一種詩琳通含笑離體培養(yǎng)再生植株方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種詩琳通含笑的離體培養(yǎng)再生植株方法，包括（1）采取外植體及其材料處理、（2）建立無菌繁殖體、（3）增殖培養(yǎng)、（4）生根培養(yǎng)、（5）移植、（6）幼苗培育六個步驟。本發(fā)明的詩琳通含笑離體培養(yǎng)再生植株方法誘導(dǎo)率和成活率高，步驟簡便可行，對保存和搶救世界珍稀瀕危木蘭科品種和繁殖極度瀕危樹種有著非常迫切和重要意義，為研究木蘭科植物大樹嫩枝進(jìn)行組織培養(yǎng)，克服污染率高、褐化嚴(yán)重、誘導(dǎo)率低、移植成活率低等組培繁殖技術(shù)具有極其寶貴的學(xué)術(shù)研究價值。
【專利說明】一種詩琳通含笑離體培養(yǎng)再生植株方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種的植株的離體培養(yǎng)再生植株方法，具體涉及一種詩琳通含笑的離體培養(yǎng)再生植株方法，屬于生物離體組織培養(yǎng)育苗【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]詩琳通含笑(學(xué)名:Micheliasirindhorniae (Noot.et Chal.) N.H.Xia etX.H.Zhangj )目前，國際上還普遍使用詩琳通木蘭(Magnolia sirindhorniae Noot.&Chalermglin)是世界珍稀瀕危木蘭科品種之一，是極度瀕危樹種，原產(chǎn)地泰國，屬常綠喬木，葉、花都非常芳香，可提煉名貴的植物香精。
[0003]詩琳通含笑為木蘭科常綠大喬木，樹干挺直，高可達(dá)30-35 m,花朵呈象牙白，單朵花可開2-3天，花期在6-7月。詩琳通含笑喜生于高濕的淡水沼澤林中，是木蘭科大家族中唯一能在水中生長的樹種，且生長快速，其木質(zhì)優(yōu)良名貴，泰國當(dāng)?shù)氐幕蕦m貴族都以擁有詩琳通制作的高檔家具或物品為榮。詩琳通含笑是泰國國王因為比較寵愛自己的女兒詩琳通公主，以其名字命名了這個泰國珍貴瀕危木科珍惜樹種。詩琳通含笑也因此被稱為“泰國之寶”，并因其珍貴而稀少被世界自然保護(hù)聯(lián)盟列為保護(hù)樹種。2012年被中國(中山)南方綠化博覽會評為形態(tài)最佳喬木金獎。詩琳通含笑是優(yōu)良的用材和庭園觀賞樹種。
[0004]目前，木蘭科植物的組培繁殖存在污染率高、褐化嚴(yán)重、誘導(dǎo)率低、移植成活率低的難題，而對于詩琳通含笑這類瀕危樹種的繁殖這些更是阻礙其繁殖技術(shù)發(fā)展的瓶頸。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明目的在于提供一種詩琳通含笑的離體培養(yǎng)再生植株方法，以保存和搶救世界珍稀瀕危木蘭科品種，實現(xiàn)極度瀕危木蘭科樹種的繁殖，為研究木蘭科植物大樹嫩枝進(jìn)行組織培養(yǎng)，克服污染率高、褐化嚴(yán)重、誘導(dǎo)率低、移植成活率低等組培繁殖技術(shù)提供寶貴的學(xué)術(shù)研究經(jīng)驗。
[0006]本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案來予以實現(xiàn):一種詩琳通含笑離體培養(yǎng)再生植株方法，包括以下步驟:
(O采取外植體及其材料處理:采取生長健壯,無病蟲害的詩琳通含笑7年生大樹主桿上萌發(fā)出的嫩枝條，經(jīng)保鮮處理后，低溫帶回實驗室；所述材料處理是剪去嫩枝條上的葉片，用新潔爾滅清洗后用流水沖洗，切成2cm帶1-2個腋芽的莖段；
(2)建立無菌繁殖體:將修剪好的莖段經(jīng)培養(yǎng)、誘導(dǎo)，建立無菌繁殖體；
(3)增殖培養(yǎng):將獲得的無菌繁殖體接種于增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)；
(4)生根培養(yǎng):將增殖培養(yǎng)后獲得的叢生芽接種于生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)；
(5)移植；
(6)幼苗培育。
[0007]步驟(2)所述建立無菌繁殖體的具體方法是:將修剪好的莖段在實驗室里用0.1%的氯化汞消毒滅菌3-10分鐘，再用無菌水洗3-4次，一瓶一段接種于初代培養(yǎng)基MSl上，在室溫為20-30°C，每日光照8-12小時，光照強(qiáng)度800-2000LX的條件下培養(yǎng)15-30天，從葉腋萌發(fā)出綠芽，剪取綠芽接種于增殖培養(yǎng)基MS2上，誘導(dǎo)出腋芽和不定芽并能夠連續(xù)生長繁殖，完成無菌繁殖體的建立。
