一種安全高效的動物精液消毒劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明為了填補(bǔ)市面上動物精液消毒劑的空白，提供了一種安全高效的動物精液消毒劑及其制備方法。按重量計(jì)，包括以下組分：聚維酮碘4.0％-6.0％、抗菌肽0.5％-1.0％、維生素0.2％-0.3％、乙二胺四乙酸0.1％－0.2％和蒸餾水余量。采用聚維酮碘與抗菌肽的混合物作為精液消毒劑用于經(jīng)濟(jì)動物的精液凈化消毒殺菌。經(jīng)試驗(yàn)證明它能夠完全殺滅公豬精液中最常見的五種危害最大的病毒：豬瘟病毒（CSFV）、豬圓環(huán)病毒（PCV-2）、豬偽狂犬病毒（PRV）、豬繁殖與呼吸綜合癥病毒（PRRSV）、豬細(xì)小病毒（PPV），以及其他大多數(shù)病原微生物，同時(shí)對精子活力及保存時(shí)間有一定延長效果，對受精卵、胚胎無毒無害。
【專利說明】一種安全高效的動物精液消毒劑及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于動物防疫【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種安全高效的動物精液消毒劑及其制 備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 現(xiàn)代畜牧業(yè)的大力發(fā)展得益于人工授精技術(shù)的快速發(fā)展。人工授精技術(shù)的優(yōu)勢是 能夠通過人工采集優(yōu)質(zhì)精液，通過一定的技術(shù)手段使它能夠長時(shí)間保存運(yùn)輸，為畜牧業(yè)品 種改良和提高生產(chǎn)績效帶來巨大經(jīng)濟(jì)效益。但是人工授精技術(shù)也有它的天然缺陷，那就是 將供體精液里面可能帶有的病原微生物都傳染給它的受體。以豬為例，公豬精液中通常含 有10 4~105 CFU/ml細(xì)菌以及可能污染的未知病毒及其他病原微生物，這些細(xì)菌和病毒會影 響公豬精液的保存時(shí)間及精子的活率，并且能夠通過人工授精技術(shù)將公豬所可能攜帶病原 微生物傳染給母豬和小豬，導(dǎo)致母豬繁殖障礙、小豬疾病的流行和生產(chǎn)績效的大幅度下降， 造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。
[0003] -些學(xué)者的研究表明公豬精液中能檢出的危害養(yǎng)豬生產(chǎn)的主要病毒有：口蹄疫病 毒（FMDV)、豬瘟病毒（CSFV)、豬圓環(huán)病毒（PCV-2)、豬偽狂犬病毒（PRV)、豬繁殖與呼吸綜合 癥病毒（PRRSV)、豬細(xì)小病毒（PPV)、日本乙型腦炎病毒（JEV)。其中已證實(shí)CSFV、PRRSV、 PPV、PRV能通過人工受精感染母豬引起死胎、流產(chǎn)等繁殖障礙。種公豬精液帶毒是豬群病 毒病垂直傳播的一個(gè)重要途徑，也是制約人工受精技術(shù)發(fā)展和推廣的一大難題。
[0004] 針對公豬精液污染，精液消毒劑開發(fā)的難度很大，原因在于：一方面是安全性的考 慮，首先要不損傷精子活率，不對受精卵、胚胎以及母豬的繁殖造成影響，對精子的遺傳性 能無影響；另一方面是有效性的考慮，對精子里面的有害病原，特別是病毒有效，是這項(xiàng)技 術(shù)的關(guān)鍵。而安全性和有效性是一對矛盾，很難對立統(tǒng)一。因此，目前市而上還沒有商品化 的精液消毒劑。全世界的從業(yè)者都只有通過在精液稀釋液中加入抗生素(如青霉素、鏈霉 素、慶大霉素、林可霉素等）來抑菌，但是抗生素僅能抑殺精液中的部份細(xì)菌繁殖，而對病毒 無效，濫用抗生素帶來的是大量耐藥菌株的產(chǎn)生。
