基于附睪管腔內(nèi)環(huán)境實(shí)驗(yàn)的微灌注方法及其裝置制造方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種基于附睪管腔內(nèi)環(huán)境實(shí)驗(yàn)的微灌注方法及其裝置。活體微灌注法進(jìn)行附睪功能研究國(guó)際上報(bào)道需在解剖顯微鏡下從附睪尾部分離附睪管做切口并插管，橡皮泥固定，然后在輸精管近端分離伴行血管后插管，插管操作難度較大。本發(fā)明在附睪尾部游離附睪管；取玻璃材質(zhì)的微灌注管，頭部拉細(xì)，尾部連接硅膠管、注射器和微量注射泵；將微灌注管頭部直接插入附睪管，滴組織膠固定，注入干預(yù)物質(zhì)；再在輸精管近端不分離伴行血管直接行硅膠管插管，組織膠固定；最后從輸精管倒沖，附睪管注射部位開(kāi)口收集附睪液。本發(fā)明優(yōu)化了活體環(huán)境下微灌注操作的步驟，操作簡(jiǎn)單易行，所需材料均購(gòu)自國(guó)內(nèi)，大幅縮短了實(shí)驗(yàn)周期，提高了實(shí)驗(yàn)效率。
【專利說(shuō)明】基于附睪管腔內(nèi)環(huán)境實(shí)驗(yàn)的微灌注方法及其裝置

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于附睪管腔內(nèi)環(huán)境實(shí)驗(yàn)領(lǐng)域，具體涉及一種基于附睪管腔內(nèi)環(huán)境實(shí)驗(yàn)的微灌注方法及其裝置。

【背景技術(shù)】
[0002]目前，國(guó)內(nèi)對(duì)于雄性動(dòng)物生殖系統(tǒng)附睪功能的研究大多在組織取材、細(xì)胞培養(yǎng)等離體狀態(tài)下研究，而關(guān)于活體環(huán)境下的研究鮮有報(bào)道，國(guó)際上只有少數(shù)的研究小組采用活體環(huán)境下微灌注法進(jìn)行附睪相關(guān)功能的研究。他們從附睪尾部分離附睪管作切口并插管，橡皮泥固定，然后在輸精管近端作另一開(kāi)口并插管，用倒灌注法向附睪尾部注入不同物質(zhì)，研究附睪功能的變化。但我們?cè)趯?shí)施過(guò)程中發(fā)現(xiàn)存在以下問(wèn)題:1.實(shí)驗(yàn)操作難度大，因附睪管管徑細(xì)，管壁薄，操作稍不熟練就會(huì)將附睪管牽拉斷，即使不斷，由于附睪管內(nèi)充滿了精液，在做切口后精液不斷涌出，影響插管；2.對(duì)器械、材料要求極高，插管所用的直徑200Mffl PVC管在國(guó)內(nèi)沒(méi)有銷售，國(guó)產(chǎn)的剪刀鑷子、橡皮泥以及固定輸精管插管的結(jié)扎線都很難滿足操作要求。3.在行輸精管插管時(shí)，一個(gè)關(guān)鍵性操作就是需分離伴行血管，但伴行血管很細(xì)，分支較多且與輸精管共用一層筋膜，兩者之間間隙微小，分離較為困難，很容易損傷血管，一旦出血，將影響實(shí)驗(yàn)操作；4.在輸精管插管固定時(shí)，其對(duì)結(jié)扎線粗細(xì)、材質(zhì)都有較高要求，使用國(guó)產(chǎn)結(jié)扎線很容易導(dǎo)致插管滑脫，或結(jié)扎線切割輸精管管壁。因此，要成功將此方案用于實(shí)驗(yàn)，操作者需花費(fèi)很多的時(shí)間和精力來(lái)練習(xí)和選擇材料，投入使用周期較長(zhǎng)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是提供一種基于附睪管腔內(nèi)環(huán)境實(shí)驗(yàn)的微灌注方法及其裝置，解決現(xiàn)有技術(shù)中附睪管和輸精管插管難、固定難的問(wèn)題。
[0004]本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:
基于附睪管腔內(nèi)環(huán)境實(shí)驗(yàn)的微灌注方法，其特征在于:
由以下步驟實(shí)現(xiàn):
步驟一:對(duì)大鼠進(jìn)行腹腔麻醉，在陰囊正中旁切口暴露附睪；
步驟二:解剖顯微鏡下，在附睪尾部用精細(xì)鑷去除Imm2的結(jié)締組織，游離環(huán)狀盤(pán)旋的附睪管；
