本申請(qǐng)涉及植物組織培養(yǎng)，具體涉及一種快速高效篩選橡膠樹花藥外植體的方法。

背景技術(shù)：

1、花藥培養(yǎng)是巴西橡膠樹組織培養(yǎng)的主要技術(shù)途徑，除花藥培養(yǎng)外，采用其他培養(yǎng)方式如未授粉胚珠、子房等培育無(wú)性系植株相對(duì)困難，花藥是獲得巴西橡膠樹體細(xì)胞胚植株最主要的外植體來源，其體細(xì)胞胚植株起始于花藥壁體細(xì)胞，經(jīng)過體細(xì)胞胚發(fā)生途徑形成完整的再生植株。由花藥離體培養(yǎng)得到的體細(xì)胞胚植株具有幼態(tài)特性，又有自主發(fā)育的根系，稱為橡膠樹自根幼態(tài)無(wú)性系，與老態(tài)芽接無(wú)性系相比，生長(zhǎng)更快、產(chǎn)量更高，抗逆性更強(qiáng)，是天然橡膠產(chǎn)業(yè)發(fā)展的新一代優(yōu)勢(shì)種植材料。目前，橡膠樹花藥外植體的常規(guī)獲得方法為：于當(dāng)日早晨將開花側(cè)枝采回，采摘工手持尖頭鑷子，在花序上挑選采摘適宜大小的雄花，消毒后剝出雄蕊用于接種，然而橡膠樹的雄花較小，長(zhǎng)約2～4mm，且橡膠花為圓錐花序，雌雄同序異花，同一花序上存在大小、顏色都十分接近，但成熟度不同的雄花，人為摘選費(fèi)時(shí)費(fèi)力，采摘耗時(shí)大幅降低了每日的可接種時(shí)間，影響了接種數(shù)量。

2、人工采摘花藥外植體時(shí)，熟練接種工人按6小時(shí)計(jì)每人每天可接種1800粒，以3個(gè)人每天接種量的需求計(jì)算，需要3人共同采摘1～1.5小時(shí)左右，在此期間，由于采摘時(shí)間過長(zhǎng)，采摘好的雄花容易發(fā)生脫水及活力減弱等情況。同時(shí)，人工采摘還可能會(huì)因?yàn)槭址ú划?dāng)或用力不均等原因，對(duì)花藥造成損傷，影響花藥的活力和培養(yǎng)效果。

3、綜上，人工采摘橡膠樹花藥外植體耗時(shí)長(zhǎng)，影響了接種數(shù)量，且過程容易受到多種因素的影響，難以保證每次采摘的花藥在活力、培養(yǎng)效果等方面都保持一致，因此，需要一種新的篩選方法，以克服目前獲得橡膠樹花藥外植體效率不高的問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本申請(qǐng)想要解決的問題是，提供一種快速高效篩選橡膠樹花藥外植體的方法，能夠大幅減少花藥外植體的采摘時(shí)間，減少人力投入，從而增加每日可接種的時(shí)間，提高接種數(shù)量和培養(yǎng)效果，為快速高效獲得橡膠樹不同品種花藥外植體及每年橡膠樹花期內(nèi)接種更多的培養(yǎng)材料提供了一種重要的方法。

2、為了解決上述技術(shù)問題，本申請(qǐng)采用以下技術(shù)方案：

3、本申請(qǐng)?zhí)峁┮环N快速高效篩選橡膠樹花藥外植體的方法，包括以下步驟：

4、s11.采摘橡膠樹花序軸，并收集所述花序軸上的雄花和雌花；

5、s12.將所述雄花和雌花用10目檢驗(yàn)篩進(jìn)行篩選，收集篩出的雄花；

6、s13.將s12中所述篩出的雄花用16目檢驗(yàn)篩進(jìn)行篩選，收集篩中的雄花；

7、s14.將s13中所述篩中的雄花用14目檢驗(yàn)篩進(jìn)行篩選，分別收集篩中的雄花和篩出的雄花；

8、s15.將s14中所述篩中的雄花用12目檢驗(yàn)篩進(jìn)行篩選，收集篩出的雄花；

9、s16.將s14和s15中，所述篩出的雄花進(jìn)行浸泡消毒，并將不符合成熟度要求的黃色雄花去除后進(jìn)行洗滌和過濾，得到所述橡膠樹花藥外植體。

10、在一些實(shí)施例中，所述10目檢驗(yàn)篩、所述12目檢驗(yàn)篩、所述14目檢驗(yàn)篩以及所述16目檢驗(yàn)篩均為標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)篩。

11、在一些示例中，所述標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)篩為新鄉(xiāng)市大漢振動(dòng)機(jī)械有限公司的直徑20cm標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)篩

