本發(fā)明與殺菌劑有關(guān)，具體而言，屬于含有機(jī)化合物的殺菌劑，進(jìn)一步來(lái)說(shuō)，屬于防治煙草病毒病的殺菌劑。該復(fù)配劑不但對(duì)多種真菌、細(xì)菌和病毒產(chǎn)生免疫和殺滅作用，如小麥花葉病、棉花黃萎病、水稻稻瘟病、番茄疫病等病害具有良好的防治作用。而且還可對(duì)多種植物病源菌具有一定的直接抑制作用，改善土壤微生物區(qū)系，促進(jìn)有益微生物生長(zhǎng)和刺激植物生長(zhǎng)，從而達(dá)到農(nóng)作物增產(chǎn)豐收的目的
技術(shù)背景
煙草病毒病俗稱煙草花葉病，是目前煙草種植上分布最廣、發(fā)生最為普遍的一大類病害。目前，我國(guó)已發(fā)現(xiàn)的煙草病毒病有16種，其中引致煙草花葉病的病毒主要有TMV、CMV、PVY等3種病毒。大部分地區(qū)病毒病是以煙草黃瓜花葉病毒病(CMV)、煙草普通花葉病毒病(TMV)等幾種病毒病混合發(fā)生，重復(fù)感染。田間病株率一般在20％～40％，重的達(dá)40％～80％，局部地塊高達(dá)100％。煙草感染病毒后，葉綠素受破壞，光合作用減弱，葉片生長(zhǎng)被抑制，葉小、畸形，減產(chǎn)幅度可達(dá)20％～80％。病毒病發(fā)生后，還嚴(yán)重影響煙葉的品質(zhì)，使品質(zhì)變劣。目前通常采用農(nóng)藥《奧力克—煙草病毒病專用》、《天達(dá)2116》等進(jìn)行防治。
丙硫唑即丙硫苯咪唑(Albendazole)，是一種高效、安全、廣譜性咪唑類殺菌劑，對(duì)多種植物病害有顯著的防效，并有一定的增產(chǎn)作用,對(duì)防治某些病菌有一定效果；氨基寡糖素(Oligosaccharins)，也稱為農(nóng)業(yè)專用殼寡糖，分為固態(tài)和液態(tài)兩種類型，對(duì)一些病菌的生長(zhǎng)產(chǎn)生抑制作用，影響真菌孢子萌發(fā)，誘發(fā)菌絲形態(tài)發(fā)生變異、孢內(nèi)生化發(fā)生改變等。氨基寡糖素是指D－氨基葡萄糖以β－1.4糖苷鍵連接的低聚糖；目前主要用于防治小麥花葉病、煙草病毒病等。
近年來(lái)，防治煙草病毒病的問(wèn)題受到重視，開(kāi)發(fā)許多專利技術(shù)，例如：ZL2006100215615號(hào)《植物抗病毒劑》、ZL2007101062965號(hào)《一種抗植物病毒的復(fù)合物》、ZL2010102265193號(hào)《一種含香菇多糖和三氮唑核苷的抗植物病毒病組合物及其應(yīng)用》、ZL2011102817780號(hào)《極細(xì)鏈格孢激活蛋白-井岡霉素可濕性粉劑及應(yīng)用》、ZL2012100125794號(hào)《殺菌組合物、農(nóng)藥及其應(yīng)用》、ZL2013102199320號(hào)《一種花域芽孢桿菌菌株SJ及其在制備煙草抗病毒制劑和促生劑中的應(yīng)用、2014101552023號(hào)《殺菌組合物及其應(yīng)用》、2015100622663號(hào)《KN-2及含KN-2的復(fù)配制劑在防治煙草花葉病毒中的應(yīng)用》、2016102110289號(hào)《一種防治煙草病毒病的核桃青皮提取物制備方法》等。這些專利技術(shù)都不是利用殺菌劑的，目前尚無(wú)用對(duì)煙草病毒病病菌的殺菌劑的相關(guān)申請(qǐng)件。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明旨在提供一種防治煙草病毒病的復(fù)合殺菌劑，使占農(nóng)產(chǎn)品重要地位的煙草增產(chǎn)增收，提高品質(zhì)，為國(guó)民經(jīng)濟(jì)的發(fā)展服務(wù)。