[0005] 201210055618. 9,名稱為"一種動物精液消毒液及其制備方法"的發(fā)明專利，公開 了一種動物精液的消毒液，是由聚乙烯吡咯烷酮、精碘、甘油、維生素 C、乙二胺四乙酸二鈉、 蒸餾水組成，按照配制聚乙烯吡咯烷酮-精碘混合物、配制維生素 C-甘油混合液、混料、檢 驗(yàn)等步驟制備得到。該消毒液單獨(dú)采用碘制劑作為精液消毒劑，很難完全殺滅精液里面污 染的病原微生物，特別是精液常見病毒，缺乏這方面必要的數(shù)據(jù)來證明其對精液消毒的有 效性，也缺乏必要的數(shù)據(jù)證明其對精子的安全性。
[0006] 201410342549. 9,名稱為"一種復(fù)方活力碘消毒劑及其制備方法"的發(fā)明專利 申請，公開了一種復(fù)方活力碘消毒劑，該消毒劑包括下列各組分（wt%) :聚維酮碘PVP-I， 2. 0-10. 0% ;維生素 A，0. 05-0. 5% ;碘酸鉀 KI03,0. 5-1. 0% ;碘化鉀 KI，0. 5-1. 0% ;螯合劑， 0. 2-2. 0% ;有機(jī)溶劑，1. 0-10. 0% ;pH調(diào)節(jié)劑，適量；水，余量。該消毒液只能作為體表消毒 齊U，不能用于動物精液消毒。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明為了填補(bǔ)市面上動物精液消毒劑的空白，提供了一種安全高效的動物精液 消毒劑及其制備方法。采用聚維酮碘與抗菌肽的混合物作為精液消毒劑用于經(jīng)濟(jì)動物(主 要是豬、牛、羊）的精液凈化消毒殺菌。經(jīng)試驗(yàn)證明它能夠完全殺滅公豬精液中最常見的五 種危害最大的病毒：豬瘟病毒（CSFV)、豬圓環(huán)病毒（PCV-2)、豬偽狂犬病毒（PRV)、豬繁殖與 呼吸綜合癥病毒（PRRSV)、豬細(xì)小病毒（PPV)，以及其他大多數(shù)病原微生物，同時(shí)對精子活 力及保存時(shí)間有一定延長效果，對受精卵、胚胎無毒無害。
[0008] 為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案： 一種安全高效的動物精液消毒劑，其特征在于：按重量計(jì)，包括以下組分： 聚維酮碘 4.0% - 6.0% 抗菌肽 0.5%- 1.0% 維生素 0.2%-0.3% 乙二胺四乙酸 0.1%-0.2% 蒸餾水 余量。
[0009] 聚維酮碘是目前畜禽養(yǎng)殖場常用的碘制劑之一，是將碘載于強(qiáng)堿性陰離子樹脂上 形成的一種接觸型消毒劑，可殺死大部分細(xì)菌、真菌和病毒。但是，在對精子安全的濃度范 圍內(nèi)，聚維酮碘對部份細(xì)菌和病毒有很好的效果，但不能完全殺滅精液里面常見五種病毒， 特別是豬偽狂犬病毒和豬瘟病毒效果不佳。
[0010] 抗菌肽是生物體內(nèi)經(jīng)誘導(dǎo)產(chǎn)生的一種具有生物活性的小分子多肽，分子量在 2000?7000左右，由20?60個(gè)氨基酸殘基組成，對細(xì)菌和病毒都有廣譜殺滅效果，且對精 子安全性非常好，特別是對精液常見病毒特別是豬瘟病毒、偽狂犬病毒、藍(lán)耳病病毒有很好 的殺滅作用，和聚維酮碘配合使用有強(qiáng)烈互補(bǔ)性。
[0011] 本發(fā)明的精液消毒劑對動物精子、受精卵、胚胎無毒，能有效殺滅動物精液中的病 毒、細(xì)菌、真菌、支原體、衣原體等致病微生物，且不污染環(huán)境。
[0012] 優(yōu)選地，本發(fā)明的動物精液消毒劑按重量計(jì)，包括以下組分： 聚維酮碘 4.0% - 6.0% 抗菌肽 0.5%- 1.0% 蜂膠 2% - 4% 維生素 0.2%-0.3% 乙二胺四乙酸 0.1%-0.2% 蒸餾水 余量。
