一種通過組織培養(yǎng)獲得大量秀竹再生植株的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種通過組織培養(yǎng)獲得大量秀竹再生植株的方法，包括采用秀竹當年生枝芽飽滿的半木質化枝條為外植體，經消毒處理后在經改良的誘導培養(yǎng)基上形成誘導芽，然后，將叢生芽接種到改良的增殖培養(yǎng)基上，誘導大量叢芽產生，再在生根培養(yǎng)基上分化出根，形成完整植株，最后移栽到花盆，完成秀竹組織培養(yǎng)過程。本發(fā)明方法填補了秀竹組織培養(yǎng)快速繁殖的空白，為秀竹的園林栽種、大面積綠化奠定了迅速且充足供應的基礎，為秀竹的工廠化大規(guī)模生產提供了可行的方案。
【專利說明】一種通過組織培養(yǎng)獲得大量秀竹再生植株的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)【技術領域】，具體涉及一種通過組織培養(yǎng)獲得大量秀竹再生植株的方法。
【背景技術】
[0002]秀WBambusa)屬簕竹屬，又名馬來簕竹,是以修長葉形以及優(yōu)良的株形作為觀賞性狀的重要觀賞竹之一。常用于制作盆景及庭院栽培作觀賞用，其竹高300-500cm，直徑2.5cm，為著名的觀賞竹種，具有廣闊的市場前景。然而，竹類植物開花間隔期長，很少開花結實，由于竹類植物花粉萌發(fā)率普遍較低，因此種子獲取十分困難。目前竹子繁殖主要以移竹、竹蔸、埋鞭、埋桿、埋節(jié)等傳統(tǒng)方法為主，這些方法具有消耗母竹多、種苗運輸不便、勞動強度大、繁殖系數低等缺點，秀竹也是如此。
[0003]竹子組織培養(yǎng)方面的研究,最早見于1968年，Alexander和Rao關于竹子合子胚離體培養(yǎng)的簡報。國外比較系統(tǒng)開展竹子組織培養(yǎng)工作始于20世紀80年代。1982年，Mehata等(MethaUI，RaoVR, Mohan Ram HY，1982)在第5屆國際植物組織細胞培養(yǎng)會議上首次報道通過胚性愈傷組織獲得印度箣竹Ui￡imbusaa:nmdiimcGa)再生植株。我國的竹子組織培 養(yǎng)工作開展得較晚，20世紀90年代才開始，闕國寧等以黃竹和印度箣竹2種叢生竹的嫩節(jié)作為外植體誘導愈傷組織，最終形成完整植株。陳懿涵等(陳懿涵等，2008)對花桿綠竹iBambusa oIdhamiI f.variega ta )進行了試管快繁研究。2009年,袁金玲(袁金玲，2009)以孝順竹小穗和種胚為外植體，誘導出胚性愈傷組織并成功實現(xiàn)植株再生；但由于竹類植物特殊的生物學特性，目前通過快繁途徑來實現(xiàn)竹類植株的再生方面的報道并不多。

【發(fā)明內容】

[0004]發(fā)明目的:針對現(xiàn)有竹類植物繁殖技術中存在的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種通過組織培養(yǎng)獲得大量秀竹再生植株的方法，克服秀竹組織培養(yǎng)過程中再生難的問題，為秀竹再生植株的培養(yǎng)提供一種方便、快捷和有效的方法。
[0005]技術方案:為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術方案為:
一種通過組織培養(yǎng)獲得大量秀竹再生植株的方法，包括秀竹外植體的準備、叢芽誘導、叢芽增殖和植株再生步驟，具體步驟如下:
(O以秀竹當年生枝芽飽滿的半木質化枝條作為外植體材料，將從室外采集的外植體進行消毒處理后備用；
(2)將無菌的秀竹外植體接種到誘導培養(yǎng)基上進行叢芽誘導，一周后叢生芽形成；其中，誘導培養(yǎng)基為 MS+2mg/L 6-BA +0.5mg/L NAA+0.0Olmg/LTDZ ；
(3)將叢生芽轉接到增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)15天以上，至大量叢芽形成；其中，增殖培養(yǎng)基為 MS+3mg/L 6-BA +0.5mg/L NAA+0.01mg/LTDZ ；
