一種微生物飼料添加劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種微生物飼料添加劑，屬于農業(yè)微生物飼料添加劑領域。它是由枯草芽孢桿菌（ Bacillussubtilis ）、丁酸梭菌（ Clostridiumbutyricum ）、釀酒酵母（ Saccharomycescerevisiae ）3種微生物按一定比例復配而成。其中枯草芽孢桿菌和丁酸梭菌采用液體發(fā)酵，釀酒酵母采用液固兩相發(fā)酵工藝，其中固體培養(yǎng)以靈芝菌糠、麥麩等為原料的培養(yǎng)基固體發(fā)酵制備。該微生物飼料添加劑用于畜禽養(yǎng)殖，不僅可有效提高仔豬和仔雞的抗病、防病等免疫功能，降低死亡率，而且用于蛋雞可以提高產蛋量、改善雞蛋品質。對促進家禽養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展、保障產品質量安全具有重要意義。CGMCC No 844020131106
【專利說明】-種微生物飼料添加劑

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種用于畜禽養(yǎng)殖的微生物飼料添加劑，屬于農業(yè)微生物飼料添加劑 領域。

【背景技術】
[0002] 近年來，隨著養(yǎng)殖業(yè)集約化程度的提高，病原傳播和入侵逐漸加重；養(yǎng)殖者為了降 低發(fā)病率、節(jié)省養(yǎng)殖成本，通常采用抗生素進行防治。長期濫用抗生素，導致動物抵抗力低 下、易感和耐藥菌株增加，使病害的控制與治療更加困難，而且抗生素無法克服腸道微生態(tài) 奈亂、藥物殘留、營養(yǎng)應激等一系列問題，同時也使畜禽產品，尤其是肉、蛋、奶等食品存在 很大安全隱患，給人們的身體健康造成極大危害。
[0003] 微生物飼料添加劑是一類無毒無副作用、無耐藥性、無環(huán)境污染的制劑，不僅具有 維持腸道微生態(tài)平衡、促進動物生長、產生消化酶及維生素、提高飼料轉化率和動物飼養(yǎng)效 益。而且部分功能菌可W產生抗菌膚類物質，具有抑制有害菌、增強機體免疫機能、降低動 物死亡率的作用。在取代抗生素、減少化學合成藥物在畜禽養(yǎng)殖中的用量方面正在發(fā)揮著 越來越重要的作用。日益成為飼料添加劑的發(fā)展趨勢。
[0004] 因此，本發(fā)明結合不同有益微生物的特異功能、作用和協(xié)同增效原理生產復合微 生物飼料添加劑，應用于畜禽養(yǎng)殖，為養(yǎng)殖產業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展提供技術支持，有廣闊的 應用前景。


【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種能夠促進畜禽生長發(fā)育、提高飼料利用率、降低幼畜 幼禽死亡率W及提高蛋禽生產性能的微生物飼料添加劑。
[0006] 本發(fā)明的主要技術方案為： 本發(fā)明的微生物飼料添加劑包含保藏編號為CGMCC No. 8440的枯草芽胞桿菌BSD-2、 保藏編號為ATCC 19398的了酸梭菌W及保藏編號為ATCC 9763的釀酒酵母。本發(fā)明的微 生物飼料添加劑所述的枯草芽抱桿菌BSD-2和下酸梭菌采用液體培養(yǎng)基發(fā)酵，釀酒酵母采 用液固兩相培養(yǎng)基發(fā)酵，固相培養(yǎng)基中含有靈芝菌慷及麥款。本發(fā)明的微生物飼料添加劑 所述液固兩相培養(yǎng)基中的液相培養(yǎng)基為GPY培養(yǎng)基，固相培養(yǎng)基中的固體基質包含70、0 重量份的麥款和i(T3〇重量份的靈芝菌慷，每100重量份的固體基質中添加淀粉：no重量 份、葡萄糖1.5^4. 0重量份、硫酸饋1.5^2. 5重量份及磯酸二氨鐘0.6^1. 8重量份W及水 8(T200重量份。本發(fā)明的微生物飼料添加劑所述枯草芽抱桿菌和下酸梭菌采用噴霧干燥 法制成粉劑，菌數(shù)> 1. 0 X l〇w C化/g，釀酒酵母固體發(fā)酵完成后瞭干粉碎，菌數(shù)> 1. 