過瘤胃賴氨酸飼料的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了含L-賴氨酸的飼料添加劑，其包括包被芯顆粒和包裹在包被芯顆粒上的包被層，其中包被層是過瘤胃脂肪，包被芯顆粒的制備方法包括將賴氨酸鹽和填充劑以及任選的谷氨酸鈉混合均勻，加入任選含有木聚糖酶的粘合劑溶液，過篩，拋丸，干燥并篩分。另外，本發(fā)明還提供了該飼料添加劑的制備方法，包括將過瘤胃脂肪噴在包被芯顆粒上。
【專利說明】過瘤胃賴氨酸飼料

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于氨基酸領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及含L-賴氨酸的飼料添加劑及其制 備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] L-賴氨酸是重要的氨基酸原料，可以作為調(diào)味品、食品、飼料添加劑使用，也可以 作為保健品、藥品中的有效或輔料成分，廣泛應(yīng)用于食品業(yè)、飼料業(yè)、制藥業(yè)及其他化學(xué)工 業(yè)中。當(dāng)前，L-賴氨酸的生產(chǎn)主要是通過微生物的發(fā)酵生產(chǎn)的，如可以利用棒狀桿菌生產(chǎn)。
[0003] 然而，當(dāng)賴氨酸作為飼料的時候，由于其屬于小分子營養(yǎng)物質(zhì)，很快就能釋放到動 物體內(nèi)，尤其在大量攝取時，影響了動物吸收利用的效率。通常解決的方法是少量多次地喂 食動物，但是這將增加動物飼養(yǎng)的工作量。因此，本發(fā)明提出了直接用賴氨酸發(fā)酵培養(yǎng)液制 備包被的賴氨酸制品的方法，可以有效減緩賴氨酸在動物體內(nèi)釋放的速度。
[0004] 本發(fā)明人在前的中國專利201210440083記載了一種包被的賴氨酸的制品，主要 用于飼料。在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明人進(jìn)行了深入的研究，令人意外地在多個方面，包括工藝方 面、成份(包括微量添加劑)方面和酶改造方面等，均獲得了能夠提高包被和/或提高利用率 的賴氨酸的制品。
[0005] 發(fā)明簡述 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于提供新的含L-賴氨酸的飼料添加劑及其制備方法。另 夕卜，本發(fā)明還可以提供從該飼料添加劑優(yōu)化中獲得的各分支發(fā)明，包括優(yōu)化的工藝在制備 含L-賴氨酸的飼料添加劑中的應(yīng)用，少量的谷氨酸鈉在制備含L-賴氨酸的飼料添加劑中 的應(yīng)用，和/或，突變的木聚糖酶在制備含L-賴氨酸的飼料添加劑中的應(yīng)用等。
[0006] 優(yōu)選地，在本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明提供了含L-賴氨酸的飼料添加劑，其包括 包被芯顆粒和包裹在包被芯顆粒上的包被層，其中包被層是過瘤胃脂肪，包被芯顆粒的制 備方法包括： (1) 將賴氨酸鹽和填充劑以及任選的谷氨酸鈉混合均勻，形成混合物； (2) 向步驟（1)獲得的混合物中加入任選含有木聚糖酶的粘合劑溶液，混合均勻，形成 軟材； (3) 將步驟（2)獲得的軟材過篩，形成粗顆粒； (4) 將步驟（3)獲得的粗顆粒拋丸，形成圓形微丸；和 (5) 干燥步驟（4)獲得的圓形微丸并進(jìn)行篩分，形成包被芯顆粒。
[0007] 優(yōu)選其中，步驟（1)中的填充劑是微晶纖維素和/或糊精。
[0008] 優(yōu)選其中，步驟（2)中的粘合劑是羧甲基纖維素。
[0009] 優(yōu)選其中，步驟（2)中的木聚糖酶氨基酸序列如SEQ ID NO :2所示。
