本發(fā)明涉及病原菌抗藥性檢測技術領域，尤其涉及一種水稻苗期耐鹽性的快速鑒定方法。

背景技術：

隨著全球水資源危機以及土壤鹽化問題的加劇,鹽脅迫已經(jīng)成為影響植物生長、導致糧食和經(jīng)濟作物減產的主要限制因素。水稻作為全世界人民最重要的口糧之一，培育耐鹽堿水稻新品種是發(fā)展鹽堿地農業(yè)的關鍵。而耐鹽水稻新品種的選育其中最重要的就是水稻耐鹽原始親本的篩選。

目前對于水稻耐鹽品種的篩選與鑒定主要集中在地上部的形態(tài)指標和生理指標，如株高、分蘗數(shù)、黃葉數(shù)、葉綠素含量、超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量，然而，生理指標易受生長環(huán)境變化及檢測方法影響，因而存在著許多不確定因素。形態(tài)指標具有直觀、易調查的優(yōu)點，其中最為直觀簡便的就是葉片黃化程度。此外，根系是農作物吸收營養(yǎng)物質的主要器官，是植物地上部分賴以生存的基礎，也是對鹽害反應最敏感的部位，因此水稻根系的研究對于水稻耐鹽性具有重要的意義，但是由于水稻根系生長在土壤中，我們很難獲得完整的根系，所以對根系的研究有很大的限制。

如何采用簡單快速的處理方法，可以同時對以上兩個地上部和地下部的形態(tài)指標進行觀察監(jiān)測從而實現(xiàn)對水稻耐鹽品種的快速鑒定篩選值得探討。

技術實現(xiàn)要素：

發(fā)明目的：為了克服現(xiàn)有技術中存在的缺陷，本發(fā)明提出了一種省時省力、操作簡單便捷、使用器材常見，成本低廉，效果顯著的水稻苗期耐鹽性的快速鑒定方法。

技術方案：為了解決上述技術問題，本發(fā)明所采用的技術方案為：一種水稻苗期耐鹽性的快速鑒定方法，包括以下步驟：

(1)鑒定工具的準備：準備帶有多個均勻播種孔的播種板，所述播種孔下部設有滲水孔；準備與播種板尺寸相配合的發(fā)芽盒，所述發(fā)芽盒上口方足以懸放1至多個播種板；

(2)待鑒定水稻種子的播種：挑選健康飽滿的待鑒定水稻種子，將種子胚向下豎放入播種孔中進行播種，一孔一粒，每個待鑒定水稻品種播種30粒以上，三個重復，并分設對照組和處理組；

(3)待鑒定水稻種子的培養(yǎng)：將播種板置于發(fā)芽盒上，在發(fā)芽盒中注滿蒸餾水，水滲入播種孔中淹沒種子，置于30℃光照培養(yǎng)箱中浸泡催芽，采用模擬水稻正常生長的12h光照處理、12h黑暗處理再循環(huán)的間歇光照處理模式，其中光照處理的光照強度為2000lx；

(4)統(tǒng)計發(fā)芽苗數(shù)，苗長一葉一心后，處理組在發(fā)芽盒中注滿3‰-6‰質量濃度的氯化鈉溶液，對照組不添加氯化鈉溶液，同時處理組和對照組從一葉一心期起都每三天加入總體積的千分之一體積的無土水培營養(yǎng)液至處理結束；

(5)步驟(4)處理開始后將光照培養(yǎng)箱內溫度調節(jié)至25℃，繼續(xù)采用模擬水稻正常生長的12h光照處理、12h黑暗處理再循環(huán)的間歇光照處理模式，其中光照處理的光照強度為2000lx；

(6)在上述條件中處理10天，10天后停止脅迫處理試驗，每個重復挑選10株長勢相近的單株，調查統(tǒng)計待鑒定水稻品種的黃葉數(shù)占總葉片數(shù)的百分比和待鑒定水稻品種的處理根數(shù)/對照根數(shù)，以黃葉數(shù)占總葉片數(shù)的百分比和處理根數(shù)/對照根數(shù)為指標評價待試品種苗期的耐鹽性，其中黃葉數(shù)占總葉片數(shù)的百分比為0-30％為強耐鹽型、31％-60％為中度耐鹽型、61％-100％為鹽敏感型；處理根數(shù)/對照根數(shù)為0.8-1為強耐鹽型、0.51-0.79為中度耐鹽型、0-0.5為鹽敏感型。

