一種小麥叢矮病抗性的規(guī)模化定量強(qiáng)化接種鑒定方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種小麥叢矮病抗性的規(guī)?；繌?qiáng)化接種鑒定方法，該方法步驟如下：（a）、獲取大田灰飛虱并分離純化出大量整齊一致的5齡灰飛虱若蟲；（b）、繁育并分離篩選出大量整齊一致2齡灰飛虱若蟲；（c）、對(duì)獲取的2齡灰飛虱若蟲飼毒；（d）、計(jì)量灰飛虱若蟲；（e）、將待測(cè)小麥品種與帶毒2齡灰飛虱若蟲定量共育傳毒；（f）、大田顯癥統(tǒng)計(jì)：將待測(cè)小麥移栽至大田隔蟲網(wǎng)室，抽穗期調(diào)查統(tǒng)計(jì)叢矮病穴發(fā)病率，即可準(zhǔn)確鑒定出待測(cè)小麥品種的抗病能力。本發(fā)明的規(guī)?；瘡?qiáng)化接種鑒定方法克服了排趨性的干擾和灰飛虱規(guī)模量獲取的難題，實(shí)現(xiàn)了定量而強(qiáng)化的小麥叢矮病接種鑒定，能夠準(zhǔn)確地評(píng)價(jià)小麥品種對(duì)小麥叢矮病的抗性水平。
【專利說(shuō)明】一種小麥叢矮病抗性的規(guī)模化定量強(qiáng)化接種鑒定方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種小麥叢矮病抗性的規(guī)?；繌?qiáng)化接種鑒定方法，屬于植物病害 抗性鑒定技術(shù)。

【背景技術(shù)】
[0002] 小麥?zhǔn)切←湆僦参锏慕y(tǒng)稱，是一種在世界各地廣泛種植的禾本科植物，最早起源 于中東的新月沃土地區(qū)。小麥?zhǔn)侨蠊任镏?，絕大部分作為食用，僅約有六分之一作為飼 料使用。小麥作為世界上總產(chǎn)量第二的糧食作物也是中國(guó)第二大糧食作物，在國(guó)人食品中 扮演著重要角色。據(jù)統(tǒng)計(jì)，在當(dāng)前中國(guó)的口糧消費(fèi)總量中，小麥占43%左右。近年來(lái)，世界 人口增長(zhǎng)以及人們生活水平不斷提高，糧食需求持續(xù)增長(zhǎng)，與此同時(shí)，耕地逐漸減少、水資 源不足、小麥病害頻發(fā)、生態(tài)環(huán)境惡化、自然災(zāi)害頻發(fā)，以及飼料用糧和生物燃料耗糧增加 等給世界糧食供給帶來(lái)了嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)，小麥生產(chǎn)在糧食安全的地位日益重要。
[0003] 小麥叢矮病是靠傳毒媒介灰飛風(fēng)傳播的病毒病，是西北和華北冬麥區(qū)的一種常發(fā) 性病害，小麥叢矮病的典型癥狀表現(xiàn)為葉片有黃綠相間條紋，分蘗增多，植株矮化，形成明 顯的叢矮狀。冬前感病株大部分不能越冬而死亡，冬前未顯癥和早春拔節(jié)后感病植株上部 葉片顯條紋，一般不能抽穗而提早枯死，有的能抽穗，但穗小籽粒秕瘦，對(duì)產(chǎn)量影響較大。小 麥叢矮病在我國(guó)分布較廣，陜西、甘肅、寧夏、內(nèi)蒙古、山東、山西、河北、河南、江蘇、浙江、新 疆、北京、天津等省（區(qū)、市)均有發(fā)生，為害程度因年份和地區(qū)而異。輕病田減產(chǎn)10%?20%， 重病田減產(chǎn)50%以上，甚至絕收。
