銀葉薜荔的組織培養(yǎng)快速繁殖的培養(yǎng)基及繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種銀葉薜荔的組織培養(yǎng)快速繁殖的培養(yǎng)基及繁殖方法?；九囵B(yǎng)基采用更適合木本植物的WPM培養(yǎng)基，通過連續(xù)繼代和合適劑量的激素組合實現(xiàn)了銀葉薜荔組織培養(yǎng)中植株的高效再生，另外對外植體無菌處理和外植體無菌苗的培養(yǎng)等做了改進。本發(fā)明操作簡單、污染率低、植株再生成功率高。
【專利說明】銀葉薜荔的組織培養(yǎng)快速繁殖的培養(yǎng)基及繁殖方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)【技術領域】，尤其涉及一種銀葉薜荔的組織培養(yǎng)快速繁殖的培養(yǎng)基及繁殖方法。
【背景技術】
[0002]銀葉薜蒸(Ficus pumia ‘Variegata’ )屬?？聘駥伲＞G木質(zhì)藤本植物,株型小巧，是優(yōu)良的觀葉植物，同時也是極佳的地被植物和綠籬材料，觀賞價值高，品質(zhì)優(yōu)良，具有很高的經(jīng)濟效益，開發(fā)利用前景廣闊，市場前景極為看好。
[0003]銀葉薜荔的常規(guī)繁殖方法是扦插和壓條法，繁殖量有限，且受季節(jié)影響，不能滿足市場需求，采用組織培養(yǎng)快速繁殖技術，可獲得優(yōu)質(zhì)整齊的種苗，為其種苗快速繁殖開辟一條有效途徑。
[0004]關于薜荔組織培養(yǎng)的報道很少，僅見報道的有李方(2000)、姜傲芳(2007)等，但這幾篇報道均存在以下問題:1)組織培養(yǎng)的材料是常見的綠葉薜荔，銀葉薜荔作為作為從國外引進的新優(yōu)觀賞植物，相關的組織培養(yǎng)技術未見報道；2)基本培養(yǎng)基選用B5或MS，導致種苗質(zhì)量下降和移栽存 活率較低，一般僅為85% ；3)從叢生芽的誘導開始，操作較復雜且芽的誘導率都不高(MS培養(yǎng)基芽誘導率為46%，B5培養(yǎng)基芽誘導率為76%)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]針對存在的問題，本發(fā)明提供一種銀葉薜荔的組織培養(yǎng)快速繁殖的培養(yǎng)基及繁殖方法，基本培養(yǎng)基采用更適合木本植物的WPM培養(yǎng)基，通過連續(xù)繼代和合適劑量的激素組合實現(xiàn)了銀葉薜荔組織培養(yǎng)中植株的高效再生，該方法操作簡單、污染率低、植株再生成功率高。
[0006]一種銀葉薜荔的組織培養(yǎng)快速繁殖的培養(yǎng)基,它包括
1)無菌苗培養(yǎng)基=WPM;
2)增殖培養(yǎng)基:WPM+ 6-BA 1.0~3.0 mg /L+ NAA 0.1~0.3mg/L ；
3)生根培養(yǎng)基:1/2WPM+IBA0.5~1.5mg/L ；
在WPM以及1/2WPM中，添加白糖15~30g/L，瓊脂5~8 g/L,調(diào)節(jié)ρΗ5.6~5.8。
[0007]，包括以下步驟:
(一)培養(yǎng)基的配制
1)無菌苗培養(yǎng)基=WPM;
2)增殖培養(yǎng)基:WPM+ 6-BA 1.0~3.0 mg /L+ NAA 0.1~0.3mg/L ；
3)生根培養(yǎng)基:1/2WPM+IBA0.5~1.5mg/L ；
在上述WPM以及1/2WPM中，添加白糖15~30g/L,瓊脂5~8 g/L,調(diào)節(jié)ρΗ5.6~5.8 ;
(二)銀葉薜荔組培苗的培養(yǎng)
I)外植體的選擇:選擇生長健壯幼嫩的銀葉薜荔莖段作為組織培養(yǎng)的外植體，流水沖洗f2h，然后超凈工作臺上用無菌水沖洗干凈，用70%酒精消毒20-40S，升汞溶液或者次氯酸鈉溶液浸泡進行滅菌，然后用無菌水沖洗多次，備用；
2)外植體無菌苗的培養(yǎng):在超凈工作臺上將步驟I)中準備的外植體切成小段，接種到無菌苗培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)；培養(yǎng)條件:培養(yǎng)溫度為25±2°C，光照光強為1500Lx，光照時間12h/d ；
3)待步驟2)中的無菌苗長到3.0 ^4.0 cm高時，切成Icm大小的小段接種到增殖培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)；培養(yǎng)條件:培養(yǎng)溫度為25±2°C，光照光強為1500Lx，光照時間12h/d ；
