一種促進(jìn)蘭州百合組培鱗莖膨大發(fā)育的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種促進(jìn)蘭州百合組培鱗莖膨大發(fā)育的方法，屬于植物種苗繁育領(lǐng)域，具體來(lái)講涉及一種促進(jìn)蘭州百合組織培養(yǎng)中誘導(dǎo)鱗莖發(fā)育的方法。本發(fā)明通過(guò)改善蘭州百合組培快繁技術(shù)，即叢芽增殖、小鱗莖的誘導(dǎo)、小鱗莖的膨大、鱗莖的膨大與壯苗及完整植株的形成四個(gè)階段促使其鱗莖膨大發(fā)育生長(zhǎng)。操作過(guò)程與培養(yǎng)試管苗類(lèi)似，培養(yǎng)完成后獲得具有膨大鱗莖的完整植株，可作為生產(chǎn)用的繁殖原始材料直接移入大田種植，大幅度提高了繁殖系數(shù)，縮短了蘭州百合的生長(zhǎng)周期，有利于蘭州百合的廣泛種植和推廣，具有良好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種促進(jìn)蘭州百合組培鱗莖膨大發(fā)育的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物栽培領(lǐng)域，具體來(lái)講是一種促進(jìn)蘭州百合組織培養(yǎng)中誘導(dǎo)鱗莖發(fā)育的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]蘭州百合屬多年生草本植物，因其地下鱗莖由數(shù)十瓣鱗片相疊抱合，有百片合成之意而得名。蘭州百合是全國(guó)四大百合品系之一，同時(shí)也是唯一味甜可食用的百合，作為食用百合，其風(fēng)味甘美、無(wú)苦味，被稱(chēng)之為“甜百合”，其鱗片包合緊密，色澤潔白、肉質(zhì)肥厚，有很高的食用、藥療和觀賞價(jià)值。
[0003]蘭州百合生長(zhǎng)周期漫長(zhǎng)，大田生產(chǎn)中，由鱗片萌發(fā)的小鱗莖生長(zhǎng)至商品種球，需要六年時(shí)間。百合主要靠小鱗莖進(jìn)行分株繁殖，一株百合每年只能得到廣3個(gè)小鱗莖，小鱗莖經(jīng)自然發(fā)育成完整的植株，大概需要三年的時(shí)間，繁殖速度非常有限，并且容易造成鱗莖退化。
[0004]當(dāng)前關(guān)于蘭州百合組織培養(yǎng)技術(shù)報(bào)道其共同點(diǎn)如下:外植體多采用鱗片，主要培養(yǎng)階段有增殖培養(yǎng)、鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)、及生根培養(yǎng)；增殖培養(yǎng)中以基礎(chǔ)培養(yǎng)基MS添加6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑為主，鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)中以基礎(chǔ)培養(yǎng)基MS添加6-BA、NAA、IBA、KT為主，并沒(méi)有進(jìn)行鱗莖的膨大培養(yǎng)；王麗艷等在《園林園藝》上的文章《蘭州百合與川百合試管苗結(jié)鱗莖研究》，報(bào)道了通過(guò)配方為1/2MS+0.5mg/L IBA的培養(yǎng)基進(jìn)行試管內(nèi)結(jié)鱗莖培養(yǎng)可形成直徑Icm的蘭州百合鱗莖的方法。當(dāng)前，研究蘭州百合鱗莖膨大發(fā)育成為培育繁殖原始材料的 研究熱點(diǎn)，在應(yīng)用組培鱗莖作為種球繁殖原始材料進(jìn)行生產(chǎn)應(yīng)用的方法，還未見(jiàn)報(bào)道。
[0005]專(zhuān)利CN03135142.5公開(kāi)了一種蘭州百合的快速繁殖方法，具體制備方法為:選取蘭州百合鱗片、葉和根的切段，采用外植體消毒后，接入含不同植物激素的培養(yǎng)基，誘導(dǎo)產(chǎn)生芽，繼代培養(yǎng)后移入生根培養(yǎng)基，當(dāng)試管苗高約3-5厘米時(shí)移栽入種植練苗基質(zhì)，鱗片不定芽的誘導(dǎo)和快殖培養(yǎng)基為MS、BA2mg/L、NAA0.2mg/L，根、葉誘導(dǎo)和繁殖培養(yǎng)基為MS、BA2mg/L、NAA0.4mg/L,試管苗生根培養(yǎng)基為1/2MS、NAA0.3mg/L，溫度27±2°C，光照強(qiáng)度2000LX，光照時(shí)間12h/d，pH為5.8。該發(fā)明能使蘭州百合鱗片繁殖發(fā)育成球莖為2~4mm的百合苗，但球莖較小，無(wú)法直接進(jìn)入大田種植。
