一種花葉玉簪快速繁殖的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種花葉玉簪快速繁殖的方法，主要通過外植體的選擇及消毒、繼代增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)以及煉苗移栽的步驟，特別是在繼代過程中，提高了光強(qiáng)，培養(yǎng)基中減少了無機(jī)鹽含量，增加了磷酸二氫鉀和水解乳蛋白，同時(shí)采用了轉(zhuǎn)換繼代培養(yǎng)基的技術(shù)手段，達(dá)到了增殖速度快、遺傳性狀穩(wěn)定、繁殖系數(shù)高的優(yōu)良效果。
【專利說明】一種花葉玉簪快速繁殖的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及玉簪的繁殖方法，特別是一種花葉玉簪的快速繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002]花葉玉簪(Hosta plantaRineu)為百合科玉簪屬植物，多年生宿根花卉,是著名觀葉植物玉簪的變種，對(duì)喜光花卉有極強(qiáng)的互補(bǔ)性，是園林綠化的優(yōu)良品種?；ㄈ~玉簪的引進(jìn)與推廣，極大地提高了其觀賞效果，豐富了園林綠化的景觀色彩。該品種株矮喜蔭，復(fù)色葉面，帶褶皺，金邊銀心相互交織，絢麗多彩的葉片呈現(xiàn)出魔幻般的花團(tuán)錦簇。在城市高大樓群的背側(cè)、立交橋下、庭院大樹遮蔭處、樹籬邊等喜陽花卉生長(zhǎng)不利的地方均可種植。裝盆后，可登堂入室，客廳、書房、大廳、會(huì)議室、窗臺(tái)上均可用它來點(diǎn)綴、裝飾，花葉玉簪的花還可散發(fā)出淡淡幽香，高雅不凡。
[0003]花葉玉簪常規(guī)的繁殖方法主要是通過分株，增殖率低，僅為3~5倍左右，短期內(nèi)要形成大規(guī)模的生產(chǎn)困難較大，如果引進(jìn)種苗，價(jià)格又很高。采用組織培養(yǎng)的繁殖方法，可以很好地解決上述難題，但通過花蕾誘導(dǎo)愈傷組織后形成的芽有變異現(xiàn)象發(fā)生，有些失去了原來的花葉特征，現(xiàn)有技術(shù)中有以下對(duì)花葉玉簪組織培養(yǎng)的研究:“花葉玉簪工廠化組培育苗技術(shù)研究”，吳國智等，《天津農(nóng)業(yè)科學(xué)》，第15卷第5期；“花葉玉簪的組織培養(yǎng)與快速繁殖技術(shù)研究”，郝硯英等，《天津農(nóng)業(yè)科學(xué)》，第12卷第2期等。上述現(xiàn)有技術(shù)雖然公開了不同階段的培養(yǎng)基配方，然而其并沒有公開具體操作條件，并且發(fā)明人在按照上述配方進(jìn)行操作，用于工廠化育苗進(jìn)行大量繁殖時(shí)，特別是在多次繼代增殖過程中，發(fā)現(xiàn)隨著繼代次數(shù)的增加，變異率迅速提高，嚴(yán)重影響了工廠化生產(chǎn)，為此，發(fā)明人進(jìn)行了有針對(duì)性的改進(jìn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題是提供一種花葉玉簪快速繁殖的方法。
[0005]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的一個(gè)技術(shù)方案是:
[0006]一種花葉玉簪快速繁殖的方法，包括:
[0007](1)外植體的選擇及消毒:于3-4月選晴朗天氣直接在大田中取塊莖上的萌發(fā)芽做為外植體，或者在其它月份提前30天左右在地里挖出玉簪洗凈后種植在以干凈的珍珠巖為基質(zhì)的盆中，后放在干凈溫室中只澆清水；用小刀削下塊莖上的芽子，后浸于盛有飽和肥皂水的燒杯中5-10分鐘，再用自來水沖洗到基本無泡沫，然后再重復(fù)上述浸泡沖洗的步驟一次，浸泡時(shí)間縮短至2-4分鐘，自來水沖洗時(shí)間不易過長(zhǎng)以免造成外植體二次污染，轉(zhuǎn)入超凈工作臺(tái)，在超凈臺(tái)中先用70%的酒精浸泡I分鐘，無菌水沖洗2次，用含有兩滴吐溫80的5%次氯酸鈉溶液消毒10-15分鐘，無菌水沖洗5次；再加入含有兩滴吐溫80的0.1 %的升汞消毒10-15分鐘，用無菌水沖洗6次；
[0008](2)接種培養(yǎng):取將步驟⑴所述的外植體，首先剝?nèi)パ康陌~，盡量多剝幾層，切取帶有潛伏芽的外植體接種到接種培養(yǎng)基中，每瓶只接一塊，培養(yǎng)基的PH6.2，培養(yǎng)溫度為23土 1°C，12h/d的光周期，光照強(qiáng)度600Lx左右，培養(yǎng)3-7天開始生長(zhǎng)，所述接種培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L+ 蔗糖 30g/L ；