0 X 1〇9 C化/g，本發(fā)明的微生物飼料添加劑所述H種菌根據(jù)重量份數(shù)，按枯草芽抱桿菌：下酸 梭菌：釀酒酵母=a?3) : a?3) : (4?6)復配制成復合菌劑，總菌數(shù)>4.0X109 C化/ go本發(fā)明的微生物飼料添加劑所述枯草芽抱桿菌BSD-2 > 1.0 Xl〇9 C化/g，下酸梭菌 > 1. 0X 1〇9 C化/g，釀酒酵母> 1. 0X 1〇8 C化/g。本發(fā)明的微生物飼料添加劑在畜禽養(yǎng)殖 中的應用。本發(fā)明的微生物飼料添加劑按1 : (1000-2000)的質量比例添加的畜禽基礎 日糧中，添加后飼料中的總菌數(shù)> 5. OXl〇6 C化/g。
[0007] 本發(fā)明所述枯草芽抱桿菌BSD-2的培養(yǎng)基組成為；蛋白腺10?13 g/L，淀粉8? 12 g/L，牛肉膏 5 ?8 g/L，酵母膏 1 ?3 g/L，KH2P〇4 0. 5 ?1.5 g/L，K2HP〇4 0. 3 ?1.0 g/ L, M拆〇4 0. 5 ?1. 0 g/L, CaC〇3 1 ?10 g/L,水 1 L,抑 7. 0 + 0. 2。
[0008] 本發(fā)明所述下酸梭菌的培養(yǎng)基組成為：膜蛋白腺0.25?0.5 g/l，酵母提取物 0. 5?1.0 g/L，蛋白腺0.25?0.5徑/1，心半脫氨酸鹽酸鹽0.3?0.5 g/L，氯化軸1.0? 1. 5 g/L，皿2?〇4 1?1. 5 g/L，M拆〇4 0. 5?0. 8 g/L，質量分數(shù)為0. 1%的刃天青指示劑2 滴，水1 L，抑值7. 0 + 0. 2。
[0009] 本發(fā)明的微生物飼料添加劑用于畜禽養(yǎng)殖中。
[0010] 本發(fā)明的微生物飼料添加劑，可有效提高仔豬和維雞的飼料轉化率，提高仔豬維 雞抗病、防病等免疫功能，降低死亡率。
[0011] 本發(fā)明的微生物飼料添加劑用于蛋雞可W提高產蛋量和飼料轉化率、改善雞蛋品 質。
[001引本發(fā)明的枯草芽胞桿菌BSD-2(公細革蘭氏染色陽性，芽抱中生， 鞭毛周生，沒有伴抱晶體形成。產生抗菌膚，對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌等有抑制作用，可 顯著提高畜禽抗病能力和免疫能力。菌株保藏編號CGMCC No. 8440。
[001引本發(fā)明的了酸梭菌（C7(0stri出Uffl 化)；桿狀，成鏈或單生，產芽抱，革蘭氏 染色陽性，嚴格厭氧生長，可利用淀粉、葡萄糖和碳水化合物產己酸、下酸等。還可產生淀粉 酶、蛋白酶等。有調整畜禽腸道微生態(tài)平衡作用。菌株保藏編號為ATCC 19398。
[0014] 本發(fā)明的釀酒酵母cerebsiaey* :球形或者卵形，直徑5? 10 ym，出芽生殖。發(fā)酵產物蛋白含量和維生素含量較高，可有效提高畜禽抗病能力和生長 速度等。菌株保藏編號為ATCC 9763。
[0015] 本發(fā)明的積極效果在于：與現(xiàn)有技術相比，首先，本發(fā)明制備的復合微生物菌劑， 具有良好的抗致病菌作用，可代替抗生素，消除由于抗生素投加帶來的副作用。其次，本發(fā) 明采用的微生物為復合菌，相對于單一菌株，該復合菌在使用過程中充分利用菌株間的協(xié) 同增效作用，在畜禽腸道內具有更強的環(huán)境適應能力，不僅可改善畜禽腸道微生態(tài)環(huán)境，而 且還可W提高畜禽抗病能力和免疫力，W及提高畜禽產品產量、改善產品質量。第H，在釀 酒酵母的固體發(fā)酵培養(yǎng)基中添加部分靈芝菌慷，不僅可W使農業(yè)廢棄物得到有效利用，改 善培養(yǎng)基的粘度、空隙率和疏松度，而且充分利用靈芝菌慷中存在的部分營養(yǎng)成分提高飼 用畜禽的免疫力和抗病能力。本發(fā)明的微生物飼料添加劑的應用，是減少抗生素對畜禽養(yǎng) 殖產生的負面影響的有效途徑，對促進家禽養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展、保障產品質量安全具有 重要意義。
