”兩種工藝路線，說明書附


圖1是本發(fā)明的二級(jí)發(fā)酵工藝路線圖，附圖2是本發(fā)明的一級(jí)發(fā)酵工藝路線圖，下面參照附
圖1和附圖2將本發(fā)明的兩種工藝路線的內(nèi)容詳述如下 一、二級(jí)發(fā)酵工藝本工藝路線是本發(fā)明的最佳工藝路線。
1.菌種斜面 (1)生產(chǎn)用菌種 A.蘇蕓金桿菌血清型14 1897株(簡(jiǎn)稱H14)。
B.球形芽孢桿菌2362株，1593株，2297株，B.S-10株，B.SC8-41株(簡(jiǎn)稱B.S)。
(2)菌種斜面培養(yǎng)基配方 A.培養(yǎng)基配方牛肉膏0.5%;蛋白胨1.0%;瓊脂2.0-2.5%，其余為花生餅粕粉(豆餅粕粉、菜子餅粉、棉子餅粉亦可)水浸出液(簡(jiǎn)稱花生餅粉浸液)， B.“花生餅粕粉水浸出液”的制備方法 在常溫下，以花生餅粕粉∶水＝(5-15)∶100的比例，將花生餅粕粉浸泡24小時(shí)以上，然后用雙層干凈紗布過濾，過濾液用NaOH溶液將PH值調(diào)到7.0-9.0范圍，此液即為所需用的花生餅粕粉水浸液，又稱“花生餅粉浸液”。
(3)菌種斜面的培養(yǎng)條件及方法將H14和B.S兩種菌的菌株分別單獨(dú)接種于兩個(gè)已滅菌，PH值為7-9的菌種斜面培養(yǎng)基上，接種完后將菌種斜面置于26-34℃的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24-72小時(shí)，肉眼觀察菌落生長(zhǎng)豐富，性狀良好，無(wú)噬菌斑，檢驗(yàn)無(wú)雜菌，H14芽孢和伴孢晶體分離，其比例為1∶1或晶體更多些;B.S大部分形成孢子囊即可，以上之菌種為培養(yǎng)合格的菌種斜面。
2.搖瓶菌種 (1)搖瓶菌種的培養(yǎng)基配方牛肉膏0.5%，蛋白胨1.0%，其余為花生餅浸液， (2)搖瓶菌種的培養(yǎng)條件及方法在≤30℃條件下，將上述培養(yǎng)好的菌種斜面接種于裝有已滅菌，PH值為7-9“搖瓶菌種培養(yǎng)基”的三角瓶中，再將接好種的三角瓶置于轉(zhuǎn)速為220轉(zhuǎn)/分的旋轉(zhuǎn)式搖床上(往復(fù)式搖床亦可)，在26℃-32℃下培養(yǎng)24-48小時(shí)，經(jīng)檢驗(yàn)菌種生長(zhǎng)茂盛無(wú)雜菌即可。
3.種子罐包括種子罐培養(yǎng)基配方，發(fā)酵條件及方法， (1)種子罐培養(yǎng)基配方KH2PO40.1%，NaCl 0.2%，MgSO40.3%，甘油聚醚消沫劑0.5%，其余是花生餅粉浸液。
(2)種子罐發(fā)酵條件及方法將上述培養(yǎng)好的搖瓶菌種H14和B.S按種子罐培養(yǎng)基的0.1-1%量引種到裝有已滅菌，PH值為7-9(7.8-8.7為最佳)“種子罐培養(yǎng)基”的兩只體積結(jié)構(gòu)相同的種子罐中，在罐溫26-32℃(28℃為最佳)，罐壓0.3-0.5公斤/厘米2，通氣量0.8-1升/升/分，攪拌轉(zhuǎn)速240轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)時(shí)間≤8小時(shí)的情況下，經(jīng)檢驗(yàn)，菌種進(jìn)入生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期，無(wú)雜菌，每視野菌量8-10個(gè)菌時(shí)為合格。
4.發(fā)酵罐包括發(fā)酵罐培養(yǎng)基配方，發(fā)酵條件及方法。
(1)發(fā)酵罐培養(yǎng)基配方與上述種子罐培養(yǎng)基配方相同。