(4)將大量叢芽轉接到生根培養(yǎng)基中，進行生根培養(yǎng)，其中，生根培養(yǎng)基為MS+3.5mg/LNAA+0.3-0.5mg/L 6-BA ；(5)待根生長至5-lOcm時，進行再生苗的煉苗與移栽；移栽花盆后的組培苗置于植物生長室中生長。
[0006]步驟I)中，消毒方法為:先用流水沖洗2_3h，然后用70%乙醇處理45s，再用0.1%HgCl2 浸泡 8min。
[0007]上述培養(yǎng)基組分中，MS為MS培養(yǎng)基成分(Murashige&Skoog medium, 1962,Physiol.Plant 15:473-497 )，NAA 為蔡乙酸(1-Naphthaleneacetic acid), TDZ 為喔二唑苯基脲，6-BA為6-芐氨基腺嘌呤。
[0008]有益效果:與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的優(yōu)點包括:通過不同生長調節(jié)劑的組合，設計出適合秀竹再生的培養(yǎng)基，完成秀竹植株再生的時間最快僅為10周左右。有效解決了秀竹繁殖困難，克服了傳統(tǒng)的母株移栽效率低、運輸成本高等缺點，且不受季節(jié)的限制，為秀竹的快速繁殖和定向生物技術育種奠定了堅實的基礎，對于實現(xiàn)秀竹工廠化生產具有很重要的意義，為秀竹大面積的推廣和利用，充分發(fā)揮其觀賞性提供了快速且充足供應的有效途徑，是一種方便、快捷和有效的秀竹再生植株培養(yǎng)方法。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0009]圖1是秀竹的外植體材料圖；
圖2是接種一周后秀竹枝芽誘導出的少量叢芽圖；
圖3是秀竹增殖15天后的叢芽圖；
圖4是秀竹增殖30天后的叢芽圖；
圖5是秀竹產生大量叢芽圖；
圖6是秀竹再生苗的生根圖；
圖7是移栽成功的秀竹再生植株圖。
【具體實施方式】
[0010]下面結合具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明。
[0011]實施例1
一種通過組織培養(yǎng)獲得大量秀竹再生植株的方法，包括以下步驟:
(1)外植體的選擇:如圖1所示，選取秀竹當年生枝芽飽滿的半木質化枝條作為外植體材料；將從室外采集的外植體先用流水沖洗2-3h，然后用70%乙醇處理45s，再用0.1%HgCl2浸泡8min，通過以上消毒方法處理后的秀竹外植體接種后，無菌率最高，芽誘導成活率高(表1)。
[0012]表1不同消毒劑處理不同時間對外植體培養(yǎng)的影響
【權利要求】
1.一種通過組織培養(yǎng)獲得大量秀竹再生植株的方法，其特征在于，包括秀竹外植體的準備、叢芽誘導、叢芽增殖和植株再生步驟，具體步驟如下: (1)以秀竹當年生枝芽飽滿的半木質化枝條作為外植體材料，將從室外采集的外植體進行消毒處理后備用； (2)將無菌的秀竹外植體接種到誘導培養(yǎng)基上進行叢芽誘導，一周后叢生芽形成；其中，誘導培養(yǎng)基為 MS+2mg/L 6-BA +0.5mg/L NAA+0.001mg/L TDZ ； (3)將叢生芽轉接到增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)15天以上，至大量叢芽形成；其中，增殖培養(yǎng)基為 MS+3mg/L 6-BA +0.5mg/L NAA+0.01mg/L TDZ ； (4)將大量叢芽轉接到生根培養(yǎng)基中，進行生根培養(yǎng)，其中，生根培養(yǎng)基為MS+3.5mg/LNAA+0.3-0.5mg/L 6-BA ； (5)待根生長至5-lOcm時，進行再生苗的煉苗與移栽；移栽花盆后的組培苗置于植物生長室中生長。
2.根據權利要求1所述的通過組織培養(yǎng)獲得大量秀竹再生植株的方法，其特征在于:步驟I)中，消毒方法為:先用流水沖洗2-3h，然后用70%乙醇處理45s，再用0.1% HgCl2-泡 8min。
【文檔編號】A01H4/00GK103907535SQ201410151630
【公開日】2014年7月9日 申請日期:2014年4月16日 優(yōu)先權日:2014年4月16日
【發(fā)明者】林樹燕, 劉國華, 丁雨龍, 郭婷婷, 趙榮, 魏強, 張春霞 申請人:南京林業(yè)大學