在一些實施方式中，步驟(1)中所述播種板選用廢舊PCR96孔板，底部削掉一截保證種子不掉出且能滲水。

更進一步的，發(fā)芽盒選用與廢舊PCR96孔板相配合的尺寸為11.6cmx11.6cmx5cm。

在一些實施方式中，步驟(2)中每個待鑒定水稻品種播種48粒。

有益效果：本發(fā)明提供的一種水稻苗期耐鹽性的快速鑒定方法，利用實驗室常見器材，全過程在光照培養(yǎng)箱中進行，模擬水稻的最適宜生長條件，采用對水稻種子的水培以及鹽脅迫處理，同時觀察地上部分和地下部分的形態(tài)指標，通過黃葉數(shù)占總葉片數(shù)的百分比和處理根數(shù)/對照根數(shù)為指標評價待試品種苗期的耐鹽性，從而實現(xiàn)對水稻苗期耐鹽性能的快速鑒定，省時省力，操作簡單便捷，使用器材常見且可廢物利用，成本低廉，鑒定結果準確性高，可靠性強，實用價值顯著，且培養(yǎng)體系有利于根系生長，便于根系的調查。

具體實施方式

下面結合實施例對本發(fā)明作進一步的詳細說明：

實施例1：

A)試驗材料：采用耐鹽品種P1(寧資12bt3)和鹽敏感品種P2(武運粳27號)為例進行說明。

B)實施方法：

(1)鑒定工具的準備：廢舊96孔PCR板6塊，吸水紙6張，尺寸為11.6cmx11.6cmx5cm的發(fā)芽盒6個，其中PCR板底部削掉一截保證種子不掉出且能滲水；

(2)待鑒定水稻種子的播種：挑選健康飽滿的待鑒定水稻種子，將種子胚向下豎放入PCR板孔中進行播種，一孔一粒，每個待鑒定水稻品種播種48粒，種子按6*8排列，三個重復，并分設對照組和處理組；

(3)待鑒定水稻種子的培養(yǎng)：將播種過的PCR板置于發(fā)芽盒上，在發(fā)芽盒中注滿蒸餾水，水滲入PCR孔內淹沒種子，置于30℃光照培養(yǎng)箱中浸泡催芽，采用模擬水稻正常生長的12h光照處理、12h黑暗處理再循環(huán)的間歇光照處理模式，其中光照處理的光照強度為2000lx；

(4)統(tǒng)計發(fā)芽苗數(shù)，苗長一葉一心后，處理組在發(fā)芽盒中注滿5‰質量濃度的氯化鈉溶液，對照組不添加氯化鈉溶液，處理組和對照組都每三天加入1mL無土水培營養(yǎng)液，購買自上海微譜化工技術服務有限公司；

(5)將光照培養(yǎng)箱內溫度調節(jié)至25℃，繼續(xù)采用模擬水稻正常生長的12h光照處理、12h黑暗處理再循環(huán)的間歇光照處理模式，其中光照處理的光照強度為2000lx；

(6)在上述條件中處理10天，10天后停止脅迫處理試驗，每個重復挑選10株長勢相近的單株，調查統(tǒng)計待鑒定水稻品種的黃葉數(shù)占總葉片數(shù)的百分比和待鑒定水稻品種的處理根數(shù)/對照根數(shù)。

C)評價方法：以黃葉數(shù)占總葉片數(shù)的百分比和處理根數(shù)/對照根數(shù)為指標評價待試品種苗期的耐鹽性，其中黃葉數(shù)占總葉片數(shù)的百分比為0-30％為強耐鹽型、31％-60％為中度耐鹽型、61％-100％為鹽敏感型；處理根數(shù)/對照根數(shù)為0.8-1為強耐鹽型、0.51-0.79為中度耐鹽型、0-0.5為鹽敏感型。

D)試驗結果：

從表1的數(shù)據(jù)結合評價方法可以看出，處理組中P1為耐鹽性較強的材料，其黃葉數(shù)占植株總葉片數(shù)的20.25％，處理根數(shù)/對照根數(shù)為0.73。而P2材料為鹽敏感型，其黃葉數(shù)占植株總葉片數(shù)的79.08％，處理根數(shù)/對照根數(shù)為0.47。此結果說明，水稻植株在受到鹽脅迫后，黃葉數(shù)會增多，根系數(shù)目有所下降，耐鹽性強的水稻品種所表現(xiàn)的鹽害程度較輕。

表1 P1和P2材料處理間表型差異

應當指出，以上具體實施方式僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，在閱讀了本發(fā)明之后，本領域技術人員對本發(fā)明的各種等價形式的修改均落于本申請所附權利要求所限定的范圍。