[0013] 蜂膠的抗菌范圍十分廣泛，具有抗細(xì)菌、抗真菌、抗霉菌、抗寄生蟲和抗病毒等作 用，是不可多得的天然廣譜抗菌和抗病毒物質(zhì)。在本發(fā)明的配方含量下，蜂膠對精子安全， 而且對精子的活率和保存時(shí)間有促進(jìn)作用，特別是對精液的低溫保存有保護(hù)作用，對聚維 酮碘和抗菌肽的殺滅病毒組合配方有協(xié)同作用。
[0014] 進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的蜂膠為天然蜂膠，黃酮含量不低于8mg / ml，不含任何有機(jī) 溶劑，增強(qiáng)抗菌效果的同時(shí)，不會影響精子活力。
[0015] 進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明的動物精液消毒劑按重量計(jì)，包括以下組分： 聚維酮碘 4.0% - 6.0% 抗菌肽 0.5%- 1.0% 蜂膠 2% - 4% 維生素 0.2%-0.3% 乙二胺四乙酸 0.1%-0.2% 甘油 2%-3% 蒸餾水 余量。
[0016] 加入甘油的目的是：對公豬精子活率和保存時(shí)間有明顯的促進(jìn)作用。
[0017] 優(yōu)選地，所述的抗菌肽為蟑螂內(nèi)源性抗菌肽。
[0018] 本發(fā)明選用蟑螂內(nèi)源性抗菌肽，其氨基酸序列為SEQID NO: 1。這種抗菌肽具有良 好穩(wěn)定性以及廣譜高效抗菌、抗病毒等特點(diǎn)，且生產(chǎn)工藝成熟和完善，其生產(chǎn)工藝是以蟑螂 內(nèi)源性抗菌肽的氨基酸序列為模版，以固相多肽合成方法將氨基酸序列重組后用工程菌表 達(dá)發(fā)酵，得到重組廣譜抗菌肽純品。
[0019] 本發(fā)明所述的維生素是指水溶性維生素C、維生素A和維生素E中的一種或者兩種 以上的組合。能有效保護(hù)精子的功能，配合使用能更好促進(jìn)精子活力，提高精子保存時(shí)間， 有利于精子的保存運(yùn)輸。
[0020] 本發(fā)明的動物精液消毒劑配制方法如下： 第一步、配制9. 5 % - 10.0 %聚維酮碘水溶液A ; 第二步、配制抗菌肽與蜂膠混合物B :將蜂膠溶液加入適量蒸餾水，攪拌混合配成蜂膠 溶液，冷卻至常溫后，加入抗菌肽低速攪拌待完全溶解后待用。
[0021] 優(yōu)選地，32-37°C下攪拌15-20分鐘配成蜂膠溶液，促進(jìn)充分融合，保證生物活性。
[0022] 第三步、配制維生素混合液C :采用水溶性維生素加入蒸餾水中低速攪拌，待完全 溶解后待用。
[0023] 第四步：將乙二胺四乙酸加入蒸餾水?dāng)嚢?，待完全溶解后依次加入C液、B液，低 速攪拌10-20分鐘，混合均勻后加入A液，低速攪拌20-40分鐘，得到紅棕色混懸液，將混懸 液過濾、灌裝得成品。
[0024] 所述的第三步，水溶性維生素完全溶解后，加入甘油攪拌均勻待用。
[0025] 優(yōu)選地，所述的低速攪拌是指15-20轉(zhuǎn)/分，完全混合不起泡，混懸液穩(wěn)定。
[0026] 常規(guī)的消毒劑對公豬精子毒性很強(qiáng)，因此不能直接添加到公豬精液中。而廣泛應(yīng) 用于皮膚和粘膜消毒的高分子有機(jī)碘，具有較高的安全性，對細(xì)菌和病毒都有較強(qiáng)的殺滅 作用，但高分子有機(jī)碘由于組份復(fù)雜也對公豬精子有較強(qiáng)殺滅作用。本研究的精液消毒劑 在小于或等于1%的低濃度下對公豬精子是安全無害的，不但不會影響精子活率和保存時(shí) 間，還可適當(dāng)提高活率和延長保存時(shí)間。因此，可應(yīng)用于豬人工受精技術(shù)精液凈化消毒，同 時(shí)也可以運(yùn)用于的精液采集和輸精過程皮膚、生殖器等消毒。具體的有益效果體現(xiàn)在于： 1、本發(fā)明的精液消毒劑中，含聚維酮碘按有效碘計(jì)算，為標(biāo)示量的8. 