一種添加萜品醇促進(jìn)樟芝液態(tài)發(fā)酵菌絲生長(zhǎng)及高產(chǎn)萜類化合物的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種添加萜品醇促進(jìn)樟芝液態(tài)發(fā)酵中菌絲生長(zhǎng)及高產(chǎn)萜類化合物的方法，屬于生物工程【技術(shù)領(lǐng)域】，可用于樟芝液態(tài)發(fā)酵高產(chǎn)三萜等萜類化合物及菌絲體。其中，萜品醇的添加方式為：將萜品醇溶解在DMSO或75%乙醇中，再添加到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中；添加量為10~1000μg/L。添加萜品醇后，與對(duì)照組（添加相應(yīng)量的DMSO或75%乙醇）相比：樟芝生物量（g/L）提高6%左右；總萜類化合物產(chǎn)量（μg/L）提高25倍左右；其中三萜產(chǎn)量（mg/L）提高36%左右。三萜理研究實(shí)驗(yàn)表明三萜具有抗癌、抗炎、抗病毒、抗氧化、降血壓及保肝等多種活性，在保肝護(hù)肝方面有極大的應(yīng)用價(jià)值。本發(fā)明可應(yīng)用于樟芝液態(tài)發(fā)酵提高樟芝總萜類化合物產(chǎn)量、三萜產(chǎn)量及菌絲體產(chǎn)量等，進(jìn)而提高樟芝液態(tài)發(fā)酵的生產(chǎn)效率及效益，對(duì)促進(jìn)樟芝工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)具有重大意義。
【專利說明】—種添加萜品醇促進(jìn)樟芝液態(tài)發(fā)酵菌絲生長(zhǎng)及高產(chǎn)萜類化合物的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物工程【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種添加萜品醇促進(jìn)樟芝液態(tài)發(fā)酵菌絲生長(zhǎng)及高產(chǎn)萜類化合物的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]樟芝(An trodi a cinnamomea ),又名牛樟芝或牛樟燕，為臺(tái)灣特有的一種藥用真菌，素有臺(tái)灣“森林紅寶石”之美譽(yù)。長(zhǎng)期以來，樟芝作為傳統(tǒng)藥方被臺(tái)灣民間用于解酒保肝，治療肝痛、肝癌、食物中毒、腹痛、腹瀉、炎癥及皮膚瘙癢等，療效顯著。現(xiàn)在藥理研究證實(shí)樟芝子實(shí)體及發(fā)酵菌絲體提取物在保肝護(hù)肝、治療肝癌、抗氧化及抗腫瘤等方面確有獨(dú)特功效。迄今為止，人們已從樟芝子實(shí)體及發(fā)酵物中分離得到70多種活性物質(zhì)，包括多糖、二萜類、三萜類、留體類及苯環(huán)衍生物等，其藥用價(jià)值遠(yuǎn)高于靈芝、人參、冬蟲夏草等傳統(tǒng)藥材，是名符其實(shí)的藥材王中之王，但樟芝強(qiáng)烈的寄主專一性、自然界數(shù)量稀少及生長(zhǎng)緩慢的特點(diǎn)使得樟芝產(chǎn)品長(zhǎng)期供不應(yīng)求，市場(chǎng)價(jià)格極高，被稱為世界上最昂貴的藥用真菌。
[0003]藥理研究實(shí)驗(yàn)表明:樟芝三萜具有抗癌、抗炎、抗病毒、抗氧化、降血壓及保肝等多種活性。從樟芝固態(tài)發(fā)酵菌絲體乙醇提取物中分離純化的三萜類化合物具有明顯抑制癌細(xì)胞增殖，浸潤(rùn)，轉(zhuǎn)移，誘導(dǎo)凋亡等活性，部分三萜表現(xiàn)出保護(hù)肝臟免受酒精或者四氯化碳的損傷及降低肝纖維化等活性；從樟芝甲醇提取物中分離的粗三萜具有良好的抗氧化作用，能通過清除羥基自由基和過氧化物離子，降低HepG2中H2O2誘導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化作用，清除AAPH/亞油酸系統(tǒng)中的超氧化物離子；野生樟芝和固態(tài)培養(yǎng)樟芝的的甲醇提取物中的羊毛甾烷類三萜化合物能抑制自發(fā)性高血壓中血管緊張素酶的作用，有效降低收縮壓和舒張壓；此外，有小鼠實(shí)驗(yàn)表明，樟芝三萜的提取物還具有解乏、提高運(yùn)動(dòng)機(jī)能的能力。因此，樟芝三萜具有開發(fā)為功能性食品、保健品乃至藥物的巨大潛力。
[0004]本發(fā)明提供了一種添加萜品醇促進(jìn)樟芝液態(tài)發(fā)酵菌絲生長(zhǎng)及高產(chǎn)萜類化合物的方法，使樟芝液態(tài)發(fā)酵生物量(g/L)提高6%左右，總萜類化合物產(chǎn)量(Pg/L)提高25倍左右，其中二帖廣量(mg/L)提聞36%左右，大幅提聞了工業(yè)化生廣棒芝的效率及效益。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是一種添加萜品醇促進(jìn)樟芝液態(tài)發(fā)酵菌絲生長(zhǎng)及高產(chǎn)萜類化合物的方法，可用于樟芝液態(tài)發(fā)酵高產(chǎn)三萜等萜類化合物及樟芝菌絲體等。
[0006]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所提供的具體技術(shù)方案如下:
將萜品醇溶于DMSO或75%乙醇后，再添加到樟芝液體培養(yǎng)基中對(duì)樟芝進(jìn)行液體發(fā)酵培養(yǎng)，以促進(jìn)樟芝菌絲生長(zhǎng)及高產(chǎn)三萜等萜類化合物。
