本發(fā)明涉及藍(lán)莓組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，特別是藍(lán)莓瓶內(nèi)快速生根方法。
背景技術(shù)：
藍(lán)莓為杜鵑花科越橘屬植物，是具有較高經(jīng)濟價值和廣闊開發(fā)前景的新興果樹樹種之一。藍(lán)莓果實營養(yǎng)豐富，特別是抗氧化能力為所有果品蔬菜之首。
當(dāng)前，利用植物組織培養(yǎng)方法可以在短期內(nèi)快速繁殖多種植物，不僅繁殖率高，且因為其是無性繁殖，可以保持原繁殖母株的優(yōu)良性狀，近年來在生產(chǎn)上應(yīng)用越來越廣。此外，扦插作為苗木繁育的另外一種重要手段，因其經(jīng)濟、方便也得到廣泛重視。但藍(lán)莓組培苗植株纖弱、生根率較低，若直接進(jìn)行扦插其成活率較低。
中國專利CN201210048620.3公開了一種矮叢藍(lán)莓組培苗的練苗及快速生根法。該方法包括如下步驟：將矮叢藍(lán)莓組培苗莖段接種在WPM基本培養(yǎng)基，在生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)，在移栽馴化階段，每隔7天噴施濃度為0.14％～0.16％的108生根寶一次。與常規(guī)組培育苗的煉苗和生根方法相比，可以使矮叢藍(lán)莓種苗生根率提高到90％以上；新苗成活率由50％上升到90％以上，同時新苗質(zhì)量也有了顯著提高。但該專利更多的關(guān)注藍(lán)莓在移栽馴化階段的生根管理措施，即在生根培養(yǎng)基培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，再次通過噴施生根寶進(jìn)行生根，從操作過程來看，操作比較繁瑣，生根所需時間較長。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述不足，提供一種藍(lán)莓瓶內(nèi)快速生根方法，該方法生根速度快，生根率高，且操作簡單，適宜大規(guī)模生產(chǎn)中使用。
本發(fā)明藍(lán)莓瓶內(nèi)快速生根法依次包括以下步驟：
1)在培養(yǎng)瓶內(nèi)鋪一層濾紙，將配制好的液體培養(yǎng)基倒入瓶內(nèi)，之后將該培養(yǎng)瓶及裝有IBA的三角瓶在120-125℃的高溫下滅菌15-20min備用；
2)選擇繼代培養(yǎng)30-40天生長健壯的藍(lán)莓，將其切成長度為3-4cm的莖段并將其基部放入IBA溶液中速蘸10-15s，然后將這些莖段豎直放入鋪有濾紙的培養(yǎng)瓶內(nèi)，培養(yǎng)基沒過藍(lán)莓莖段1-2cm；
3)先在暗光條件下培養(yǎng)一周，之后在光照強度為1500-2500Lx、光照時長為10-14h/d的條件下培養(yǎng)20-30天。
其中步驟1)中所述液體培養(yǎng)基配方為1/2WPM+20-30g/L蔗糖，pH為5.8-5.9。
步驟1)所述的液體培養(yǎng)基中還可以加入活性炭，加入量為重量百分比濃度0.2％～0.5％，試驗發(fā)現(xiàn)，活性炭不僅可以創(chuàng)造一個暗環(huán)境，而且還可以吸附一些有毒物質(zhì)，使根不容易發(fā)生褐變，有利于根的生長。
步驟1)所述的液體培養(yǎng)基中還可以加入維生素C，加入量為0.001-0.002mmol/L。
其中步驟1)中所述IBA濃度為100-200mg/L，根據(jù)不同的品種確定最佳濃度。