[0009](3)繼代培養(yǎng):將不污染的帶有新營(yíng)養(yǎng)芽的外植體轉(zhuǎn)入第一繼代培養(yǎng)基中使芽增殖，所述第一繼代培養(yǎng)基是 1/2MS+6-BA0.5-2mg/L+NAA0.1-0.5mg/L+磷酸二氫鉀 150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，繼代5次左右，轉(zhuǎn)入第二繼代培養(yǎng)基或不添加任何激素的空白培養(yǎng)基中繼代一次，所述第二繼代培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.8mg/L+磷酸二氫鉀150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，所述空白培養(yǎng)基為1/2MS+磷酸二氫鉀150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，然后再轉(zhuǎn)入第一繼代培養(yǎng)基中繼續(xù)增殖，根據(jù)需苗量重復(fù)上述步驟；繼代培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基的PH6.2，培養(yǎng)溫度為23土 1°C，14-18h/d的光周期，光照強(qiáng)度2000Lx左右；
[0010](4)生根培養(yǎng):將繼代培養(yǎng)得到的小芽直接轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，較大的苗從中間豎著劈開一分為二再轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基的PH6.2,培養(yǎng)溫度為23±1°C, 12h/d的光周期，光照強(qiáng)度600Lx左右，所述生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.3mg\L+蔗糖20g/L，20天左右生根，當(dāng)根生長(zhǎng)到3cm左右出瓶，根生長(zhǎng)過長(zhǎng)或生根時(shí)間過長(zhǎng)都會(huì)影響移栽成活；
[0011](5)煉苗移栽:先將培養(yǎng)瓶移至溫室，自然條件下煉苗4d，然后解開封口膜，煉苗6d，煉苗完成后取出小苗洗凈根部附著的培養(yǎng)基，移栽到經(jīng)消毒的基質(zhì)中，溫度控制在24-26°C，前7d濕度控制在70%左右，以后逐漸降低濕度，直至將移栽苗置于自然條件下，煉苗移栽期間適當(dāng)遮光，使光照強(qiáng)度為自然光的50%。
[0012]步驟⑷中所述小芽直徑小于0.5mm ;所述較大的芽直徑0.5mm以上。
[0013]步驟(5)所述的基質(zhì)為蛭石。
[0014]本發(fā)明的有益效果是:
[0015](I)本申請(qǐng)以芽作為外植體，發(fā)明人經(jīng)過大量長(zhǎng)期實(shí)踐操作，發(fā)現(xiàn)只有芽作為外植體才能保持花葉的特性；在除春季以外的其它月份，由于玉簪的芽都埋在土中，極易污染，如何防止外植體污染是以后繁殖的關(guān)鍵步驟，因此，發(fā)明人利用干凈的珍珠巖作為基質(zhì)培養(yǎng)花葉玉簪的母株，接種時(shí)每瓶接種一塊，大大降低了外植體污染的概率，因?yàn)?，發(fā)明人在具體操作期間，發(fā)現(xiàn)若每瓶接種3-4塊外植體，只要有一塊外植體污染，即便其它外植體沒有污染，整瓶都不能用于后續(xù)的繼代繁殖；
[0016](2)發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，在工廠化育苗過程中，繼代超過5代左右，開始出現(xiàn)變異，發(fā)明人經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，上述原因是激素累積導(dǎo)致，因此，在繼代過程中，采用了轉(zhuǎn)換培養(yǎng)基的方法，這也是本發(fā)明的重點(diǎn)之一；
[0017](3)花葉玉簪在自然條件下，光照強(qiáng)、光周期長(zhǎng)會(huì)抑制玉簪的生長(zhǎng)，出現(xiàn)焦葉、休眠等現(xiàn)象，因此，玉簪喜歡弱光的條件，而在組培過程中，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)弱光條件反而會(huì)導(dǎo)致組培苗徒長(zhǎng)，而影響芽分化；另外，繼代培養(yǎng)基中，發(fā)明人采用了 1/2MS大量元素，以代替現(xiàn)有技術(shù)中廣泛采用的MS，因?yàn)榘l(fā)明人經(jīng)過大量的試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，MS大量元素同樣容易導(dǎo)致組培苗徒長(zhǎng)，而影響芽分化，因此，發(fā)明人創(chuàng)造性的以1/2MS代替MS，同時(shí)在培養(yǎng)基中增加了能夠促進(jìn)芽分化的磷酸二氫鉀和水解乳蛋白，因此，在繼代過程中，提高了光強(qiáng)，培養(yǎng)基中減少了無機(jī)鹽含量，增加了磷酸二氫鉀和水解乳蛋白，從而抑制了組培苗徒長(zhǎng)，促進(jìn)了芽分化，取得了意料不到的效果；
