本發(fā)明屬于席草的組培技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及席草一步成苗批量化生產(chǎn)的方法。

背景技術(shù)：

席草(Juncus effusus L.)是一種重要的經(jīng)濟(jì)作物，具有柔軟并富有彈性，并不易褪色，還有吸濕、脫臭、防蟲、防蛀并具有天然草香等特性，使席草很適合編織榻榻米、草席、草墊、草扇和草籃等，其產(chǎn)品具有通氣、吸濕、清涼的作用。由于席草可以自身調(diào)節(jié)干濕，所以用席草制成的產(chǎn)品夏季能保持適度的干燥，使人的皮膚感覺異常舒適，冬季保溫性能良好，因此席草編織品已成為人們?nèi)粘Ｉ钪兄匾募彝ト粘Ｓ闷?，同時(shí)也可以作為室內(nèi)時(shí)尚裝飾品，深受廣大消費(fèi)者的青睞，其編織品具有那些塑料、化纖、竹子等編織品無法比擬的特性和優(yōu)點(diǎn)。席草根莖可作藥用，有利尿、安眠、止血、治小兒夜啼等功效，因此日本人喜用席草編織品作為室內(nèi)裝飾和睡眠還具有其更深層次的原因日本是使用藺草編織品最多的國家，至少已有500多年的歷史。隨著我國人民生活水平的不斷提高和回歸自然熱的掀起，用天然藺草作為原料的綠色編織品，必將引起人們?cè)絹碓蕉嗟年P(guān)注。

席草為多年生宿根性草本植物，常規(guī)育種通過分株繁殖，一是逐年分株繁殖導(dǎo)致質(zhì)量下降，不適合加工。本發(fā)明通過組織培養(yǎng)方法，提純復(fù)壯席草的優(yōu)勢(shì)，且創(chuàng)造出席草高效成苗的最佳方法，建立一套高效低耗量的培養(yǎng)體系，以最快的速度將研究成果轉(zhuǎn)化為現(xiàn)實(shí)生產(chǎn)力。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種高效低耗量的席草快速繁殖方法，該方法培養(yǎng)效果佳，增殖系數(shù)高，穩(wěn)定性好、生產(chǎn)成本低，是一種在最短的時(shí)間內(nèi)獲得大量試管苗的快速繁殖方法。

本發(fā)明的目的是通過以下方式實(shí)現(xiàn)的：

一種席草一步成苗批量化生產(chǎn)的方法，包括以下步驟：

(1)基礎(chǔ)苗獲得：選擇優(yōu)良席草植株的分蘗節(jié)為外植體，外植體消毒后在1/2MS+6-BA1.2～4.5mg/L的瓊脂固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，誘導(dǎo)出分蘗芽；

(2)批量化生產(chǎn)：將步驟(1)獲得的分蘗芽，接在1/2MS+6-BA1.2～4.5mg/L+NAA0.02～1.0mg/L+IAA0.02～1.0mg/L+多效唑0.5～5.0mg/L的瓊脂固體培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖和生根；

(3)大田栽培：幼苗出瓶移栽前，打開瓶蓋煉苗，取出清洗根部培養(yǎng)基，隨后將幼苗直接移栽至水田。

步驟(1)中將席草整株從大田挖出，將根部清洗干凈，放置清潔的水中培養(yǎng)2周，將分蘗節(jié)分成單株，再將根和基部老葉去掉，分蘗節(jié)保留1.8-2.2cm高。

步驟(1)中分蘗節(jié)消毒時(shí)，首先用洗衣粉清洗干凈，在無菌操作臺(tái)上用無菌水洗5～7次，用70％酒精浸潤30秒-1分鐘，再放入0.1％的升汞溶液中滅菌12～18分鐘，無菌水沖洗5～6次，備用。

步驟(1)誘導(dǎo)出的叢芽繼代培養(yǎng)時(shí)，分成4-6株/叢，再轉(zhuǎn)入步驟(1)相同的培養(yǎng)基中，每隔30d繼代一次。