[0010] 優(yōu)選其中，賴氨酸鹽、填充劑、谷氨酸鈉和粘合劑的重量比為40~55 :4~6 :0~2 : 0· 3~0· 8,優(yōu)選為 42~50 :4. 5~5· 5 :0~1· 5(如 0· 5~1· 5):0. 4~0· 5,更優(yōu)選為 43~48 :4· 8~5· 2 : 0~1· 2 (如 0· 8~1· 2) :0· 45~0· 55,最優(yōu)選為 45~46 :5 :0~1 :0· 5。
[0011] 優(yōu)選其中，包被芯顆粒和包被層的重量比為40~60 :40~60,優(yōu)選為46~56 :43~53， 更優(yōu)選為48. 5~51. 5 :48. 5~51. 5,最優(yōu)選為1 :1。
[0012] 優(yōu)選其中，每克飼料添加劑中木聚糖酶活性為0~30IU，優(yōu)選為0~15IU (如 5~15IU)，更優(yōu)選為 0~10IU (如 8~10IU)，最優(yōu)選為 0~9IU。
[0013] 優(yōu)選其中，步驟（2)中的篩是30目篩。
[0014] 優(yōu)選其中，步驟（5)中的篩分是分離獲得能通過30目篩并被40目篩截留的顆粒。
[0015] 在另一方面，本發(fā)明提供了前述方面的飼料添加劑的制備方法，其包括將過瘤胃 脂肪噴在包被芯顆粒上的步驟。
[0016] 發(fā)明詳述 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于提供新的含L-賴氨酸的飼料添加劑。另外，本發(fā)明還可 以提供該飼料添加劑的制備方法以及優(yōu)化的工藝在制備含L-賴氨酸的飼料添加劑中的應(yīng) 用、少量的谷氨酸鈉在制備含L-賴氨酸的飼料添加劑中的應(yīng)用，和/或，突變的木聚糖酶及 其在制備含L-賴氨酸的飼料添加劑中的應(yīng)用等分支發(fā)明。
[0017] 一，術(shù)語解釋 在本文中，術(shù)語具有所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員所常規(guī)理解的含義。為了清楚起見，本文對如 下術(shù)語進(jìn)行特別說明。
[0018] 在本文中，術(shù)語"任選"具有其詞典義，即相應(yīng)被限定的對象被選擇或者不選擇。例 如，含有任選的谷氨酸鈉指的是含有或者不含有谷氨酸鈉。又如，任選含有木聚糖酶指的是 含有或者不含有木聚糖酶。
[0019] 在本文中，術(shù)語"填充劑"和"粘合劑"分別指的是對非人動物食用安全的分別起 到填充和粘合作用的輔劑，優(yōu)選地，本文中的"填充劑"和"粘合劑"是食用級（即人食用安 全的)，可以參照相應(yīng)(人用）食品的指標(biāo)。
[0020] 在本文中，術(shù)語"包含"或"包括"是開放式的表述，即除了所列明包含或包括的成 份之外，可以不再含有其他成分或步驟，但也不排除還含有其他不影響具體列明的成份或 步驟發(fā)揮功用的其他成分或步驟。優(yōu)選地，本文中的"包含"或"包括"優(yōu)選為"由…組成"。
[0021] 在本文中，如未加特別注明，術(shù)語"賴氨酸"指的是L-賴氨酸。
[0022] 二，含L-賴氨酸的制品 在本發(fā)明的第二（1)方面，本發(fā)明提供了含L-賴氨酸的飼料添加劑，其包括包被芯顆 粒和包裹在包被芯顆粒上的包被層，其中包被層是過瘤胃脂肪，包被芯顆粒的制備方法包 括： (1) 將賴氨酸鹽和填充劑以及任選的谷氨酸鈉混合均勻，形成混合物； (2) 向步驟（1)獲得的混合物中加入任選含有木聚糖酶的粘合劑溶液，混合均勻，形成 軟材； (3) 將步驟（2)獲得的軟材過篩，形成粗顆粒； (4) 將步驟（3)獲得的粗顆粒拋丸，形成圓形微丸；和 (5) 干燥步驟（4)獲得的圓形微丸并進(jìn)行篩分，形成包被芯顆粒。
[0023] 優(yōu)選其中，步驟（1)中的填充劑是微晶纖維素和/或糊精。
[0024] 優(yōu)選其中，步驟（2)中的粘合劑是羧甲基纖維素。
[0025] 優(yōu)選其中，步驟（2)中的木聚糖酶氨基酸序列如SEQ ID NO :2所示。