[0004] 小麥叢矮病毒主要由灰飛虱傳毒。在中國(guó)多數(shù)北方地區(qū)，灰飛虱一年發(fā)生3?4 代，2?3齡若蟲在雜草根際或土縫中越冬。翌年3月中旬開(kāi)始活動(dòng)，集中危害新返青的雜 草嫩葉。4月上旬，冬麥返青或春麥出苗后由田埂轉(zhuǎn)至麥田，靠田埂的蟲口密度高，后漸向田 中擴(kuò)散。4月下旬是越冬代成蟲羽化盛期。6月下旬第一代成蟲出現(xiàn)。小麥成熟后，灰飛虱 轉(zhuǎn)至秋作物及田邊雜草，再繁殖1?2代，于11月份遷移到田埂等雜草叢下土中越冬?；?飛虱1?2齡若蟲易獲毒，成蟲傳毒能力最強(qiáng)，最短獲毒時(shí)間12h，最短傳毒時(shí)間20min，獲 毒率及傳毒率隨吸食時(shí)間延長(zhǎng)而提高?；绎w虱一旦獲毒可終生帶毒，但不經(jīng)卵傳播。病毒 在若蟲體內(nèi)越冬。在冬麥區(qū)，灰飛虱秋季從帶病毒的越夏寄主上大量遷飛至麥田，造成早播 秋苗發(fā)病。越冬帶毒若蟲是毒源，翌年遷回麥田危害。近幾年，隨著小麥田灰飛虱發(fā)生數(shù)量 逐年上升，小麥叢矮病的發(fā)生和危害程度也越來(lái)越嚴(yán)重，已成為制約我國(guó)小麥生產(chǎn)的嚴(yán)重 病害，給我國(guó)的糧食安全帶來(lái)了極大的挑戰(zhàn)。
[0005]目前，對(duì)小麥叢矮病的防治主要是使用農(nóng)藥防治傳毒介體灰飛虱，但由于介體昆 蟲種群數(shù)量大導(dǎo)致防治效果不佳，且存在環(huán)境污染。培育抗病品種是防治各類病害最為經(jīng) 濟(jì)、有效的手段。篩選、發(fā)掘和創(chuàng)新抗病種質(zhì)是開(kāi)展抗病育種的前提和基礎(chǔ)，而抗性基因定 位和克隆，則為利用標(biāo)記輔助選擇等分子育種手段、加快和高效培育抗病品種提供了全新 而有利的工具。但迄今小麥叢矮病抗性QTL檢測(cè)和遺傳效應(yīng)分析還處于起步階段，在生產(chǎn) 上也沒(méi)有發(fā)現(xiàn)對(duì)小麥叢矮病免疫的品種，所以對(duì)小麥叢矮病抗性種質(zhì)進(jìn)行大規(guī)模篩選和展 開(kāi)小麥叢矮病抗性遺傳特性研究顯得尤為迫切。
[0006] 篩選抗病資源應(yīng)用于抗病育種生產(chǎn)是最為直接有效的方法，目前小麥育種上篩選 抗病品種、抗病基因定位鑒定抗性家系均采用田間自然發(fā)病鑒定，即將各鑒定品種或品系 以小區(qū)形式種植于大田，每個(gè)小區(qū)幾十株左右，大田常規(guī)栽培管理，傳毒介體灰飛虱自然傳 毒，待小麥顯現(xiàn)病癥后調(diào)查各鑒定品種(豕系）小區(qū)的株發(fā)病率，以此為標(biāo)準(zhǔn)鑒別小麥品種 (家系)抗感能力的差異。然而，由于植物對(duì)天敵的抗性分為耐害性、抗生性和排趨性三種類 另IJ，各種抗性類別具有不同的抗性機(jī)理。不同小麥品種(家系）對(duì)灰飛虱排趨性的差異使得 不同小麥品種(家系）的某些形態(tài)和生理等特性，表現(xiàn)出對(duì)灰飛虱的取食偏向的差異。而小 麥叢矮病的傳毒介體正為灰飛虱，因此，通過(guò)自然鑒定方法鑒定得到的抗病小麥，實(shí)際上可 能是抗蟲(排趨性強(qiáng)）小麥而并非抗病小麥。然而，假若以該抗蟲不抗病小麥育成品種進(jìn)行 病害區(qū)規(guī)模種植后，規(guī)模種植導(dǎo)致傳毒介體被迫選擇而使得小麥對(duì)灰飛虱排趨而產(chǎn)生的假 抗病表現(xiàn)消失，將可能給小麥生產(chǎn)帶來(lái)較大的損失。