[0018](4)生根時(shí)，將較大的苗豎著一分為二，每半都能形成完整的植株，因此，在最后階段，使組培苗數(shù)量得到了成倍的增長(zhǎng)，達(dá)到了大量繁殖的目的。[0019]本發(fā)明培養(yǎng)過程速度快，再生頻率較高，變異率較低，周期相對(duì)較短，能較好地保持花葉玉簪的遺傳穩(wěn)定性。
【具體實(shí)施方式】
[0020]下面對(duì)本發(fā)明的較佳實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)闡述，以使本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特征能更易于被本領(lǐng)域技術(shù)人員理解，從而對(duì)本發(fā)明的保護(hù)范圍做出更為清楚明確的界定。
[0021]實(shí)施例一:
[0022]花葉玉簪快速繁殖的方法，包括:
[0023](I)外植體的選擇及消毒:于3月選晴朗天氣直接在大田中取塊莖上的萌發(fā)芽做為外植體，用小刀削下塊莖上的芽子，后浸于盛有飽和肥皂水的燒杯中5分鐘，再用自來水沖洗到基本無泡沫，然后再重復(fù)上述浸泡沖洗的步驟一次，浸泡時(shí)間縮短至2分鐘，自來水沖洗時(shí)間不易過長(zhǎng)以免造成外植體二次污染，轉(zhuǎn)入超凈工作臺(tái)，在超凈臺(tái)中先用70%的酒精浸泡I分鐘，無菌水中洗2次，用含有兩滴吐溫80的5%次氯酸鈉溶液消毒10分鐘，無菌水中洗5次；再用含有兩滴吐溫80的0.1 %的升汞消毒10分鐘,用無菌水沖洗6次；
[0024](2)接種培養(yǎng):取將步驟(1)所述的外植體，首先剝?nèi)パ康陌~，盡量多剝幾層，切取帶有潛伏芽的外植體接種到接種培養(yǎng)基中，每瓶只接一塊，培養(yǎng)基的PH6.2，培養(yǎng)溫度為22°C，12h/d的光周期，光照強(qiáng)度1500Lx左右，培養(yǎng)5天開始生長(zhǎng)，所述接種培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L+ 蔗糖 30g/L ；
[0025](3)繼代培養(yǎng):將不污染的帶有新營(yíng)養(yǎng)芽的外植體轉(zhuǎn)入第一繼代培養(yǎng)基中使芽增殖，所述第一繼代培養(yǎng)基是1/2MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.lmg/L+磷酸二氫鉀150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，繼代5次，轉(zhuǎn)入第二繼代培養(yǎng)基或不添加任何激素的空白培養(yǎng)基中繼代一次，所述第二繼`代培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.8mg/L+磷酸二氫鉀150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，所述空白培養(yǎng)基為1/2MS+磷酸二氫鉀150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，然后再轉(zhuǎn)入第一繼代培養(yǎng)基中繼續(xù)增殖5代；繼代培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基的PH6.2，培養(yǎng)溫度為22°C，14h/d的光周期，光照強(qiáng)度2000Lx左右；
[0026](4)生根培養(yǎng):將繼代培養(yǎng)得到的直徑小于0.5cm的小芽轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中,將直徑0.5cm以上較大的芽豎向劈開一分為二再轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基的PH6.2，培養(yǎng)溫度為22°C，12h/d的光周期，光照強(qiáng)度1500Lx左右，所述生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.3mg\L+蔗糖20g/L，20天左右生根，當(dāng)根生長(zhǎng)到3cm左右出瓶，根生長(zhǎng)過長(zhǎng)或生根時(shí)間過長(zhǎng)都會(huì)影響移栽成活；