4)待步驟3)中的小苗長出的長到3.0~6.0cm高時，接種到生根培養(yǎng)基中；培養(yǎng)條件:培養(yǎng)溫度為25±2°C，光照光強為1500Lx，光照時間12h/d ；
5)待步驟4)中的小苗長到高4~8cm且具有至少3條長于2cm的根時，得到可出瓶種植的種苗。
[0008]3、根據(jù)權利要求2所述的利用銀葉薜荔的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，進一步，
(三)組培苗的煉苗與移栽
將步驟5)所述的種苗帶瓶一起移至溫室大棚，先去蓋放置2-5天，出瓶并洗凈根部培養(yǎng)基，移栽入泥炭:珍珠巖按體積3:1的混合基質(zhì)中，管理至成品苗，出圃。
[0009]本發(fā)明的有益效果
一、本發(fā)明操作步驟簡單，不采用叢生芽誘導的復雜步驟，而是直接對外植體進行無菌苗的培養(yǎng)，提高生長效率，降低了污染率，為后續(xù)增殖提供了健壯的幼苗；
二、本發(fā)明通過采用更適宜木本植物的WPM培養(yǎng)基配方，結合不同的激素配比和濃度調(diào)節(jié)，提高了繁殖系數(shù)(5-8倍)，縮短了增殖和生根周期(增殖生長14-20天，生根生長14-20天)；也進一步提高了種苗的質(zhì)量，使移栽成活率高達95%以上；
三、采用本發(fā)明的方法，一般僅需50~60天即可得到種苗，是一種不受季節(jié)等因素影響，高效、快速提供優(yōu)質(zhì)銀葉薜荔種苗的方法，可以加速良種推廣速度，提高田間品種種植產(chǎn)量。
[0010]四、本發(fā)明建立的銀葉薜荔組織培養(yǎng)體系將為工廠化育苗提供理論依據(jù)和技術支撐，方法操作簡單、污染率低、植株再生成功率高。
【具體實施方式】
[0011]通過以下實施例對本發(fā)明作進一步的詳細說明，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。
[0012]實施例1
一種銀葉薜荔的組織培養(yǎng)快速繁殖的方法，依次進行一下步驟:
(一)培養(yǎng)基的配制，包括基本培養(yǎng)基和組培各階段培養(yǎng)基的各組分與每升所含重量
為:
I)基本培養(yǎng)基:無菌苗培育、增殖、壯苗的培養(yǎng)基均采用WPM基本培養(yǎng)基，生根培養(yǎng)采用 1/2WPM。
[0013]2)無菌苗培養(yǎng)基為:WPM+白糖20g/L+瓊脂8g/L，pH5.6~5.8
3)增殖、壯苗培養(yǎng)基為:WPM + 6-ΒΑ 2.0 mg/L + NAA 0.2 mg/L+ 白糖 25g/L+ 瓊脂 5g/L，ρΗ5.6 ~5.8 ο
[0014]4)生根培養(yǎng)基為:1/2WPM + IBA0.5mg/L + 白糖 30g/L+ 瓊脂 5g/L，pH5.6 ~5.8 ;(二)銀葉薜荔組培苗的培養(yǎng)
1)外植體的選擇:選擇生長健壯幼嫩的銀葉薜荔莖段作為組織培養(yǎng)的外植體，先用10%的洗潔精浸泡flOmin，再用流水沖洗l~2h，于超凈工作臺上用無菌水沖洗干凈；用70%酒精消毒30s，0.1%升汞水溶液浸泡5~8min進行滅菌,后用無菌水沖洗5~6次，備用；
2)外植體無菌苗的培養(yǎng):在超凈工作臺上將上述莖段切成Icm大小的小段，接種到無菌苗培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)；培養(yǎng)條件:培養(yǎng)溫度為25±2°C，光照光強為1500Lx，光照時間12h/d ；
3)待步驟2)中的無菌苗長到3.0 ^4.0 cm高時，切成Icm大小的小段接種到增殖培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)；培養(yǎng)條件:培養(yǎng)溫度為25±2°C，光照光強為1500Lx，光照時間12h/d ；
4)待步驟3)中的小苗長出的長到3.0~6.0cm高時，接種到生根培養(yǎng)基中；培養(yǎng)條件:培養(yǎng)溫度為25±2°C，光照光強為1500Lx，光照時間12h/d ；
5)待步驟4)中的小苗長到高4~8cm且具有至少3條長于2cm的根時，得到可出瓶種植的種苗。
[0015](三)組培苗的煉苗與移栽 將步驟5)所述的種苗帶瓶一起移至溫室大棚，先去蓋放置2-5天，出瓶并洗凈根部培養(yǎng)基，移栽入泥炭:珍珠巖按體積3:1的混合基質(zhì)中，管理至成品苗，出圃。