[0026] 優(yōu)選其中，賴氨酸鹽、填充劑、谷氨酸鈉和粘合劑的重量比為40~55 :4~6 :0~2 : 0· 3~0· 8,優(yōu)選為 42~50 :4. 5~5· 5 :0~1· 5(如 0· 5~1· 5):0. 4~0· 5,更優(yōu)選為 43~48 :4· 8~5· 2 : 0~1· 2 (如 0· 8~1· 2) :0· 45~0· 55,最優(yōu)選為 45~46 :5 :0~1 :0· 5。
[0027] 優(yōu)選其中，包被芯顆粒和包被層的重量比為40~60 :40~60,優(yōu)選為46~56 :43~53， 更優(yōu)選為48. 5~51. 5 :48. 5~51. 5,最優(yōu)選為1 :1。
[0028] 優(yōu)選其中，每克飼料添加劑中木聚糖酶活性為0~30IU，優(yōu)選為0~15IU (如 5~15IU)，更優(yōu)選為 0~10IU (如 8~10IU)，最優(yōu)選為 0~9IU。
[0029] 優(yōu)選其中，步驟（2)中的篩是30目篩。
[0030] 優(yōu)選其中，步驟（5)中的篩分是分離獲得能通過30目篩并被40目篩截留的顆粒。
[0031] 在本發(fā)明的第二（2)方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的第二（1)方面的飼料添加劑的 制備方法，其包括將過瘤胃脂肪噴在包被芯顆粒上的步驟。
[0032] 優(yōu)選其包括： (1) 將賴氨酸鹽和填充劑以及任選的谷氨酸鈉混合均勻，形成混合物； (2) 向步驟（1)獲得的混合物中加入任選含有木聚糖酶的粘合劑溶液，混合均勻，形成 軟材； (3) 將步驟（2)獲得的軟材過篩，形成粗顆粒； (4) 將步驟（3)獲得的粗顆粒拋丸，形成圓形微丸； (5) 干燥步驟（4)獲得的圓形微丸并進(jìn)行篩分，形成包被芯顆粒；和 (6) 將過瘤胃脂肪噴在步驟（5)獲得的包被芯顆粒上。
[0033] 在本發(fā)明的第二（3)方面，本發(fā)明提供了含L-賴氨酸的制品，其包括包被芯顆粒 和包裹在包被芯顆粒上的包被層，其中包被層是過瘤胃脂肪，包被芯顆粒包括賴氨酸鹽、填 充劑和粘合劑以及任選的谷氨酸鈉和任選的木聚糖酶。
[0034] 優(yōu)選其中，制品是詞料添加劑。
[0035] 優(yōu)選其中,賴氨酸鹽是賴氨酸鹽酸鹽、賴氨酸硫酸鹽或者它們的混合物,優(yōu)選是賴 氨酸硫酸鹽。
[0036] 優(yōu)選其中，填充劑是微晶纖維素和/或糊精。
[0037] 優(yōu)選其中，粘合劑是羧甲基纖維素。
[0038] 優(yōu)選其中，木聚糖酶氨基酸序列如SEQ ID NO : 2所示。
[0039] 優(yōu)選其中，賴氨酸鹽、填充劑、谷氨酸鈉和粘合劑的重量比為40~55 :4~6 :0~2 : 0· 3~0· 8,優(yōu)選為 42~50 :4. 5~5· 5 :0~1· 5(如 0· 5~1· 5):0. 4~0· 5,更優(yōu)選為 43~48 :4· 8~5· 2 : 0~1· 2 (如 0· 8~1· 2) :0· 45~0· 55,最優(yōu)選為 45~46 :5 :0~1 :0· 5。
[0040] 優(yōu)選其中，包被芯顆粒和包被層的重量比為40~60 :40~60,優(yōu)選為46~56 :43~53， 更優(yōu)選為48. 5~51. 5 :48. 5~51. 5,最優(yōu)選為1 :1。
[0041] 優(yōu)選其中，每克制品中木聚糖酶活性為0~30IU，優(yōu)選為0~15IU (如5~15IU)，更優(yōu) 選為0~10IU (如8~10IU)，最優(yōu)選為0~9IU。
[0042] 優(yōu)選其中，包被芯顆粒是能通過30目篩并被40目篩截留的顆粒。
[0043] 優(yōu)選其中，脂肪優(yōu)選是棕櫚脂肪和/或卵磷脂，更優(yōu)選是能通過商業(yè)途徑獲取的 產(chǎn)品，如百佳能、百事美等，優(yōu)選是百佳能HTL316、百事美T300等。在本發(fā)明的具體實施方 式中，包被所用的脂肪是百事美T300。
[0044] 如無相反或者矛盾的指示，以上各方面可以優(yōu)選本方面或者本文中的其他各方面 的內(nèi)容。
