一種翅柄鐵線蕨快速繁殖的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種翅柄鐵線蕨的繁育方法，所述的方法包括：1)外植體的選取，2)外植體消毒，3)初始誘導培養(yǎng)，4)愈傷組織誘導，5)增殖培養(yǎng)，6)生根培養(yǎng)，7)煉苗和移栽。采用本方法繁育翅柄鐵線蕨，可以降低生產(chǎn)成本，提高繁殖速度和成活率。
【專利說明】一種翅柄鐵線蕨快速繁殖的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及植物快速繁殖【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其是翅柄鐵線蕨快速繁殖【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 蕨類植物是介于苔蘚植物和種子植物之間的一大類群植物，具有獨特的生活史。 全世界蕨類植物約有12000多種，我國是世界上蕨類植物資源最豐富的地區(qū)之一，約有 2000余種。蕨類植物分布很廣，從高山到海濱，從寒帶到熱帶都有生長，生態(tài)類型也極其多 樣，主要為土生、石生或附生，少數(shù)為水生或沼生。
[0003] 蕨類植物在經(jīng)濟有著一定的重要性，常常被用作藥物、食物、指示植物、工農(nóng)業(yè)的 原料。
[0004] 大多數(shù)蕨類植物具有較高的觀賞價值，它們雖然沒有鮮艷奪目的花與果實，然而 它們以千姿百態(tài)奇特的葉形、葉姿和青翠碧綠的色彩，使人賞心悅目，在觀賞植物中占有重 要地位。
[0005] 翅柄鐵線藏（學名：Adiantum subliferum(Wall.) ex Hook.)是藏類植物，多年生 草本。植株高約30厘米。根狀莖短而直立，被棕褐色披針形鱗片。葉簇生；栗黑色，有光 澤，葉片披針形，互生，頂生羽片為扇形，外緣具有3-6缺刻，基部楔形。葉脈多回二歧分叉， 葉干后厚紙質(zhì)，淡褐綠色，有光澤，能著地生根，行無性繁殖。孢子囊群每羽片3-7枚；囊群 蓋橢圓形或腎形，染色體2n = 120。生林下潮濕的地方；分布于中國、越南、印度、尼泊爾、 印度尼西亞、菲律賓及非洲西部熱帶地區(qū)。
[0006] 翅柄鐵線蕨烏黑發(fā)亮的細長葉柄兩側(cè)，裝點著淺綠色的翡翠膜帶，宛若信鴿的雙 翼，翩然飛致，因此得名。叢生葉翠綠，由二排對開近半月狀的羽片組成，羽片粉紅色， 十分艷麗。長大的葉自然分披，像少女的披肩長發(fā)，洋氣灑脫，給人以美感，楚楚動人， 別開生面。翠綠色的羽片，先端變窄，有時延長為鞭狀，落地生根，根莖繁衍形成新植株。 枝芳菲的翅柄鐵線蕨，向四周平展的綠葉，簇擁著微紅色的幼葉，酷似一叢待放的花朵， 嫵媚動人，供游人大飽眼富，使觀者留戀往返。
[0007] 目前，翅柄鐵線蕨多采用孢子繁育來進行生產(chǎn)栽培，這繁育技術(shù)提高品種的純度， 保持了品種特性，但成活率較低及繁殖速度較慢，制約了翅柄鐵線蕨產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。而組織培 養(yǎng)育苗技術(shù)既可以保持種的純度和特性，也可以降低生產(chǎn)成本，提高繁殖速度和成活率。
[0008] 現(xiàn)有技術(shù)中尚無經(jīng)愈傷組織途徑獲得翅柄鐵線蕨再生植株的報道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種翅柄鐵線蕨快速繁殖的方法，經(jīng)愈傷組織 途徑獲得翅柄鐵線蕨叢生芽，誘導生根，可實現(xiàn)翅柄鐵線蕨組培苗的大量快速繁殖。
[0010] 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提出下列技術(shù)方案：
[0011] 一種翅柄鐵線蕨快速繁殖的方法，其特征在于所述的方法包括以下步驟：
[0012] 1)外植體的選?。喝?cm長的根狀莖莖尖，去掉雜質(zhì)及莖尖周圍的絨毛等附屬 物；
[0013] 2)外植體消毒：將上述莖尖放入盛有自來水的20-25KHZ超聲波清洗機中保持溫 度30-35 °C處理30-45min，然后以自來水沖洗10-20min ;隨后在超凈工作臺上以70-75 %的 酒精消毒25-35秒，0. 02%升汞溶液中處理5-7分鐘，然后以無菌水沖洗4-5遍，置于無菌 培養(yǎng)皿備用；
