草烏粗提物及有效成分的制備和應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種草烏粗提物及從中分離得到的化合物neoechinulinA在抗植物病毒中的應(yīng)用，本發(fā)明所述的草烏粗提物是以干燥草烏(AconitumcarmichaeliDebx.)為原料，粉碎過(guò)篩后以濃度為70~95%的乙醇浸泡，浸泡液經(jīng)減壓濃縮得到乙醇浸膏，加少量水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，余下水層，所得的各種萃取液減壓濃縮得到的相應(yīng)浸膏，化合物neoechinulinA是通過(guò)活性跟蹤從草烏乙酸乙酯層中分離得到，草烏粗提物和化合物neoechinulinA對(duì)黃瓜花葉病毒病、煙草花葉病毒病、南方水稻黑條矮縮病毒病和水稻條紋葉枯病毒等植物病毒有較好的防治作用。
【專(zhuān)利說(shuō)明】草烏粗提物及有效成分的制備和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種草烏粗提物及從中分離得到的化合物neoechinulin A在抗植物病毒中的應(yīng)用，屬于植物保護(hù)中植物源農(nóng)藥領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]近年來(lái)，植物病毒病的危害日益嚴(yán)重，給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，據(jù)報(bào)道，每年僅因黃瓜花葉病毒病、煙草花葉病毒病、水稻條紋葉枯病毒和南方水稻黑條矮縮病毒病等煙草花葉病毒病造成的損失就高達(dá)I億多美元。目前對(duì)于病毒病的防治還沒(méi)有非常有效的方法，已有的防治農(nóng)作物病毒病的商品藥品種少，防治效果也不夠理想。研究發(fā)現(xiàn)，很多天然植物中含有的化學(xué)成分具有高效、低毒的特點(diǎn)，從植物中尋找具有較高活性的先導(dǎo)化合物已成為開(kāi)發(fā)植物病毒抑制劑的重要途徑之一。
[0003]草烏為毛茛科植物烏頭的干燥塊根，別名:五毒根、斷腸草、鴨頭、藥羊蒿、雞頭草、百步草。草烏的植物基源較多，包括北烏頭(Aconitum kusnezoffii Reichb)、烏頭{Aeoniturn Carmichaeli Debx.)、華烏頭{Aconiturn Chinense Paxt)、黃草烏{AconiturnVilmorinianum Kowar)、紫草烏{Aconitum Delavyl Franch)等的塊根，主要為野生品種。烏頭屬植物約有350種，主要分布于亞洲、歐洲和北美洲，我國(guó)大約有167種，大部分分布在云南北部、四川西部、西藏東部的高山地帶。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，草烏主要含有的化學(xué)成分為生物堿、黃酮、留醇、揮發(fā)油等，其中以二萜生物堿居多。
[0004]2Ol3年，黃烈軍等報(bào)道了從巖烏頭(Aconitum recemulosum Franch)中分離得到的13個(gè)二職生物堿的抗煙草花葉病毒(tobacco mosaic virus, TMV)活性,在濃度為30 //g/mL 時(shí)，化合物 racemulosine A、sachaconitine、circinasine A、talatisamine、8-decetylyunaconitine和14_acetytalatisamine的抗TMV活性均優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照藥劑寧南霉素，化合物 racemulosine A、sachaconitine、circinasine A 和 14-acetytalatisamine的抗TMV侵染活性尤其顯著,抑制率在60%以上；化合物racemulosine A和talatisamine對(duì)TMV增殖的抑制活性明顯比陽(yáng)性對(duì)照藥好。(黃烈軍，葛永輝，劉開(kāi)興，張建新，郝曉江，巖烏頭的化學(xué)成分及對(duì)煙草花葉病毒病的活性，農(nóng)藥，2013，52(4)，295-297.)這說(shuō)明烏頭屬植物在抗植物病毒方面具有很大的研究發(fā)展空間。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的 目的是提供草烏粗提物和化合物neoechinulin A的制備和應(yīng)用。本發(fā)明的發(fā)明人在研究中發(fā)現(xiàn)草烏粗提物對(duì)植物病毒病如黃瓜花葉病毒病、水稻條紋葉枯病毒和南方水稻黑條矮縮病毒病等具有較好抑制作用，通過(guò)活性跟蹤對(duì)草烏粗提物進(jìn)行分離，從乙酸乙酯層分離得到對(duì)植物病毒病具有較好抑制作用的化合物neoechinulin A。