[0045] 三，制備含L-賴氨酸的制品的工藝 在本發(fā)明的第三（1)方面，本發(fā)明提供了含L-賴氨酸的制品的制備方法，其包括： (1) 將賴氨酸鹽和填充劑以及任選的谷氨酸鈉混合均勻，形成混合物； (2) 向步驟（1)獲得的混合物中加入任選含有木聚糖酶的粘合劑溶液，混合均勻，形成 軟材； (3 )將步驟（2 )獲得的軟材過篩(如，30目篩)，形成粗顆粒； (4) 將步驟（3)獲得的粗顆粒拋丸，形成圓形微丸； (5) 干燥步驟（4)獲得的圓形微丸并進(jìn)行篩分，形成包被芯顆粒粒；和， (6) 將過瘤胃脂肪噴在步驟（5)獲得的包被芯顆粒上。
[0046] 優(yōu)選該制備方法制備的含L-賴氨酸的制品是本發(fā)明的第二（3)方面所述的制品。
[0047] 優(yōu)選該制備方法由如下步驟組成： (1) 將賴氨酸鹽和填充劑以及任選的谷氨酸鈉混合均勻，形成混合物； (2) 向步驟（1)獲得的混合物中加入任選含有木聚糖酶的粘合劑溶液，混合均勻，形成 軟材； (3 )將步驟（2 )獲得的軟材過篩(如，30目篩)，形成粗顆粒； (4) 將步驟（3)獲得的粗顆粒拋丸，形成圓形微丸； (5) 干燥步驟（4)獲得的圓形微丸并進(jìn)行篩分，形成包被芯顆粒；和， (6) 將過瘤胃脂肪噴在步驟（5)獲得的包被芯顆粒上。
[0048] 本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，對粗顆粒拋丸以形成圓形微丸的步驟和/或干燥圓形微丸并進(jìn)行 篩分，能夠有效提高過瘤胃脂肪包被的含L-賴氨酸的制品的抗降解能力。所以在接下來的 方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的第三（1)方面中的步驟（4)和/或步驟（5)的應(yīng)用。優(yōu)選其中 拋丸在拋丸機(jī)中進(jìn)行；和/或，篩分用一個或多個特定孔徑的篩網(wǎng)進(jìn)行分離。
[0049] 在本發(fā)明的第三（2)方面，本發(fā)明提供了對粗顆粒拋丸以形成圓形微丸的步驟在 制備過瘤胃脂肪包被的含L-賴氨酸的制品的方法中的應(yīng)用。
[0050] 在本發(fā)明的第三（3)方面，本發(fā)明提供了干燥圓形微丸并進(jìn)行篩分在制備過瘤胃 脂肪包被的含L-賴氨酸的制品的方法中的應(yīng)用。
[0051] 在本發(fā)明的第三（4)方面，本發(fā)明提供了對粗顆粒拋丸以形成圓形微丸的步驟在 提高過瘤胃脂肪包被的含L-賴氨酸的制品的抗降解能力中的應(yīng)用。
[0052] 在本發(fā)明的第三（5)方面，本發(fā)明提供了干燥圓形微丸并進(jìn)行篩分的步驟在提高 過瘤胃脂肪包被的含L-賴氨酸的制品的抗降解能力中的應(yīng)用。
[0053] 優(yōu)選其中，對粗顆粒拋丸以形成圓形微丸的步驟處于(優(yōu)選緊接于）形成粗顆粒之 后。
[0054] 優(yōu)選其中，干燥圓形微丸并進(jìn)行篩分的步驟處于(優(yōu)選緊接于）將過瘤胃脂肪噴在 包被芯顆粒上之前。
[0055] 優(yōu)選其中，過瘤胃脂肪包被的含L-賴氨酸的制品是本發(fā)明的第二（3)方面所述的 制品。
[0056] 優(yōu)選其中，制備過瘤胃脂肪包被的含L-賴氨酸的制品的方法是本發(fā)明的第三（1) 方面所述的方法。
[0057] 優(yōu)選其中，篩分是分離獲得能通過30目篩并被40目篩截留的顆粒。
[0058] 如無相反或者矛盾的指示，以上各方面可以優(yōu)選本方面或者本文中的其他各方面 的內(nèi)容。
[0059] 四，谷氨酸鈉在含L-賴氨酸的制品中的應(yīng)用 本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，少量谷氨酸鈉對含L-賴氨酸的制品的抗降解能力是有益的，而且不影 響賴氨酸發(fā)揮飼料的作用。所以，本發(fā)明還提供了谷氨酸鈉在含L-賴氨酸的制品中的應(yīng)用 和相應(yīng)方法。