5%?12. 0% ;采 用聚維酮碘與抗菌肽配合使用，用于經(jīng)濟(jì)動物的精液凈化消毒殺菌，具有強(qiáng)烈的互補(bǔ)性。 能夠完全殺滅公豬精液中最常見的五種危害最大的病毒：豬瘟病毒（CSFV)、豬圓環(huán)病毒 (PCV-2)、豬偽狂犬病毒（PRV)、豬繁殖與呼吸綜合癥病毒（PRRSV)、豬細(xì)小病毒（PPV)，以及 其他大多數(shù)病原微生物；同時(shí)本發(fā)明的精液消毒劑對精子活力及保存時(shí)間有一定延長效 果，對受精卵、胚胎無毒無害。
[0027] 2、本發(fā)明的配方中添加蜂膠，特別是不含任何有機(jī)溶劑的天然蜂膠，且對精子安 全，而且對精子的活率和保存時(shí)間有促進(jìn)作用，特別是對精液的低溫保存有保護(hù)作用；對聚 維酮碘和抗菌肽的殺滅病毒組合配方有協(xié)同作用，不會影響精子活力，同時(shí)具有增強(qiáng)配方 抗菌效果的作用。
[0028] 3、本發(fā)明選用蟑螂內(nèi)源性抗菌肽，這種抗菌肽具有良好穩(wěn)定性以及廣譜高效抗 菌、抗病毒等特點(diǎn)，且生產(chǎn)工藝成熟和完善，易于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
[0029] 4、本發(fā)明對精液消毒劑的制備方法嚴(yán)格控制，按制備方法中的順序添加配方中各 組分，不會產(chǎn)生沉淀，得到產(chǎn)品的穩(wěn)定性好，37°C恒溫箱放置三個(gè)月后碘含量下降率低于 4 %，六個(gè)月碘含量下降率低于8 %。
[0030] 5、由于安全性和有效性的考慮，精液消毒劑開發(fā)的難度很大，目前精液消毒劑還 沒有市售同類產(chǎn)品，只有普通用于動物體表、圈舍、環(huán)境等消毒劑，本發(fā)明的精液消毒劑已 經(jīng)得到全國超過100家大中型養(yǎng)豬企業(yè)的生產(chǎn)驗(yàn)證，在使用本發(fā)明產(chǎn)品后生產(chǎn)成績大幅改 善的有超過50%，普遍反映母豬繁殖障礙疾病大幅降低，疾病發(fā)生率顯著下降，小豬好養(yǎng)， 生產(chǎn)績效普遍提高，具有顯著經(jīng)濟(jì)效益和社會效益。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0031] 圖1為本發(fā)明的不同濃度精液消毒劑對精子活率的影響示意圖。

【具體實(shí)施方式】
[0032] 下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容作進(jìn)一步詳細(xì)的描述。
[0033] 實(shí)施例1 一種安全高效的動物精液消毒劑，按重量計(jì)，包括以下組分： 聚維酮碘 4.0% 抗菌肽 0.5% 維生素C 0.2% 乙二胺四乙酸 0.1% 蒸餾水 余量。
[0034] 實(shí)施例2 一種安全高效的動物精液消毒劑，按重量計(jì)，包括以下組分： 聚維酮碘 6.0% 抗菌肽 1.0% 維生素A 0. 3% 乙二胺四乙酸 0.2% 蒸餾水 余量。
[0035] 實(shí)施例3 一種安全高效的動物精液消毒劑，按重量計(jì)，包括以下組分： 聚維酮碘 5.0% 抗菌肽 0.6% 維生素 C和A 0. 22% 乙二胺四乙酸 0.12% 蒸餾水 余量。
[0036] 所述的蜂膠為天然蜂膠，黃酮含量不低于8mg / ml，不含任何有機(jī)溶劑。 [0037] 所述的抗菌肽為蟑螂內(nèi)源性抗菌肽。
[0038] 實(shí)施例4 一種安全高效的動物精液消毒劑，按重量計(jì)，包括以下組分： 聚維酮碘 4.0% 抗菌肽 0.5% 蜂膠 2% 維生素 C和E 0. 2% 乙二胺四乙酸 0.1% 蒸餾水 余量。