步驟(2)是將步驟(1)獲得的叢生芽切下來，分成4-6株/叢，每瓶7-10叢進(jìn)行增殖和生根。

步驟(2)繼代培養(yǎng)時(shí)，分成4-6株/叢，每瓶7-10叢，轉(zhuǎn)入步驟(2)相同培養(yǎng)基中。

步驟(1)和(2)的培養(yǎng)溫度為24℃±2，1000～2000lx弱光環(huán)境中，每天10～12小時(shí)光照培養(yǎng)。

步驟(3)是將步驟(2)獲得的根葉俱全，且5-6cm高的幼苗出瓶移栽，先打開瓶蓋煉苗5-7d，再取出清洗根部培養(yǎng)基，隨后將幼苗分成4-6株/叢移至水田；大田栽培水位均保持在1-2cm深。

步驟(1)優(yōu)選使用的瓊脂固體培養(yǎng)基為：1/2MS+6-BA3.5mg/L；或者使用培養(yǎng)基：1/2MS+6-BA4.0mg/L。

步驟(2)優(yōu)選使用的瓊脂固體培養(yǎng)基為：1/2MS+6-BA2.5mg/L+NAA0.6mg/L+IAA0.5mg/L+多效唑3.0mg/L；或者使用培養(yǎng)基：1/2MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.6mg/L+IAA0.4mg/L+多效唑4.0mg/L。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于：

1、針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的不足之處，該發(fā)明方法提高了席草優(yōu)良特性，其無性系后代不經(jīng)過愈傷組織階段，能保持與母本優(yōu)良特性的高度一致性。

2、本發(fā)明根據(jù)生產(chǎn)需要設(shè)計(jì)培養(yǎng)方法，首先同步誘導(dǎo)大量分蘗芽，抑制根的形成，提高增殖倍數(shù)，加快基礎(chǔ)苗的繁殖，增殖倍數(shù)達(dá)到7-10；每瓶獲得有效苗70株以上，大大提高了培養(yǎng)效率，節(jié)約了生產(chǎn)成本。

3、批量化生產(chǎn)階段同步誘導(dǎo)分蘗芽、不定根，增殖與生根簡化為一步完成，即“一步成苗”方法，形成完整植株只需30d左右，節(jié)約了30d左右的生根時(shí)間。

4、直接從瓶內(nèi)移栽大田，省略了溫室煉苗階段，而且4-6株/叢進(jìn)行移栽，緩苗期短，移栽成活率高達(dá)95％以上。

5、本發(fā)明選擇未經(jīng)組培繁殖的分蘗節(jié)進(jìn)行分株繁殖為對(duì)照；兩者移栽條件一致，適時(shí)追肥一次；移栽7個(gè)月左右，種苗為組培試管苗的植株相比于對(duì)照莖色翠綠，鮮草直徑相對(duì)較粗、草莖較長，頂草長。

6、根據(jù)前人成本預(yù)算的方法計(jì)算，本發(fā)明技術(shù)生產(chǎn)100萬株席草試管苗，每瓶有效生根苗為70株以上，僅需生產(chǎn)約0.5萬瓶基礎(chǔ)苗，約1.5萬瓶生根苗，合計(jì)2萬瓶。本發(fā)明不僅減少了無菌操作步驟，而且節(jié)約了培養(yǎng)室空間，簡化了健康種苗生產(chǎn)程序，降低了生產(chǎn)成本，提高了生產(chǎn)效率。

附圖說明

圖1為席草有效苗苗的生長情況；

圖2為席草有效苗根的生長情況；

圖3為席草組培試管苗在大田的生長情況；

圖4為席草分株苗在大田的生長情況。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合實(shí)施例旨在進(jìn)一步說明本發(fā)明，而非限制本發(fā)明。