[0027](5)煉苗移栽:先將培養(yǎng)瓶移至溫室，自然條件下煉苗4d，然后解開封口膜，煉苗6d，煉苗完成后取出小苗洗凈根部附著的培養(yǎng)基，移栽到經(jīng)消毒的蛭石中，溫度控制在24-26°C，前7d濕度控制在70%左右，以后逐漸降低濕度，直至將移栽苗置于自然條件下，煉苗移栽期間適當(dāng)遮光，使光照強(qiáng)度為自然光的50%。
[0028]實(shí)施例二:
[0029]花葉玉簪快速繁殖的方法，包括:
[0030](I)外植體的選擇及消毒:于4月選晴朗天氣直接在大田中取塊莖上的萌發(fā)芽做為外植體，用小刀削下塊莖上的芽子，后浸于盛有飽和肥皂水的燒杯中7分鐘，再用自來水沖洗到基本無泡沫，然后再重復(fù)上述浸泡沖洗的步驟一次，浸泡時(shí)間縮短至3分鐘，自來水沖洗時(shí)間不易過長(zhǎng)以免造成外植體二次污染，轉(zhuǎn)入超凈工作臺(tái)，在超凈臺(tái)中先用70%的酒精浸泡I分鐘，無菌水沖洗2次，用含有兩滴吐溫80的5%次氯酸鈉溶液消毒12分鐘，無菌水沖洗5次；再加入含有兩滴吐溫80的0.1 %的升汞消毒12分鐘,用無菌水沖洗6次；
[0031](2)接種培養(yǎng):取將步驟(1)所述的外植體，首先剝?nèi)パ康陌~，盡量多剝幾層，切取帶有潛伏芽的外植體接種到接種培養(yǎng)基中，每瓶只接一塊，培養(yǎng)基的PH6.2，培養(yǎng)溫度為23°C，12h/d的光周期，光照強(qiáng)度1500Lx左右，培養(yǎng)3天開始生長(zhǎng)，所述接種培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L+ 蔗糖 30g/L ；
[0032](3)繼代培養(yǎng):將不污染的帶有新營(yíng)養(yǎng)芽的外植體轉(zhuǎn)入第一繼代培養(yǎng)基中使芽增殖，所述第一繼代培養(yǎng)基是1/2MS+6-BA1.2mg/L+NAA0.3mg/L+磷酸二氫鉀150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，繼代5次，轉(zhuǎn)入第二繼代培養(yǎng)基或不添加任何激素的空白培養(yǎng)基中繼代一次，所述第二繼代培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.8mg/L+磷酸二氫鉀150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，所述空白培養(yǎng)基為1/2MS+磷酸二氫鉀150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，然后再轉(zhuǎn)入第一繼代培養(yǎng)基中繼續(xù)增殖3代；繼代培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基的PH6.2，培養(yǎng)溫度為23°C，18h/d的光周期，光照強(qiáng)度2000Lx左右；
[0033](4)生根培養(yǎng):將繼代培養(yǎng)得到的直徑小于0.5cm的小芽轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中,將直徑0.5cm以上較大的芽豎向劈開一分為二再轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基的PH6.2，培養(yǎng)溫度為23°C，12h/d的光周期，光照強(qiáng)度1500Lx左右，所述生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.3mg\L+蔗糖20g/L，20天左右生根，當(dāng)根生長(zhǎng)到3cm左右出瓶，根生長(zhǎng)過長(zhǎng)或生根時(shí)間過長(zhǎng)都會(huì)影響移栽成活；
[0034](5)煉苗移栽:先將培養(yǎng)瓶移至溫室，自然條件下煉苗4d，然后解開封口膜，煉苗6d，煉苗完成后取出 小苗洗凈根部附著的培養(yǎng)基，移栽到經(jīng)消毒的蛭石中，溫度控制在24-26°C，前7d濕度控制在70%左右，以后逐漸降低濕度，直至將移栽苗置于自然條件下，煉苗移栽期間適當(dāng)遮光，使光照強(qiáng)度為自然光的50%。
[0035]實(shí)施例三:
[0036]一種花葉玉簪快速繁殖的方法，
[0037](I)外植體的選擇及消毒:若在8月初開始取外植體，則在7月初在地里挖出玉簪洗凈后種植在以干凈的珍珠巖為基質(zhì)的盆中，后放在干凈溫室中只澆清水；用小刀削下塊莖上的芽子，后浸于盛有飽和肥皂水的燒杯中10分鐘，再用自來水中洗到基本無泡沫，然后再重復(fù)上述浸泡中洗的步驟一次，浸泡時(shí)間縮短至4分鐘，自來水沖洗時(shí)間不易過長(zhǎng)以免造成外植體二次污染，轉(zhuǎn)入超凈工作臺(tái)，在超凈臺(tái)中先用70%的酒精浸泡I分鐘，無菌水中洗2次，用含有兩滴吐溫80的5%次氯酸鈉溶液消毒15分鐘，無菌水沖洗5次；再加入含有兩滴吐溫80的0.1 %的升汞消毒15分鐘,用無菌水中洗6次；
