本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種紫玉蘭組織培養(yǎng)工藝。

背景技術(shù)：

紫玉蘭又名木蘭、辛夷，為中國(guó)特有植物，分布在中國(guó)云南、福建、湖北、四川等地，生長(zhǎng)于海拔300米至1600米的地區(qū)，一般生長(zhǎng)在山坡林緣；紫玉蘭花朵艷麗怡人，芳香淡雅，孤植或叢植都很美觀，樹(shù)形婀娜，枝繁花茂，是優(yōu)良的庭園、街道綠化植物，為中國(guó)有2000多年歷史的傳統(tǒng)花卉和中藥；且不易移植和養(yǎng)護(hù)，是非常珍貴的花木。

現(xiàn)在隨著技術(shù)的發(fā)展，很多地區(qū)都在開(kāi)展紫玉蘭培養(yǎng)的方法，想在本地區(qū)培育種植紫玉蘭；傳統(tǒng)的紫玉蘭一般采用播種、扦插、嫁接、壓條和分株繁殖等培養(yǎng)方式；這些培養(yǎng)方式的耗時(shí)長(zhǎng)，而且繁育不易成活；現(xiàn)有的一些紫玉蘭組織培養(yǎng)方式是在封閉的無(wú)菌條件下進(jìn)行的，所需成本較大，而且還存在著組織培養(yǎng)中外植體容易褐化，成活率不高的問(wèn)題，不能用于紫玉蘭的大量繁殖。

申請(qǐng)?zhí)枮?01310730707.3的專利文件公開(kāi)了一種紫玉蘭組織培養(yǎng)方法，用于提供一種在開(kāi)放式條件下進(jìn)行，不用置備一個(gè)封閉式無(wú)菌環(huán)境，節(jié)約了成本；對(duì)紫玉蘭滅菌處理，保證了外植體無(wú)菌污染，提高其培養(yǎng)成活率高；用2％PVP浸泡外植體以及在培養(yǎng)基中加入2％PVP，減輕了外植體的褐化，提高了外植體的成活率的紫玉蘭組織培養(yǎng)方法；該紫玉蘭組織培養(yǎng)方法操作簡(jiǎn)單，時(shí)間短，成本低廉，成活率高、生根率高，并能實(shí)現(xiàn)短期內(nèi)的出瓶移栽，且能夠保持原品種的優(yōu)良性狀，為良種繁育和產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)；但是，其不能夠大幅度提高紫玉蘭組織培養(yǎng)的生根率和成活率，且不能夠提高組織培養(yǎng)的紫玉蘭的質(zhì)量。

因此，我們提出了一種紫玉蘭組織培養(yǎng)工藝用于解決上述問(wèn)題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

基于背景技術(shù)存在的技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提出了一種紫玉蘭組織培養(yǎng)工藝。

本發(fā)明提出的一種紫玉蘭組織培養(yǎng)工藝，包括以下步驟：

S1：對(duì)進(jìn)行紫玉蘭組織培養(yǎng)的場(chǎng)地做滅菌抑菌處理；

S2：在生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲(chóng)害的紫玉蘭母本植株上選擇直徑為1-3cm帶有腋芽的紫玉蘭枝條作為外植體；

S3：將外植體先用自來(lái)水沖洗10-12min，然后用濃度為0.1-0.3％的升汞和吐溫混合物浸泡8-12min，最后用無(wú)菌水沖洗4-7min；

S4：準(zhǔn)備以下重量份的原料：乙醇20-25份，吲哚丁酸鉀21-24份，滑石粉15-20份，黏土12-16份，萘乙酸鈉25-30份，草木灰18-22份，火土灰17-21份，然后將乙醇、吲哚丁酸鉀、滑石粉、黏土、萘乙酸鈉、草木灰和火土灰混合，制得試劑；

S5：將無(wú)菌水沖洗后的外植體浸入試劑內(nèi)，浸泡5-8h；

S6：將浸泡后的外植體插入基本培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，至新芽長(zhǎng)出后，將長(zhǎng)出新芽的外植體轉(zhuǎn)插入伸長(zhǎng)培養(yǎng)基中進(jìn)行新芽的伸長(zhǎng)培養(yǎng)，至新芽伸長(zhǎng)到0.3-0.5cm后，將外植體接入含有生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的基本培養(yǎng)基中，培養(yǎng)20-25天后，將外植體在5-8℃下冷藏12-16天，然后轉(zhuǎn)接到基本培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)25-30天，生根后將生根苗移接到室外進(jìn)行培養(yǎng)。