步驟三:取玻璃材質(zhì)的微灌注管，內(nèi)徑0.5 mm，外徑0.8 mm，頭部由拉管儀拉成細(xì)針頭，針頭尖端外徑小于0.2 _，微灌注管尾部連接內(nèi)徑為0.8 _的硅膠管，硅膠管另一端連接I ml的注射器，注射器連接微量注射泵；
步驟四:將微灌注管頭部的針頭插入附睪管，在插管位置點(diǎn)覆組織膠固定微灌注管，微量注射泵以1-2 μ 1/min的速度注入干預(yù)物質(zhì)；
步驟五:30 min后在輸精管近端用外徑300 μ m的硅膠管插管，在插管位置點(diǎn)覆組織膠固定插管；
步驟六:將附睪管從注射部位開(kāi)一小口，微量注射泵以45 μ Ι/min的速度用PBS倒沖法從輸精管將附睪尾部的附睪液沖出并收集。
[0005]所述的基于附睪管腔內(nèi)環(huán)境實(shí)驗(yàn)的微灌注方法中使用的微灌注裝置，其特征在于:
設(shè)置有玻璃材質(zhì)的微灌注管，內(nèi)徑為0.5mm,外徑為0.8mm ；
所述微灌注管頭部由拉管儀拉成細(xì)針頭，針頭尖端外徑小于0.2 mm ;
所述微灌注管尾部連接有內(nèi)徑為0.8mm的硅膠管。
[0006]所述微灌注管插管位置點(diǎn)覆組織膠。
[0007]所述硅膠管另一端連接Iml的注射器，注射器連接微量注射泵。
[0008]本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):
1、材料易得:
一般的毛細(xì)玻璃管即可滿足，將內(nèi)徑為0.5 mm，外徑為0.8 mm的毛細(xì)玻璃管一端在拉管儀上拉成較細(xì)的針；固定插管的組織膠一般的外科手術(shù)用膠即可。解決了國(guó)外常用的固定附睪管插管的橡皮泥難購(gòu)買、國(guó)產(chǎn)的橡皮泥又達(dá)不到要求的問(wèn)題，同時(shí)也解決了國(guó)產(chǎn)結(jié)扎線難以固定輸精管插管的問(wèn)題。
[0009]2、操作簡(jiǎn)單:
一方面，相比于國(guó)外用的PVC管，此灌注針尖端較硬，不用在附睪管上做切口，可直接插管，從而避免了做切口時(shí)精液溢出以及PVC管較軟難操作的問(wèn)題。另一方面，選用組織膠固定插管，簡(jiǎn)單易行，在插管處滴幾滴組織膠，瞬間即可將插管和組織固定住，既避免了橡皮泥固定附睪管插管外力過(guò)大將附睪管封閉的情況，又避免了用結(jié)扎線固定時(shí)切割輸精管以及插管滑脫的可能。另外也不用分離輸精管伴行的血管，直接在輸精管處做一切口，避免分離不當(dāng)血管破裂造成的操作影響。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0010]圖1為微灌注裝置結(jié)構(gòu)圖。
[0011]圖中，1-微灌注管，2-針頭，3-組織膠，4-硅膠管。

【具體實(shí)施方式】
[0012]下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的說(shuō)明。
[0013]本發(fā)明涉及的基于附睪管腔內(nèi)環(huán)境實(shí)驗(yàn)的微灌注方法，用于雄性動(dòng)物附睪功能的在體研究，尤其適用于附睪上皮功能以及附睪管腔微環(huán)境變化的研究，利用特殊儀器設(shè)備對(duì)附睪管腔施加外源干預(yù)后，可收集附睪液獲取干預(yù)后的變化信息，還可觀察正常附睪管腔環(huán)境及上皮細(xì)胞的生理變化，是一種從活體獲取作為中間結(jié)果的信息的方法，具體由以下步驟實(shí)現(xiàn):
步驟一:對(duì)大鼠進(jìn)行腹腔麻醉，在陰囊正中旁切口暴露附睪；
步驟二:解剖顯微鏡下，在附睪尾部用精細(xì)鑷去除Imm2的結(jié)締組織，游離環(huán)狀盤(pán)旋的附睪管；
步驟三:取玻璃材質(zhì)的微灌注管，內(nèi)徑0.5 mm，外徑0.8 mm，頭部由拉管儀拉成細(xì)針頭，針頭尖端外徑小于0.2 _，微灌注管尾部連接內(nèi)徑為0.8 _的硅膠管，硅膠管另一端連接I ml的注射器，注射器連接微量注射泵； 步驟四:將微灌注管頭部的針頭插入附睪管，在插管位置點(diǎn)覆組織膠固定微灌注管，微量注射泵以1-2 μ 1/min的速度注入干預(yù)物質(zhì)；
步驟五:30 min后在輸精管近端用外徑300 μ m的硅膠管插管，在插管位置點(diǎn)覆組織膠固定插管；