[0006]本發(fā)明所述的草烏粗提物包括草烏總浸膏、草烏石油醚層提取物、草烏乙酸乙酯層提取物、草烏正丁醇層提取物和草烏水層提取物，其特征在于以干燥草烏(Aconitumcarmichaeli Debx.)為原料，粉碎過(guò)篩后以濃度為70-95%的乙醇浸泡，浸泡液經(jīng)減壓濃縮，回收乙醇后得到的乙醇浸膏，稱(chēng)為草烏總浸膏，再將乙醇浸膏加少量水分散，依次用石
油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，余下水層，所得各種萃取液減壓濃縮得到相應(yīng)浸膏，分別稱(chēng)
為草烏石油醚層提取物，草烏乙酸乙酯層提取物，草烏正丁醇層提取物，草烏水層提取物，
加上草烏總浸膏，統(tǒng)稱(chēng)草烏粗提物。取乙酸乙酯層浸膏用乙酸乙酯溶解，100-200目硅膠拌
樣，200-300目硅膠裝柱，用中壓柱層析分離，以石油醚:乙酸乙酯=1:(T0:1(V:V)的洗脫
液梯度洗脫，TLC點(diǎn)板跟蹤，收集相同極性的洗脫液，得Fr 2-1至Fr 2-6 6個(gè)組分。其中
Fr 2-4用100-200目硅膠拌樣，200-300目硅膠裝柱，常壓柱層析分離，以二氯甲烷:甲醇
=l:(Tl:1 (V:V)的洗脫液梯度洗脫,得到化合物neoechinulin A,結(jié)構(gòu)式如下:
【權(quán)利要求】
1.一種抗植物病毒的草烏粗提物及有效成分，其特征是以干燥草烏iAconitumcarmichaeli Debx.)為原料，以濃度為70~95%的乙醇浸泡，浸泡液經(jīng)減壓濃縮，回收乙醇后得到的乙醇浸膏，稱(chēng)為草烏總浸膏，再將乙醇浸膏加少量水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，余下水層，所得各種萃取液減壓濃縮得到的浸膏加上乙醇浸膏，統(tǒng)稱(chēng)草烏粗提物；取乙酸乙酯層浸膏用乙酸乙酯溶解，100~200目硅膠拌樣，200~300目硅膠裝柱，用中壓柱層析分離，以石油醚:乙酸乙酯=1:0~0:1(V:V)的洗脫液梯度洗脫，TLC點(diǎn)板跟蹤，收集相同極性的洗脫液，得Fr 2-1至Fr 2-6 6個(gè)組分； 其中Fr 2-4用100~200目硅膠拌樣，200~300目硅膠裝柱，常壓柱層析分離，以二氯甲燒:甲醇=1:0~1:1 (V:V)的洗脫液梯度洗脫,得到化合物neoechinulin A,結(jié)構(gòu)式如下:

2.按照權(quán)利要求1所述的草烏粗提物及有效成分的應(yīng)用，其特征在于防治農(nóng)作物病害中的藥物或藥劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述草烏粗提物及有效成分的應(yīng)用，其特征在于草烏粗提物和化合物neoechinulin A用作藥物時(shí),可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述草烏粗提物及有效成分的應(yīng)用，其特征在于農(nóng)作物為蔬菜和禾谷類(lèi)作物。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述草烏粗提物及有效成分的應(yīng)用，其特征在于所述的農(nóng)作物病害為黃瓜花葉病毒病、玉米條紋葉枯病毒、馬鈴薯X病毒、馬鈴薯Y病毒、水稻矮縮病毒病和南方水稻黑條矮縮病毒病。
6.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的應(yīng)用，其特征在于所述的農(nóng)作物病害包括煙草花葉病毒病、黃瓜花葉病毒病、玉米條紋葉枯病毒、馬鈴薯X病毒、馬鈴薯Y病毒、水稻矮縮病毒病和南方水稻黑條矮縮病毒病。
【文檔編號(hào)】A01P1/00GK103788074SQ201410031796
【公開(kāi)日】2014年5月14日 申請(qǐng)日期:2014年1月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月23日
【發(fā)明者】胡德禹, 朱蕓瑩, 宋寶安, 薛偉, 陳卓, 王貞超 申請(qǐng)人:貴州大學(xué)