[0039] 實(shí)施例5 一種安全高效的動物精液消毒劑，按重量計(jì)，包括以下組分： 聚維酮碘 6.0% 抗菌肽 1.0% 蜂膠 4% 維生素C、A、E 0. 3% 乙二胺四乙酸 0.2% 蒸餾水 余量。
[0040] 所述的抗菌肽為蟑螂內(nèi)源性抗菌肽。
[0041] 實(shí)施例6 一種安全高效的動物精液消毒劑，按重量計(jì)，包括以下組分： 聚維酮碘 5. 5% 抗菌肽 0.8% 蜂膠 3% 維生素 C、A、E 0. 25% 乙二胺四乙酸 0.15% 蒸餾水 余量。
[0042] 所述的蜂膠為天然蜂膠，黃酮含量不低于8mg / ml，不含任何有機(jī)溶劑。
[0043] 實(shí)施例7 一種安全高效的動物精液消毒劑，按重量計(jì)，包括以下組分： 聚維酮碘 4.0% 抗菌肽 0.5% 蜂膠 2 % % 維生素C、A、E 0. 2% 乙二胺四乙酸 0.1% 甘油 2% 蒸餾水 余量。
[0044] 所述的蜂膠為天然蜂膠，黃酮含量不低于8mg / ml，不含任何有機(jī)溶劑。
[0045] 實(shí)施例8 一種安全高效的動物精液消毒劑，按重量計(jì)，包括以下組分： 聚維酮碘 6.0% 抗菌肽 1.0% 蜂膠 4% 維生素E 0.3% 乙二胺四乙酸 0.2% 甘油 3% 蒸餾水 余量。
[0046] 實(shí)施例9 一種安全高效的動物精液消毒劑，按重量計(jì)，包括以下組分： 聚維酮碘 5.2% 抗菌肽 0.7% 蜂膠 3.2% 維生素 C、A、E 0. 26% 乙二胺四乙酸 0.16% 甘油 2.5% 蒸餾水 余量。
[0047] 實(shí)施例10 一種安全高效的動物精液消毒劑，按重量計(jì)，包括以下組分： 聚維酮碘 4. 5% 抗菌肽 0.9% 蜂膠 2.5% 維生素 C、A、E 0. 28% 乙二胺四乙酸 0.18% 甘油 2.2% 蒸餾水 余量。
[0048] 所述的蜂膠為天然蜂膠，黃酮含量不低于8mg / ml，不含任何有機(jī)溶劑。
[0049] 所述的抗菌肽為蟑螂內(nèi)源性抗菌肽。
[0050] 實(shí)施例11 本發(fā)明動物精液消毒劑的配制方法如下： 第一步、配制9. 5%聚維酮碘水溶液A待用； 第二步、配制抗菌肽與蜂膠混合物B :將蜂膠溶液加入適量蒸餾水，攪拌混合配成蜂膠 溶液，冷卻至常溫后，加入抗菌肽低速攪拌待完全溶解后待用； 第三步、配制維生素混合液C :采用水溶性維生素加入蒸餾水中低速攪拌，待完全溶解 后待用； 第四步：將乙二胺四乙酸加入蒸餾水?dāng)嚢瑁耆芙夂笠来渭尤隒液、B液，低速攪 拌10分鐘，混合均勻后加入A液，低速攪拌20分鐘，得到紅棕色混懸液，將混懸液過濾、灌 裝得成品。
[0051] 實(shí)施例12 本發(fā)明動物精液消毒劑的配制方法如下： 第一步、配制10. 0%聚維酮碘水溶液A待用； 第二步、配制抗菌肽與蜂膠混合物B :將蜂膠溶液加入適量蒸餾水，37°C下攪拌15分鐘 配成蜂膠溶液，冷卻至常溫后，加入抗菌肽低速攪拌待完全溶解后待用； 第三步、配制維生素混合液C :采用水溶性維生素加入蒸餾水中低速攪拌，待完全溶解 后待用； 第四步：將乙二胺四乙酸加入蒸餾水?dāng)嚢?，待完全溶解后依次加入C液、B液，低速攪 拌20分鐘，混合均勻后加入A液，低速攪拌40分鐘，得到紅棕色混懸液，將混懸液過濾、灌 裝得成品。
[0052] 實(shí)施例13 本發(fā)明動物精液消毒劑的配制方法如下： 第一步、配制9. 6%聚維酮碘水溶液A待用； 第二步、配制抗菌肽與蜂膠混合物B :將蜂膠溶液加入適量蒸餾水，32°C下攪拌20分鐘 配成蜂膠溶液，冷卻至常溫后，加入抗菌肽低速攪拌待完全溶解后待用； 第三步、配制維生素混合液C :采用水溶性維生素加入蒸餾水中低速攪拌，待完全溶解 后加入甘油攪拌均勻待用； 第四步：將乙二胺四乙酸加入蒸餾水?dāng)嚢瑁耆芙夂笠来渭尤隒液、B液，低速攪 拌15分鐘，混合均勻后加入A液，低速攪拌30分鐘，得到紅棕色混懸液，將混懸液過濾、灌 裝得成品。