[0007]所述萜品醇添加方式為，先將萜品醇溶解在DMSO或75%乙醇等溶劑中，再添加到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中；
所述職品醇添加量為，10?1000 μ g/L ； 所述樟芝培養(yǎng)方式為液體發(fā)酵培養(yǎng)等。
[0008]本發(fā)明的有益效果如下:
將本發(fā)明提供的萜品醇添加到樟芝液體培養(yǎng)基中對(duì)樟芝進(jìn)行液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)，可使樟芝液態(tài)發(fā)酵生物量(g/L)提高6%左右，總萜類化合物產(chǎn)量(Pg/L)提高25倍左右，其中三萜產(chǎn)量(mg/L)提聞36%左右，大幅提聞了工業(yè)化生廣棒芝的效率及效益。
[0009]顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)前提下，還可以做出其他多種形式的修改、替換或變更。例如將萜品醇溶解在不同的溶劑中添加、添加不同濃度的萜品醇、添加含萜品醇的混合物、應(yīng)用于固態(tài)發(fā)酵等不同培養(yǎng)方法等。
[0010]以下通過實(shí)例形式的【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再做進(jìn)一步詳細(xì)說明，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下實(shí)例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的【技術(shù)領(lǐng)域】均屬于本發(fā)明的范圍。
[0011]表I添加低濃萜品醇對(duì)樟芝液態(tài)發(fā)酵生物量及三萜產(chǎn)量的影響。
[0012]注:表中空白對(duì)照為于發(fā)酵培養(yǎng)基中添加10 yL DMSO溶劑。
[0013]表2添加中濃萜品醇對(duì)樟芝液態(tài)發(fā)酵生物量及三萜產(chǎn)量的影響。
[0014]注:表中空白對(duì)照為于發(fā)酵培養(yǎng)基中添加10 yL DMSO溶劑。
[0015]

【具體實(shí)施方式】
[0016]實(shí)施例1:添加低濃職品醇對(duì)樟芝液態(tài)發(fā)酵生物量及三職產(chǎn)量的影響
1.菌種:以保藏號(hào)為ATCC N0.200183的樟芝菌株作為出發(fā)菌進(jìn)行液態(tài)發(fā)酵。
[0017]2.發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L):葡萄糖33.0，蛋白胨2.8，黃豆粉2.0，MgSO4 1.0, KH2PO42.0，麩皮 2.0, pH 4.5。
[0018]3.萜品醇的添加:將萜品醇溶解在DMSO中，配制成濃度為lg/L的溶液，吸取10μ L添加到發(fā)酵培養(yǎng)基中。
[0019]4.樟芝液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng):按1.0X 15個(gè)/mL的接種量將樟芝孢子在接入裝有100mL發(fā)酵培養(yǎng)基(添加萜品醇)的500 mL三角瓶中，100 rpm，26 °G恒溫培養(yǎng)12 d。對(duì)照為添加10 μ L DMSO溶劑。每組做3個(gè)重復(fù)。
[0020]5.生物量的檢測(cè):將發(fā)酵完的樟芝發(fā)酵產(chǎn)物用4層紗布過濾，并用去離子水反復(fù)洗滌菌球，將獲得的菌球真空冷凍干燥后稱重。
[0021]6.三萜產(chǎn)量的檢測(cè):準(zhǔn)確稱取50 mg樟芝菌絲體，添加500 μ L甲醇過夜提取，取提取液100 μ L于10 mL具塞磨口試管，水浴蒸干，加0.3 mL新鮮配制的5%香草醛-冰醋酸溶液和I mL的高氯酸，60°C反應(yīng)20 min，冰水冷卻，加10 mL冰醋酸，搖勻，在550 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總?cè)频暮?。相關(guān)結(jié)果見表1，添加低濃度萜品醇后，樟芝菌絲體中三萜含量提高14.17%左右。
[0022]表I

【權(quán)利要求】
1.一種添加萜品醇促進(jìn)樟芝液態(tài)發(fā)酵菌絲生長(zhǎng)及高產(chǎn)萜類化合物的方法，其特征在于，先將萜品醇溶解在DMSO或水中，再按10?1000 μ g/L的添加量將萜品醇溶液添加到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行樟芝液體發(fā)酵培養(yǎng)，以提高樟芝液體發(fā)酵的萜類化合物及菌絲體產(chǎn)量。
2.權(quán)利要求1所述的方法，其特征為萜品醇添加方式為，先將萜品醇溶解在DMSO或75%乙醇等溶劑中，再添加到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中。
3.權(quán)利要求1所述的方法，其特征為萜品醇添加量為10?1000μ g/L。
4.權(quán)利要求1所述的方法，其特征為樟芝培養(yǎng)方式為液體發(fā)酵培養(yǎng)。
【文檔編號(hào)】A01G1/04GK104126412SQ201410192394
【公開日】2014年11月5日 申請(qǐng)日期:2014年5月9日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月9日
【發(fā)明者】陸震鳴, 許正宏, 史勁松, 耿燕, 李華祥, 陸育嬌, 錢建瑛 申請(qǐng)人:江南大學(xué)