[0008]步驟(3)所述增殖培養(yǎng)是:將無菌繁殖體接種于增殖培養(yǎng)基MS2中，放置在人為控制室溫為20-30°C，每日光照8-12小時，光照強(qiáng)度800-2000LX的條件下培養(yǎng)15-30天，從葉腋萌發(fā)出無菌綠芽，剪取綠芽接種于增殖培養(yǎng)基MS2上，芽叢增殖，培養(yǎng)15-30天后，芽叢增殖倍數(shù)2-4倍，在無菌條件下再將其分割轉(zhuǎn)接，經(jīng)過反復(fù)繼代培養(yǎng)擴(kuò)大繁殖。 [0009]步驟(4)所述生根培養(yǎng)是:當(dāng)叢生芽高在15mm以上時，將芽從基部切下，分割成單株接種于生根培養(yǎng)基MS3中，放置在室溫20-30°C，每日光照8-12小時，光照強(qiáng)度在1000-10000LX的條件下15-20天，苗開始出根，再放置到75%遮蔭條件下溫室中促根并煉苗20-30天，生根瓶苗葉片展開，莖芽生長健壯，形成完整植株。
[0010]步驟(5)所述移植是指將生根的組培瓶苗移栽到育苗杯中，完成瓶苗從人工控制培養(yǎng)條件給養(yǎng)到幼苗自養(yǎng)的過程，具體方法是:將瓶中的幼苗小心取出，洗凈黏在苗上的培養(yǎng)基,移植到填滿基質(zhì)的育苗杯中，每一杯種植一株苗,移植覆土深度剛好蓋住根系,一般不超過I厘米，壓緊基質(zhì)，使苗根和基質(zhì)緊密接觸，移植完成后淋透定苗水。
[0011]所述基質(zhì)是由泥炭土與椰糠按2:1的比例充分混合得到。
[0012]所述移植是將根系生長良好的瓶苗移入溫室馴化后再進(jìn)行，將開始出根的瓶苗直接移入溫室馴化，瓶苗在溫室里馴化、煉苗的過程中繼續(xù)生長出根，可提前8-12天將馴化好的瓶苗進(jìn)行移植。
[0013]步驟(6)所述幼苗培育是指瓶苗在移植后保持基質(zhì)濕潤，空氣相對濕度在95%以上，防止葉片失水，之后逐步控制基質(zhì)水分，相對濕度控制在80%-60%，控制培養(yǎng)溫度25-28 °C，蔭棚用70%的遮光網(wǎng)遮光。
[0014]步驟(6)所述幼苗培育是在移植后第三天采用0.1%百菌清噴霧消毒滅菌，能有效防止病菌滋生，之后每隔10-15天噴霧一次；當(dāng)有新芽萌發(fā)、新根長出時，噴施1500倍營養(yǎng)液，根據(jù)幼苗生長狀況，每隔半個月噴施一次。
[0015]步驟(6 )所述幼苗培育是移植后生長穩(wěn)定了，長出新芽和新根后，逐步增加光照強(qiáng)度，直到進(jìn)行全光照常規(guī)管理，幼苗培育至15厘米高時，移至大一號花盆培育大苗。
[0016]本發(fā)明所述MSl培養(yǎng)基配方為初代培養(yǎng)基，可按每I升含以下營養(yǎng)元素的藥品種類和質(zhì)量的比例，溶解于水中配制成初代培養(yǎng)基，PH調(diào)至5.8
【權(quán)利要求】
1.一種詩琳通含笑離體培養(yǎng)再生植株方法，其特征在于:包括以下步驟: (O采取外植體及其材料處理:采取生長健壯,無病蟲害的詩琳通含笑7年生大樹主桿上萌發(fā)出的嫩枝條，經(jīng)保鮮處理后，低溫帶回實驗室；所述材料處理是剪去嫩枝條上的葉片，用新潔爾滅清洗后用流水沖洗，切成2cm帶1-2個腋芽的莖段； (2)建立無菌繁殖體:將修剪好的莖段經(jīng)培養(yǎng)、誘導(dǎo)，建立無菌繁殖體； (3)增殖培養(yǎng):將獲得的無菌繁殖體接種于增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)； (4)生根培養(yǎng):將增殖培養(yǎng)后獲得的叢生芽接種于生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)； (5)移植； (6)幼苗培育。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的詩琳通含笑離體培養(yǎng)再生植株方法，其特征在于:步驟(2)所述建立無菌繁殖體的具體方法是:將修剪好的莖段在實驗室里用0.1%的氯化汞消毒滅菌3-10分鐘，再用無菌水洗3-4次，一瓶一段接種于初代培養(yǎng)基MSl上，在室溫為20-30°C，每日光照8-12小時，光照強(qiáng)度800-2000LX的條件下培養(yǎng)15-30天，從葉腋萌發(fā)出綠芽，剪取綠芽接種于增殖培養(yǎng)基MS2上，誘導(dǎo)出腋芽和不定芽并能夠連續(xù)生長繁殖，完成無菌繁殖體的建立。