(2)發(fā)酵罐的發(fā)酵條件及方法將上述種子罐已培養(yǎng)好的H14菌液按培養(yǎng)基量的0.1-1%先壓入裝有已滅菌，PH值7-9培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，罐壓為0.3-0.5Kg/cm2，罐溫26-30℃(28℃為最佳)通氣量0.8-1升/升/分?jǐn)嚩?40轉(zhuǎn)/分，發(fā)酵時(shí)間≤8小時(shí)(8小時(shí)為最佳)，再將上述種子罐已培養(yǎng)好的另一菌種B.S菌液與H14相同的量壓入本罐中，使H14與B.S兩種菌在同一發(fā)酵罐中進(jìn)行協(xié)同發(fā)酵和共同生長(zhǎng)，發(fā)酵時(shí)間達(dá)12小時(shí)(以H14菌發(fā)酵時(shí)間計(jì))，發(fā)酵罐內(nèi)的通風(fēng)量增大至1-1.5升/升/分，發(fā)酵總時(shí)間為24-48小時(shí)，檢查當(dāng)兩菌孢子形成率達(dá)80%以上時(shí)即可收獲。
5.產(chǎn)品的后處理 (1)產(chǎn)品的濃縮為了使制品便于包裝和儲(chǔ)運(yùn)，可用超濾薄膜過濾器或用刮板濃縮機(jī)將發(fā)酵原產(chǎn)品濃縮1-4倍(使用時(shí)再用水稀釋5-10倍)。
(2)產(chǎn)品的防腐處理為了保障產(chǎn)品在長(zhǎng)期儲(chǔ)存過程中不變質(zhì)，在產(chǎn)品濃縮后加入相當(dāng)產(chǎn)品總量0.2%的苯甲酸鈉攪勻，將產(chǎn)品進(jìn)行包裝(以塑料或玻璃容器為佳)。
6.產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn) (1)檢驗(yàn)H14與B.S之比例以H14∶B.S＝1∶1為最佳(參考值)。
(2)毒力效價(jià)測(cè)定參照WHO生物毒效測(cè)定方法進(jìn)行，其結(jié)果應(yīng)達(dá)到120-240Iu/mg為合格。
二.一級(jí)發(fā)酵工藝本工藝路線適合于發(fā)酵罐為100L-1000L的小型生產(chǎn)線。
1.菌種斜面“一級(jí)發(fā)酵工藝”的“生產(chǎn)用菌種”，“菌種斜面培養(yǎng)基配方”和“菌種斜面的培養(yǎng)條件及方法”均與前述“二級(jí)發(fā)酵工藝”的菌種斜面部分相同。
2.發(fā)酵罐包括培養(yǎng)基配方，發(fā)酵條件及方法。
可將上述培養(yǎng)好的菌種斜面即三角燒瓶液體菌種或茄子瓶菌苔菌種，分別采用下述兩種不同方法接種于裝有已滅菌，PH值為7-9培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中(本培養(yǎng)基成分與“二級(jí)發(fā)酵工藝”發(fā)酵罐用培養(yǎng)基成份相同)， (1)先將H14和B.S兩菌種混勻，倒入已準(zhǔn)備好的無(wú)菌接種瓶中，然后再?gòu)臒o(wú)菌接種瓶引種到發(fā)酵罐中(與一般抗菌素發(fā)酵時(shí)的接種方法相同)，接種完后即開始發(fā)酵，發(fā)酵條件罐溫26-34℃，罐壓0.3-0.5Kg/cm2，通氣量0.8-1升/升/分，攪拌轉(zhuǎn)速260-450轉(zhuǎn)/分(罐體小的轉(zhuǎn)速要快一些)，發(fā)酵時(shí)間24-48小時(shí)，經(jīng)檢驗(yàn)當(dāng)兩種菌孢子形成率達(dá)80%以上時(shí)即可收獲。