[0053] 所述的低速攪拌是指15轉(zhuǎn)/分。
[0054] 實(shí)施例14 本發(fā)明動物精液消毒劑的配制方法如下： 第一步、配制9. 7%聚維酮碘水溶液A待用； 第二步、配制抗菌肽與蜂膠混合物B :將蜂膠溶液加入適量蒸餾水，35°C下攪拌16分鐘 配成蜂膠溶液，冷卻至常溫后，加入抗菌肽低速攪拌待完全溶解后待用； 第三步、配制維生素混合液C :采用水溶性維生素加入蒸餾水中低速攪拌，待完全溶解 后加入甘油攪拌均勻待用； 第四步：將乙二胺四乙酸加入蒸餾水?dāng)嚢瑁耆芙夂笠来渭尤隒液、B液，低速攪 拌16分鐘，混合均勻后加入A液，低速攪拌25分鐘，得到紅棕色混懸液，將混懸液過濾、灌 裝得成品。
[0055] 所述的低速攪拌是指20轉(zhuǎn)/分。
[0056] 實(shí)施例15 本發(fā)明動物精液消毒劑的配制方法如下： 第一步、配制9. 8 %聚維酮碘水溶液A待用； 第二步、配制抗菌肽與蜂膠混合物B :將蜂膠溶液加入適量蒸餾水，36°C下攪拌18分鐘 配成蜂膠溶液，冷卻至常溫后，加入抗菌肽低速攪拌待完全溶解后待用； 第三步、配制維生素混合液C :采用水溶性維生素加入蒸餾水中低速攪拌，待完全溶解 后加入甘油攪拌均勻待用； 第四步：將乙二胺四乙酸加入蒸餾水?dāng)嚢?，待完全溶解后依次加入C液、B液，低速攪 拌14分鐘，混合均勻后加入A液，低速攪拌28分鐘，得到紅棕色混懸液，將混懸液過濾、灌 裝得成品。
[0057] 所述的低速攪拌是指16轉(zhuǎn)/分。
[0058] 實(shí)施例16 本發(fā)明涉及的蟑螂內(nèi)源性抗菌肽生產(chǎn)工藝，采用蟑螂內(nèi)源性抗菌肽基因轉(zhuǎn)化酵母發(fā)酵 生產(chǎn)方法： (1) 搖瓶培養(yǎng)：將含蟑螂內(nèi)源性抗菌肽基因質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的酵母作為菌種接入三角瓶中，在 28-32°C，搖床轉(zhuǎn)速150-300轉(zhuǎn)/分的條件下，培養(yǎng)24-72小時(shí)； (2) 發(fā)酵罐培養(yǎng)：將（1)中已培養(yǎng)好的種子接入發(fā)酵罐，接種量為2-20%，在28-322， 攪拌速度180-400轉(zhuǎn)/分，罐壓0. 04-0. 12兆帕，風(fēng)量1 : 0. 5-1 : 1. 8體積/體積/分， pH6. 5-7. 5的條件下，培養(yǎng)24-96小時(shí)。
[0059] 培養(yǎng)過程中加入1%甲醇誘導(dǎo)，將發(fā)酵所得抗菌肽在90-1KTC下加熱8-20分鐘； 其中所用的培養(yǎng)基組分及重量百分含量為：酵母粉〇. 1-3%、蛋白胨0. 5-4%、糖0. 1-3%， pH 6. 5-7. 5〇 實(shí)施例17 毒理學(xué)試驗(yàn) 采用動物試驗(yàn)觀察其急性毒性、亞急性毒性及刺激性毒性結(jié)果。
[0060] 結(jié)果：本發(fā)明精液消毒劑（1%稀釋)對大鼠和小鼠急性經(jīng)口 LD50均大于5000 mg/ kg ? BW，其原液對兔眼、完整皮膚及破損皮膚無刺激性；給藥劑量在1000 mg/kg ? BW以下， 與陰性對照組比較，對大鼠的體重、血常規(guī)及血液生物化學(xué)指標(biāo)無顯著影響，試驗(yàn)動物各臟 器均未見明顯病理改變。
[0061] 仔豬口服精液凈化保護(hù)劑原液，每天兩次，每次1ml，連續(xù)兩天給藥，用藥前后試驗(yàn) 仔豬可食用組織中碘濃度均低于最高殘留限量，精液消毒劑在豬使用時(shí)無休藥期。精液凈 化保護(hù)劑在使用濃度下毒理學(xué)是安全的。