[0014] 3)初始誘導培養(yǎng)：將滅菌后外植體兩端各剪去2-3mm，莖尖按末端向下插入初始 誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光強l〇〇〇-2500Lx、光周期5-8h/d，溫度25°C ±2°C ;培養(yǎng) 4-6d后將其中未污染的外植體莖尖轉(zhuǎn)接到新的初始誘導培養(yǎng)基中，并繼續(xù)培養(yǎng)12-18d至 新芽長出；所述的初始誘導培養(yǎng)基組成為：MS+6-BA0. 1-0. 2mg/L+NAA0. 01-0. 02mg/L ;
[0015] 4)愈傷組織誘導：取初始誘導培養(yǎng)中的芽，放入愈傷組織誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng) 15-20d，條件為暗培養(yǎng)，溫度20°C ±2°C ;所述愈傷組織培養(yǎng)基為：MS+6-BA0. 5-2.0mg/ L+NAA0. 02-0. 5mg/L+PVP5-10mg/L ；
[0016] 5)分化和增殖培養(yǎng)：將透明無色的愈傷組織塊放入分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)20-25d，增 殖產(chǎn)生大量叢生苗，培養(yǎng)條件為光強1800-2500LX、光周期8-10h/d，溫度25°C ±2°C;所述 分化和增殖培養(yǎng)用培養(yǎng)基為：WPM+6-BA0. 1-0. 5mg/L+NAA0. 1-0. 5mg/L+PVP5-10mg/L ;
[0017] 6)生根培養(yǎng)：將5)步驟中的叢生苗切割成單個，轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)15-20d 后生根，培養(yǎng)條件為光強1800-2500Lx、光周期8-10h/d，溫度25°C ±2°C;所述生根用培養(yǎng) 基為：1/2MS+IBA0. 1-0. 5mg/L+PVP5-10mg/L ;
[0018] 7)煉苗和移栽：將有生根的翅柄鐵線蕨幼苗的培養(yǎng)基瓶蓋打開，室溫下煉苗5-8d 后，取出幼苗，洗去根部培養(yǎng)基，移栽裝有河沙和蛭石基質(zhì)的苗床上，保持溫度20-25°C，濕 度85% -95%，適當遮蔭即可；
[0019] 所述的WPM培養(yǎng)基配方為：大量元素：硝酸銨NH4N03400mg/L，硫酸鉀K 2S04900mg/ L，磷酸二氫鉀 KH2P03170mg/L，硫酸鎂 MgS04 · 7H20370mg/L ;鈣鹽：氯化鈣 CaCl2 · 2H2096mg/ L ;四水合硝酸鈣Ca(N03)2 · 4H20556mg/L ;微量元素：硼酸Η3Β036· 2mg/L，硫酸錳 MnS04 · 4Η2022· 5mg/L，硫酸鋅 ZnS04 · 7Η208· 6mg/L，鑰酸鈉 Na2Mo04 · 2Η200· 25mg/L， 硫酸銅CuS04 · 5Η200· 25mg/L ;鐵鹽：乙二胺四乙酸二鈉Na2-EDTA37. 3mg/L，硫酸亞鐵 FeS04 · 7Η2027· 8mg/L ;有機酸：肌醇100mg/L，甘氨酸2mg/L，鹽酸硫胺素lmg/L，鹽酸批口多 醇 0· 5mg/L，煙酸 0· 5mg/L ;
[0020] 所述的MS培養(yǎng)基配方為：大量元素：硝酸鉀KN031900mg/L，硝酸銨NH 4N031650mg/ L，磷酸二氫鉀 KH2P03170mg/L，硫酸鎂MgS04 ·7Η20370π^/1 ;鈣鹽：氯化鈣 CaCl2 ·2Η20440π^/ L ;微量元素：碘化鉀 ΚΙ(λ 83mg/L，硼酸 Η3Β036· 2mg/L，硫酸錳 MnS04 · 4Η2022· 3mg/L，硫酸 鋅 ZnS04 · 7Η208· 6mg/L，鑰酸鈉 Na2Mo04 · 2Η200· 25mg/L，硫酸銅 CuS04 · 5Η200· 025mg/L， 氯化鈷CoCl2 · 6H200. 025mg/L ;鐵鹽：乙二胺四乙酸二鈉 Na2-EDTA37. 25mg/L，硫酸亞鐵 FeS04 · 7Η2027· 85mg/L ;有機酸：肌醇100mg/L，甘氨酸2mg/L，鹽酸硫胺素0· 5mg/L，鹽酸吡 哆醇 0· 5mg/L，煙酸 0· 5mg/L ;蔗糖 30g/L，瓊脂粉 7g/L，pH 為 5. 7 ;