[0060] 在本發(fā)明的第四（1)方面，本發(fā)明提供了含L-賴氨酸的制品的制備方法，其包括： (1) 將賴氨酸鹽和填充劑以及谷氨酸鈉混合均勻，形成混合物； (2) 向步驟（1)獲得的混合物中加入任選含有木聚糖酶的粘合劑溶液，混合均勻，形成 軟材； (3 )將步驟（2 )獲得的軟材過篩(如，30目篩)，形成粗顆粒； (4) 將步驟（3)獲得的粗顆粒拋丸，形成圓形微丸； (5) 干燥步驟（4)獲得的圓形微丸并進(jìn)行篩分，形成包被芯顆粒；和， (6) 將過瘤胃脂肪噴在步驟（5)獲得的包被芯顆粒上。
[0061] 優(yōu)選其中，制品是詞料添加劑。
[0062] 優(yōu)選其中，步驟（1)中的填充劑是微晶纖維素和/或糊精。
[0063] 優(yōu)選其中，步驟（2)中的粘合劑是羧甲基纖維素。
[0064] 優(yōu)選其中，步驟（2)中的木聚糖酶氨基酸序列如SEQ ID NO :2所示。
[0065] 優(yōu)選其中，賴氨酸鹽、填充劑、谷氨酸鈉和粘合劑的重量比為42~50 :4. 5~5. 5 : 0· 5~1· 5 :0· 4~0· 5,更優(yōu)選為 43~48 :4· 8~5· 2 :0· 8~1· 2 :0· 45~0· 55,最優(yōu)選為 45~46 :5 :1 : 0· 5〇
[0066] 優(yōu)選其中，包被芯顆粒和包被層的重量比為40~60 :40~60,優(yōu)選為46~56 :43~53， 更優(yōu)選為48. 5~51. 5 :48. 5~51. 5,最優(yōu)選為1 :1。
[0067] 優(yōu)選其中，每克飼料添加劑中木聚糖酶活性為0~30IU，優(yōu)選為0~15IU (如 5~15IU)，更優(yōu)選為 0~10IU (如 8~10IU)，最優(yōu)選為 0~9IU。
[0068] 優(yōu)選其中，每克飼料添加劑中木聚糖酶活性為0~30IU，優(yōu)選為0~15IU (如 5~15IU)，更優(yōu)選為 0~10IU (如 8~10IU)，最優(yōu)選為 0~9IU。
[0069] 優(yōu)選其中，步驟（5)中的篩分是分離獲得能通過30目篩并被40目篩截留的顆粒。
[0070] 在本發(fā)明的第四（2)方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的第四（1)方面所述的方法制備 的制品。
[0071] 在本發(fā)明的第四（3)方面，本發(fā)明提供了谷氨酸鈉在制備過瘤胃脂肪包被的含 L-賴氨酸的制品的方法中或者在提高過瘤胃脂肪包被的含L-賴氨酸的制品的抗降解能力 中的應(yīng)用。即，本發(fā)明提供了谷氨酸鈉在制備過瘤胃脂肪包被的含L-賴氨酸的制品的方法 中的應(yīng)用，本發(fā)明還提供了谷氨酸鈉在提高過瘤胃脂肪包被的含L-賴氨酸的制品的抗降 解能力中的應(yīng)用。
[0072] 優(yōu)選其中，谷氨酸鈉是很少的，例如谷氨酸鈉的重量占過瘤胃脂肪包被的含L-賴 氨酸的制品的〇. 5~1. 5%，優(yōu)選是0. 8~1. 2%，最優(yōu)選是1%。
[0073] 優(yōu)選其中，過瘤胃脂肪包被的含L-賴氨酸的制品是本發(fā)明的第四（2)方面所述的 制品。
[0074] 優(yōu)選其中，制備過瘤胃脂肪包被的含L-賴氨酸的制品的方法是本發(fā)明的第四（1) 方面所述的方法。
[0075] 如無相反或者矛盾的指示，以上各方面可以優(yōu)選本方面或者本文中的其他各方面 的內(nèi)容。
[0076] 五，突變的木聚糖酶及其應(yīng)用 本發(fā)明人令人意外地發(fā)現(xiàn)了木聚糖酶突變體，其在基本保持原有耐高溫特性的基礎(chǔ)上 大幅增加了酶活性，特別有益于添加入含L-賴氨酸的飼料添加劑中。
[0077] 在本發(fā)明的第五（1)方面，本發(fā)明提供了突變的木聚糖酶，其包含突變Arg45Ser， 即第45位氨基酸殘基由Arg突變?yōu)镾er。
[0078] 優(yōu)選該突變的木聚糖酶的氨基酸序列 (1) 如 SEQ ID No:2 所示；或 (2) 是對SEQ ID No:2缺失、添加和/或取代一個或幾個(優(yōu)選不超過7個，更優(yōu)選不超 過5個，如不超過3個）氨基酸殘基而獲得的保留SEQ ID No: 2活性的序列，而且其中包含 突變 Arg45Ser。