步驟六:將附睪管從注射部位開(kāi)一小口，微量注射泵以45 μ Ι/min的速度用PBS倒沖法從輸精管將附睪尾部的附睪液沖出并收集。
[0014]檢測(cè)附睪液pH值及組織成分的變化，或取材檢測(cè)附睪上皮細(xì)胞的生理變化。
[0015]上述方法中涉及的微灌注裝置，是在現(xiàn)有技術(shù)基礎(chǔ)上通過(guò)改進(jìn)得到的，不采用在附睪管上做切口插PVC管，而是設(shè)置玻璃材質(zhì)的微灌注管1，將微灌注管I頭部由拉管儀拉成細(xì)針頭2，微灌注管I尾部連接硅膠管4，硅膠管4另一端連接Iml的注射器(lml)，注射器連接微量注射泵。微灌注管I插管位置點(diǎn)覆組織膠3。所述微灌注管I的內(nèi)徑為0.5mm,外徑為0.8mm,頭部針頭2的外徑小于0.2 mm,娃膠管4內(nèi)徑為0.8_。該設(shè)備的使用避免了輸精管和伴行血管的分離，可直接插管，不用結(jié)扎線固定而用組織膠固定，大大簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)步驟，降低了實(shí)驗(yàn)難度，可有效提高實(shí)驗(yàn)效率。
[0016]本發(fā)明的內(nèi)容不限于實(shí)施例所列舉，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通過(guò)閱讀本發(fā)明說(shuō)明書(shū)而對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案采取的任何等效的變換，均為本發(fā)明的權(quán)利要求所涵蓋。
【權(quán)利要求】
1.基于附睪管腔內(nèi)環(huán)境實(shí)驗(yàn)的微灌注方法，其特征在于: 由以下步驟實(shí)現(xiàn): 步驟一:對(duì)大鼠進(jìn)行腹腔麻醉，在陰囊正中旁切口暴露附睪； 步驟二:解剖顯微鏡下，在附睪尾部用精細(xì)鑷去除Imm2的結(jié)締組織，游離環(huán)狀盤(pán)旋的附睪管； 步驟三:取玻璃材質(zhì)的微灌注管，內(nèi)徑0.5 mm，外徑0.8 mm，頭部由拉管儀拉成細(xì)針頭，針頭尖端外徑小于0.2 _，微灌注管尾部連接內(nèi)徑為0.8 _的硅膠管，硅膠管另一端連接I ml的注射器，注射器連接微量注射泵； 步驟四:將微灌注管頭部的針頭插入附睪管，在插管位置點(diǎn)覆組織膠固定微灌注管，微量注射泵以1-2 μ 1/min的速度注入干預(yù)物質(zhì)； 步驟五:30 min后在輸精管近端用外徑300 μ m的硅膠管插管，在插管位置點(diǎn)覆組織膠固定插管； 步驟六:將附睪管從注射部位開(kāi)一小口，微量注射泵以45 μ Ι/min的速度用PBS倒沖法從輸精管將附睪尾部的附睪液沖出并收集。
2.權(quán)利要求1所述的基于附睪管腔內(nèi)環(huán)境實(shí)驗(yàn)的微灌注方法中使用的微灌注裝置，其特征在于: 設(shè)置有玻璃材質(zhì)的微灌注管(I)，內(nèi)徑為0.5mm,外徑為0.8mm ； 所述微灌注管(I)頭部由拉管儀拉成細(xì)針頭(2)，針頭(2)尖端外徑小于0.2 mm ; 所述微灌注管(I)尾部連接有內(nèi)徑為0.8mm的硅膠管(4 )。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種大鼠附睪微灌注裝置，其特征在于: 所述微灌注管(I)插管位置點(diǎn)覆組織膠(3 )。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的基于附睪管腔內(nèi)環(huán)境實(shí)驗(yàn)的微灌注方法中使用的微灌注裝置，其特征在于: 所述硅膠管(4)另一端連接Iml的注射器，注射器連接微量注射泵。
【文檔編號(hào)】A61D1/00GK104323868SQ201410618576
【公開(kāi)日】2015年2月4日 申請(qǐng)日期:2014年11月6日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月6日
【發(fā)明者】李臻, 馬斌芳, 幸世龍, 程胖, 趙潔, 馮瀟, 魏金花 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)