[0006]蘭州百合組織培養(yǎng)體系中通常以初代誘導(dǎo)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)來(lái)獲得組培苗，獲得的組培苗可移栽到大田生長(zhǎng)，難以發(fā)育成可生產(chǎn)用的繁殖原始材料，主要原因?yàn)榻M培苗不具備鱗莖或鱗莖太弱小，所以在蘭州百合組培體系中，研究鱗莖的發(fā)育膨大成為了培育種球的主要熱點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]在上述背景下，本發(fā)明通過(guò)改善蘭州百合組培快繁技術(shù)，促使其鱗莖膨大發(fā)育生長(zhǎng)。操作過(guò)程與培養(yǎng)試管苗類(lèi)似，培養(yǎng)完成后獲得具有膨大鱗莖的完整植株，可作為生產(chǎn)用的繁殖原始材料直接移入大田種植，本發(fā)明縮短了蘭州百合的生長(zhǎng)周期，有利于蘭州百合廣泛種植和推廣，具有良好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。
[0008]本發(fā)明提供了一種促進(jìn)蘭州百合組培鱗莖膨大發(fā)育的方法，操作較為簡(jiǎn)單，對(duì)環(huán)境及設(shè)備要求低，具體實(shí)施方法如下:
1、獲取蘭州百合外植體:選擇于10月中旬時(shí)挖取的蘭州百合種球，剝?nèi)ナ軅镊[片，選擇外、中層干凈的鱗片，用自來(lái)水沖洗后晾干備用。
[0009]2、消毒接種:將步驟I晾干的鱗片放到超凈工作臺(tái)上，使用75%乙醇浸泡2(T30秒鐘，再用0.1%的升汞溶液浸泡1(T12分鐘，然后用無(wú)菌水沖洗3次，將沖洗干凈的鱗片置于超凈工作臺(tái)上晾干。
[0010]3、蘭州百合組織培養(yǎng)誘導(dǎo)鱗莖膨大發(fā)育，采用四階段培養(yǎng)的技術(shù)路線誘導(dǎo)鱗莖形成并發(fā)育膨大生長(zhǎng):
①第一階段叢芽增殖:將步驟2晾干的鱗片接種到Fl培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)周期為30天，培養(yǎng)溫度為25 °C，培養(yǎng)光照強(qiáng)度為200(T4000LuX，光周期為9h Light/15h Dark，所述Fl培養(yǎng)基包含MS培養(yǎng)基、0.2~0.4mg/L 6-芐氨基腺嘌呤、
0.04、.06mg/L萘乙酸、2(T40g/L蔗糖和4.5g/L瓊脂，該階段培養(yǎng)進(jìn)行2次以上；
②第二階段小鱗莖的誘導(dǎo):將步驟3第①步驟所得的叢芽苗切割除去葉片，將余下的芽體轉(zhuǎn)接到F2培養(yǎng)基，以培養(yǎng)基F2為鱗莖誘導(dǎo)發(fā)育培養(yǎng)基進(jìn)行鱗莖的誘導(dǎo)形成及增殖，培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)周期為3(T40天，培養(yǎng)溫度為25°C，培養(yǎng)光照強(qiáng)度為200(T4000LuX，光周期為9h Light/15h Dark，所述F2培養(yǎng)基包含MS培養(yǎng)基、8(Tl00g/L蔗糖和4.5g/L瓊脂；
③第三階段小鱗莖的膨大:將步驟3第②步驟所得的分化鱗莖切割下來(lái)，并切除葉片，將其移植到F3培養(yǎng)基，以培養(yǎng)基F3為鱗莖膨大發(fā)育培養(yǎng)基進(jìn)行小鱗莖的膨大生長(zhǎng)，培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)周期為30~40天，培養(yǎng)溫度為25°C，培養(yǎng)光照強(qiáng)度為200(T4000LuX，光周期為9hLight/15h Dark，所述F3培養(yǎng)基包含1.5倍MS培養(yǎng)基、0.12^0.18mg/L 6-芐氨基腺嘌呤、0.12~0.18mg/L赤霉素、60~80g/L鹿糖和4.5g/L瓊脂；
④第四階段鱗莖的膨大與壯苗及完整植株的形成:將步驟3第③步驟所得的膨大鱗莖切割下來(lái)，并切除葉片，將其移至到F4培養(yǎng)基，以培養(yǎng)基F4為鱗莖進(jìn)一步膨大發(fā)育并生根壯苗的培養(yǎng)基，進(jìn)行鱗莖的膨大生長(zhǎng)及完整植株的形成，培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)周期為30天，培養(yǎng)溫度為25°C，培養(yǎng)光照強(qiáng)度為200(T4000Lux，光周期為9h Light/15h Dark,所述F4培養(yǎng)基包含MS、0.8~1.2mg/L多效唑、8(Tl00g/L蔗糖和4.5g/L瓊脂。
【具體實(shí)施方式】
[0011]實(shí)施例1
1、獲取蘭州百合外植體:選擇于10月中旬時(shí)挖取的蘭州百合種球，剝?nèi)ナ軅镊[片，選擇外、中層干凈的鱗片，用自來(lái)水沖洗后晾干備用。
