本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)及脫毒領(lǐng)域，尤其涉及黃玫瑰甘薯的莖尖脫毒育苗方法。

背景技術(shù)：

甘薯是一種營養(yǎng)豐富、適應(yīng)性廣、抗逆性強、用途廣泛的作物，富含多種維生素，俗稱“土人參”。現(xiàn)已培育出多個甘薯品種，其中，中國農(nóng)業(yè)大學(xué)甘薯研究室育成的甘薯新品種“黃玫瑰”，胡蘿卜素含量很高，是一種營養(yǎng)型的甘薯品種。但是由于甘薯屬于塊根作物，生長過程中利用營養(yǎng)體進行繁殖，因此容易受到病毒的侵染，病毒易在體內(nèi)積累，從而逐年加重，造成減產(chǎn)，這種情況不利于黃玫瑰甘薯的品種推廣。防治甘薯病毒病，提高甘薯產(chǎn)量和品質(zhì)的一條最有效途徑是利用莖尖分生組織培養(yǎng)繁育甘薯脫毒苗，同樣的這種方法也可用于黃玫瑰甘薯培育脫毒薯苗。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明旨在解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，而提供黃玫瑰甘薯的莖尖脫毒育苗方法。

本發(fā)明為實現(xiàn)上述目的，采用以下技術(shù)方案：黃玫瑰甘薯的莖尖脫毒育苗方法，其特征在于，其步驟如下：

(1)選取表皮光滑、薯形正常、大小均勻、無病蟲害和無損傷的薯塊，在太陽下暴曬2～3天，然后用清水洗凈，放置在25～30℃的溫室內(nèi)進行催芽；

(2)當(dāng)薯塊上萌發(fā)的芽苗長到10cm時，剪取頂部生長旺盛的3cm的芽段，剪去肉眼可見的已展開的葉片，放入燒杯中，倒入0.1％的洗衣粉水進行洗滌，然后流水沖洗20min，再用紗布吸干水分，然后在超凈工作臺內(nèi)用70％的乙醇浸泡10s，再用0.1％的升汞溶液浸泡5min進行表面消毒，最后用無菌水漂洗5～6次；

(3)在超凈工作臺上剪取1cm長的幼莖先端，在40倍解剖鏡下切除較大的葉原基，找到位于頂端的呈透明扁平凸起狀的莖尖生長點，用消毒后的解剖針切下生長點，長度為0.2～0.3mm，切下后用解剖針將莖尖挑到裝有添加生長調(diào)節(jié)劑的MS培養(yǎng)基的三角瓶中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)基內(nèi)另加入營養(yǎng)物質(zhì)，每瓶接種一個外植體，每接種一個莖尖后都要將解剖針放在酒精燈上燒10s進行消毒，培養(yǎng)溫度25℃，濕度50％，光照強度2000Lx，光照時間16h/d；

(4)當(dāng)莖尖長到6～7片葉片時進行病毒檢測，檢測方法為使用電鏡檢測，直接在電鏡下觀察，去除檢測出的帶毒苗和品種特性及形狀變差的莖尖苗，剩下的即脫毒苗；在無菌條件下，將莖尖苗剪切成段，每段帶一節(jié)和一片葉，形態(tài)學(xué)的下端扦插于加入生長調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基中，使莖段下端長出根，側(cè)芽向上萌發(fā)形成完整植株；

(5)脫毒苗在培養(yǎng)基上長成完整植株后進行煉苗，方法為：將裝有小苗的培養(yǎng)瓶移到15～20℃的培養(yǎng)室中放置5d，然后打開培養(yǎng)瓶用鑷子取出小苗，洗去根部殘余的培養(yǎng)基，再用0.1％的甲醛溶液浸泡10min，然后以5cm×5cm的行距栽入帶防蟲網(wǎng)棚的土壤上，土壤在移栽前7d進行消毒，小苗栽好后立即用噴壺噴水，再用1/800～1/1000百菌清或多菌靈噴淋，然后搭拱棚并蓋上遮陽網(wǎng)，每天澆水1次。

特別的，所述步驟(3)和所述步驟(4)中的生長調(diào)節(jié)劑及添加量均為：萘乙酸0.2mg/L和6-芐氨基嘌呤2.0mg/L。

特別的，所述步驟(3)中的另加的營養(yǎng)物質(zhì)及添加量為：蔗糖30g/L和6-瓊脂6g/L。

本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明中黃玫瑰甘薯的莖尖脫毒苗的培育過程簡單，可操作性強，培育步驟合理，可以獲得成活率較高的無毒黃玫瑰甘薯苗，提高了無毒苗的產(chǎn)量與質(zhì)量，并且在培育過程中，合理選用了MS培養(yǎng)基，并加入了生長調(diào)節(jié)劑和營養(yǎng)物質(zhì)，有助于植株幼苗的生長，提高幼苗成活率，植株培育完成后進行了煉苗，提高了植株幼苗的環(huán)境適應(yīng)性。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步說明：

實施例1

黃玫瑰甘薯的莖尖脫毒育苗方法，其特征在于，其步驟如下：

(1)選取表皮光滑、薯形正常、大小均勻、無病蟲害和無損傷的薯塊，在太陽下暴曬2天，然后用清水洗凈，放置在25℃的溫室內(nèi)進行催芽；

(2)當(dāng)薯塊上萌發(fā)的芽苗長到10cm時，剪取頂部生長旺盛的3cm的芽段，剪去肉眼可見的已展開的葉片，放入燒杯中，倒入0.1％的洗衣粉水進行洗滌，然后流水沖洗20min，再用紗布吸干水分，然后在超凈工作臺內(nèi)用70％的乙醇浸泡10s，再用0.1％的升汞溶液浸泡5min進行表面消毒，最后用無菌水漂洗5次；