[0007] 為排除排趨性對(duì)抗病鑒定的影響，對(duì)小麥進(jìn)行人工定量接種帶毒介體成為一種必 然。然而，進(jìn)行小麥品種資源的抗性鑒定需要大量的傳毒介體灰飛虱，灰飛虱人工飼養(yǎng)規(guī)模 量小，飼養(yǎng)成本很高，難以滿足品種抗性鑒定的規(guī)模量的需求，限制了人工定量接種鑒定的 推廣應(yīng)用。
[0008] 灰飛虱重災(zāi)區(qū)大田生態(tài)系統(tǒng)內(nèi)每年的灰飛虱數(shù)量均非常巨大，人工獲取也比較容 易，而實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)灰飛虱用于品種資源抗性鑒定難以滿足規(guī)模量的要求，若能夠設(shè)計(jì)一種 方法利用大田生態(tài)系統(tǒng)規(guī)模量的灰飛虱進(jìn)行小麥定量強(qiáng)化接種鑒定從而實(shí)現(xiàn)對(duì)小麥品種 資源的準(zhǔn)確評(píng)價(jià)將是一種可行的選擇。
[0009] 在大田，昆蟲與寄生作物在很長(zhǎng)的歷史時(shí)期就生活在一起，雙方相互作用、彼此影 響，相互調(diào)節(jié)制約，小麥叢矮病等昆蟲傳毒介體病的大發(fā)生，正體現(xiàn)了作物和昆蟲之間長(zhǎng)期 互作關(guān)系，而昆蟲與作物間的相互影響又受自然環(huán)境、生態(tài)環(huán)境的多變性制約，為實(shí)現(xiàn)對(duì)小 麥品種資源的準(zhǔn)確評(píng)價(jià)，需要實(shí)驗(yàn)室提供作物昆蟲互作研究的穩(wěn)定而適宜的生態(tài)環(huán)境。模 擬大田生態(tài)系統(tǒng)內(nèi)灰飛虱與小麥的互作關(guān)系、利用大田生態(tài)系統(tǒng)解決規(guī)?；绎w虱的獲取難 題、定量并強(qiáng)化小麥叢矮病接種鑒定從而實(shí)現(xiàn)對(duì)小麥品種資源的準(zhǔn)確評(píng)價(jià)正是本發(fā)明的根 本思路。
[0010] 利用本方法評(píng)價(jià)小麥品種對(duì)小麥叢矮病的抗性水平，既可以去除排趨性對(duì)鑒定結(jié) 果的干擾，又可以克服品種抗性鑒定所需灰飛虱規(guī)模量獲取的難題，并且實(shí)現(xiàn)了定量而強(qiáng) 化的小麥叢矮病抗性接種鑒定。這一鑒定方法除了可以應(yīng)用于小麥品種資源的發(fā)掘鑒定、 品種抗性評(píng)價(jià)、抗病品種選育外，亦可以應(yīng)用于抗病基因定位的表型鑒定和抗性遺傳規(guī)律 研究等眾多領(lǐng)域。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0011] 本發(fā)明的目的是針對(duì)小麥叢矮病田間自然鑒定中存在的排趨性干擾難題和室內(nèi) 人工接種鑒定的灰飛虱規(guī)模量獲取難題，提供一種小麥叢矮病抗性的規(guī)?；繌?qiáng)化接種 鑒定方法，該鑒定方法既可以去除排趨性對(duì)鑒定結(jié)果的干擾，又解決了品種抗性鑒定所需 灰飛虱規(guī)模量獲取的難題，并且實(shí)現(xiàn)了定量而強(qiáng)化的小麥叢矮縮病接種鑒定，最終實(shí)現(xiàn)了 對(duì)小麥叢矮病抗性的準(zhǔn)確評(píng)價(jià)。