(2)在與上述(1)相同發(fā)酵條件的基礎(chǔ)上，先將H14接種到發(fā)酵罐中之后，在間隔1-8小時(shí)之內(nèi)(間隔8小時(shí)為最佳)再將B.S接種到發(fā)酵罐中，這樣有利于兩菌均衡生長(zhǎng)，(B.S比H14具有較強(qiáng)生長(zhǎng)勢(shì))，發(fā)酵時(shí)間以H14接種完計(jì)為24-48小時(shí)，經(jīng)檢驗(yàn)，當(dāng)兩菌孢子的形成率達(dá)80%以上時(shí)即可收獲。
3.產(chǎn)品的后處理及產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)均與“二級(jí)發(fā)酵工藝”中的“產(chǎn)品后處理及產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)”的內(nèi)容相同，故從略。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn) 1.本發(fā)明對(duì)H14和B.S的混合生長(zhǎng)的相容性為一新的發(fā)現(xiàn)，并利用兩菌混合生長(zhǎng)的相容性進(jìn)行了雙菌種協(xié)同發(fā)酵方法的研究，通過H14與B.S協(xié)同發(fā)酵生產(chǎn)出與B.S和H14單菌種滅幼蚊劑有實(shí)質(zhì)性差別的本雙菌滅幼蚊劑。
2.本發(fā)明生產(chǎn)的雙菌滅幼蚊劑的突出優(yōu)點(diǎn)具有H14和B.S的全部?jī)?yōu)點(diǎn)，即殺蟲譜廣、速效和長(zhǎng)效的特點(diǎn)，又從根本上克服了B.S和H14的全部缺點(diǎn)，即B.S殺蟲譜窄，作用緩慢和H14無(wú)持效的局限性，詳見下表所列數(shù)據(jù) 單菌與雙菌協(xié)同發(fā)酵毒力效率的比較(LC50) 3.本發(fā)明在生產(chǎn)中節(jié)約了設(shè)備投資、人工、原料和能耗，降低了產(chǎn)品成本，提高了經(jīng)濟(jì)效益。
本發(fā)明是在B.S和H14單菌生產(chǎn)的基礎(chǔ)上，是在不增加設(shè)備、人工、原料和能耗的條件下生產(chǎn)出本雙菌滅幼蚊劑的，而且本雙菌滅幼蚊劑具備B.S和H14兩種細(xì)菌滅幼蚊劉的優(yōu)點(diǎn)和克服了它們各自的局限性，故使用本細(xì)菌滅幼蚊劑等于同時(shí)使用B.S和H14兩種滅幼蚊劑的效果。因用量節(jié)約一半，所以設(shè)備投資、人工、原料和能耗等均能近一倍的下降。相形之下成本也會(huì)近一倍的下降。這樣也明顯的提高了生產(chǎn)廠家的經(jīng)濟(jì)效益。
4.本發(fā)明生產(chǎn)的雙菌滅幼蚊劑由于克服了B.S和H14兩種滅幼蚊劑的局限性，使產(chǎn)品的使用范圍放寬得很廣。例如本發(fā)明生產(chǎn)的雙菌滅幼蚊劑特別適用稻田、沼澤等多蚊種孳生地，經(jīng)實(shí)踐證明，使用效果極好。
本發(fā)明的最佳實(shí)施例 1.菌種斜面 (1)生產(chǎn)用菌種H14和B.S。
(2)菌種斜面培養(yǎng)包括培養(yǎng)基配方、菌種培養(yǎng)條件及方法。
A.斜面培養(yǎng)基配方牛肉膏0.5%，蛋白胨1.0%，瓊脂2.5%，其余是花生餅粉浸液。
B.菌種斜面培養(yǎng)條件及方法將H14和B.S兩菌分別單獨(dú)接種于兩只已滅菌PH值為7.8的斜面培養(yǎng)基上，接完種將斜面置于28℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48小時(shí)，肉眼觀察菌苔生長(zhǎng)豐富，性狀良好，無(wú)噬菌斑，檢驗(yàn)無(wú)雜菌，H14芽孢和伴孢晶體分離，其比例為1∶1;B.S大部形成孢子囊。