[0079] 在本發(fā)明的第五（2)方面，本發(fā)明提供了編碼本發(fā)明的第五（1)方面所述的木聚 糖酶的基因。
[0080] 優(yōu)選該基因的核苷酸序列如SEQ ID No: 1所示。
[0081] 在本發(fā)明的第五（3)方面，本發(fā)明提供了包含本發(fā)明的第五（2)方面所述的基因 的載體。
[0082] 在本發(fā)明的第五（4)方面，本發(fā)明提供了菌種，其包含本發(fā)明的第五（2)方面所述 的基因，或用本發(fā)明的第五（3 )方面所述的載體轉(zhuǎn)化或者轉(zhuǎn)染而得。
[0083] 優(yōu)選該菌種是分泌表達(dá)菌,如,酵母。
[0084] 在本發(fā)明的第五（5)方面，本發(fā)明提供了發(fā)酵生產(chǎn)本發(fā)明的第五（1)方面所述的 木聚糖酶的方法，其包括在發(fā)酵條件下培養(yǎng)本發(fā)明的第五（4)方面所述的菌種，從培養(yǎng)物中 分離出本發(fā)明的第五（1)方面所述的木聚糖酶。
[0085] 在本發(fā)明的第五（6)方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的第五（1)方面所述的木聚糖酶 在制備含L-賴氨酸的制品中的用途。
[0086] 優(yōu)選其中，每克含L-賴氨酸的制品中本發(fā)明的第五（1)方面所述的木聚糖酶活性 為5~15IU，更優(yōu)選為8~10IU，最優(yōu)選為9IU。
[0087] 優(yōu)選其中，制品是飼料添加劑。
[0088] 優(yōu)選其中，含L-賴氨酸的制品包括包被芯顆粒和包裹在包被芯顆粒上的包被層， 其中包被層是過瘤胃脂肪，包被芯顆粒包括本發(fā)明的第五（1)方面所述的木聚糖酶、賴氨酸 鹽、填充劑和粘合劑以及任選的谷氨酸鈉。
[0089] 更優(yōu)選其中，賴氨酸鹽是賴氨酸鹽酸鹽、賴氨酸硫酸鹽或者它們的混合物，優(yōu)選是 賴氨酸硫酸鹽。
[0090] 更優(yōu)選其中，填充劑是微晶纖維素和/或糊精。
[0091] 更優(yōu)選其中，粘合劑是羧甲基纖維素。
[0092] 更優(yōu)選其中，木聚糖酶氨基酸序列如SEQ ID NO :2所示。
[0093] 優(yōu)選其中，賴氨酸鹽、填充劑、谷氨酸鈉和粘合劑的重量比為40~55 :4~6 :0~2 : 0· 3~0· 8,優(yōu)選為 42~50 :4. 5~5· 5 :0~1· 5(如 0· 5~1· 5):0. 4~0· 5,更優(yōu)選為 43~48 :4· 8~5· 2 : 0~1· 2 (如 0· 8~1· 2) :0· 45~0· 55,最優(yōu)選為 45~46 :5 :0~1 :0· 5。
[0094] 優(yōu)選其中，包被芯顆粒和包被層的重量比為40~60 :40~60,優(yōu)選為46~56 :43~53， 更優(yōu)選為48. 5~51. 5 :48. 5~51. 5,最優(yōu)選為1 :1。
[0095] 優(yōu)選其中，包被芯顆粒是能通過30目篩并被40目篩截留的顆粒。
[0096] 優(yōu)選其中，脂肪優(yōu)選是棕櫚脂肪和/或卵磷脂，更優(yōu)選是能通過商業(yè)途徑獲取的 產(chǎn)品，如百佳能、百事美等，優(yōu)選是百佳能HTL316、百事美T300等。在本發(fā)明的具體實施方 式中，包被所用的脂肪是百事美T300。
[0097] 優(yōu)選其中，制備的方法包括： (1) 將賴氨酸鹽和填充劑以及任選的谷氨酸鈉混合均勻，形成混合物； (2) 向步驟（1)獲得的混合物中加入含有木聚糖酶的粘合劑溶液，混合均勻，形成軟 材； (3 )將步驟（2 )獲得的軟材過篩(如，30目篩)，形成粗顆粒； (4) 將步驟（3)獲得的粗顆粒拋丸，形成圓形微丸； (5) 干燥步驟（4)獲得的圓形微丸并進(jìn)行篩分，形成包被芯顆粒；和， (6 )任選地，將過瘤胃脂肪噴在步驟（5 )獲得的包被芯顆粒上。