[0012] 本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案解決的： 一種小麥叢矮病抗性的規(guī)?；繌?qiáng)化接種鑒定方法，其特征在于：所述的規(guī)模化定 量強(qiáng)化接種鑒定方法步驟如下： (a) 、采用搪瓷盤法從田間采集灰飛虱后通過(guò)純化篩選裝置獲取大量5齡灰飛虱若蟲； (b) 、將篩選獲得的5齡灰飛虱若蟲接種到作物昆蟲共育箱內(nèi)培育的水稻上共育并繁 育下一代灰飛虱若蟲，并進(jìn)一步利用調(diào)整的純化篩選裝置分離獲取大量整齊一致的2齡灰 飛虱若蟲； (c) 、將篩選獲得的2齡灰飛風(fēng)若蟲移入栽有小麥叢矮病重災(zāi)區(qū)取材的小麥叢矮病病 株上進(jìn)行飼毒； (d) 、通過(guò)精密電子天平稱重獲得單頭2齡灰飛虱若蟲的重量，根據(jù)確定的蟲/苗比例 計(jì)算所需灰飛虱總重，進(jìn)而稱重定量； (e) 、根據(jù)確定的蟲/苗比例將飼毒后的定量2齡灰飛虱若蟲接種到作物昆蟲共育箱內(nèi) 栽培的待測(cè)小麥幼苗上共育傳毒； (f) 、待灰飛虱半數(shù)死亡時(shí)將待測(cè)小麥移栽至大田隔蟲網(wǎng)室，常規(guī)栽培管理，抽穗期調(diào) 查統(tǒng)計(jì)叢矮病穴發(fā)病率，并根據(jù)叢矮病穴發(fā)病率準(zhǔn)確鑒定出待測(cè)小麥品種的抗病能力。
[0013] 所述步驟（a)中的灰飛虱收集時(shí)間為每年五月下旬?六月上旬期小麥田由青轉(zhuǎn)黃 期。
[0014] 所述步驟（a)中的純化篩選裝置使用時(shí)，采用孔徑為22目和26目的分樣篩組合 以有效分離出5齡灰飛虱若蟲和部分灰飛虱成蟲；然后將篩選分離出的灰飛虱倒入內(nèi)壁光 滑的深桶內(nèi)，拍擊桶外壁使得灰飛虱成蟲飛離而若蟲滯留，即可獲得大量整齊一致的5齡 灰飛風(fēng)若蟲。
[0015] 所述步驟（b)中的5齡灰飛虱若蟲接種到作物昆蟲共育箱內(nèi)培育的水稻上時(shí)，與5 齡灰飛虱若蟲共育的水稻為2?3葉期。
[0016] 所述步驟（b)中的作物昆蟲共育箱的培養(yǎng)溫度控制在25°C、光14h/暗10h。
[0017] 所述步驟（b)中的作物昆蟲共育箱內(nèi)繁育下一代灰飛虱若蟲后，此時(shí)篩選裝置翻 轉(zhuǎn)90°將垂直的趨光方向改變?yōu)樗椒较?，采用孔徑?2目和35目的分樣篩組合以有效 分離獲得大量整齊一致的2齡灰飛虱若蟲。
[0018] 所述步驟（c)中的小麥叢矮病病株為上一年自小麥叢矮病重災(zāi)區(qū)取材后于_20°C 的冰箱冷藏的，待病株自然解凍后將根用浸水脫脂棉包裹并用塑料布包扎結(jié)實(shí)模擬大田移 栽方式垂直固定于作物昆蟲共育箱內(nèi)，然后移入2齡灰飛風(fēng)若蟲飼毒不低于48h。