[0021] 所述的1/2MS培養(yǎng)基配方為：大量元素：硝酸鉀KN039 50mg/L，硝酸銨NH4N038 2 5mg/ L，磷酸二氫鉀KH2P0385mg/L，硫酸鎂MgS04 · 7H20185mg/L ;余同上述MS培養(yǎng)基；
[0022] 所述的6-BA為6-芐氨基嘌呤；
[0023] 所述的NAA為α -萘乙酸；
[0024] 所述的IBA為吲哚-3- 丁酸；
[0025] 所述的PVP為聚乙烯吡咯烷酮。
[0026] 優(yōu)選的，步驟3)中初始誘導培養(yǎng)基組成為：MS+6-BA0. 15mg/L+NAA0. 015mg/L。
[0027] 優(yōu)選的，步驟 4)中愈傷組織培養(yǎng)基為：MS+6-BAl. 5mg/L+NAA0. 2mg/L+PVP8mg/L。
[0028] 優(yōu)選的，步驟5)中分化和增殖培養(yǎng)用培養(yǎng)基為：WPM+6-BA0. 3mg/L+NAA0. 2mg/ L+PVP8mg/L〇
[0029] 優(yōu)選的，步驟6)中生根用培養(yǎng)基為：1/2MS+IBA0. 2mg/L+PVP8mg/L。
[0030] 采用本發(fā)明繁殖翅柄鐵線蕨，可實現(xiàn)翅柄鐵線蕨組培苗的大量快速繁殖，為翅柄 鐵線蕨生產(chǎn)栽培和品種改良奠定基礎(chǔ)。
[0031] 為了更好的闡述技術(shù)方案，下面結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明作進一步的說明，但 本發(fā)明所要求的保護范圍不限于下列實施例。

【具體實施方式】
[0032] 實施例1
[0033] 1)外植體的選取：取2cm長的根狀莖莖尖，去掉雜質(zhì)及莖尖周圍的絨毛等附屬 物；
[0034] 2)外植體消毒：將上述莖尖放入盛有自來水的20-25KHZ超聲波清洗機中保持溫 度30-35°C處理30min，然后以自來水沖洗lOmin ;隨后在超凈工作臺上以70-75%的酒精消 毒25秒，0. 02%升汞溶液中處理5分鐘，然后以無菌水沖洗4遍，置于無菌培養(yǎng)皿備用；
[0035] 3)初始誘導培養(yǎng)：將滅菌后外植體兩端各剪去2_3mm，莖尖按末端向下插入初始 誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光強l〇〇〇-2500Lx、光周期5-8h/d，溫度25°C ±2°C ;培養(yǎng) 6d后將其中未污染的外植體莖尖轉(zhuǎn)接到新的初始誘導培養(yǎng)基中，并繼續(xù)培養(yǎng)18d至新芽長 出；所述的初始誘導培養(yǎng)基組成為：MS+6-BA0. lmg/L+NAAO. Olmg/L ;
[0036] 4)愈傷組織誘導：取初始誘導培養(yǎng)中的芽，放入愈傷組織誘導培養(yǎng)基中培 養(yǎng)15-20d，條件為暗培養(yǎng)，溫度20°C ± 2 °C ;所述愈傷組織培養(yǎng)基為：MS+6-BA0. 5mg/ L+NAAO. 02mg/L+PVP5mg/L ；
[0037] 5)分化和增殖培養(yǎng)：將透明無色的愈傷組織塊放入分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)225d，增殖 產(chǎn)生大量叢生苗，培養(yǎng)條件為光強1800-2500LX、光周期8-10h/d，溫度25°C ±2°C;所述分 化和增殖培養(yǎng)用培養(yǎng)基為：WPM+6-BA0. lmg/L+NAAO. lmg/L+PVP5mg/L ;
[0038] 6)生根培養(yǎng)：將5)步驟中的叢生苗切割成單個，轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)20d后 生根，培養(yǎng)條件為光強1800-2500LX、光周期8-10h/d，溫度25°C ±2°C ;所述生根用培養(yǎng)基 為：1/2MS+IBA0. lmg/L+PVP5mg/L ;