2.搖瓶菌種包括搖瓶培養(yǎng)基配方，搖瓶菌種培養(yǎng)條件及方法。
(1)搖瓶培養(yǎng)基配方牛肉膏0.5%，蛋白胨1.0%，其余是花生餅粉浸液， (2)搖瓶菌種培養(yǎng)條件及方法在≤30℃條件下，將上述“菌種斜面”接種于裝有已滅菌，PH值為7.8“搖瓶培養(yǎng)基”的三角瓶中;接種后將三角瓶置于轉(zhuǎn)速為220轉(zhuǎn)/分的旋轉(zhuǎn)式搖床上，在29℃±1℃下培養(yǎng)48小時(shí)，經(jīng)檢驗(yàn)孢子囊形成率達(dá)80%以上，無(wú)雜菌。
3.種子罐包括種子罐培養(yǎng)基配方，種子罐發(fā)酵條件及發(fā)酵方法。
(1)種子罐培養(yǎng)基配方KH2PO40.1%，NaCl 0.2% MgSO40.03%，甘油聚醚消沫劑0.1%。
(2)種子罐發(fā)酵條件及方法將上述制備的搖瓶菌種H14和B.S按種子罐培養(yǎng)基1%相同的量，先后相隔8小時(shí)，(H14先，B.S后)分別接種到裝有已滅菌，PH值為7.8“種子罐培養(yǎng)基”的兩只體積相同的種子罐中，在下述相同條件下罐溫29±1℃、罐壓0.4Kg/cm2，通氣量1升/升/分，攪拌轉(zhuǎn)速240轉(zhuǎn)/分常開，各培養(yǎng)8小時(shí)，經(jīng)檢驗(yàn)，菌種進(jìn)入生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期，無(wú)雜菌，每視野菌量10個(gè)菌。
4.發(fā)酵罐包括培養(yǎng)基配方，發(fā)酵罐的發(fā)酵條件及方法。
(1)培養(yǎng)基配方與本實(shí)施例“種子罐培養(yǎng)基”同。
(2)發(fā)酵罐的發(fā)酵條件及方法先將上述種子罐培養(yǎng)8小時(shí)合格的H14菌，壓入裝有已滅菌，PH值為7.8培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，在罐壓0.5公斤/厘米2，罐溫29±1℃，通氣量1升/升/分，攪拌轉(zhuǎn)速240轉(zhuǎn)/分，發(fā)酵時(shí)間達(dá)8小時(shí)，再將上述另一只種子罐培養(yǎng)8小時(shí)合格的B.S菌與H14菌液量相同壓入本發(fā)酵罐中，使H14與B.S兩菌在同一發(fā)酵罐內(nèi)進(jìn)行協(xié)同發(fā)酵和共同生長(zhǎng);當(dāng)發(fā)酵時(shí)間達(dá)12小時(shí)時(shí)(以H14發(fā)酵時(shí)間計(jì))，通風(fēng)量增大至1.5升/升/分，當(dāng)發(fā)酵時(shí)間達(dá)48小時(shí)時(shí)(以H14發(fā)酵時(shí)間計(jì))，孢子形成率達(dá)89%進(jìn)行收獲。
5.產(chǎn)品的后處理 (1)發(fā)酵液濃縮將發(fā)酵罐的發(fā)酵液用超濾薄膜過濾器濃縮4倍。
(2)防腐處理在已濃縮的發(fā)酵液中加入相當(dāng)發(fā)酵液量的0.2%苯甲酸鈉攪勻進(jìn)行防腐，然后將產(chǎn)品裝入塑料容器中。
6.產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn) (1)檢驗(yàn)H14和B.S的比例;經(jīng)檢驗(yàn)H14∶B.S＝1∶1(參考數(shù))。
(2)參照WHO生物毒效測(cè)定方法進(jìn)行毒力效價(jià)測(cè)定，其結(jié)果為240Iu/mg。
