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一種抑制漆樹外植體污染和褐變的方法

文檔序號:253635閱讀:332來源:國知局
一種抑制漆樹外植體污染和褐變的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及植物組培【技術領域】,尤其是組培中抑制外植體的污染和褐變的方法。本發(fā)明公開了一種抑制漆樹外植體污染和褐變的方法,其特征在于包括使用苯扎氯銨來消毒處理漆樹外植體步驟和將消毒好的材料接種在添加半胱氨酸的White培養(yǎng)基上暗培養(yǎng)的步驟。本發(fā)明的方法抑制漆樹外植體的污染和防止漆樹外植體的褐變。為漆樹組織培養(yǎng)提供充足的無菌外植體,有力地保證了后續(xù)組織培養(yǎng)的成功率,且成本低,適于工業(yè)化生產(chǎn)。
【專利說明】一種抑制漆樹外植體污染和褐變的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及植物組培【技術領域】,尤其是組培中抑制外植體的污染和褐變的方法?!颈尘凹夹g】
[0002]i^^iToxicodendron F6?r/7ici/7w應)是漆樹科(Anacardiacceae)漆屬植物,因產(chǎn)生漆而得名,是我國特有的最具民族特征的經(jīng)濟林木,而生漆是是目前世界上唯一來自綠色植物,在生物酶催化作用下,常溫能固化成膜的生物高分子涂料,已廣泛用于軍工、化工、輕工、石油、采礦、美術等方面,也是我國重要的出口農(nóng)產(chǎn)品。由于漆樹聚集了天然涂料、油料和木材等多種用途,不僅是我國重要的特用經(jīng)濟樹種,也是優(yōu)良的生態(tài)樹種,對我國貧困山區(qū)的經(jīng)濟發(fā)展和農(nóng)民經(jīng)濟收入增加以及生態(tài)環(huán)境建設都有著重要的作用。
[0003]漆樹屬于枝插較為困難的樹種,在良種苗木培育中,主要采用種子繁殖的實生育苗和根萌繁殖的無性育苗。但漆樹屬異花授粉的經(jīng)濟樹種,采用種子繁殖的實生育苗,必然產(chǎn)生較大分化,其優(yōu)良品質的遺傳特性難以保持。同時,漆樹存在天然敗育現(xiàn)象,其繁育方式主要為埋根育苗。埋根育苗的成苗率低,繁殖速度慢,采集根段對母樹易造成一定的傷害,影響產(chǎn)量,不能滿足大規(guī)模繁殖的生產(chǎn)要求。
[0004]當前,快速高效的苗木培育技術成為了推廣漆樹優(yōu)良品種和優(yōu)良單株的瓶頸。因此,探索一條在不損害、不降低漆樹優(yōu)良品種種性的前提下,能滿足生產(chǎn)要求的大規(guī)模苗木繁殖方法是當前漆樹產(chǎn)業(yè)發(fā)展中急需解決的問題。而利用植物組織培養(yǎng)技術快速育苗是一個新興的生物技術應用領域,由于取材對母體無傷害且用量少,繁殖系數(shù)高,繁殖速度快,已成為許多植物商品化 育苗的重要途徑。
[0005]有關漆樹組培快繁技術的研究報道很少,到目前為止,漆樹組織通過愈傷化、繼代、分化及生根進而培育出植株的完整組培快繁技術體系尚未建立。其主要問題是,在進行漆樹的組織培養(yǎng)試驗中,存在嚴重的細菌和真菌污染問題,污染率達到100%。同時,由于漆樹的漆酚含量較高,組織培養(yǎng)中出現(xiàn)嚴重的外植體褐變現(xiàn)象。其莖、葉的切片組織從表面向培養(yǎng)基釋放褐色物質以至培養(yǎng)基逐漸變成成褐色,外植體隨之進一步變褐而死亡,不能存活。
[0006]因此,為了建立高效的漆樹組培快繁技術體系,首要解決漆樹外植體的污染和褐變問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明要解決的是在高效的漆樹組培快繁技術體系中,漆樹外植體的污染和褐變問題,從而提出一種可有效去除表面細菌和內(nèi)生真菌,防止外植體褐變的方法。
[0008]本發(fā)明公開了一種抑制漆樹外植體污染和褐變的方法,其特征在于包括使用苯扎氯銨來消毒處理漆樹外植體步驟和將消毒好的材料接種在添加半胱氨酸的White培養(yǎng)基上暗培養(yǎng)的步驟。
[0009]步驟具體如下:(1)采取生長健壯、無病蟲害的漆樹I~2年生莖段或幼嫩葉片,用毛刷蘸肥皂水輕拭,刷凈材料表面污物,置于燒杯中,自來水沖洗2 h ;
(2)轉入超凈工作臺內(nèi),75%乙醇浸泡20S,無菌水沖洗3 min ;
(3)用1%苯扎氯銨浸泡Imin,無菌水沖洗3 min ;
(4)用0.1%升萊消毒20 min,無菌水沖洗5~8次,每次2 min ;
(5)用消毒過的濾紙吸干水分,將材料切割為Icm莖段或1cm Xlcm的方塊;