[0039] 7)煉苗和移栽：將有生根的翅柄鐵線蕨幼苗的培養(yǎng)基瓶蓋打開，室溫下煉苗5d 后，取出幼苗，洗去根部培養(yǎng)基，移栽裝有河沙和蛭石基質(zhì)的苗床上，保持溫度20_25°C，濕 度85% -95%，適當遮蔭即可。
[0040] 經(jīng)試驗，采用本實施例所育試管苗的苗床移栽成活率為91. 3%。
[0041] 實施例2
[0042] 1)外植體的選?。喝?cm長的根狀莖莖尖，去掉雜質(zhì)及莖尖周圍的絨毛等附屬 物；
[0043] 2)外植體消毒：將上述莖尖放入盛有自來水的20-25KHZ超聲波清洗機中保持溫 度35°C處理45min，然后以自來水沖洗20min ;隨后在超凈工作臺上以70-75%的酒精消毒 35秒，0. 02%升汞溶液中處理7分鐘，然后以無菌水沖洗5遍，置于無菌培養(yǎng)皿備用；
[0044] 3)初始誘導培養(yǎng)：將滅菌后外植體兩端各剪去2_3mm，莖尖按末端向下插入初始 誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光強l〇〇〇-2500Lx、光周期5-8h/d，溫度25°C ±2°C ;培養(yǎng) 4d后將其中未污染的外植體莖尖轉(zhuǎn)接到新的初始誘導培養(yǎng)基中，并繼續(xù)培養(yǎng)12d至新芽長 出；所述的初始誘導培養(yǎng)基組成為：MS+6-BA0. 2mg/L+NAA0. 02mg/L ;
[0045] 4)愈傷組織誘導：取初始誘導培養(yǎng)中的芽，放入愈傷組織誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)15d， 條件為暗培養(yǎng)，溫度20°C ± 2 °C ;所述愈傷組織培養(yǎng)基為：MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 5mg/ L+PVP10mg/L ；
[0046] 5)分化和增殖培養(yǎng)：將透明無色的愈傷組織塊放入分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)20d，增殖 產(chǎn)生大量叢生苗，培養(yǎng)條件為光強1800-2500LX、光周期8-10h/d，溫度25°C ±2°C;所述分 化和增殖培養(yǎng)用培養(yǎng)基為：WPM+6-BA0. 5mg/L+NAA0. 5mg/L+PVP10mg/L ;
[0047] 6)生根培養(yǎng)：將5)步驟中的叢生苗切割成單個，轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)15d后 生根，培養(yǎng)條件為光強1800-2500LX、光周期8-10h/d，溫度25°C ±2°C ;所述生根用培養(yǎng)基 為：1/2MS+IBA0. 5mg/L+PVP10mg/L ;
[0048] 7)煉苗和移栽：將有生根的翅柄鐵線蕨幼苗的培養(yǎng)基瓶蓋打開，室溫下煉苗5d 后，取出幼苗，洗去根部培養(yǎng)基，移栽裝有河沙和蛭石基質(zhì)的苗床上，保持溫度20-25°C，濕 度85% -95%，適當遮蔭即可。
[0049] 經(jīng)試驗，采用本實施例所育試管苗的苗床移栽成活率為90. 2%。
[0050] 實施例3
[0051] 1)外植體的選?。喝?cm長的根狀莖莖尖，去掉雜質(zhì)及莖尖周圍的絨毛等附屬 物；
[0052] 2)外植體消毒：將上述莖尖放入盛有自來水的20-25KHZ超聲波清洗機中保持溫 度30-35°C處理45min，然后以自來水沖洗20min ;隨后在超凈工作臺上以75%的酒精消毒 35秒，0. 02%升汞溶液中處理7分鐘，然后以無菌水沖洗5遍，置于無菌培養(yǎng)皿備用；
[0053] 3)初始誘導培養(yǎng)：將滅菌后外植體兩端各剪去2_3mm，莖尖按末端向下插入初 始誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光強l〇〇〇-2500Lx、光周期5-8h/d，溫度25°C ±2°C ; 培養(yǎng)5d后將其中未污染的外植體莖尖轉(zhuǎn)接到新的初始誘導培養(yǎng)基中，并繼續(xù)培養(yǎng)15d 至新芽長出；所述的初始誘導培養(yǎng)基組成為：初始誘導培養(yǎng)基組成為：MS+6-BA0. 15mg/ L+NAAO. 015mg/L ；