[0098] 如無相反或者矛盾的指示，以上各方面可以優(yōu)選本方面或者本文中的其他各方面 的內(nèi)容。
[0099] 本發(fā)明具有以下有益效果：通過多個方面的改進(jìn)，本發(fā)明的制品安全可靠，相對于 現(xiàn)有技術(shù)，可更有效降低動物體內(nèi)賴氨酸的釋放速度，抗降解能力更強(qiáng)，更加提高飼料的利 用率而促進(jìn)動物的生長發(fā)育。
[0100] 為了便于理解，以下將通過具體的實施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)地描述。需要特別指 出的是，這些描述僅僅是示例性的描述，并不構(gòu)成對本發(fā)明范圍的限制。依據(jù)本說明書的論 述，本發(fā)明的許多變化、改變對所屬領(lǐng)域技術(shù)人員來說都是顯而易見的。
[0101] 另外，本發(fā)明引用了公開文獻(xiàn)，這些文獻(xiàn)是為了更清楚地描述本發(fā)明，它們的全文 內(nèi)容均納入本文進(jìn)行參考，就好像它們的全文已經(jīng)在本文中重復(fù)而明確記載過一樣。
[0102]

【具體實施方式】
[0103] 以下通過實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的內(nèi)容。如未特別指明，實施例中所用的技術(shù) 手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段和市售的常用儀器、試劑，可參見《分子克隆實驗 指南(第3版)》（科學(xué)出版社)、《微生物學(xué)實驗(第4版)》（高等教育出版社）以及相應(yīng)儀器 和試劑的廠商說明書等參考。
[0104] 實施例1突變型的木聚糖酶基因的表達(dá)構(gòu)建體的制備 根據(jù)我們在前中國專利第201210185883號記載的木聚糖酶基因，將其上編碼第45位 的Arg突變成Ser，即將核苷酸序列第133-135位的CGC突變成TCC，突變型的木聚糖酶的 核苷酸序列如序列表的SEQ ID No: 1所示，所編碼的木聚糖酶的氨基酸序列如SEQ ID No: 2 所示。然后，根據(jù)《分子克隆實驗指南》以及所用商品化試劑的操作指南構(gòu)建分泌表達(dá)的酵 母，簡而言之，即將編碼該木聚糖酶的基因用正向引物如序列表的SEQ ID No: 3所示（弓丨 入了 EcoR I內(nèi)切酶位點)、反向引物如序列表的SEQ ID No:4所示（引入了 Not I內(nèi)切酶位 點）擴(kuò)增后用EcoR I和Not I雙酶切，并與經(jīng)這兩個內(nèi)切酶酶切的pPIC3. 5質(zhì)粒(可購自 Invitrogen公司）用T4 DNA連接酶進(jìn)行連接，轉(zhuǎn)化入大腸桿菌DH5a中。挑出陽性克隆， 抽提出其中的質(zhì)粒，經(jīng)測序驗證正確后，將陽性質(zhì)粒用Sal I酶切線性化后，通過電轉(zhuǎn)化法 轉(zhuǎn)化入畢氏酵母GSl 15株，在含G418的平板上挑出陽性酵母轉(zhuǎn)化株，寄回。
[0105] 實施例2突變型的木聚糖酶的發(fā)酵制備及活性測定 將實施例1獲得的陽性酵母轉(zhuǎn)化株接種到50ml BMGY液體培養(yǎng)基（IOOmM磷酸鉀緩沖 液（pH6. 0)，其中含1%酵母提取物、2%蛋白胨，酵母含氮堿基1. 34%，生物素4*10_5%，葡萄糖 2%，甘油1%)中，于30°C、200rpm培養(yǎng)至0D600達(dá)到5. 0。
[0106] 將上述培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接到IL BMGY液體培養(yǎng)基中，于30°C、200rpm培養(yǎng)24小時，加入 5ml甲醇，然后繼續(xù)于30°C、200rpm培養(yǎng)8天，期間每24小時補(bǔ)加5ml甲醇，通氣控制溶氧 (DO)大于20%，并控制pH為6.0 (用氨水調(diào)節(jié))。培養(yǎng)完成后，用0.22 μ m濾膜過濾并保留 上清液，該上清液經(jīng)SDS-PAGE檢測其中富含木聚糖酶對應(yīng)的蛋白質(zhì)，由此發(fā)酵得到木聚糖 酶上清液。