[0062] 實(shí)施例18 本發(fā)明的成品檢驗(yàn)項(xiàng)目與操作方法： 1.有效碘含量檢測 按照《中華人民共和國獸藥典》（2005版）有效碘檢測方法，本品含聚維酮碘按有效碘 (I)計(jì)算，應(yīng)為標(biāo)示量的8. 5%?12. 0%。
[0063] 【性狀】本品為紅棕色液體。
[0064] 【鑒別】 (1)取本品1?5漓，加水IOml與淀粉指示液1滴，即顯藍(lán)紫色。
[0065] (2)取本品IOml,置50ml錐形瓶中（瓶內(nèi)頸切勿沾污），瓶口覆蓋一張用淀粉指示 液濕潤的濾紙，放置80秒鐘，不顯藍(lán)色。
[0066] 【檢查】pH值應(yīng)為3.0?6.0。
[0067] 2.公豬精子安全性檢測 采集公豬精液，用精液稀釋液分別配制濃度為2%、I. 5%、1%的精液凈化保護(hù)劑，將所有 稀釋液置于37°C水浴鍋中溫浴備用。
[0068] 采集好精液后，迅速用精子自動形態(tài)分析儀檢測原精液精子的活率。將原精液平 均分成4份，分別與不同濃度的精液凈化保護(hù)劑等體積混合，以不含精液消毒劑的精液稀 釋液所稀釋的精液為對照組?；旌虾缶合緞┑慕K濃度分別為1%、7.5%、0. 5%。
[0069] 將各組稀釋好的精液分裝，置于17°C恒溫冰箱，每隔24小時(shí)檢測一次各組的精子 活率并記錄，直至精子活率低50%則停止檢測。精子活率指呈直線運(yùn)動的精子占總精子數(shù) 的比率，用百分率表示。精子有效存活時(shí)間定義為精子活率在50%以上的保存時(shí)間。
[0070] 成品檢驗(yàn)結(jié)果如圖1所示，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)為1%、0. 75%、0. 5%三組精子活率及保存時(shí)間 均應(yīng)高于對照組。
[0071] 3、常見五種豬精液污染病毒殺滅效果檢驗(yàn)方法 3. 1必備材料和方法 3. 1.1藥物本明的精液消毒劑 3. 1. 2細(xì)胞和毒株：ST細(xì)胞、Marc-145細(xì)胞、PK15-ZJU細(xì)胞；豬繁殖與呼吸綜合征病毒 (PRRSV)JXAl-R株、偽狂犬病毒（PRV) SE株、豬瘟病毒（CFSV)Thiveral株、細(xì)小病毒（PPV) SCl株，和圓環(huán)病毒2型（PCV-2) ZJ/C株。
[0072] 3. 1. 3細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑和儀器設(shè)備： 3. 2檢驗(yàn)方法及操作步驟： 3. 2. 1、檢測ST、Marc-145、PK15-ZJU細(xì)胞對不同稀釋度精液消毒劑溶液（PBS稀釋）的 耐受性，得出對應(yīng)于每種細(xì)胞的精液消毒劑的安全濃度。 3. 2. 2、精液消毒劑對PBS稀釋的病毒殺滅實(shí)驗(yàn)方法(體外實(shí)驗(yàn)）：在精液消毒劑安全濃 度范圍內(nèi)，將不同濃度精液消毒劑溶液分別與一定濃度的五種病毒溶液等體積混合置37°C 作用lh，然后接種于對應(yīng)細(xì)胞中，通過觀察細(xì)胞病變程度判定精液消毒劑對病毒的體外殺 滅作用。
[0073] 判定標(biāo)準(zhǔn)：若病毒接種于相應(yīng)細(xì)胞能引起典型病變，且除開病毒的其他試劑不引 起細(xì)胞病變，實(shí)驗(yàn)成立，此時(shí)，精液消毒劑與病毒混合作用后接種細(xì)胞，精液消毒劑的殺滅 作用與細(xì)胞病變程度成反比，即：無細(xì)胞病變，表明精液消毒劑對病毒有完全殺滅作用。見 表1。
[0074] 表1 96孔板中各病毒檢測加入試劑說明