[0038](2)接種培養(yǎng):取將步驟(1)所述的外植體，首先剝?nèi)パ康陌~，盡量多剝幾層，切取帶有潛伏芽的外植體接種到接種培養(yǎng)基中，每瓶只接一塊，培養(yǎng)基的PH6.2，培養(yǎng)溫度為24°C，12h/d的光周期，光照強(qiáng)度1500Lx左右，培養(yǎng)7天開始生長(zhǎng)，所述接種培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L+ 蔗糖 30g/L ；
[0039](3)繼代培養(yǎng):將不污染的帶有新營(yíng)養(yǎng)芽的外植體轉(zhuǎn)入第一繼代培養(yǎng)基中使芽增殖，所述第一繼代培養(yǎng)基是l/2MS+6-BA2mg/L+NAA0.5mg/L+磷酸二氫鉀150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，繼代5次，轉(zhuǎn)入第二繼代培養(yǎng)基或不添加任何激素的空白培養(yǎng)基中繼代I次，所述第二繼代培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.8mg/L+磷酸二氫鉀150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，所述空白培養(yǎng)基為1/2MS+磷酸二氫鉀150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，然后再轉(zhuǎn)入第一繼代培養(yǎng)基中繼續(xù)增殖5代，后轉(zhuǎn)入第二繼代培養(yǎng)基中繼代
I代，然后再轉(zhuǎn)入第一繼代培養(yǎng)基中繼續(xù)增殖2代；繼代培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基的PH6.2，培養(yǎng)溫度為24°C，16h/d的光周期，光照強(qiáng)度2000Lx左右；
[0040](4)生根培養(yǎng):將繼代培養(yǎng)得到的直徑小于0.5cm的小芽轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中,將直徑0.5cm以上較大的芽豎向劈開一分為二再轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基的PH6.2，培養(yǎng)溫度為24°C，12h/d的光周期，光照強(qiáng)度1500Lx左右，所述生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.3mg\L+蔗糖20g/L，20天左右生根，當(dāng)根生長(zhǎng)到3cm左右出瓶，根生長(zhǎng)過長(zhǎng)或生根時(shí)間過長(zhǎng)都會(huì)影響移栽成活；
[0041](5)煉苗移栽:先將培養(yǎng)瓶移至溫室，自然條件下煉苗4d，然后解開封口膜，煉苗6d，煉苗完成后取出小苗洗凈根部附著的培養(yǎng)基，移栽到經(jīng)消毒的蛭石中，溫度控制在24-26°C，前7d濕度控制在70%左右，以后逐漸降低濕度，直至將移栽苗置于自然條件下，煉苗移栽期間適當(dāng)遮光，使光照強(qiáng)度為自然光的50%。
[0042]對(duì)比例:
[0043]對(duì)比例的條件、步驟和實(shí)施例三相同，并且都是繼代14代，唯一的區(qū)別是不轉(zhuǎn)換
培養(yǎng)基，只是在第一繼代培養(yǎng)基中繼代增殖。
[0044]上述三個(gè)實(shí)施例中，花葉玉簪的變異率分別為1.5 %，1.2 %，1.3 %，增值倍數(shù)平均達(dá)到了 4倍左右，生根 率達(dá)到了 96%，最終的成活率達(dá)到了 100%，并且質(zhì)量得到了較好的保證，而對(duì)比例中，由于在繼代培養(yǎng)中沒有轉(zhuǎn)換培養(yǎng)基，繼代到第8代時(shí)，變異率達(dá)到了22%，繼代到第11代時(shí)，變異率達(dá)到了 48%，繼代到第14代時(shí)，變異率達(dá)到了 76%左右，嚴(yán)
重影響了花葉玉簪的工廠化育苗。