實(shí)施例的施用效果 1.本實(shí)施例產(chǎn)品的效果例如使用本實(shí)施例制做的產(chǎn)品10克相當(dāng)于使用B.S10克和H1410克之和(共20克)的效果，由此可知，要近一倍的節(jié)約了設(shè)備投資、人工、原料等，故成本有近一倍的降低，同時(shí)也大幅度的提高了經(jīng)濟(jì)效益， 2.本實(shí)施例的產(chǎn)品適用范圍廣，經(jīng)實(shí)驗(yàn)，本實(shí)施例產(chǎn)品特別適用于稻田、沼澤等多蚊種孳生地， 3.本實(shí)施例的產(chǎn)品經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明同時(shí)具有H14殺蟲譜廣，速效和B.S長(zhǎng)效(21天以上)的特點(diǎn);而且從根本上克服了B.S殺蟲譜窄，作用緩慢和H14無(wú)持效的局限性，見下表所列數(shù)據(jù)
權(quán)利要求
1、一種細(xì)菌滅幼蚊劑的雙菌協(xié)同發(fā)酵法其特征在于所述的雙菌協(xié)同發(fā)酵法是利用H14和B.S兩種菌混合共生的相容性，把H14和B.S放入同一只發(fā)酵罐中，采用深層發(fā)酵的“二級(jí)發(fā)酵工藝”或“一級(jí)發(fā)酵工藝”制得一種新的滅幼蚊劑，該滅幼蚊劑不但同時(shí)含H14和B.S兩種菌，而且在使用效果上與H14或B.S單菌滅幼蚊劑都有實(shí)質(zhì)性差別，上述兩種發(fā)酵工藝包括
(一)二級(jí)發(fā)酵工藝
(1)菌種斜面，(2)搖瓶菌種，(3)種子罐，(4)發(fā)酵罐，(5)產(chǎn)品后處理(第一步濃縮，第二步防腐處理)，(6)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)。
(二)一級(jí)發(fā)酵工藝
(1)菌種斜面，(2)發(fā)酵罐，(3)產(chǎn)品后處理(第一步濃縮，第二步防腐處理)及產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)。
2、按照權(quán)利要求1所述的雙菌協(xié)同發(fā)酵法中(一)二級(jí)發(fā)酵工藝的(1)菌種斜面其特征在于“菌種斜面”的
(1)斜面培養(yǎng)基配方牛肉膏0.5%;蛋白胨1.0%;瓊脂2.0-2.5%，其余為花生餅粕粉(或豆餅粕粉，或菜子餅粉，或棉子餅粉)水浸出液。
(2)菌種斜面培養(yǎng)條件及方法將H14和B.S兩種菌分別單獨(dú)接種于兩個(gè)裝有已滅菌，PH值為7-9的“斜面培養(yǎng)基”上，接完種將斜面培養(yǎng)基置于培養(yǎng)箱內(nèi)，在26-30℃下培養(yǎng)24-72小時(shí)，肉眼觀察菌苔生長(zhǎng)豐富，性狀良好，無(wú)噬菌斑，檢驗(yàn)無(wú)雜菌，H14芽孢和伴孢晶體分離，其比例為1∶1或晶體更多些;B.S大部分形成孢子囊即可。
3、按照權(quán)利要求1所述的雙菌協(xié)同發(fā)酵法中(一)二級(jí)發(fā)酵工藝的(2)搖瓶菌種其特征在于“搖瓶菌種”的
(1)搖瓶培養(yǎng)基配方
牛肉膏0.5%;蛋白胨1.0%;其余為花生餅粕粉的水浸出液(用棉子餅粉、豆餅粉、菜子餅粉均可)。
(2)搖瓶菌種培養(yǎng)條件及方法
在≤30℃條件下，將已培養(yǎng)好的“菌種斜面”接種于裝有己滅菌，PH值7-9“搖瓶培養(yǎng)基的”三角瓶中，在26-30℃下將接好種的三角瓶置于搖床上培養(yǎng)24-48小時(shí)，檢驗(yàn)菌種生長(zhǎng)茂盛，無(wú)雜菌即可。
4、按照權(quán)利要求1所述的雙菌協(xié)同發(fā)酵法中(一)二級(jí)發(fā)酵工藝的(3)種子罐其特征在于“種子罐”的