[0012]2、消毒接種:將步驟I晾干的鱗片放到超凈工作臺(tái)上，使用75%乙醇浸泡20秒鐘，再用0.1%的升汞溶液浸泡10分鐘，然后用無(wú)菌水沖洗3次，將沖洗干凈的鱗片置于超凈工作臺(tái)上晾干。
[0013]3、將步驟2晾干的鱗片接種到由MS、0.3mg/ L 6_芐氨基嘌呤、0.05 mg/L萘乙酸、30g/L蔗糖和4.5g/L瓊脂組成的Fl培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)周期為30天，培養(yǎng)溫度為25°C，培養(yǎng)光照強(qiáng)度為3000LUX，光周期為9h Light/15h Dark。
[0014]該階段培養(yǎng)3次。
[0015]培育出的蘭州百合球莖為2~4mm，無(wú)法直接置于大田種植。
[0016]實(shí)施例2
1、獲取蘭州百合外植體:選擇于10月中旬時(shí)挖取的蘭州百合種球，剝?nèi)ナ軅镊[片，選擇外、中層干凈的鱗片，用自來(lái)水沖洗后晾干備用。
[0017]2、消毒接種:將步驟I晾干的鱗片放到超凈工作臺(tái)上，使用75%乙醇浸泡20秒鐘，再用0.1%的升汞溶液浸泡10分鐘，然后用無(wú)菌水沖洗3次，將沖洗干凈的鱗片置于超凈工作臺(tái)上晾干。 [0018]3、蘭州百合組織培養(yǎng)誘導(dǎo)鱗莖膨大發(fā)育，采用四階段培養(yǎng)的技術(shù)路線誘導(dǎo)鱗莖形成并發(fā)育膨大生長(zhǎng):
①第一階段叢芽增殖:將步驟2晾干的鱗片接種到由MS、0.25mg/ L 6-芐氨基腺嘌呤、0.04 mg/L萘乙酸、30g/L蔗糖和4.5g/L瓊脂組成的Fl培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)周期為30天，培養(yǎng)溫度為25°C，培養(yǎng)光照強(qiáng)度為2000LUX，光周期為9h Light/15hDark,該階段培養(yǎng)2次；
②第二階段小鱗莖的誘導(dǎo):將步驟3第①步驟所得的叢芽苗切割除去葉片，將余下的芽體轉(zhuǎn)接到由MS、80g/L蔗糖和4.5g/L瓊脂組成的F2培養(yǎng)基，以培養(yǎng)基F2為鱗莖誘導(dǎo)發(fā)育培養(yǎng)基進(jìn)行鱗莖的誘導(dǎo)形成及增殖，培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)周期為30天，培養(yǎng)溫度為25°C，培養(yǎng)光照強(qiáng)度為2000LUX，光周期為9h Light/15h Dark ；
③第三階段小鱗莖的膨大:將步驟3第②步驟所得的分化鱗莖切割下來(lái)，并切除葉片，將其移植到由1.5倍1^、0.1311^/ L 6-芐氨基腺嘌呤、0.12 mg/L赤霉素、60g/L蔗糖和
4.5g/L瓊脂組成的F3培養(yǎng)基，以培養(yǎng)基F3為鱗莖膨大發(fā)育培養(yǎng)基進(jìn)行小鱗莖的膨大生長(zhǎng)，培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)周期為35天，培養(yǎng)溫度為25°C，培養(yǎng)光照強(qiáng)度為2000LUX，光周期為9hLight/15h Dark ；
④第四階段鱗莖的膨大與壯苗及完整植株的形成:將步驟3第③步驟所得的膨大鱗莖切割下來(lái)，并切除葉片，將其移至到由MS、0.9mg/L多效唑、85g/L蔗糖和4.5g/L瓊脂組成的F4培養(yǎng)基，以培養(yǎng)基F4為鱗莖進(jìn)一步膨大發(fā)育并生根壯苗的培養(yǎng)基，進(jìn)行鱗莖的膨大生長(zhǎng)及完整植株的形成，培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)周期為30天，培養(yǎng)溫度為25°C，培養(yǎng)光照強(qiáng)度為2000Lux，光周期為 9h Light/15h Dark。
[0019]通過(guò)四階段的培養(yǎng)后，獲得的蘭州百合鱗莖參數(shù)如下:
【權(quán)利要求】