步驟3)所述的暗光條件下是指可以將培養(yǎng)瓶放在暗室內(nèi)，也可以用黑布遮蓋。
步驟3)所述暗光下及光照條件下的培養(yǎng)溫度均為23-25℃。
本發(fā)明的有益效果是：
(1)本發(fā)明的適用范圍較廣。
(2)本發(fā)明的生根速度快，生根率高，且操作簡單，適宜大規(guī)模生產(chǎn)中使用。
藍(lán)莓瓶內(nèi)使用固體培養(yǎng)基培養(yǎng)，一般生根時間需要60天左右，而本發(fā)明縮短到20-30天左右，生根時間縮短，成活率可達(dá)90％以上。
具體實施方式
下面將結(jié)合實例對本發(fā)明的實施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解，下列實施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限定本發(fā)明的范圍。
實施例1：試驗品種為奧尼爾
1)在培養(yǎng)瓶內(nèi)鋪一層濾紙，然后將制備好的液體培養(yǎng)基(配方為1/2WPM+20g/L蔗糖+0.3％活性炭，pH為5.8)倒入培養(yǎng)瓶內(nèi)，之后將培養(yǎng)瓶及裝有IBA的三角瓶(IBA濃度為200mg/L)在121℃的高溫下滅菌15min備用；2)選擇繼代培養(yǎng)35天左右且生長健壯的藍(lán)莓，將其切成長度為3-4cm的莖段，將其基部放入IBA溶液中速蘸10s，然后將這些莖段豎著放入培養(yǎng)瓶中；3)先在暗光下培養(yǎng)一周，之后在光照強度為2000Lx、光照時長為14h/d下的培養(yǎng)條件下進(jìn)行培養(yǎng)。光照下培養(yǎng)30天后生根率92％，平均根長2.7cm，移栽后成活率可達(dá)到93％。
實施例2：試驗品種為奧尼爾
(1)在培養(yǎng)瓶內(nèi)鋪一層濾紙，然后將制備好的液體培養(yǎng)基(配方為1/2WPM+20g/L蔗糖，還含有維生素C，加入量為0.001mmol/L，pH為5.8)倒入培養(yǎng)瓶內(nèi)，之后將培養(yǎng)瓶及裝有IBA的三角瓶(IBA濃度為200mg/L)在121℃的高溫下滅菌15min備用；2)選擇繼代培養(yǎng)35天生長健壯的藍(lán)莓，將其切成長度為3-4cm的莖段，將其基部放入IBA溶液中速蘸10s，然后將這些莖段豎著放入培養(yǎng)瓶中；3)先在暗光下培養(yǎng)一周，之后在光照強度為2000Lx、光照時長為14h/d下的培養(yǎng)條件下進(jìn)行培養(yǎng)。光照下培養(yǎng)30天后生根率可達(dá)90％，平均根長為2.1cm，移栽后成活率可達(dá)到92％。
實施例3：試驗品種為奧尼爾
(1)在培養(yǎng)瓶內(nèi)鋪一層濾紙，然后將制備好的液體培養(yǎng)基(配方為1/2WPM+20g/L蔗糖，pH為5.8)倒入培養(yǎng)瓶內(nèi)，之后將培養(yǎng)瓶及裝有IBA的三角瓶(IBA濃度為200mg/L)在121℃的高溫下滅菌15min備用；2)選擇繼代培養(yǎng)35天生長健壯的藍(lán)莓，將其切成長度為3-4cm的莖段，將其基部放入IBA溶液中速蘸10s，然后將這些莖段豎著放入培養(yǎng)瓶中；3)先在暗光下培養(yǎng)一周，之后在光照強度為2000Lx、光照時長為14h/d下的培養(yǎng)條件下進(jìn)行培養(yǎng)。光照下培養(yǎng)30天后生根率87％，平均根長2.0cm，移栽后成活率可達(dá)到88％。
實施例4：試驗品種為奧尼爾