(1)種子罐培養(yǎng)基配方
KH2PO40.1%;NaCl 0.2%; MgSO40.03%;甘油聚醚消沫劑0.1%，其余為花生餅粕粉(豆餅粉，菜子餅粕，棉子餅粉亦可)水浸出液。
(2)種子罐發(fā)酵條件及方法
將上述搖瓶菌種H14和B.S分別按種子罐培養(yǎng)基的0.1%～1%相同量引種到兩支體積、結(jié)構(gòu)相同的裝有己滅菌，PH值為7-9(7.8～8.7為最佳)“種子罐培養(yǎng)基”的種子罐中;在罐溫26-30℃(28℃為最佳)，罐壓0.3-0.5公斤/厘米2，通氣量0.8-1升/升/分，攪拌轉(zhuǎn)速240轉(zhuǎn)/分，常開，培養(yǎng)時(shí)間≤8小時(shí);經(jīng)檢驗(yàn)，當(dāng)菌種進(jìn)入生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期，無(wú)雜菌，每視野量8-10個(gè)菌時(shí)即可。
5、按照權(quán)利要求1所述的雙菌協(xié)同發(fā)酵法中(一)二級(jí)發(fā)酵工藝的(4)發(fā)酵罐，其特征在于“發(fā)酵罐”的
(1)發(fā)酵罐培養(yǎng)基配方與“種子罐培養(yǎng)基配方”相同。
(2)發(fā)酵罐發(fā)酵條件及方法
先將上述種子罐已培養(yǎng)好的H14菌液按發(fā)酵罐液量的0.1-1.0%壓入裝有已滅菌，PH值為7-9發(fā)酵罐培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中;在罐壓0.3-0.5公斤/厘米2，罐溫26℃-30℃(28℃為最佳)，通氣量0.8-1升/升/分，攪拌轉(zhuǎn)速240轉(zhuǎn)/分，發(fā)酵時(shí)間在≤8小時(shí)內(nèi)(以8小時(shí)為最佳)，再將種子罐已培養(yǎng)好的另一種B.S菌壓入本發(fā)酵罐中，使H14與B.S兩種菌在同一發(fā)酵罐中進(jìn)行協(xié)同發(fā)酵和共同生長(zhǎng)，當(dāng)發(fā)酵時(shí)間(以H14菌發(fā)酵時(shí)間計(jì))達(dá)12小時(shí)時(shí)，發(fā)酵罐的通氣量增大至1-1.5升/升/分，發(fā)酵總時(shí)間為24-48小時(shí)(以H14菌發(fā)酵時(shí)間計(jì))，且兩菌孢子形成率達(dá)80%以上時(shí)，即可收獲。
6、按照權(quán)利要求1所述的雙菌協(xié)同發(fā)酵法中(一)二級(jí)發(fā)酵工藝的(5)產(chǎn)品后處理(第一步濃縮，第二步防腐處理)方法，其特征在于“產(chǎn)品后處理”的
第一步濃縮可用“超濾薄膜過濾器”或用“刮板濃縮機(jī)”進(jìn)行濃縮，將出發(fā)酵罐的產(chǎn)品濃縮1-4倍以便于產(chǎn)品的儲(chǔ)運(yùn)(使用時(shí)再用水稀釋5-10倍)。
第二步防腐處理為了保障產(chǎn)品在長(zhǎng)期儲(chǔ)存中不變質(zhì)，在產(chǎn)品經(jīng)濃縮后再加入相當(dāng)濃縮液量的0.2%苯甲酸鈉攪勻進(jìn)行防腐，然后包裝。
7、按照權(quán)利要求1所述的雙菌協(xié)同發(fā)酵法中(一)二級(jí)發(fā)酵工藝的(6)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)其特征在于在產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)包括
(1)檢驗(yàn)H14與B.S的比例，以H14∶B.S＝1∶1為最佳(參考值)。