【權(quán)利要求】
1. 一種安全高效的動物精液消毒劑，其特征在于：按重量計(jì)，包括以下組分： 聚維酮碘 4.0% - 6.0% 抗菌肽 0.5%- 1.0% 維生素 0.2%-0.3% 乙二胺四乙酸 0.1%-0.2% 蒸餾水 余量。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種安全高效的動物精液消毒劑，其特征在于：按重量計(jì)， 包括以下組分： 聚維酮碘 4.0% - 6.0% 抗菌肽 0.5%- 1.0% 蜂膠 2% - 4% 維生素 0.2%-0.3% 乙二胺四乙酸 0.1%-0.2% 蒸餾水 余量。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種安全高效的動物精液消毒劑，其特征在于：所述的蜂膠 為天然蜂膠，黃酮含量不低于8mg / ml，不含任何有機(jī)溶劑。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種安全高效的動物精液消毒劑，其特征在于：按重量計(jì)， 包括以下組分： 聚維酮碘 4.0% - 6.0% 抗菌肽 0.5%- 1.0% 蜂膠 2% - 4% 維生素 0.2%-0.3% 乙二胺四乙酸 0.1%-0.2% 甘油 2%-3% 蒸餾水 余量。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種安全高效的動物精液消毒劑，其特征在于：所述的抗菌 肽為蟑螂內(nèi)源性抗菌肽。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種安全高效的動物精液消毒劑，其特征在于：所述的維生 素是指水溶性維生素C、維生素A和維生素E中的一種或者兩種以上的組合。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種安全高效的動物精液消毒劑的制備方法，其特征在于：所述動物精液消毒劑的配制方法如下： 第一步、配制9. 5 % - 10.0 %聚維酮碘水溶液A待用； 第二步、配制抗菌肽與蜂膠混合物B :將蜂膠溶液加入適量蒸餾水，攪拌混合配成蜂膠 溶液，冷卻至常溫后，加入抗菌肽低速攪拌待完全溶解后待用； 第三步、配制維生素混合液C :采用水溶性維生素加入蒸餾水中低速攪拌，待完全溶解 后待用； 第四步：將乙二胺四乙酸加入蒸餾水?dāng)嚢?，待完全溶解后依次加入C液、B液，低速攪 拌10-20分鐘，混合均勻后加入A液，低速攪拌20-40分鐘，得到紅棕色混懸液，將混懸液過 濾、灌裝得成品。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種安全高效的動物精液消毒劑的制備方法，其特征在于：所述的第三步，水溶性維生素完全溶解后，加入甘油攪拌均勻待用。
9. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種安全高效的動物精液消毒劑的制備方法，其特征在于：所述的第二步，32-37°C下攪拌15-20分鐘配成蜂膠溶液。
10. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種安全高效的動物精液消毒劑的制備方法，其特征在 于：所述的低速攪拌是指15-20轉(zhuǎn)/分。
【文檔編號】A01N1/02GK104304237SQ201410628740
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年11月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月11日
【發(fā)明者】況洪 申請人:成都美強(qiáng)獸醫(yī)技術(shù)服務(wù)有限公司