[0019] 所述步驟（d)中的2齡灰飛虱若蟲飼毒后采用趨光分離毛刷刷離灰飛虱若蟲時(shí)夾 雜的雜質(zhì)和死蟲，然后轉(zhuǎn)移20?50頭灰飛虱若蟲進(jìn)稱量瓶，通過(guò)精密電子天平稱重，去皮 計(jì)算瓶?jī)?nèi)灰飛虱若蟲的總重后根據(jù)瓶?jī)?nèi)灰飛虱若蟲的數(shù)量，計(jì)算得到單頭灰飛虱若蟲的重 量，根據(jù)待測(cè)小麥株數(shù)和接種強(qiáng)度確定飼毒灰飛虱若蟲數(shù)目，進(jìn)而計(jì)算接種所需飼毒灰飛 虱若蟲的總重并稱重定量。
[0020] 所述步驟（e)中的待測(cè)小麥?zhǔn)墙?jīng)過(guò)人工春化預(yù)處理后播種的，待其生長(zhǎng)處于1?2 葉期，且待測(cè)小麥按照20cm2/株的比例留取長(zhǎng)勢(shì)健康均勻的幼苗。
[0021] 所述步驟（e)中的待測(cè)小麥按照5?15蟲/苗的比例接種飼毒后的2齡灰飛虱 若蟲，作物昆蟲共育箱的培養(yǎng)溫度控制在20°C、光12h/暗12h共育傳毒至接種的灰飛風(fēng)自 然衰老死亡。
[0022] 本發(fā)明相比現(xiàn)有技術(shù)有如下優(yōu)點(diǎn)： 本發(fā)明通過(guò)純化篩選裝置獲得大量整齊一致的大田來(lái)源的5齡灰飛虱若蟲，進(jìn)而通過(guò) 作物昆蟲共育箱共育出大量的2齡灰飛虱若蟲，并再次通過(guò)純化篩選裝置獲得大量整齊一 致的2齡灰飛虱若蟲，然后通過(guò)2齡灰飛虱若蟲共育飼毒、待測(cè)小麥定量共育接種傳毒的方 式使得待測(cè)小麥發(fā)病，最后通過(guò)調(diào)查叢矮病穴發(fā)病率即可準(zhǔn)確鑒定出待測(cè)小麥品種的抗病 能力。
[0023] 本發(fā)明的規(guī)?；瘡?qiáng)化接種鑒定方法既可以去除排趨性對(duì)鑒定結(jié)果的干擾，又可以 克服品種抗性鑒定所需灰飛虱規(guī)模量獲取的難題，并且實(shí)現(xiàn)了定量而強(qiáng)化的小麥叢矮病接 種鑒定，能夠準(zhǔn)確地評(píng)價(jià)小麥品種對(duì)小麥叢矮病的抗性水平；該鑒定方法除了可以應(yīng)用于 小麥品種資源的發(fā)掘鑒定、品種抗性評(píng)價(jià)、抗病品種選育外，亦可以應(yīng)用于抗病基因定位的 表型鑒定和抗性遺傳規(guī)律研究等眾多領(lǐng)域，故適宜推廣使用。

【具體實(shí)施方式】
[0024] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。
[0025] -種小麥叢矮病抗性的規(guī)?；繌?qiáng)化接種鑒定方法，該規(guī)?；繌?qiáng)化接種鑒 定方法步驟如下：（a)、大田灰飛虱的獲取和分離純化：在每年五月下旬?六月上旬期小麥 田由青轉(zhuǎn)黃期，搪瓷盤法調(diào)查灰飛虱5齡蟲占多數(shù)時(shí)，采用搪瓷盤法從田間采集灰飛虱(其 中含有大量雜質(zhì)和雜蟲)，然后利用純化篩選裝置進(jìn)行分離篩選，為主要獲取5齡灰飛虱若 蟲，純化篩選裝置的分樣篩采用孔徑為22目和26目的分樣篩組合，因?yàn)楹Y取調(diào)查發(fā)現(xiàn)， 22?26目的分樣篩組合可有效的屏蔽掉灰飛虱死蟲、雜質(zhì)和無(wú)(弱)趨光性昆蟲、大體型趨 光性昆蟲、小體型趨光性昆蟲和灰飛風(fēng)幼齡若蟲的干擾，有效分離出5齡若蟲和部分灰飛 