優(yōu)選地，所述S2中，在生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲(chóng)害的紫玉蘭母本植株上選擇直徑為2-3cm帶有腋芽的紫玉蘭枝條作為外植體。

優(yōu)選地，所述S3中，將外植體先用自來(lái)水沖洗11-12min，然后用濃度為0.2-0.3％的升汞和吐溫混合物浸泡9-11min，最后用無(wú)菌水沖洗5-6min。

優(yōu)選地，所述S4中，準(zhǔn)備以下重量份的原料：乙醇21-24份，吲哚丁酸鉀22-23份，滑石粉16-19份，黏土13-15份，萘乙酸鈉26-29份，草木灰19-21份，火土灰18-20份，然后將乙醇、吲哚丁酸鉀、滑石粉、黏土、萘乙酸鈉、草木灰和火土灰混合，制得試劑。

優(yōu)選地，所述S5中，將無(wú)菌水沖洗后的外植體浸入試劑內(nèi)，浸泡6-7h。

優(yōu)選地，所述S6中，將浸泡后的外植體插入基本培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，至新芽長(zhǎng)出后，將長(zhǎng)出新芽的外植體轉(zhuǎn)插入伸長(zhǎng)培養(yǎng)基中進(jìn)行新芽的伸長(zhǎng)培養(yǎng)，至新芽伸長(zhǎng)到0.4-0.5cm后，將外植體接入含有生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的基本培養(yǎng)基中，培養(yǎng)21-24天后，將外植體在6-7℃下冷藏13-15天，然后轉(zhuǎn)接到基本培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)26-29天，生根后將生根苗移接到室外進(jìn)行培養(yǎng)。

本發(fā)明中，所述一種紫玉蘭組織培養(yǎng)工藝通過(guò)在生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲(chóng)害的紫玉蘭母本植株上選擇紫玉蘭枝條作為外植體能夠保證外植體的質(zhì)量?jī)?yōu)良，通過(guò)用自來(lái)水沖洗、用濃度為0.1-0.3％的升汞和吐溫混合物浸泡、用無(wú)菌水沖洗能夠進(jìn)行消毒，避免外植體感染病菌，通過(guò)將外植體浸入試劑內(nèi)能夠大幅度提高外植體的生根率和成活率，且能夠提高外植體的質(zhì)量，本發(fā)明能夠保證組織培養(yǎng)的紫玉蘭的質(zhì)量?jī)?yōu)良，且能夠大幅度提高紫玉蘭組織培養(yǎng)的生根率和成活率，更能夠提高組織培養(yǎng)的紫玉蘭的質(zhì)量，工藝簡(jiǎn)單，使用方便。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步解說(shuō)。

實(shí)施例一

本實(shí)施例提出了一種紫玉蘭組織培養(yǎng)工藝，包括以下步驟：

S1：對(duì)進(jìn)行紫玉蘭組織培養(yǎng)的場(chǎng)地做滅菌抑菌處理；

S2：在生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲(chóng)害的紫玉蘭母本植株上選擇直徑為1cm帶有腋芽的紫玉蘭枝條作為外植體；

S3：將外植體先用自來(lái)水沖洗10min，然后用濃度為0.1％的升汞和吐溫混合物浸泡8min，最后用無(wú)菌水沖洗4min；

S4：準(zhǔn)備以下重量份的原料：乙醇20份，吲哚丁酸鉀21份，滑石粉15份，黏土12份，萘乙酸鈉25份，草木灰18份，火土灰17份，然后將乙醇、吲哚丁酸鉀、滑石粉、黏土、萘乙酸鈉、草木灰和火土灰混合，制得試劑；

S5：將無(wú)菌水沖洗后的外植體浸入試劑內(nèi)，浸泡5h；

S6：將浸泡后的外植體插入基本培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，至新芽長(zhǎng)出后，將長(zhǎng)出新芽的外植體轉(zhuǎn)插入伸長(zhǎng)培養(yǎng)基中進(jìn)行新芽的伸長(zhǎng)培養(yǎng)，至新芽伸長(zhǎng)到0.3cm后，將外植體接入含有生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的基本培養(yǎng)基中，培養(yǎng)20天后，將外植體在5℃下冷藏12天，然后轉(zhuǎn)接到基本培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)25天，生根后將生根苗移接到室外進(jìn)行培養(yǎng)。