[0054] 4)愈傷組織誘導：取初始誘導培養(yǎng)中的芽，放入愈傷組織誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)18d， 條件為暗培養(yǎng)，溫度20°C ±2°C ;所述愈傷組織培養(yǎng)基為：MS+6-BA1. 5mg/L+NAA0. 2mg/ L+PVP8mg/L ；
[0055] 5)分化和增殖培養(yǎng)：將透明無色的愈傷組織塊放入分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)22d，增殖 產(chǎn)生大量叢生苗，培養(yǎng)條件為光強1800-2500LX、光周期8-10h/d，溫度25°C ±2°C;所述分 化和增殖培養(yǎng)用培養(yǎng)基為：WPM+6-BA0. 3mg/L+NAA0. 2mg/L+PVP8mg/L ;
[0056] 6)生根培養(yǎng)：將5)步驟中的叢生苗切割成單個，轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)18d后 生根，培養(yǎng)條件為光強1800-2500LX、光周期8-10h/d，溫度25°C ±2°C ;所述生根用培養(yǎng)基
【權(quán)利要求】
1. 一種翅柄鐵線蕨快速繁殖的方法，其特征在于所述的方法包括以下步驟： 1) 外植體的選取：取2cm長的根狀莖莖尖，去掉雜質(zhì)及莖尖周圍的絨毛等附屬物； 2) 外植體消毒：將上述莖尖放入盛有自來水的20-25KHZ超聲波清洗機中保持溫度 30-35°C處理30-45min，然后以自來水沖洗10-20min ;隨后在超凈工作臺上以70-75%的酒 精消毒25-35秒，0. 02%升汞溶液中處理5-7分鐘，然后以無菌水沖洗4-5遍，置于無菌培 養(yǎng)皿備用； 3) 初始誘導培養(yǎng)：將滅菌后外植體兩端各剪去2-3mm，莖尖按末端向下插入初始誘導 培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光強l〇〇〇-2500Lx、光周期5-8h/d，溫度25°C ±2°C ;培養(yǎng)4-6d 后將其中未污染的外植體莖尖轉(zhuǎn)接到新的初始誘導培養(yǎng)基中，并繼續(xù)培養(yǎng)12-18d至新芽 長出；所述的初始誘導培養(yǎng)基組成為：MS+6-BA0. 1-0. 2mg/L+NAA0. 01-0. 02mg/L ; 4) 愈傷組織誘導：取初始誘導培養(yǎng)中的芽，放入愈傷組織誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng) 15-20d，條件為暗培養(yǎng)，溫度20°C ±2°C ;所述愈傷組織培養(yǎng)基為：MS+6-BA0. 5-2.0mg/ L+NAA0. 02-0. 5mg/L+PVP5-10mg/L ； 5) 分化和增殖培養(yǎng)：將透明無色的愈傷組織塊放入分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)20-25d，增殖產(chǎn) 生大量叢生苗，培養(yǎng)條件為光強1800-2500LX、光周期8-10h/d，溫度25°C ±2°C ;所述分化 和增殖培養(yǎng)用培養(yǎng)基為：WPM+6-BA0. 1-0. 5mg/L+NAA0. 1-0. 5mg/L+PVP5-10mg/L ; 6) 生根培養(yǎng)：將5)步驟中的叢生苗切割成單個，轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)15-20d后 生根，培養(yǎng)條件為光強1800-2500LX、光周期8-10h/d，溫度25°C ±2°C ;所述生根用培養(yǎng)基 為：1/2MS+IBA0. 1-0. 