[0016] 菌種保藏方式 本發(fā)明的枯草芽抱桿菌BSD-2,分類命名為公已于2013年11月6 日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中也，簡稱CGMCC，地址；北京市朝陽 區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，郵編10010,菌種保藏號為CGMCC No. 8440。
[0017] 本發(fā)明的下酸梭菌，分類命名為C7(〇stri出uffl知來源于美國模式菌種收 集中也，菌株保藏編號為ATCC 19398。
[0018] 本發(fā)明的釀酒酵母，分類命名為feccAarowces cerebsiae，來源于美國模式菌 種收集中也，菌株保藏編號為ATCC 9763。

【具體實施方式】
[0019] 在本發(fā)明中，菌株保藏編號CGMCC No. 8440的枯草芽胞桿菌BSD-2 W及菌株保藏 編ATCC 19398和ATCC 9763的了酸梭菌和釀酒酵母可W分別通過中國普通微生物菌種保 藏管理中也和美國模式菌種收集中也獲得。
[0020] 本發(fā)明涉及的枯草芽抱桿菌和下酸梭菌的培養(yǎng)基的種類可W在很大范圍內改變， 可W為各種能夠用于培養(yǎng)枯草芽抱桿菌、下酸梭菌的培養(yǎng)基，例如，可W為LB培養(yǎng)基，也可 W為本發(fā)明所公開的培養(yǎng)基，當采用本發(fā)明所公開的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)時，菌體生長相對較 快，發(fā)酵效率較高。所述LB培養(yǎng)基為本領域技術人員所公知。
[0021] 本發(fā)明的釀酒酵母采用液固兩相發(fā)酵工藝，液體培養(yǎng)采用GPY培養(yǎng)基，固體培養(yǎng) 采用本發(fā)明公開的添加靈芝菌慷的固體培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，具體培養(yǎng)方法與常規(guī)培養(yǎng)方法一 致。
[0022] 本發(fā)明各實施例的微生物飼料添加劑的制備方法為；枯草芽抱桿菌和下酸梭菌采 用液體培養(yǎng)，形成芽抱后，分別采用噴霧干燥法制成粉劑，每種菌數(shù)>l.〇Xl〇w C化/g。釀 酒酵母固體發(fā)酵完成后瞭干粉碎，菌數(shù)> 1. 0X 1〇9 C化/g。H種菌按一定比例復配制成，總 菌數(shù)> 2. OXl〇9 cfu/g。
[0023] 本發(fā)明中枯草芽抱桿菌、下酸梭菌、釀酒酵母的培養(yǎng)方法為本領域技術人員所公 知。
[0024] 下面，通過實施例對本發(fā)明進行更加詳細的說明，但是不作為對本發(fā)明的限制。
[0025] 實施例1釀酒酵母液固兩相發(fā)酵 釀酒酵母采用液固兩相培養(yǎng)工藝，液相培養(yǎng)基為GPY培養(yǎng)基；固相培養(yǎng)分別采用常規(guī) 培養(yǎng)基和本發(fā)明公布的培養(yǎng)基進行發(fā)酵。
[0026] 常用固體培養(yǎng)基為：麥款；谷慷=80份：20份，所述的固體培養(yǎng)基中添加其他成 分及比例，按其固體基質成分總量為100 g，添加淀粉4.0 g、葡萄糖2.0 g、硫酸饋1.0 g、 磯酸二氨鐘0.5 g，抑值自然；將該些成分溶于150 mL水后再與固體基質攬拌均勻，蒸汽 滅困。
[0027] 本發(fā)明公布的固體培養(yǎng)基為：麥款：靈芝菌慷=80份：20份。所述的固體培養(yǎng)基 中添加其他成分及比例，按其固體基質成分總量為100 g，添加淀粉6.0 g、葡萄糖4.0 g、硫 酸饋2.0 g、磯酸二氨鐘0.8 g，抑值自然；將該些成分溶于180 mL水后再與固體基質攬拌 均勻，蒸汽滅菌。
[0028] 分別將用液體培養(yǎng)基GPY培養(yǎng)的釀酒酵母菌種按10% (重量比）的比例接入滅菌 固體培養(yǎng)基中，攬拌均勻，常規(guī)固體發(fā)酵培養(yǎng)2 d，陰涼處瞭干粉碎備用。
[0029] 將用兩種固體培養(yǎng)基發(fā)酵酵母用于仔豬和蛋維雞飼喂實驗，釀酒酵母按1 : 1000 的比例添加到畜禽基礎日糧中，酵母菌數(shù)> 5.0X105 C化/g。