[0107] 取新鮮的上清液，分成三份，一份冷藏待用（A)，一份冷凍干燥至固體后用磷酸 鉀緩沖液（PH6.0)重新溶解（B)，一份于80°C烘箱中蒸發(fā)干燥至固體后用磷酸鉀緩沖液 (pH6. 0)重新溶解（C);對照采用中國專利第201210185883號發(fā)現(xiàn)的木聚糖酶基因，用磷酸 鉀緩沖液（PH6. 0)溶解后分成三份，一份冷藏待用（CA)，另兩份分別冷凍干燥（CB)和80°C 烘箱蒸發(fā)干燥（CC)，然后重溶于磷酸鉀緩沖液（pH6. 0)。分別測定這些木聚糖酶活性，換算 成原單位體積上清液或單位重量的酶活，計算由于高溫脫水造成的酶活損失率，結(jié)果如表1 所示，表明相對于原來我們發(fā)現(xiàn)的耐高溫脫水的木聚糖酶，本發(fā)明的突變型的木聚糖酶，雖 然耐高溫脫水能力略差于原來的，但是仍舊保留了 75%以上的活性，尤其令人意外的是，酶 活性有了顯著的提升，即便經(jīng)過高溫脫水，其酶活性的絕對值仍舊高于原來的木聚糖酶，甚 至高于原來的木聚糖酶在未經(jīng)過高溫脫水時的酶活。
[0108] 表1本發(fā)明和市售的木聚糖酶的高溫脫水酶活損失率

【權(quán)利要求】
1. 含L-賴氨酸的飼料添加劑，其包括包被芯顆粒和包裹在包被芯顆粒上的包被層，其 中包被層是過瘤胃脂肪，包被芯顆粒的制備方法包括： (1) 將賴氨酸鹽和填充劑以及任選的谷氨酸鈉混合均勻，形成混合物； (2) 向步驟（1)獲得的混合物中加入任選含有木聚糖酶的粘合劑溶液，混合均勻，形成 軟材； (3) 將步驟（2)獲得的軟材過篩，形成粗顆粒； (4) 將步驟（3)獲得的粗顆粒拋丸，形成圓形微丸；和 (5) 干燥步驟（4)獲得的圓形微丸并進(jìn)行篩分，形成包被芯顆粒。
2. 權(quán)利要求1所述的飼料添加劑，其中步驟（1)中的填充劑是微晶纖維素和/或糊精。
3. 權(quán)利要求1所述的飼料添加劑，其中步驟（2)中的粘合劑是羧甲基纖維素。
4. 權(quán)利要求1所述的飼料添加劑，其中步驟（2)中的木聚糖酶氨基酸序列如SEQ ID NO :2所示。
5. 權(quán)利要求1所述的飼料添加劑，其中賴氨酸鹽、填充劑、谷氨酸鈉和粘合劑的重量比 為 40~55 :4~6 :0~2 :0? 3~0. 8,優(yōu)選為 42~50 :4. 5~5. 5 :0~1. 5 (如 0? 5~1. 5) :0? 4~0. 5,更優(yōu) 選為 43~48 :4. 8~5. 2 :0~1. 2 (如 0? 8~1. 2) :0? 45~0. 55,最優(yōu)選為 45~46 :5 :0~1 :0? 5。
6. 權(quán)利要求1所述的飼料添加劑，其中包被芯顆粒和包被層的重量比為40~60 :40~60， 優(yōu)選為 46~56 :43~53,更優(yōu)選為 48. 5~51. 5 :48. 5~5L 5,最優(yōu)選為 1 :1。
7. 權(quán)利要求1所述的飼料添加劑，其中每克飼料添加劑中木聚糖酶活性為0~30IU，優(yōu) 選為0~15IU (如5~15IU)，更優(yōu)選為0~10IU (如8~10IU)，最優(yōu)選為0~9IU。
8. 權(quán)利要求1所述的飼料添加劑，其中步驟（2)中的篩是30目篩。
9. 權(quán)利要求1所述的飼料添加劑，其中步驟（5)中的篩分是分離獲得能通過30目篩并 被40目篩截留的顆粒。
10. 權(quán)利要求1~9之任一所述的飼料添加劑的制備方法，其包括將過瘤胃脂肪噴在包 被芯顆粒上的步驟。
【文檔編號】A23K1/165GK104431369SQ201410778038
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月17日
【發(fā)明者】孟剛, 馬吉銀, 陳崇安 申請人:寧夏伊品生物科技股份有限公司