發(fā)明人對(duì)具有殺滅煙草病毒病菌活性的混配藥劑的原料藥質(zhì)量配比進(jìn)行反復(fù)試驗(yàn)，對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，找到一種復(fù)合殺菌劑，對(duì)煙草病毒病菌具備較強(qiáng)的毒殺能力。
發(fā)明人提供的防治煙草病毒病的復(fù)合殺菌劑是以丙硫唑和氨基寡糖素為基料，按照丙硫唑和氨基寡糖素的質(zhì)量配比4∶1～1∶2配制而成的復(fù)合殺菌劑；所述丙硫唑?yàn)橘|(zhì)量分?jǐn)?shù)98％的原藥，所述氨基寡糖素為質(zhì)量分?jǐn)?shù)80％的原藥。
經(jīng)過(guò)進(jìn)一步優(yōu)選，丙硫唑和氨基寡糖素的最佳質(zhì)量配比為2∶1。
上述防治煙草病毒病的復(fù)合殺菌劑的篩選試驗(yàn)如下：
1試驗(yàn)?zāi)康模?/p>
對(duì)丙硫唑、氨基寡糖素及其混配劑對(duì)煙草病毒病的毒力及配方篩選試驗(yàn)，為該復(fù)配殺菌劑用于田間防治煙草病毒病提供依據(jù)。
2供試材料和測(cè)定方法
2.1供試藥劑
98％丙硫唑(albendazole)原藥，貴州道元生物技術(shù)有限公司提供；
80％氨基寡糖素(oligosaccharins)母藥，貴州道元生物技術(shù)有限
公司提供；
2.2其它試劑
冰醋酸、無(wú)菌水、吐溫-80等試劑。
2.3供試靶標(biāo)---煙草病毒病
煙草病毒病為煙草黃瓜花葉病毒病(CMV)。于湖南瀏陽(yáng)市永安煙草基地?zé)熑~上采集，室內(nèi)離體保存和培養(yǎng)。
2.4培養(yǎng)條件
溫度25℃-30℃，相對(duì)濕度65％-75％。
2.5主要儀器設(shè)備
電子天平(感量0.lmg)、毛筆、智能溫室、移液管、洗瓶等。
3毒力測(cè)定方法
參照NY/T1156.4-2006推薦的盆栽法及半葉法。步驟如下：(1)培育煙草(心葉煙)幼苗盆栽，保濕供接種用。(2)藥劑配置：將丙硫唑、氨基寡糖素分別配成母液，再稀釋成系列濃度：丙硫唑、氨基寡糖素分別用適量的冰醋酸和無(wú)菌水溶解，再將丙硫唑用0.5％吐溫
80無(wú)菌水溶液稀釋成6、12、24、48、96mg/L,將氨基寡糖素用0.5％吐溫80無(wú)菌水溶液稀釋成2.5、5、10、20、40mg/L待用；5個(gè)丙硫唑和氨基寡糖素不同配比(有效成分之比分別為4∶1；3∶1；2∶1；1∶1；1∶2)分別先用冰醋酸稀溶液溶解，然后用含0.1％吐溫-8的溶液稀釋成3.5、7、14、28、56mg/L系列濃度待用。(3)藥劑處理：將以上各濃度藥劑與分別與等體積的病毒汁液混合鈍化30min，摩擦接種心葉煙左半葉，滅菌水與病毒汁液混合接種右半葉。3-7d后記錄祜斑數(shù)，計(jì)算病情指數(shù)。設(shè)不含藥劑的處理作為空白對(duì)照。(4)培養(yǎng)：每個(gè)處理4次重復(fù)，每盆1株三生煙，每株接種接種4片葉。置于連續(xù)光照/黑暗各12h交替、溫度29℃-31℃,相對(duì)濕度65％-75％的條件下培養(yǎng)。接種后在37d后根據(jù)對(duì)照發(fā)病情況，對(duì)接種葉片進(jìn)行分級(jí)調(diào)查，采用如下分級(jí)方法：
待空白對(duì)照病葉率達(dá)到50％以上時(shí)，分級(jí)調(diào)查整株葉片發(fā)病情況，分級(jí)方法為：
0級(jí):無(wú)任何癥狀；
1級(jí):病斑面積占接種葉面積的5％以下；
3級(jí)：病斑面積占接種葉面積的6％-15％；
