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一種食用百合的花藥培養(yǎng)脫毒方法與流程

文檔序號:11172043閱讀:1723來源:國知局
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域,尤其涉及一種通過花藥培養(yǎng)途徑高效脫除百合病毒的食用百合的花藥培養(yǎng)脫毒方法。

背景技術(shù):
百合是單子葉植物亞綱百合科百合科(Liliaceae)百合屬(Lilium)的所有種類的總稱,根據(jù)用途可分為藥用百合、食用百合和觀賞用百合(觀賞百合)。據(jù)《中華人民共和國藥典》(2005年版一部)規(guī)定,百合科植物卷丹(Liliumlancifolium.Thunb.)、百合(LiliumbrowniiF.E.Browniivar.viridulumBaker.)、細(xì)葉百合(LiliumpumilumDC.)的干燥肉質(zhì)鱗葉為藥用百合。而我國食用百合的主要品種有甘肅蘭州百合、湖南邵陽百合、江蘇宜興百合,以蘭州百合品質(zhì)最好,在生產(chǎn)栽培、花卉市場常見的觀賞用百合則有3大品種群,分別是庸香百合雜種系、亞洲百合雜種系和東方百合雜種系。食用百合是野生百合經(jīng)過多年的良種馴化、品種篩選、以及人工栽培后,可供食用的、安全無毒的食品。我國自古就有食用百合的習(xí)慣。宋代林洪在《山家清供》中提到百合食用方法“春秋仲月采百合根暴干,搗篩和面作湯餅,最益氣血,又蒸熟可以佐酒”。明代《花疏》中記有“百合宜興最多,人取其根饋客”。明代中葉編纂的《平?jīng)隹h志》中記載“蔬則百合山藥最佳”?!侗静菥V目》中有“百合新者,可蒸可煮,和肉更佳;干者做粉食,最宜人”。明代高濂在《飲饌服食》中收有百合面,即“用百合搗為粉,和面搜為餅,為面食亦可”。迄今,食用百合已成為我國經(jīng)濟(jì)價值較高的藥食兩用植物,具有較好地藥用價值和保健功能。百合鱗片含有豐富的淀粉、蛋白質(zhì)、脂肪、糖類、果膠質(zhì)、維生素、胡蘿卜素等,還含有鈣、磷、鋅、鐵、硒等13種微量元素和18種氨基酸,具有潤肺止咳、清心安神、養(yǎng)陰止血、補(bǔ)脾健胃、清熱解毒等功效。據(jù)資料統(tǒng)計,百合包括栽培種和野生種全世界有100多種,產(chǎn)于我國的有39種,其中有10個品種可供食用;而目前栽培面積較大的品種主要有宜興百合、龍牙百合、蘭州百合、川百合四種。百合以有性方式(種子繁殖)和無性方式進(jìn)行繁殖,商業(yè)上主要以扦插繁殖和分球繁殖等無性繁殖為主,長期的無性繁殖將會使體內(nèi)逐漸積累大量病毒致使植物發(fā)生病毒病,并導(dǎo)致種性退化,食用百合也不例外。病毒病經(jīng)常對百合生產(chǎn)造成嚴(yán)重危害,其中發(fā)生普遍、危害嚴(yán)重的病毒有4種,即百合無病癥病毒(LSV)、黃瓜花葉病毒(CMV)、百合X病毒(LVX)和郁金香頂裂病毒等4種病毒危害。近年來,隨著百合引種數(shù)量的增加、種植面積的擴(kuò)大以及不規(guī)范的種球自繁,病毒病已開始在我國各百合種植區(qū)發(fā)生流行,一般發(fā)病率為40%-50%,二代種球的帶毒率在90%以上。病毒病對食用百合的危害表現(xiàn)主要有:植株嚴(yán)重矮化,脈明,花葉,畸形,壞死斑,鱗莖變小,產(chǎn)量下降,種質(zhì)明顯退化,開花少且小,有的甚至盲花,嚴(yán)重時整株枯死,嚴(yán)重制約了我國食用百合的產(chǎn)量和質(zhì)量。如何減少和消除病毒病,生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)無毒種苗,是食用百合種球商品化生產(chǎn)面臨的一個重要問題。目前,百合病毒病已成為僅次于真菌病害的主要病害,由于病毒復(fù)制與植物代謝密切相關(guān),而且有些病毒的抗逆性很強(qiáng),一直沒有有效的防治措施,因此,獲得無病毒苗成為優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)食用百合的關(guān)鍵。目前,生產(chǎn)上主要是通過熱處理、組培莖尖脫毒和化學(xué)處理等方法進(jìn)行脫毒。