虱成蟲，將分離出的灰飛虱置入內(nèi)壁光滑的深桶內(nèi)，拍擊桶外壁使得灰飛虱成蟲飛離而若 蟲滯留，最終獲得大量整齊一致的5齡灰飛風(fēng)若蟲；（b)、2齡灰飛風(fēng)若蟲的培育和分離篩 選：將篩選獲得的5齡灰飛虱若蟲接種到作物昆蟲共育箱內(nèi)培育的2?3葉期水稻上共育 并繁育下一代灰飛風(fēng)若蟲，作物昆蟲共育箱的培養(yǎng)溫度控制在25°C、光14h/暗10h，共育兩 周左右可觀察到大量灰飛虱若蟲出現(xiàn)，待多數(shù)若蟲生長(zhǎng)到2齡期，用柔軟的毛刷將聚集在 水稻葉和莖桿上的大量灰飛虱若蟲分離進(jìn)塑料盒內(nèi)；為篩選整齊一致的2齡灰飛虱若蟲， 篩選裝置參照成蟲篩選裝置進(jìn)行調(diào)整，同樣利用若蟲的趨光性進(jìn)行分選，分樣篩組合選擇 32?35目，且由于若蟲運(yùn)動(dòng)能力較弱，此時(shí)篩選裝置翻轉(zhuǎn)90°設(shè)置將垂直的趨光方向改變 為水平方向，將若蟲置于黑暗一端，若蟲趨光水平爬動(dòng)，采用32?35目的分樣篩組合能夠 分離獲得大量整齊一致的2齡灰飛虱若蟲；（c)、灰飛虱若蟲飼毒：將上一年在-20°C的冰 箱中冷藏的小麥叢矮病重災(zāi)區(qū)取材的小麥病株自然解凍，將病株根用浸水脫脂棉包裹并用 塑料布包扎結(jié)實(shí)模擬大田移栽方式垂直固定于作物昆蟲共育箱(僅通風(fēng)光照，不播種、不通 水）內(nèi)，然后移入2齡灰飛虱若蟲飼毒不低于48h，使得2齡灰飛虱若蟲帶毒；（d)計(jì)量灰飛 虱若蟲：用柔軟的毛刷將飼毒后的2齡灰飛虱若蟲分離進(jìn)塑料盒，不設(shè)分樣篩，采用純化篩 選裝置趨光分離毛刷刷離2齡灰飛虱若蟲時(shí)夾雜的雜質(zhì)和死蟲，轉(zhuǎn)移20?50頭2齡灰飛 虱若蟲進(jìn)稱量瓶，精密電子天平稱重，去皮計(jì)算瓶?jī)?nèi)2齡灰飛虱若蟲的總重，瓶?jī)?nèi)2齡灰飛 虱若蟲肉眼計(jì)數(shù)，計(jì)算得到單頭2齡灰飛虱若蟲的重量，根據(jù)待測(cè)小麥株數(shù)和接種強(qiáng)度確 定飼毒灰飛虱若蟲數(shù)目，進(jìn)而計(jì)算接種所需飼毒灰飛虱若蟲的總重并稱重定量；（e)、待測(cè) 小麥與帶毒2齡灰飛虱若蟲定量共育傳毒：當(dāng)步驟（b)中的作物昆蟲共育箱內(nèi)灰飛虱若蟲 大量出現(xiàn)(多一齡幼蟲）時(shí)，將經(jīng)過(guò)人工春化預(yù)處理的待測(cè)小麥播種在作物昆蟲共育箱內(nèi)培 養(yǎng)，每箱播種一個(gè)待測(cè)小麥品種(家系)，完成步驟（c)后待測(cè)小麥幼苗的生長(zhǎng)會(huì)處于1?2 葉期，按照20cm 2/株的比例淘汰弱苗和不均勻的苗以留取長(zhǎng)勢(shì)健康均勻的稻苗，按照5? 15蟲/苗的比例將飼毒后的定量2齡灰飛虱若蟲接種到作物昆蟲共育箱內(nèi)栽培的待測(cè)小麥 品種幼苗上共育傳毒，作物昆蟲共育箱的培養(yǎng)溫度控制在20°C、光12h/暗12h共育傳毒至 接種的灰飛虱自然衰老死亡；（f)、待測(cè)水稻大田顯癥統(tǒng)計(jì)：待灰飛虱半數(shù)死亡后將待測(cè)小 麥移栽至大田隔蟲網(wǎng)室，常規(guī)栽培管理，小麥抽穗期調(diào)查統(tǒng)計(jì)叢矮病穴發(fā)病率，叢矮病癥狀 主要表現(xiàn)為病株生長(zhǎng)細(xì)弱，葉部仍有黃綠相間條紋，病株矮化，一般不能拔節(jié)和抽穗，有的 即使能抽穗，其籽粒也很秕瘦，統(tǒng)計(jì)計(jì)數(shù)穴發(fā)病率，并根據(jù)叢矮病穴發(fā)病率準(zhǔn)確鑒定出待測(cè) 小麥品種的抗病能力。