5級(jí):病斑面積占接種葉面積的16％—25％；
7級(jí):病斑面積占接種葉面積的26％—50％；
9級(jí)：病斑面積占接種葉面積的50％以上。
根據(jù)調(diào)查數(shù)據(jù)，計(jì)算各處理的病情指數(shù)和防治效果。計(jì)算公式為：
Ni:各級(jí)病葉數(shù)；
i:相對(duì)級(jí)數(shù)值；
N:調(diào)查總?cè)~數(shù)。
然后用DPS軟件統(tǒng)計(jì)求毒力回歸方程計(jì)算各藥劑的EC50、EC90、95％的置信限、相關(guān)系數(shù)及混配劑的共毒系數(shù)(CTC),選擇最佳比例。
4試驗(yàn)結(jié)果
分別將丙硫唑、氨基寡糖素及5個(gè)不同混配制劑釆用上述方法對(duì)煙草病毒病進(jìn)行毒力測(cè)定并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，其結(jié)果見(jiàn)表1，由表1中數(shù)據(jù)可見(jiàn)，丙硫唑、氨基寡糖素5個(gè)不同的配比對(duì)煙草病毒病的共毒系數(shù)均大于120,說(shuō)明兩藥劑復(fù)配對(duì)煙草病毒病具有增效作用。其中，丙硫唑、氨基寡糖素有效成分比例為2∶1時(shí)，共毒系數(shù)最高，為143.76。
表1丙硫唑、氨基寡糖素及5個(gè)不同配比對(duì)煙草病毒病毒力測(cè)定結(jié)果
5結(jié)論
毒力測(cè)定結(jié)果表明，丙硫唑和氨基寡糖素5個(gè)不同比例混配對(duì)煙草病毒病的共毒系數(shù)均大于120,說(shuō)明兩原藥藥劑復(fù)配可用于防治煙草病毒病，預(yù)期效果良好。選擇丙硫唑和氨基寡糖素有效成份之質(zhì)量配比為2∶1的比例進(jìn)行復(fù)配，預(yù)期效果最佳。
本發(fā)明的復(fù)合殺菌劑，兩種原藥基料不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，具有明顯的增效作用，使用安全，對(duì)于目前田間不同類型的煙草病毒病菌有很好的毒殺活性，且明顯高于丙硫唑或是氨基寡糖素單劑。適用于廣大農(nóng)村防治煙草病毒病。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1 取質(zhì)量分?jǐn)?shù)98％的丙硫唑8kg和質(zhì)量分?jǐn)?shù)80％的氨基寡糖素2kg為基料，復(fù)配成10kg防治煙草病毒病的復(fù)合殺菌劑。
實(shí)施例2 取質(zhì)量分?jǐn)?shù)98％的丙硫唑6kg和質(zhì)量分?jǐn)?shù)80％的氨基寡糖素2kg為基料，復(fù)配成8kg防治煙草病毒病的復(fù)合殺菌劑。
實(shí)施例3 取質(zhì)量分?jǐn)?shù)98％的丙硫唑6kg和質(zhì)量分?jǐn)?shù)80％的氨基寡糖素3kg為基料，復(fù)配成9kg防治煙草病毒病的復(fù)合殺菌劑。
實(shí)施例4 取質(zhì)量分?jǐn)?shù)98％的丙硫唑5kg和質(zhì)量分?jǐn)?shù)80％的氨基寡糖素5kg為基料，復(fù)配成10kg防治煙草病毒病的復(fù)合殺菌劑。
實(shí)施例5 取質(zhì)量分?jǐn)?shù)98％的丙硫唑3kg和質(zhì)量分?jǐn)?shù)80％的氨基寡糖素6kg為基料，復(fù)配成9kg防治煙草病毒病的復(fù)合殺菌劑。
上述五例復(fù)合殺菌劑2016年在貴州某地使用，取得很好防治煙草病毒病的效果，其中丙硫唑和氨基寡糖素的質(zhì)量配比為2∶1效果最佳。