(3)在超凈工作臺上剪取1cm長的幼莖先端，在40倍解剖鏡下切除較大的葉原基，找到位于頂端的呈透明扁平凸起狀的莖尖生長點，用消毒后的解剖針切下生長點，長度為0.2mm，切下后用解剖針將莖尖挑到裝有添加生長調(diào)節(jié)劑的MS培養(yǎng)基的三角瓶中進行培養(yǎng)，生長調(diào)節(jié)劑及添加量為：萘乙酸0.2mg/L和6-芐氨基嘌呤2.0mg/L，培養(yǎng)基內(nèi)另加入蔗糖30g/L和6-瓊脂6g/L，每瓶接種一個外植體，每接種一個莖尖后都要將解剖針放在酒精燈上燒10s進行消毒，培養(yǎng)溫度25℃，濕度50％，光照強度2000Lx，光照時間16h/d；

(4)當(dāng)莖尖長到6片葉片時進行病毒檢測，檢測方法為使用電鏡檢測，直接在電鏡下觀察，去除檢測出的帶毒苗和品種特性及形狀變差的莖尖苗，剩下的即脫毒苗；在無菌條件下，將莖尖苗剪切成段，每段帶一節(jié)和一片葉，形態(tài)學(xué)的下端扦插于加入生長調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基中，使莖段下端長出根，側(cè)芽向上萌發(fā)形成完整植株；

(5)脫毒苗在培養(yǎng)基上長成完整植株后進行煉苗，方法為：將裝有小苗的培養(yǎng)瓶移到15℃的培養(yǎng)室中放置5d，然后打開培養(yǎng)瓶用鑷子取出小苗，洗去根部殘余的培養(yǎng)基，再用0.1％的甲醛溶液浸泡10min，然后以5cm×5cm的行距栽入帶防蟲網(wǎng)棚的土壤上，土壤在移栽前7d進行消毒，小苗栽好后立即用噴壺噴水，再用1/800百菌清噴淋，然后搭拱棚并蓋上遮陽網(wǎng)，每天澆水1次。

實施例2

黃玫瑰甘薯的莖尖脫毒育苗方法，其特征在于，其步驟如下：

(1)選取表皮光滑、薯形正常、大小均勻、無病蟲害和無損傷的薯塊，在太陽下暴曬3天，然后用清水洗凈，放置在30℃的溫室內(nèi)進行催芽；

(2)當(dāng)薯塊上萌發(fā)的芽苗長到10cm時，剪取頂部生長旺盛的3cm的芽段，剪去肉眼可見的已展開的葉片，放入燒杯中，倒入0.1％的洗衣粉水進行洗滌，然后流水沖洗20min，再用紗布吸干水分，然后在超凈工作臺內(nèi)用70％的乙醇浸泡10s，再用0.1％的升汞溶液浸泡5min進行表面消毒，最后用無菌水漂洗6次；

(3)在超凈工作臺上剪取1cm長的幼莖先端，在40倍解剖鏡下切除較大的葉原基，找到位于頂端的呈透明扁平凸起狀的莖尖生長點，用消毒后的解剖針切下生長點，長度為0.3mm，切下后用解剖針將莖尖挑到裝有添加生長調(diào)節(jié)劑的MS培養(yǎng)基的三角瓶中進行培養(yǎng)，生長調(diào)節(jié)劑及添加量為：萘乙酸0.2mg/L和6-芐氨基嘌呤2.0mg/L，培養(yǎng)基內(nèi)另加入蔗糖30g/L和6-瓊脂6g/L，每瓶接種一個外植體，每接種一個莖尖后都要將解剖針放在酒精燈上燒10s進行消毒，培養(yǎng)溫度25℃，濕度50％，光照強度2000Lx，光照時間16h/d；

(4)當(dāng)莖尖長到7片葉片時進行病毒檢測，檢測方法為使用電鏡檢測，直接在電鏡下觀察，去除檢測出的帶毒苗和品種特性及形狀變差的莖尖苗，剩下的即脫毒苗；在無菌條件下，將莖尖苗剪切成段，每段帶一節(jié)和一片葉，形態(tài)學(xué)的下端扦插于加入生長調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基中，使莖段下端長出根，側(cè)芽向上萌發(fā)形成完整植株；

(5)脫毒苗在培養(yǎng)基上長成完整植株后進行煉苗，方法為：將裝有小苗的培養(yǎng)瓶移到20℃的培養(yǎng)室中放置5d，然后打開培養(yǎng)瓶用鑷子取出小苗，洗去根部殘余的培養(yǎng)基，再用0.1％的甲醛溶液浸泡10min，然后以5cm×5cm的行距栽入帶防蟲網(wǎng)棚的土壤上，土壤在移栽前7d進行消毒，小苗栽好后立即用噴壺噴水，再用1/1000多菌靈噴淋，然后搭拱棚并蓋上遮陽網(wǎng)，每天澆水1次。

上面對本發(fā)明進行了示例性描述，顯然本發(fā)明具體實現(xiàn)并不受上述方式的限制，只要采用了本發(fā)明的方法構(gòu)思和技術(shù)方案進行的各種改進，或未經(jīng)改進直接應(yīng)用于其它場合的，均在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。