5mg/L+PVP5-10mg/L ; 7) 煉苗和移栽：將有生根的翅柄鐵線蕨幼苗的培養(yǎng)基瓶蓋打開，室溫下煉苗5-8d后， 取出幼苗，洗去根部培養(yǎng)基，移栽裝有河沙和蛭石基質(zhì)的苗床上，保持溫度20-25°C，濕度 85% -95%，適當遮蔭即可； 所述的WPM培養(yǎng)基配方為：大量元素：硝酸銨NH4N03400mg/L，硫酸鉀K2S0 4900mg/L， 磷酸二氫鉀 KH2P03170mg/L，硫酸鎂 MgS04 · 7H20370mg/L ;鈣鹽：氯化鈣 CaCl2 · 2H2096mg/ L ;四水合硝酸鈣Ca(N03)2 · 4H20556mg/L ;微量元素：硼酸Η3Β036· 2mg/L，硫酸錳 MnS04 · 4Η2022· 5mg/L，硫酸鋅 ZnS04 · 7Η208· 6mg/L，鑰酸鈉 Na2Mo04 · 2Η200· 25mg/L， 硫酸銅CuS04 · 5Η200· 25mg/L ;鐵鹽：乙二胺四乙酸二鈉Na2-EDTA37. 3mg/L，硫酸亞鐵 FeS04 · 7Η2027· 8mg/L ;有機酸：肌醇100mg/L，甘氨酸2mg/L，鹽酸硫胺素lmg/L，鹽酸批口多 醇 0· 5mg/L，煙酸 0· 5mg/L ; 所述的MS培養(yǎng)基配方為：大量元素：硝酸鉀KN031900mg/L，硝酸銨NH4N0 31650mg/L， 磷酸二氫鉀 KH2P03170mg/L，硫酸鎂 MgS04 · 7H20370mg/L ;鈣鹽：氯化鈣 CaCl2 · 2H20440mg/ L ;微量元素：碘化鉀 ΚΙ(λ 83mg/L，硼酸 Η3Β036· 2mg/L，硫酸錳 MnS04 · 4Η2022· 3mg/L，硫酸 鋅 ZnS04 · 7Η208· 6mg/L，鑰酸鈉 Na2Mo04 · 2Η200· 25mg/L，硫酸銅 CuS04 · 5Η200· 025mg/L， 氯化鈷CoCl2 · 6H200. 025mg/L ;鐵鹽：乙二胺四乙酸二鈉 Na2-EDTA37. 25mg/L，硫酸亞鐵 FeS04 · 7Η2027· 85mg/L ;有機酸：肌醇100mg/L，甘氨酸2mg/L，鹽酸硫胺素0· 5mg/L，鹽酸吡 哆醇 0· 5mg/L，煙酸 0· 5mg/L ;蔗糖 30g/L，瓊脂粉 7g/L，pH 為 5. 7 ; 所述的1/2MS培養(yǎng)基配方為：大量元素：硝酸鉀KN039 50mg/L，硝酸銨NH4N038 2 5mg/L，磷 酸二氫鉀KH2P0385mg/L，硫酸鎂MgS04 · 7H20185mg/L ;余同上述MS培養(yǎng)基； 所述的6-BA為6-芐氨基嘌呤； 所述的NAA為α -萘乙酸； 所述的ΙΒΑ為吲哚-3-丁酸； 所述的PVP為聚乙烯吡咯烷酮。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種翅柄鐵線蕨快速繁殖的方法，其特征在于所述步驟3)中初 始誘導培養(yǎng)基組成為：MS+6-BA0. 15mg/L+NAA0. 015mg/L。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種翅柄鐵線蕨快速繁殖的方法，其特征在于所述步驟4)中愈 傷組織培養(yǎng)基為：MS+6-BA1. 5mg/L+NAA0. 2mg/L+PVP8mg/L。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種翅柄鐵線蕨快速繁殖的方法，其特征在于所述步驟5)中分 化和增殖培養(yǎng)用培養(yǎng)基為：WPM+6-BA0. 3mg/L+NAA0. 2mg/L+PVP8mg/L。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種翅柄鐵線蕨快速繁殖的方法，其特征在于所述步驟6)中生 根用培養(yǎng)基為：1/2MS+IBA0. 2mg/L+PVP8mg/L。
【文檔編號】A01H4/00GK104082145SQ201410318402
【公開日】2014年10月8日 申請日期:2014年7月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月4日
【發(fā)明者】戴勤, 王冬梅, 李慧珍 申請人:蕪湖歐標農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司