1.一種采用四階段培養(yǎng)的技術(shù)路線誘導(dǎo)蘭州百合鱗莖膨大發(fā)育的方法，其特征在于:包括如下四階段: ①第一階段叢芽增殖:將剝?nèi)√m州百合外、中層干凈的鱗片，用自來(lái)水沖洗晾干后，使用75%乙醇浸泡消毒2(T30秒鐘,再用0.1%的升萊溶液浸泡l(Tl2分鐘,然后用無(wú)菌水沖洗3次后晾干，將上述晾干的鱗片接種到Fl培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)周期為30天，培養(yǎng)溫度為25°C，培養(yǎng)光照強(qiáng)度為200(T4000Lux，光周期為9h Light/15h Dark，所述Fl培養(yǎng)基包含MS培養(yǎng)基、0.2~0.4mg/L 6-芐氨基腺嘌呤、0.04~0.06mg/L萘乙酸、2(T40g/L蔗糖和4.5g/L瓊脂，該階段培養(yǎng)進(jìn)行2次以上形成叢生芽； ②第二階段小鱗莖的誘導(dǎo):將第一階段所得的叢芽苗切割除去葉片，將余下的芽體轉(zhuǎn)接到F2培養(yǎng)基，以培養(yǎng)基F2為鱗莖誘導(dǎo)發(fā)育培養(yǎng)基，進(jìn)行鱗莖的誘導(dǎo)形成及增殖，培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)周期為30~40天，培養(yǎng)溫度為25°C，培養(yǎng)光照強(qiáng)度為200(T4000LuX，光周期為9hLight/15h Dark,所述F2培養(yǎng)基包含MS培養(yǎng)基、8(Tl00g/L蔗糖和4.5g/L瓊脂； ③第三階段小鱗莖的膨大:將第二階段所得的分化鱗莖切割下來(lái)，并切除葉片，將其移植到F3培養(yǎng)基，以培養(yǎng)基F3為鱗莖膨大發(fā)育培養(yǎng)基，進(jìn)行小鱗莖的膨大生長(zhǎng)，培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)周期為30~40天，培養(yǎng)溫度為25°C，培養(yǎng)光照強(qiáng)度為200(T4000LuX，光周期為9hLight/15h Dark，所述F3培養(yǎng)基包含1.5倍MS培養(yǎng)基、0.12^0.18mg/L 6-芐氨基腺嘌呤、.0.12~0.18mg/L赤霉素、60~80g/L鹿糖和4.5g/L瓊脂； ④第四階段鱗莖的膨大與壯苗及完整植株的形成:將第三階段所得的膨大鱗莖切割下來(lái)，并切除葉片，將其移至到F4培養(yǎng)基，以培養(yǎng)基F4為鱗莖進(jìn)一步膨大發(fā)育并生根壯苗培養(yǎng)基，進(jìn)行鱗莖的膨大生長(zhǎng)及完整植株的形成，培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)周期為30天，培養(yǎng)溫度為250C，培養(yǎng)光照強(qiáng)度為200(T4000Lux，光周期為9h Light/15h Dark,所述第四階段中F4培養(yǎng)基包含MS、0.8~1.2mg/L多效唑、8(Tl00g/L蔗糖和4.5g/L瓊脂。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用四階段培養(yǎng)的技術(shù)路線誘導(dǎo)蘭州百合鱗莖膨大發(fā)育的方法，其特征在于:所述第一階段中Fl培養(yǎng)基配方由MS培養(yǎng)基、0.3mg/L 6-節(jié)氨基嘌呤、.0.05mg/L萘乙酸、30g/L蔗糖和4.5g/L瓊脂構(gòu)成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用四階段培養(yǎng)的技術(shù)路線誘導(dǎo)蘭州百合鱗莖膨大發(fā)育的方法，其特征在于:所述第二階段中F2培養(yǎng)基配方由MS培養(yǎng)基、100g/L蔗糖和4.5g/L瓊脂構(gòu)成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用四階段培養(yǎng)的技術(shù)路線誘導(dǎo)蘭州百合鱗莖膨大發(fā)育的方法，其特征在于:所述第三階段中F3培養(yǎng)基配方由1.5倍MS培養(yǎng)基、0.15mg/L 6-芐氨基嘌呤、0.15mg/L赤霉素、75g/L蔗糖和4.5g/L瓊脂構(gòu)成。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用四階段培養(yǎng)的技術(shù)路線誘導(dǎo)蘭州百合鱗莖膨大發(fā)育的方法，其特征在于:所述第四階段中F4培養(yǎng)基配方由MS、1.0mg/L多效唑、80g/L蔗糖和.4.5g/L瓊脂構(gòu)成。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103636502SQ201310669080
【公開(kāi)日】2014年3月19日 申請(qǐng)日期:2013年12月11日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月11日
【發(fā)明者】張進(jìn)忠, 韋紹龍, 李小泉, 鄒瑜, 黃慶華 申請(qǐng)人:廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所