實(shí)施例1、組織培養(yǎng)快速繁殖席草

一、培養(yǎng)基配制和滅菌

初代繼代培養(yǎng)基用于基礎(chǔ)苗繁殖：1/2MS+6-BA3.5mg/L；

一步成苗批量化生產(chǎn)培養(yǎng)基：1/2MS+6-BA2.5mg/L+NAA0.6mg/L+IAA0.5mg/L+多效唑3.0mg/L。

以上培養(yǎng)基121℃下，滅菌20分鐘。

二、基礎(chǔ)苗繁殖

取席草(Juncus effusus L.)分蘗節(jié)，將席草整株從大田挖出，將根部清洗干凈，放置清潔的水中培養(yǎng)2周左右，再將分蘗節(jié)分成單株，再將根、基部老葉和頂部去掉，分蘗節(jié)保留2cm左右高；消毒時(shí)，首先用洗衣粉清洗干凈，在無菌操作臺(tái)上用無菌水洗5～7次，用70％酒精浸潤30秒-1分鐘，再放入0.1％的升汞溶液中滅菌12～18分鐘，無菌水沖洗5～6次，備用。將分蘗節(jié)轉(zhuǎn)入裝有初代培養(yǎng)基上塑料培養(yǎng)瓶(容量80毫升)中，每個(gè)培養(yǎng)瓶外植體個(gè)數(shù)為10個(gè)左右，在下述培養(yǎng)條件下進(jìn)行培養(yǎng)：24℃左右，每天10小時(shí)光照，光照強(qiáng)度為1000～2000lx左右；分蘗節(jié)接種90個(gè)。培養(yǎng)3周左右，從分蘗節(jié)基部開始形成分蘗芽，繼續(xù)培養(yǎng)2周，100％分蘗節(jié)基部形成5以上的分蘗芽，最高達(dá)到10個(gè)。繼代培養(yǎng)時(shí)，將叢芽分成4-6株/叢，每隔30d繼代一次，每次繼代中，每個(gè)分蘗芽增殖7-10倍。這一步需要抑制根的形成，以防影響基礎(chǔ)苗的繁殖。根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模，繁殖充足的基礎(chǔ)苗，再進(jìn)行批量化生產(chǎn)。

三、批量化生產(chǎn)

取上述90個(gè)株系中的90個(gè)株系進(jìn)行繼代繁殖，具體方法如下：將步驟(1)獲得的分蘗芽叢按4-6株/叢的規(guī)格分開，接種在培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)基同步驟(2)，培養(yǎng)條件同步驟(2)；培養(yǎng)30d左右后，增殖倍數(shù)為7-10，苗高5-6cm，同步生根率高達(dá)100％，每瓶獲得根葉俱全的有效苗70株以上。有效苗苗的生長情況如圖1所示，有效苗根的生長情況如圖2所示。

四、試管苗移栽：

步驟(3)是將步驟(2)獲得的根葉俱全，且5-6cm高的幼苗出瓶移栽，先打開瓶蓋煉苗5-7d，再取出清洗根部培養(yǎng)基，隨后將幼苗分成4-6株/叢左右移至水田，選擇未經(jīng)組培繁殖的席草分蘗苗進(jìn)行分株繁殖為對(duì)照，水位均保持在1-2cm深；兩者移栽條件和方法一致。

移栽時(shí)間為2015年10月22日，10d左右恢復(fù)生長，30d左右長出新葉，60d左右100％長出新葉。移栽8個(gè)月席草試管苗的生長情況如圖3所示；移栽8個(gè)月對(duì)照的生長情況如圖4所示。

本發(fā)明所提供的席草組織培養(yǎng)繁殖方法，分蘗節(jié)為外植體，取材容易，數(shù)量大，遺傳穩(wěn)定性高，生長良好等優(yōu)勢(shì)。在初代培養(yǎng)過程中，不經(jīng)過愈傷組織階段，直接從分蘗節(jié)基部形成分蘗芽，不僅生長速度快，而且繁殖系數(shù)大。批量化生產(chǎn)階段，采用同步增殖生根，“一步成苗”的方法，簡化了健康種苗生產(chǎn)程序。本發(fā)明技術(shù)生產(chǎn)100萬株席草試管苗，每瓶有效生根苗為70株以上，僅需生產(chǎn)約0.5萬瓶基礎(chǔ)苗，約1.5萬瓶生根苗，合計(jì)2萬瓶。本發(fā)明不僅減少了無菌操作步驟，而且節(jié)約了培養(yǎng)室空間，簡化了健康種苗生產(chǎn)程序，降低了生產(chǎn)成本，提高了生產(chǎn)效率。

實(shí)施例2、組織培養(yǎng)快速繁殖席草

一、培養(yǎng)基配制和滅菌

初代繼代培養(yǎng)基：1/2MS+6-BA4.0mg/L；

一步成苗批量化生產(chǎn)培養(yǎng)基：1/2MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.6mg/L+IAA0.4mg/L+多效唑4.0mg/L。

取席草(Juncus effusus L.)分蘗節(jié)，基本操作方法同實(shí)施例1一致；效果與實(shí)施例1相差不大。