[0045]除上述實(shí)施例外，本發(fā)明還可以有其他實(shí)施方式。凡采用等同替換或等效變換形成的技術(shù)方案，均落在本發(fā)明要求的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種花葉玉簪快速繁殖的方法，其特征在于，包括: (1)外植體的選擇及消毒:于3-4月選晴朗天氣直接在大田中取塊莖上的萌發(fā)芽做為外植體，或者在其它月份提前30天左右在地里挖出玉簪洗凈后種植在以干凈的珍珠巖為基質(zhì)的盆中，后放在干凈溫室中只澆清水；用小刀削下塊莖上的芽子，后浸于盛有飽和肥皂水的燒杯中5-10分鐘，再用自來水沖洗到基本無泡沫，然后再重復(fù)上述浸泡沖洗的步驟一次，浸泡時(shí)間縮短至2-4分鐘，自來水沖洗時(shí)間不易過長(zhǎng)以免造成外植體二次污染，轉(zhuǎn)入超凈工作臺(tái)，在超凈臺(tái)中先用70 %的酒精浸泡I分鐘，無菌水沖洗2次，用含有兩滴吐溫80的5%次氯酸鈉溶液消毒10-15分鐘，無菌水沖洗5次；再用含有兩滴吐溫80的0.1%的升汞消毒10-15分鐘，用無菌水沖洗6次； (2)接種培養(yǎng):取將步驟(1)所述的外植體，首先剝?nèi)パ康陌~，盡量多剝幾層，切取帶有潛伏芽的外植體接種到接種培養(yǎng)基中，每瓶只接一塊，培養(yǎng)基的PH6.2，培養(yǎng)溫度為23土 1°C，12h/d的光周期，光照強(qiáng)度600Lx左右，培養(yǎng)3-7天開始生長(zhǎng)，所述接種培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L+ 蔗糖 30g/L ； (3)繼代培養(yǎng):將不污染的帶有新營(yíng)養(yǎng)芽的外植體轉(zhuǎn)入第一繼代培養(yǎng)基中使芽增殖，所述第一繼代培養(yǎng)基是 1/2MS+6-BA0.5-2mg/L+NAA0.1-0.5mg/L+ 磷酸二氫鉀 150mg/L+ 水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，繼代5次左右，轉(zhuǎn)入第二繼代培養(yǎng)基或不添加任何激素的空白培養(yǎng)基中繼代一次，所述第二繼代培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.8mg/L+磷酸二氫鉀150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，所述空白培養(yǎng)基為1/2MS+磷酸二氫鉀150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，然后再轉(zhuǎn)入第一繼代培養(yǎng)基中繼續(xù)增殖，根據(jù)需苗量重復(fù)上述步驟；繼代培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基的PH6.2，培養(yǎng)溫度為23±1°C，14-18h/d的光周期，光照強(qiáng)度1000Lx 左右； (4)生根培養(yǎng):將繼代培 養(yǎng)得到的小芽直接轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，較大的苗從中間豎著劈開一分為二再轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基的PH6.2,培養(yǎng)溫度為23土TC, 12h/d的光周期，光照強(qiáng)度600Lx左右，所述生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.3mg\L+蔗糖20g/L，20天左右生根，當(dāng)根生長(zhǎng)到3cm左右出瓶，根生長(zhǎng)過長(zhǎng)或生根時(shí)間過長(zhǎng)都會(huì)影響移栽成活； (5)煉苗移栽:先將培養(yǎng)瓶移至溫室，自然條件下煉苗4d，然后解開封口膜，煉苗6d，煉苗完成后取出小苗洗凈根部附著的培養(yǎng)基，移栽到經(jīng)消毒的基質(zhì)中，溫度控制在24-26°C，前7d濕度控制在70%左右，以后逐漸降低濕度，直至將移栽苗置于自然條件下，煉苗移栽期間適當(dāng)遮光，使光照強(qiáng)度為自然光的50%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的花葉玉簪快速繁殖的方法，其特征在于，步驟(4)中所述小芽直徑小于0.5mm ;所述較大的芽直徑0.5mm以上。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的花葉玉簪快速繁殖的方法，其特征在于，步驟(5)所述的基質(zhì)為蛭石。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103858770SQ201410130846
【公開日】2014年6月18日 申請(qǐng)日期:2014年4月3日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月3日
【發(fā)明者】張金政, 孫國峰, 李曉東, 吳東啟, 林秦文 申請(qǐng)人:中國科學(xué)院植物研究所