[0026] 實(shí)施例一 2013年6月，采用重災(zāi)區(qū)取材的冷凍小麥病株作為毒源，采用本方法進(jìn)行接種鑒定，同 期采用1?2齡無(wú)毒灰飛虱若蟲做對(duì)照，其他處理相同。飼毒時(shí)間定為48h，接種強(qiáng)度均為 10頭/株，顯癥后調(diào)查叢矮病穴發(fā)病率。

【權(quán)利要求】
1. 一種小麥叢矮病抗性的規(guī)?；繌?qiáng)化接種鑒定方法，其特征在于：所述的定量強(qiáng) 化接種鑒定方法步驟如下：（a)、采用搪瓷盤法從田間采集灰飛虱后通過(guò)純化篩選裝置獲 取大量5齡灰飛虱若蟲；（b)、將篩選獲得的5齡灰飛虱若蟲接種到作物昆蟲共育箱內(nèi)培育 的水稻上共育并繁育下一代灰飛虱若蟲，并進(jìn)一步利用調(diào)整的純化篩選裝置分離獲取大量 整齊一致的2齡灰飛虱若蟲；（c)、將篩選獲得的2齡灰飛虱若蟲移入栽有小麥叢矮病重災(zāi) 區(qū)取材的小麥叢矮病病株上進(jìn)行飼毒；（d)、通過(guò)精密電子天平稱重獲得單頭2齡灰飛虱若 蟲的重量，根據(jù)確定的蟲/苗比例計(jì)算所需灰飛虱總重，進(jìn)而稱重定量；（e)、根據(jù)確定的蟲 /苗比例將飼毒后的定量2齡灰飛虱若蟲接種到作物昆蟲共育箱內(nèi)栽培的待測(cè)小麥幼苗上 共育傳毒；（f)、待灰飛虱半數(shù)死亡時(shí)將待測(cè)小麥移栽至大田隔蟲網(wǎng)室，常規(guī)栽培管理，抽 穗期調(diào)查統(tǒng)計(jì)叢矮病穴發(fā)病率，并根據(jù)叢矮病穴發(fā)病率準(zhǔn)確鑒定出待測(cè)小麥品種的抗病能 力。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的小麥叢矮病抗性的規(guī)模化定量強(qiáng)化接種鑒定方法，其特征在 于：所述步驟（a)中的灰飛虱收集時(shí)間為每年五月下旬?六月上旬期小麥田由青轉(zhuǎn)黃期。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的小麥叢矮病抗性的規(guī)?；繌?qiáng)化接種鑒定方法，其特征在 于：所述步驟（a)中的純化篩選裝置使用時(shí)，采用孔徑為22目和26目的分樣篩組合以有效 分離出5齡灰飛虱若蟲和部分灰飛虱成蟲；然后將篩選分離出的灰飛虱倒入內(nèi)壁光滑的深 桶內(nèi)，拍擊桶外壁使得灰飛虱成蟲飛離而若蟲滯留，即可獲得大量整齊一致的5齡灰飛虱 若蟲。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的小麥叢矮病抗性的規(guī)?；繌?qiáng)化接種鑒定方法，其特征在 于：所述步驟（b)中的5齡灰飛虱若蟲接種到作物昆蟲共育箱內(nèi)培育的水稻上時(shí)，與5齡灰 飛虱若蟲共育的水稻為2?3葉期。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的小麥叢矮病抗性的規(guī)?