(2)毒力效價(jià)測(cè)定參照WHO生物毒效測(cè)定方法進(jìn)行，濃縮后的制品應(yīng)達(dá)到120-240Iu/mg。
8、按照權(quán)利要求1所述的雙菌協(xié)同發(fā)酵法中(二)一級(jí)發(fā)酵工藝的(1)菌種斜面，其特征在于“菌種斜面”的“培養(yǎng)基配方”和“菌種斜面培養(yǎng)條件及方法”與前述“二級(jí)發(fā)酵工藝”的相同。
9、按照權(quán)利要求1所述的雙菌協(xié)同發(fā)酵法中(二)一級(jí)發(fā)酵工藝的(2)發(fā)酵罐，其特征在于所述的“發(fā)酵罐”的
(1)發(fā)酵罐培養(yǎng)基配方與“二級(jí)發(fā)酵工藝”的發(fā)酵罐培養(yǎng)基配方相同。
(2)發(fā)酵罐的工藝方法將上述培養(yǎng)好的“菌種斜面”，即三角燒瓶液體菌種或茄子瓶菌苔菌種可分別采用下述兩種不同方法接種于發(fā)酵罐中
A.先將H14和B.S兩菌種混合后倒入已準(zhǔn)備好的無(wú)菌接種瓶中，再?gòu)臒o(wú)菌接種瓶引種到發(fā)酵罐中(與一般抗菌素發(fā)酵時(shí)的接種方法類同);接種后即開始發(fā)酵，在罐溫26-34℃，罐壓0.3-0.5公斤/厘米2，通氣量0.8-1升/升/分，攪抖260-450轉(zhuǎn)/分(罐體小的轉(zhuǎn)速要快些)條件下，培養(yǎng)24-48小時(shí)。
B.在與上述A相同發(fā)酵條件的基礎(chǔ)上，先將H14接種于發(fā)酵罐中，然后在間隔1-8小時(shí)內(nèi)(間隔8小時(shí)為最佳)，再將B.S接種于發(fā)酵罐中，發(fā)酵時(shí)間(以H14接種完計(jì))24-48小時(shí)，經(jīng)檢驗(yàn)，兩菌孢子形成率達(dá)80%以上即可收獲。
10、按照權(quán)利要求1所述的雙菌協(xié)同發(fā)酵法中(二)一級(jí)發(fā)酵工藝的(3)產(chǎn)品后處理(第一步濃縮，第二步防腐處理)及產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)，其特征在于“一級(jí)發(fā)酵工藝”的“產(chǎn)品后處理(第一步濃縮，第二步防腐處理)”及“產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)”與“二級(jí)發(fā)酵工藝”的“產(chǎn)品后處理(第一步濃縮，第二步防腐處理)”及“產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)”方法相同。
全文摘要
一種細(xì)菌滅幼蚊劑的雙菌協(xié)同發(fā)酵法是利用B.S格H14兩菌混合生長(zhǎng)的相容性，把H14和B.S放入同一只裝有以花生餅粕粉浸出液為主成分的培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中進(jìn)行雙菌協(xié)同發(fā)酵后，生產(chǎn)出一種與B.S或H14單菌滅幼蚊劑有實(shí)質(zhì)差別的細(xì)菌滅幼蚊劑；該滅幼蚊劑同時(shí)具有H14殺蟲譜廣，速效和B.S長(zhǎng)效的優(yōu)點(diǎn)，也從根本上克服了B.S殺蟲譜窄，作用緩慢和H14無(wú)持效的缺點(diǎn)。
文檔編號(hào)A01N63/02GK1050667SQ9010538
公開日1991年4月17日 申請(qǐng)日期1990年8月28日 優(yōu)先權(quán)日1990年8月28日
發(fā)明者陳世夫, 管玉霞, 李德臣, 武秀蘭 申請(qǐng)人:山東省衛(wèi)生防疫站