實(shí)施例二

本實(shí)施例提出了一種紫玉蘭組織培養(yǎng)工藝，包括以下步驟：

S1：對(duì)進(jìn)行紫玉蘭組織培養(yǎng)的場(chǎng)地做滅菌抑菌處理；

S2：在生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲(chóng)害的紫玉蘭母本植株上選擇直徑為2cm帶有腋芽的紫玉蘭枝條作為外植體；

S3：將外植體先用自來(lái)水沖洗11min，然后用濃度為0.2％的升汞和吐溫混合物浸泡10min，最后用無(wú)菌水沖洗5min；

S4：準(zhǔn)備以下重量份的原料：乙醇23份，吲哚丁酸鉀22份，滑石粉18份，黏土14份，萘乙酸鈉28份，草木灰20份，火土灰19份，然后將乙醇、吲哚丁酸鉀、滑石粉、黏土、萘乙酸鈉、草木灰和火土灰混合，制得試劑；

S5：將無(wú)菌水沖洗后的外植體浸入試劑內(nèi)，浸泡6h；

S6：將浸泡后的外植體插入基本培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，至新芽長(zhǎng)出后，將長(zhǎng)出新芽的外植體轉(zhuǎn)插入伸長(zhǎng)培養(yǎng)基中進(jìn)行新芽的伸長(zhǎng)培養(yǎng)，至新芽伸長(zhǎng)到0.4cm后，將外植體接入含有生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的基本培養(yǎng)基中，培養(yǎng)23天后，將外植體在6℃下冷藏14天，然后轉(zhuǎn)接到基本培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)28天，生根后將生根苗移接到室外進(jìn)行培養(yǎng)。

實(shí)施例三

本實(shí)施例提出了一種紫玉蘭組織培養(yǎng)工藝，包括以下步驟：

S1：對(duì)進(jìn)行紫玉蘭組織培養(yǎng)的場(chǎng)地做滅菌抑菌處理；

S2：在生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲(chóng)害的紫玉蘭母本植株上選擇直徑為3cm帶有腋芽的紫玉蘭枝條作為外植體；

S3：將外植體先用自來(lái)水沖洗12min，然后用濃度為0.3％的升汞和吐溫混合物浸泡12min，最后用無(wú)菌水沖洗7min；

S4：準(zhǔn)備以下重量份的原料：乙醇25份，吲哚丁酸鉀24份，滑石粉20份，黏土16份，萘乙酸鈉30份，草木灰22份，火土灰21份，然后將乙醇、吲哚丁酸鉀、滑石粉、黏土、萘乙酸鈉、草木灰和火土灰混合，制得試劑；

S5：將無(wú)菌水沖洗后的外植體浸入試劑內(nèi)，浸泡8h；

S6：將浸泡后的外植體插入基本培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，至新芽長(zhǎng)出后，將長(zhǎng)出新芽的外植體轉(zhuǎn)插入伸長(zhǎng)培養(yǎng)基中進(jìn)行新芽的伸長(zhǎng)培養(yǎng)，至新芽伸長(zhǎng)到0.5cm后，將外植體接入含有生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的基本培養(yǎng)基中，培養(yǎng)25天后，將外植體在8℃下冷藏16天，然后轉(zhuǎn)接到基本培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)30天，生根后將生根苗移接到室外進(jìn)行培養(yǎng)。

對(duì)實(shí)施例一、實(shí)施例二、實(shí)施例三和常規(guī)組織培養(yǎng)工藝培養(yǎng)的紫玉蘭進(jìn)行測(cè)試，測(cè)試結(jié)果表明：實(shí)施例一、實(shí)施例二和實(shí)施例三的組織培養(yǎng)工藝培養(yǎng)的紫玉蘭的質(zhì)量比較常規(guī)組織培養(yǎng)工藝培養(yǎng)的紫玉蘭的質(zhì)量提高百分比分別為4.3％、4.8％和5.6％，實(shí)施例一、實(shí)施例二、實(shí)施例三和常規(guī)組織培養(yǎng)工藝培養(yǎng)的紫玉蘭的生根率分別為69％、73％、84％和56％，由此可知，實(shí)施例一、實(shí)施例二和實(shí)施例三的組織培養(yǎng)工藝培養(yǎng)的紫玉蘭的質(zhì)量和生根率比較常規(guī)組織培養(yǎng)工藝培養(yǎng)的紫玉蘭的質(zhì)量和生根率具有明顯提高，且實(shí)施例三為最佳實(shí)施例。

以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實(shí)施方式，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。