12、在一些實(shí)施例中，在s16中，所述浸泡消毒包括以下步驟：

13、s21.將所述雄花使用乙醇進(jìn)行浸泡后過濾，得到初步消毒的橡膠樹花藥外植體；

14、s22.將所述初步消毒的橡膠樹花藥外植體使用hgcl2溶液和吐溫80進(jìn)行浸泡后過濾，得到完全消毒的橡膠樹花藥外植體。

15、在一些實(shí)施例中，在s21中，所述乙醇的濃度為75％。

16、在一些實(shí)施例中，在s22中，所述hgcl2溶液的濃度為0.1％～0.15％。

17、在一些實(shí)施例中，在s22中，所述吐溫80用量為1～5滴。

18、在一些實(shí)施例中，在s21中，所述浸泡的時(shí)間為30～60s。

19、在一些實(shí)施例中，在s22中，所述浸泡的時(shí)間為8～12min。

20、在一些實(shí)施例中，在s16中，所述黃色雄花的去除方法包括：在進(jìn)行浸泡消毒時(shí)，將懸浮的黃色雄花撈出。

21、在一些實(shí)施例中，在s16中，所述洗滌的清洗液為無(wú)菌水，所述洗滌的次數(shù)為5次。

22、本申請(qǐng)具有以下有益效果：

23、(1)本申請(qǐng)使用不同規(guī)格的檢驗(yàn)篩成功完成對(duì)橡膠樹花藥外植體的篩選，同時(shí)極大縮短了花藥外植體的選取時(shí)間，避免了花藥外植體因選取時(shí)間過長(zhǎng)，影響培養(yǎng)效果。

24、(2)通過本申請(qǐng)篩選出的橡膠樹花藥外植體，與人工挑選相比，能保持甚至具有更高的愈傷組織誘導(dǎo)率及體細(xì)胞胚發(fā)生率。

25、(3)檢驗(yàn)篩目前主要應(yīng)用食品、礦業(yè)、冶金、建筑以及環(huán)境監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域，目前暫未用于植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，本申請(qǐng)創(chuàng)造性的將檢驗(yàn)篩用于花藥外植體的篩選，能夠極大程度的降低花藥外植體的篩選難度。

26、(4)本申請(qǐng)?zhí)峁┑目焖俑咝ШY選橡膠樹花藥外植體的方法，能夠大大降低橡膠樹花藥外植體的采摘難度，降低采摘工人的工作強(qiáng)度，節(jié)約獲取花藥外植體的人力投入，進(jìn)而將更多的人力資源投入到花藥外植體接種的工作中。

技術(shù)特征：

1.一種快速高效篩選橡膠樹花藥外植體的方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述10目檢驗(yàn)篩、所述12目檢驗(yàn)篩、所述14目檢驗(yàn)篩以及所述16目檢驗(yàn)篩均為標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)篩。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在s16中，所述浸泡消毒包括以下步驟：

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，在s21中，所述乙醇的濃度為75％。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，在s22中，所述hgcl2溶液的濃度為0.1％～0.15％。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，在s22中，所述吐溫80用量為1～5滴。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，在s21中，所述浸泡的時(shí)間為30～60s。

8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，在s22中，所述浸泡的時(shí)間為8～12min。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在s16中，所述黃色雄花的去除方法包括：在進(jìn)行浸泡消毒時(shí)，將懸浮的黃色雄花撈出。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在s16中，所述洗滌的清洗液為無(wú)菌水，所述洗滌的次數(shù)為5次。

技術(shù)總結(jié)
本申請(qǐng)涉及植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種快速高效篩選橡膠樹花藥外植體的方法，包括以下步驟：S11.采摘橡膠樹花序軸，收集花序軸上的雄花和雌花；S12.將雄花和雌花用10目檢驗(yàn)篩進(jìn)行篩選，收集篩出雄花；S13.將S12中篩出雄花用16目檢驗(yàn)篩進(jìn)行篩選，收集篩中雄花；S14.將S13中篩中雄花用14目檢驗(yàn)篩進(jìn)行篩選，收集篩中雄花和篩出雄花；S15.將S14中篩中雄花用12目檢驗(yàn)篩進(jìn)行篩選，收集篩出雄花；S16.將S14和S15中，篩出雄花進(jìn)行浸泡消毒，將不符合成熟度要求的雄花去除后進(jìn)行洗滌和過濾，得到橡膠樹花藥外植體。本申請(qǐng)?zhí)峁┑姆椒?，能夠大幅減少花藥外植體的采摘時(shí)間，提高接種數(shù)量和培養(yǎng)效果，為快速高效獲得橡膠樹不同品種花藥外植體提供了一種重要的方法。

技術(shù)研發(fā)人員：李玲,桂明春,唐敏,田海,孫小龍,柳覲,梁國(guó)平
受保護(hù)的技術(shù)使用者：云南省熱帶作物科學(xué)研究所
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9