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的詩琳通含笑離體培養(yǎng)再生植株方法，其特征在于:步驟(3)所述增殖培養(yǎng)是:將無菌繁殖體接種于增殖培養(yǎng)基MS2中，放置在人為控制室溫為20-30°C，每日光照8-12小時，光照強(qiáng)度800-2000LX的條件下培養(yǎng)15-30天，從葉腋萌發(fā)出無菌綠芽，剪取綠芽接種于增殖培養(yǎng)基MS2上，芽叢增殖，培養(yǎng)15-30天后，芽叢增殖倍數(shù)2-4倍，在無菌條件下再將其分割轉(zhuǎn)接，經(jīng)過反復(fù)繼代培養(yǎng)擴(kuò)大繁殖。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的詩琳通`含笑離體培養(yǎng)再生植株方法，其特征在于:步驟(4)所述生根培養(yǎng)是:當(dāng)叢生芽高在15mm以上時，將芽從基部切下，分割成單株接種于生根培養(yǎng)基MS3中，放置在室溫20-30°C，每日光照8-12小時，光照強(qiáng)度在1000-10000LX的條件下15-20天，苗開始出根，再放置到75%遮蔭條件下溫室中促根并煉苗20-30天，生根瓶苗葉片展開，莖芽生長健壯，形成完整植株。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的詩琳通含笑離體培養(yǎng)再生植株方法，其特征在于:步驟(5)所述移植是指將生根的組培瓶苗移栽到育苗杯中，完成瓶苗從人工控制培養(yǎng)條件給養(yǎng)到幼苗自養(yǎng)的過程，具體方法是:將瓶中的幼苗小心取出，洗凈黏在苗上的培養(yǎng)基，移植到填滿基質(zhì)的育苗杯中，每一杯種植一株苗，移植覆土深度剛好蓋住根系，一般不超過I厘米，壓緊基質(zhì)，使苗根和基質(zhì)緊密接觸，移植完成后淋透定苗水。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的詩琳通含笑離體培養(yǎng)再生植株方法，其特征在于:所述基質(zhì)是由泥炭土與椰糠按2:1的比例充分混合得到。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的詩琳通含笑離體培養(yǎng)再生植株方法，其特征在于:所述移植是將根系生長良好的瓶苗移入溫室馴化后再進(jìn)行，將開始出根的瓶苗直接移入溫室馴化，瓶苗在溫室里馴化、煉苗的過程中繼續(xù)生長出根，可提前8-12天將馴化好的瓶苗進(jìn)行移植。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的詩琳通含笑離體培養(yǎng)再生植株方法，其特征在于:步驟(6)所述幼苗培育是指瓶苗在移植后保持基質(zhì)濕潤，空氣相對濕度在95%以上，防止葉片失水，之后逐步控制基質(zhì)水分，相對濕度控制在80%-60%，控制培養(yǎng)溫度25-28 °C，蔭棚用70%的遮光網(wǎng)遮光。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的詩琳通含笑離體培養(yǎng)再生植株方法，其特征在于:步驟(6)所述幼苗培育是在移植后第三天采用0.1%百菌清噴霧消毒滅菌，能有效防止病菌滋生，之后每隔10-15天噴霧一次；當(dāng)有新芽萌發(fā)、新根長出時，噴施1500倍營養(yǎng)液，根據(jù)幼苗生長狀況，每隔半個月噴施一次。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的詩琳通含笑離體培養(yǎng)再生植株方法，其特征在于:步驟(6)所述幼苗培育是移植后生長穩(wěn)定了，長出新芽和新根后，逐步增加光照強(qiáng)度，直到進(jìn)行全光照常規(guī)管理，幼苗培育至15厘米高時， 移至大一號花盆培育大苗。
【文檔編號】A01H4/00GK103718969SQ201410041803
【公開日】2014年4月16日 申請日期:2014年1月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月28日
【發(fā)明者】楊小紅, 黃少偉, 莫曉勇, 朱開甫, 董君 申請人:華南農(nóng)業(yè)大學(xué)