1)在培養(yǎng)瓶內(nèi)鋪一層濾紙，然后將制備好的液體培養(yǎng)基(配方為1/2WPM+20g/L蔗糖+0.3％活性炭，pH為5.8，還含有維生素C，加入量為0.001mmol/L)倒入培養(yǎng)瓶內(nèi)，之后將培養(yǎng)瓶及裝有IBA的三角瓶(IBA濃度為200mg/L)在121℃的高溫下滅菌15min備用；2)選擇繼代培養(yǎng)35天生長健壯的藍(lán)莓，將其切成長度為3-4cm的莖段，將其基部放入IBA溶液中速蘸10s，然后將這些莖段豎著放入培養(yǎng)瓶中；3)先在暗光下培養(yǎng)一周，之后在光照強度為2000Lx、光照時長為14h/d下的培養(yǎng)條件下進(jìn)行培養(yǎng)。光照下培養(yǎng)30天后生根率97％，平均根長3.3cm，移栽后成活率可達(dá)到97％。
實施例5：試驗品種為喬治
1)在培養(yǎng)瓶內(nèi)鋪一層濾紙，然后將制備好的液體培養(yǎng)基(配方為1/2WPM+20g/L蔗糖+0.3％活性炭，pH為5.8)倒入培養(yǎng)瓶內(nèi)，之后將培養(yǎng)瓶及裝有IBA的三角瓶(IBA濃度200mg/L)在121℃的高溫下滅菌15min備用；2)選擇繼代培養(yǎng)35天生長健壯的藍(lán)莓，將其切成長度為3-4cm的莖段，將其基部放入IBA溶液中速蘸10s，然后將這些莖段放入培養(yǎng)瓶中；3)在暗光下培養(yǎng)一周，之后在光照強度為2000Lx、光照時長為14h/d下的培養(yǎng)條件下進(jìn)行培養(yǎng)。光照下培養(yǎng)25天后生根率95％，平均根長1.2cm，移栽后成活率可達(dá)到90％。
實施例6：試驗品種為藍(lán)豐
1)在培養(yǎng)瓶內(nèi)鋪一層濾紙，然后將制備好的液體培養(yǎng)基(配方為1/2WPM+20g/L蔗糖，pH為5.8，還含有活性炭，重量百分比濃度為0.3％)倒入培養(yǎng)瓶內(nèi)，之后將培養(yǎng)瓶及裝有IBA的三角瓶(IBA濃度100mg/L)在121℃的高溫下滅菌15min備用；2)選擇繼代培養(yǎng)35天生長健壯的藍(lán)莓，將其切成長度為3-4cm的莖段，將其基部放入IBA溶液中速蘸10s，然后將這些莖段放入培養(yǎng)瓶中；3)首先在暗光下培養(yǎng)一周，之后在光照強度為2000Lx、光照時長為14h/d下的培養(yǎng)條件下進(jìn)行培養(yǎng)。
光照下培養(yǎng)20天后生根率92％，根平均達(dá)到1.2cm，移栽后藍(lán)豐藍(lán)莓苗的成活率可達(dá)到91％。
實施例7：試驗品種為都克
1)在培養(yǎng)瓶內(nèi)鋪一層濾紙，然后將制備好的液體培養(yǎng)基(配方為1/2WPM+20g/L蔗糖，pH為5.8，還含有活性炭，重量百分比濃度為0.3％)倒入培養(yǎng)瓶內(nèi)，之后將培養(yǎng)瓶及裝有IBA的三角瓶(IBA濃度200mg/L)在121℃的高溫下滅菌15min備用；2)選擇繼代培養(yǎng)35天生長健壯的藍(lán)莓，將其切成長度為3-4cm的莖段，將其基部放入IBA溶液中速蘸10s，然后將這些莖段放入培養(yǎng)瓶中；3)首先在暗光下培養(yǎng)一周，之后在光照強度為2000Lx、光照時長為14h/d下的培養(yǎng)條件下進(jìn)行培養(yǎng)。
光照下培養(yǎng)20天后生根率100％，根平均達(dá)到3.33cm，移栽后都克藍(lán)莓苗的成活率可達(dá)到92％。
實施例8：試驗品種為喬治