[0030] 仔豬用22日齡健康斷奶的大白豬60頭，隨機分成3組，每組20頭。設2個實驗 組，分別飼喂添加不同培養(yǎng)基發(fā)酵的釀酒酵母飼料；設1個對照組，喂全價配合飼料，不進 行抗生素注射劑用藥等方法的防控，其他的飼養(yǎng)管理按豬場的常規(guī)方法進行，日糧及飼養(yǎng) 管理等完全相同，飼喂30天，觀察各處理對斷奶仔豬平均日增重、料肉比、腹瀉率的影響。 蛋維雞用1日齡北京白240只試驗，隨機分成3組，每組80只。設2個實驗組，分別飼喂添 加不同培養(yǎng)基發(fā)酵的釀酒酵母菌劑飼料；設1個空白對照組，其他飼養(yǎng)管理按雞場常規(guī)方 法進行，日糧及飼養(yǎng)管理完全相同。飼喂28天，觀察各處理對維雞平均日增重、料肉比、死 淘率的影響。具體結果見表1。
[0031] 由表1可知，在基礎飼料中添加釀酒酵母，可W顯著提高仔豬和蛋維雞的平均日 增重，降低料肉比、仔豬的腹瀉率和維雞的死淘率。其中采用常規(guī)固體培養(yǎng)基和本發(fā)明培養(yǎng) 基發(fā)酵的釀酒酵母對仔豬和蛋維雞平均日增重和料肉比影響差異不顯著，但添加本發(fā)明培 養(yǎng)基發(fā)酵的釀酒酵母與常規(guī)培養(yǎng)基相比，可W顯著降低仔豬的腹瀉率和蛋維雞的死淘率。 說明采用本發(fā)明公布的釀酒酵母培養(yǎng)基制備菌劑可W顯著提高畜禽的免疫力和抗病能力。
[0032] 表 1

【權利要求】
1. 一種微生物飼料添加劑，其特征在于其包含保藏編號為CGMCC No. 8440的枯草芽胞 桿菌BSD-2、保藏編號為ATCC 19398的丁酸梭菌以及保藏編號為ATCC 9763的釀酒酵母。
2. 根據(jù)權利要求1所述的一種微生物飼料添加劑，其特征在于所述的枯草芽孢桿菌 BSD-2和丁酸梭菌采用液體培養(yǎng)基發(fā)酵，釀酒酵母采用液固兩相培養(yǎng)基發(fā)酵，固相培養(yǎng)基中 含有靈芝菌糠及麥麩。
3. 根據(jù)權利要求2所述的一種微生物飼料添加劑，其特征在于所述液固兩相培養(yǎng)基中 的液相培養(yǎng)基為GPY培養(yǎng)基，固相培養(yǎng)基中的固體基質包含70~90重量份的麥麩和1(T30 重量份的靈芝菌糠，每100重量份的固體基質中添加淀粉:T10重量份、葡萄糖1.5~4.0重 量份、硫酸銨1. 5~2. 5重量份及磷酸二氫鉀0. 6~1. 8重量份以及水80~200重量份。
4. 根據(jù)權利要求1所述的一種微生物飼料添加劑，其特征在于所述枯草芽孢桿菌和丁 酸梭菌采用噴霧干燥法制成粉劑，菌數(shù)> l.OXKT cfu/g，釀酒酵母固體發(fā)酵完成后晾干 粉碎，菌數(shù)彡1.0X109 cfu/g。
5. 根據(jù)權利要求4所述的一種微生物飼料添加劑，其特征在于所述三種菌根據(jù)重量份 數(shù)，按枯草芽孢桿菌：丁酸梭菌：釀酒酵母=(1~3) : (1~3) : (4~6)復配制成復合菌劑， 總菌數(shù)彡 4. 0X109 cfu/g。
6. 根據(jù)權利要求5所述的一種微生物飼料添加劑，其特征在于所述枯草芽孢桿菌 BSD-2 彡 1.0X109 cfu/g，丁酸梭菌彡 1.0X109 cfu/g，釀酒酵母彡 1.0X108 cfu/g。
7. 根據(jù)權利要求1所述的一種微生物飼料添加劑，其特征在于其在畜禽養(yǎng)殖中的應 用。
8. 根據(jù)權利要求7所述的一種微生物飼料添加劑，其特征在于將所述復合微生物飼 料添加劑按1 : (1000~2000)的質量比例添加的畜禽基礎日糧中，添加后飼料中的總菌數(shù) 彡 5. 0X106 cfu/g。
【文檔編號】A23K1/16GK104397323SQ201410434316
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年8月29日 優(yōu)先權日:2014年8月29日
【發(fā)明者】程輝彩, 張根偉, 張麗萍, 習彥花, 張飛燕, 崔冠慧, 尹淑麗, 董玉蘭, 段普凡, 李書生 申請人:河北省科學院生物研究所