[0016]實施例2
本例中，步驟(一)培養(yǎng)基的配制，包括基本培養(yǎng)基和組培各階段培養(yǎng)基的各組分與每升所含重量為:
無菌苗培養(yǎng)基為:WPM +白糖25g/L+瓊脂5g/L，pH5.6~5.8 ;
增殖培養(yǎng)基為:WPM+ 6-BA3.0 mg/L + NAA 0.2 mg/L+ 白糖 30g/L+ 瓊脂 5g/L，pH5.6 ~
5.8ο
[0017]生根培養(yǎng)基為:1/2WPM+ IBAl.0 mg/L + 白糖 30g/L+ 瓊脂 5g/L，pH5.6 ~5.8 ; 其余步驟、工藝同實施例1。
[0018]實施例3
本例中，步驟(一)培養(yǎng)基的配制，包括基本培養(yǎng)基和組培各階段培養(yǎng)基的各組分與每升所含重量為:
無菌苗培養(yǎng)基為:WPM +白糖30g/L+瓊脂5g/L，pH5.6~5.8 ;
增殖培養(yǎng)基為:WPM+ 6-BA3.0 mg/L + NAA0.3 mg/L+ 白糖 30g/L+ 瓊脂 5g/L，pH5.6 ~
5.8ο
[0019]生根培養(yǎng)基為:1/2WPM+ IBAl.5 mg/L + 白糖 30g/L+ 瓊脂 5g/L，pH5.6 ~5.8 ; 其余步驟、工藝同實施例1。
【權利要求】
1.一種銀葉薜荔的組織培養(yǎng)快速繁殖的培養(yǎng)基，其特征在于，它包括 1)無菌苗培養(yǎng)基=WPM;
2)增殖培養(yǎng)基:WPM+ 6-BA 1.0~3.0 mg /L+ NAA 0.1-θ.3mg/L ； 3)生根培養(yǎng)基:1/2WPM+IBA0.5~1.5mg/L ； 在WPM以及1/2WPM中，添加白糖15~30g/L，瓊脂5~8 g/L，調(diào)節(jié)ρΗ5.6~5.8。
2.一種銀葉薜荔的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步驟: (一)培養(yǎng)基的配制 1)無菌苗培養(yǎng)基=WPM;
2)增殖培養(yǎng)基:WPM+ 6-BA 1.0~3.0 mg /L+ NAA 0.1-θ.3mg/L ； 3)生根培養(yǎng)基:1/2WPM+IBA0.5~1.5mg/L ； 在上述WPM以及1/2WPM中，添加白糖15~30g/L,瓊脂5~8 g/L,調(diào)節(jié)ρΗ5.6~5.8 ; (二)銀葉薜荔組培苗的培養(yǎng) 1)外植體的選擇:選擇生長健壯幼嫩的銀葉薜荔莖段作為組織培養(yǎng)的外植體，流水沖洗f2h，然后超凈工作臺上用無菌水沖洗干凈，用70%酒精消毒20-40S，升汞溶液或者次氯酸鈉溶液浸泡進行滅菌，然后用無菌水沖洗多次，備用； 2)外植體無菌苗的培養(yǎng):在超凈工作臺上將步驟I)中準備的外植體切成小段，接種到無菌苗培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)；培養(yǎng)條件:培養(yǎng)溫度為25±2°C，光照光強為1500Lx，光照時間12h/d ； 3)待步驟2)中的無菌苗長到3.0 ^4.0 cm高時，切成Icm大小的小段接種到增殖培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)；培養(yǎng)條件:培養(yǎng)溫度為25±2°C，光照光強為1500Lx，光照時間12h/d ； 4)待步驟3)中的小苗長出的長到3.0~6.0cm高時，接種到生根培養(yǎng)基中；培養(yǎng)條件:培養(yǎng)溫度為25±2°C，光照光強為1500Lx，光照時間12h/d ； 5)待步驟4)中的小苗長到高4~8cm且具有至少3條長于2cm的根時，得到可出瓶種植的種苗。
3.根據(jù)權利要求2所述的利用銀葉薜荔的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，進一止少， (三)組培苗的煉苗與移栽 將步驟5)所述的種苗帶瓶一起移至溫室大棚，先去蓋放置2-5天，出瓶并洗凈根部培養(yǎng)基，移栽入泥炭:珍珠巖按體積3:1的混合基質(zhì)中，管理至成品苗，出圃。
【文檔編號】A01H4/00GK104026011SQ201410249818
【公開日】2014年9月10日 申請日期:2014年6月9日 優(yōu)先權日:2014年6月9日
【發(fā)明者】鄒清成, 朱開元, 劉慧春, 馬廣瑩, 周江華 申請人:浙江省蕭山棉麻研究所