(6)接種于添加半胱氨酸的White培養(yǎng)基,比例為IL的White培養(yǎng)基附加100 mg半胱氨酸,PH調(diào)節(jié)為5.8 ;
(7)暗培養(yǎng)2周,溫度20土 2V ;
(8)轉于光照強度1000~2000Lux,光照時間12 h/d,溫度25±2°C的培養(yǎng)條件下常規(guī)培養(yǎng)。
[0010]在本發(fā)明中通過使用苯扎氯銨的消毒處理,有效去除漆樹外植體材料的表面細菌和內(nèi)生真菌;二是將消毒好的材料接種在添加半胱氨酸的White培養(yǎng)基上暗培養(yǎng),防止漆樹外植體的褐變,步驟(1)~(4)目的在于抑制漆樹外植體的污染;步驟(5)~(7)目的在于抑制漆樹外植體的褐變。
[0011]苯扎氯銨是一種陽離子表面活性劑,屬非氧化性殺菌劑,具有廣譜、高效的殺菌滅藻能力。常用于醫(yī)療方面,手術前皮膚的消毒、黏膜和傷口的清洗消毒、創(chuàng)傷和燒傷感染的治療、手術器械的消毒和保存,對人體無毒害作用。另還可用作藥用防腐劑以及工業(yè)水處理劑和勻染劑。但在組織培養(yǎng)領域,尚未見有使用苯扎氯銨進行植物材料消毒,去除外植體內(nèi)生真菌的研究報道。在多次試用數(shù)十種常規(guī)外植體消毒殺菌劑仍不能解決漆樹外植體污染問題的情況下,本發(fā)明利用苯扎氯銨能改變菌體胞漿膜的通透性,使菌體胞漿物質外滲,從而達到殺菌滅菌效果的原理,首次將醫(yī)療常用的消毒劑苯扎氯銨應用在植物組織培養(yǎng)領域,對真菌污染嚴重的漆樹材料進行消毒殺菌處理,取得了良好的效果,苯扎氯銨處理后的漆樹外植體成活率高達96.03~97.85%。
【具體實施方式】
[0012]實施例1、
(1)采取生長健壯、無病蟲害的漆樹I~2年生莖段或幼嫩葉片,用毛刷蘸肥皂水輕拭,刷凈材料表面污物,置于燒杯中,自來水沖洗2 h ;
(2)轉入超凈工作臺內(nèi),75%乙醇浸泡20S,無菌水沖洗3 min ;
(3)用1%苯扎氯銨浸泡Imin,無菌水沖洗3 min ;
(4)用0.1%升萊消毒20 min,無菌水沖洗5~8次,每次2 min ;
(5)用消毒過的濾紙吸干水分,將材料切割為Icm莖段或1cm Xlcm的方塊;
(6)接種于添加半胱氨酸的White培養(yǎng)基,比例為IL的White培養(yǎng)基附加100 mg半胱氨酸,蔗糖30 g,瓊脂粉6 g,pH調(diào)節(jié)為5.8 ;
(7)暗培養(yǎng)2周,溫度20土 2V ;
(8)轉于光照強度1000~2000Lux,光照時間12 h/d,溫度25±2°C的培養(yǎng)條件下常規(guī)培養(yǎng)。
[0013]消毒處理的對比試驗:實驗步驟同上述,在步驟(3)使用常規(guī)的抗真菌劑,制菌霉素和兩性霉素B,與發(fā)明使用的苯扎氯銨分別處理,進行對比試驗,在步驟(6) (7)時,接種于常規(guī)培養(yǎng)基上常規(guī)培養(yǎng)。試驗結果如下表:
【權利要求】
1.一種抑制漆樹外植體污染褐變的方法,其特征在于包括使用苯扎氯銨來消毒處理漆樹外植體步驟和將消毒好的材料接種在添加半胱氨酸的White培養(yǎng)基上暗培養(yǎng)的步驟。
2.如權利要求1所說的抑制漆樹外植體污染褐變的方法,其特征在于具體步驟如下: (1)采取生長健壯、無病蟲害的漆樹I~2年生莖段或幼嫩葉片,用毛刷蘸肥皂水輕拭,刷凈材料表面污物,置于燒杯中,自來水沖洗2 h ; (2)轉入超凈工作臺內(nèi),75%乙醇浸泡20S,無菌水沖洗3 min ; (3)用1%苯扎氯銨浸泡Imin,無菌水沖洗3 min ; (4)用0.1%升萊消毒20 min,無菌水沖洗5~8次,每次2 min ; (5)用消毒過的濾紙吸干水分,將材料切割為Icm莖段或1cm Xlcm的方塊; (6)接種于添加半胱氨酸的White培養(yǎng)基,比例為IL的White培養(yǎng)基附加100 mg半胱氨酸,蔗糖30 g,瓊脂粉6 g,pH調(diào)節(jié)為5.8 ; (7)暗培養(yǎng)2周,溫度20土 2V ; (8)轉于光照強度1000~2000Lux,光照時間12 h/d,溫度25±2°C的培養(yǎng)條件下常規(guī)培養(yǎng)。
【文檔編號】A01H4/00GK104026008SQ201410210142
【公開日】2014年9月10日 申請日期:2014年5月19日 優(yōu)先權日:2014年5月19日
【發(fā)明者】何承忠, 李旦, 趙月明, 段安安, 祝建兵, 廖聲熙, 許玉蘭 申請人:西南林業(yè)大學
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