1)在培養(yǎng)瓶內(nèi)鋪一層濾紙，然后將制備好的液體培養(yǎng)基(配方為1/2WPM+20g/L蔗糖，pH為5.8，還含有活性炭，重量百分比濃度為0.3％)倒入培養(yǎng)瓶內(nèi)，之后將培養(yǎng)瓶及裝有IBA的三角瓶(IBA濃度200mg/L)在121℃的高溫下滅菌15min備用；2)選擇繼代培養(yǎng)35天生長健壯的藍(lán)莓，將其切成長度為3-4cm的莖段，將其基部放入IBA溶液中速蘸10s，然后將這些莖段放入培養(yǎng)瓶中；3)首先在暗光下培養(yǎng)一周，之后在光照強度為2000Lx、光照時長為14h/d下的培養(yǎng)條件下進(jìn)行培養(yǎng)。
光照下培養(yǎng)25天左右后生根率90％，根平均達(dá)到1.7cm，移栽后喬治藍(lán)莓苗的成活率可達(dá)到90％。
實施例9：試驗品種為奧尼爾
1)在培養(yǎng)瓶內(nèi)鋪一層濾紙，然后將制備好的液體培養(yǎng)基(配方為1/2WPM+30g/L蔗糖，pH為5.8，還含有活性炭，重量百分比濃度為0.4％)倒入培養(yǎng)瓶內(nèi)，之后將培養(yǎng)瓶及裝有IBA的三角瓶(IBA濃度為200mg/L)在121℃的高溫下滅菌15min備用；2)選擇繼代培養(yǎng)35天生長健壯的藍(lán)莓，將其切成長度為3-4cm的莖段，將其基部放入IBA溶液中速蘸10s，然后將這些莖段豎著放入培養(yǎng)瓶中；3)首先在暗光下培養(yǎng)一周，之后在光照強度為2000Lx、光照時長為14h/d下的培養(yǎng)條件下進(jìn)行培養(yǎng)。
光照下培養(yǎng)20天后生根率95％，根平均達(dá)到2.9cm，移栽后奧尼爾藍(lán)莓苗的成活率可達(dá)到97％。
以上實施例暗光下及光照下的培養(yǎng)溫度均為25℃。
試驗結(jié)論：本發(fā)明繁殖方法適用范圍廣，生根速度快，操作簡單，且生根率高，適宜大規(guī)模生產(chǎn)中使用。
實施例1-4均針對奧尼爾藍(lán)莓做的試驗，培養(yǎng)基不同，其中實施例4配方為1/2WPM+20g/L蔗糖+活性炭+維生素C，實施例1配方為1/2WPM+20g/L蔗糖+活性炭，實施例2配方為1/2WPM+20g/L蔗糖+維生素C，實施例3配方為1/2WPM+20g/L蔗糖。
從實施例1-4的試驗結(jié)果可以看出，同時含活性炭和維生素C的實施例4生根率、根長度及移栽后藍(lán)莓苗的成活率均比其他實施例更好。
對比例1：
以圓藍(lán)、粉藍(lán)和夏普藍(lán)等為研究對象，采用瓶內(nèi)固體培養(yǎng)基生根的方法(配方為1/2WPM+0.3mg/LIBA)，經(jīng)過20d的培養(yǎng)，上述三個品種的生根率分別是1.3％，0和0，經(jīng)過60d的培養(yǎng)，生根率分別達(dá)到82.7％、74.9％和72％。
對比例2：
以兔眼藍(lán)莓為研究對象，采用瓶內(nèi)生根(配方為MS+0.2mg/LIBA)，生根率僅為57.5％。
對比例3：
以美登為研究對象，采用瓶內(nèi)生根方法(配方為1/2WPM+0.6mg/LIBA)，經(jīng)過生根培養(yǎng)45d后調(diào)研，其生根率達(dá)到85％。
以上內(nèi)容描述了本發(fā)明的基本原理和主要特征，本發(fā)明不受上述實施例的限制，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下，本發(fā)明還會有各種變化和改進(jìn)，這些變化和改進(jìn)都落入要求保護的本發(fā)明范圍內(nèi)。