然而,目前的食用百合脫毒方法并不完善,各種脫毒方法均有其不足之處。熱處理是利用病毒和植物對溫度敏感性的差異不同,利用高溫對植物進(jìn)行處理,高溫使病毒鈍化,在植物體內(nèi)很難繁殖,部分植物細(xì)胞耐高溫加速細(xì)胞分裂和繁殖,從而獲得無病毒的新生植物組織部分,再進(jìn)一步繁殖得到無病毒苗,然而熱處理不能脫除所有病毒,且影響百合存活率;莖尖培養(yǎng)脫毒是利用病毒在植物體內(nèi)分布不均勻,在根尖和莖尖病毒含量很少或不含病毒,因此,采用莖尖離體培養(yǎng)的方法可以脫除病毒,其缺點是植物的存活率很低;化學(xué)處理法是將抗病毒藥劑注射進(jìn)植物體內(nèi)或者加入培養(yǎng)基中,以達(dá)到除去病毒的目的,一般要與莖尖組織培養(yǎng)相結(jié)合應(yīng)用,可一定程度的提高莖尖脫毒效率和存活率。花藥離體培養(yǎng)是把花粉發(fā)育到一定階段的花藥接種到培養(yǎng)基上,來改變花藥內(nèi)花粉粒的發(fā)育程序,使其分裂形成細(xì)胞團(tuán),進(jìn)而分化成胚狀體,形成愈傷組織,由愈傷組織再分化成植株的一種技術(shù),花藥培養(yǎng)主要用途為培育單倍體植株,然而,由于小孢子基本不攜帶病毒,通過花藥培養(yǎng)培育的植株幾乎能達(dá)到完全脫毒的目的,因此,若將離體的食用百合花藥培育成單倍體植株,進(jìn)而選擇食用百合的單倍體植株加倍的正常植株來育苗,可以較好的達(dá)到食用百合脫毒的目的。然而,現(xiàn)有的食用百合花藥培養(yǎng)效率較低,遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到生產(chǎn)的要求,主要在于百合花藥誘導(dǎo)效率過低。培養(yǎng)基是花藥培養(yǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ),直接關(guān)系到培養(yǎng)物的生長與分化,培養(yǎng)基組分是影響花培效率的一個很重要的因素。培養(yǎng)基各組分的合適用量,以及它們之間一定的組合關(guān)系,可導(dǎo)致花培效率的大幅度提高。篩選和優(yōu)化培養(yǎng)基組分,提高培養(yǎng)基的誘導(dǎo)率,是提高花藥培養(yǎng)力的有效措施。通過大量食用百合花藥培養(yǎng)的摸索和實踐,我們進(jìn)一步優(yōu)化了基本培養(yǎng)基配方,并且不斷嘗試加入一些提高花藥誘導(dǎo)力的添加物并組合其種類搭配及濃度,摸索出了一種高效率地誘導(dǎo)食用百合花藥誘導(dǎo)培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方,達(dá)到了通過食用百合花藥培養(yǎng)進(jìn)行脫毒的產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用效率。我們的研究結(jié)果對于食用百合的脫毒技術(shù)的進(jìn)步具有較大的意義。

技術(shù)實現(xiàn)要素:
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷,提供了一種通過花藥培養(yǎng)途徑高效脫除百合病毒的食用百合的花藥培養(yǎng)脫毒方法。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案解決的:一種食用百合的花藥培養(yǎng)脫毒方法,其特征在于:該花藥培養(yǎng)脫毒方法的詳細(xì)步驟如下:(1)配制食用百合花藥誘導(dǎo)培養(yǎng)基食用百合花藥誘導(dǎo)培養(yǎng)基按每升蒸餾水中由以下物質(zhì)配制而成:大量元素:KNO32500~2700mg/L,NH4NO31600~1800mg/L,KH2PO4440~480mg/L,MgSO4?7H2O350~390mg/L,CaCl2?2H2O820~860mg/L;微量元素:MnSO4?4H2O20~25mg/L,ZnSO4?7H2O8.0~9.0mg/L,H3BO36.0~6.5mg/L,KI0.8~0.85mg/L,Cu...
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