；繌?qiáng)化接種鑒定方法，其特 征在于：所述步驟（b)中的作物昆蟲共育箱的培養(yǎng)溫度控制在25°C、光14h/暗10h。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的小麥叢矮病抗性的規(guī)?；繌?qiáng)化接種鑒定方法，其特征 在于：所述步驟（b)中的作物昆蟲共育箱內(nèi)繁育下一代灰飛虱若蟲后，此時(shí)篩選裝置翻轉(zhuǎn) 90°將垂直的趨光方向改變?yōu)樗椒较?，采用孔徑?2目和35目的分樣篩組合以有效分 離獲得大量整齊一致的2齡灰飛虱若蟲。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的小麥叢矮病抗性的規(guī)?；繌?qiáng)化接種鑒定方法，其特征在 于：所述步驟（c)中的小麥叢矮病病株為上一年自小麥叢矮病重災(zāi)區(qū)取材后于-20°C的冰 箱冷藏的，待病株自然解凍后將根用浸水脫脂棉包裹并用塑料布包扎結(jié)實(shí)模擬大田移栽方 式垂直固定于作物昆蟲共育箱內(nèi)，然后移入2齡灰飛風(fēng)若蟲飼毒不低于48h。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的小麥叢矮病抗性的規(guī)?；繌?qiáng)化接種鑒定方法，其特征在 于：所述步驟（d)中的2齡灰飛虱若蟲飼毒后采用趨光分離毛刷刷離灰飛虱若蟲時(shí)夾雜的 雜質(zhì)和死蟲，然后轉(zhuǎn)移20?50頭灰飛虱若蟲進(jìn)稱量瓶，通過(guò)精密電子天平稱重，去皮計(jì)算 瓶?jī)?nèi)灰飛虱若蟲的總重后根據(jù)瓶?jī)?nèi)灰飛虱若蟲的數(shù)量，計(jì)算得到單頭灰飛虱若蟲的重量， 根據(jù)待測(cè)小麥株數(shù)和接種強(qiáng)度確定飼毒灰飛虱若蟲數(shù)目，進(jìn)而計(jì)算接種所需飼毒灰飛虱若 蟲的總重并稱重定量。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1或8所述的小麥叢矮病抗性的規(guī)?；繌?qiáng)化接種鑒定方法，其特 征在于：所述步驟（e)中的待測(cè)小麥?zhǔn)墙?jīng)過(guò)人工春化預(yù)處理后播種的，待其生長(zhǎng)處于1?2 葉期，且待測(cè)小麥按照20cm2/株的比例留取長(zhǎng)勢(shì)健康均勻的幼苗。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的小麥叢矮病抗性的規(guī)?；繌?qiáng)化接種鑒定方法，其特征 在于：所述步驟（e)中的待測(cè)小麥按照5?15蟲/苗的比例接種飼毒后的2齡灰飛虱若蟲， 作物昆蟲共育箱內(nèi)20°C、光12h/暗12h共育傳毒至接種的灰飛虱自然衰老死亡。
【文檔編號(hào)】A01K67/033GK104429665SQ201510000441
【公開(kāi)日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2015年1月4日 優(yōu)先權(quán)日:2015年1月4日
【發(fā)明者】不公告發(fā)明人 申請(qǐng)人:王開(kāi)