狐貍尾蘭原球莖快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種狐貍尾蘭原球莖快速繁殖方法，屬多年生草本植物領(lǐng)域。以狐貍尾蘭種子作外植體，通過從種子→原球莖(類原球莖體)→叢生芽→完整植株的繁殖途徑進(jìn)行繁殖，結(jié)果表明，狐貍尾蘭種子在溫度(25±2)℃，光照強(qiáng)度1500-2000lx，光照時(shí)間12h/d的條件下，最適培養(yǎng)基為MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L，增殖培養(yǎng)最適培養(yǎng)基為MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.1mg/L，生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA1.0mg/L。可以在短期內(nèi)獲得大量優(yōu)質(zhì)種苗；利用狐貍尾蘭未成熟種子作外植體，應(yīng)用組織培養(yǎng)等生物技術(shù)對(duì)狐貍尾蘭類原球莖體誘導(dǎo)、增殖和催根，對(duì)組培苗壯苗、生根培養(yǎng)和移栽等。為狐貍尾蘭工廠化育苗提供一種新方法。
【專利說明】狐貍尾蘭原球莖快速繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種狐貍尾蘭原球莖快速繁殖方法，屬蘭科鉆喙蘭屬的多年生草本植物領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]蘭科狐貍尾蘭是多年生草本植物，為典型的熱帶附生蘭，也是海南野生蘭花優(yōu)良種質(zhì)資源之一，狐貍尾蘭葉片肥厚、翠綠，花朵清麗，香味四溢，花期長，而且其生長適應(yīng)性強(qiáng)，栽培容易，花期為我國傳統(tǒng)春節(jié)前后，是極好的新春賀歲花卉，頗受廣大群眾青睞。然而，由于其生長環(huán)境熱帶森林過量采伐，其適生環(huán)境嚴(yán)重惡化，加上人們?yōu)榱俗非笱矍袄?，過度采集出售，致使野生狐貍尾蘭數(shù)量銳減，嚴(yán)重影響了狐貍尾蘭生態(tài)群的構(gòu)成，幾近瀕危。由于其種子在自然條件下不易萌發(fā)，常規(guī)繁殖多采用分株方法，但是此法繁殖系數(shù)低，繁殖速度慢，遠(yuǎn)不能滿足市場(chǎng)需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明提供一種狐貍尾蘭原球莖快速繁殖方法，可以在短期內(nèi)獲得大量優(yōu)質(zhì)種苗；利用狐貍尾蘭未成熟種子作外植體，應(yīng)用組織培養(yǎng)等生物技術(shù)對(duì)狐貍尾蘭類原球莖體誘導(dǎo)、增殖和催根，對(duì)組培苗壯苗、生根培養(yǎng)和移栽等。通過對(duì)狐貍尾蘭的快繁技術(shù)系統(tǒng)化研究，為狐貍尾蘭工廠化育苗提供一種新方法。
[0004]本發(fā)明是以如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:一種狐貍尾蘭原球莖快速繁殖方法，具體步驟如下:
[0005]1)無菌材料的獲得:取狐貍尾蘭9成熟果實(shí)；先用自來水沖洗狐貍尾蘭果實(shí)表面，然后在超凈工作臺(tái)上用70%酒精表面消毒果實(shí)2min，無菌水沖洗1次，再用無菌濾紙吸干水分，然后用解剖刀切開莢果·，取出細(xì)小種子，輕輕將種子均勻散落到固體培養(yǎng)基上，每瓶接種量為100粒左右；所述的培養(yǎng)基為VW+6BA1.0mg/L+NAA0.1-0.2mg/L或MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1-0.2mg/L 的培養(yǎng)基；
[0006]2)類原球莖體誘導(dǎo):把狐貍尾蘭的種子分別接種于VW+6-BA-2.0mg/L+NAA0.2mg/L、MS+6-BAl.0mg/L+NAA0.2mg/L的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)原球莖(類原球莖體)的形成；
[0007]3)類原球莖體增殖培養(yǎng)。類原球莖體萌發(fā)后，轉(zhuǎn)接到新鮮培養(yǎng)基中，繼續(xù)培養(yǎng)約20d左右，頂部膨大并分化出子葉，同時(shí)在基部分化出2-3粗狀的假根，在進(jìn)行增殖培養(yǎng)時(shí)，可把基部的假根切掉，增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L。
[0008]4)生根培養(yǎng):當(dāng)小芽具有3-4，葉長2-3生長健壯的小芽單株切下，轉(zhuǎn)接入1/2MS+NAA1.0mg/L的生根培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)其生根。
[0009]本發(fā)明的有益效果是:可以在短期內(nèi)獲得大量優(yōu)質(zhì)種苗；利用狐貍尾蘭未成熟種子作外植體，應(yīng)用組織培養(yǎng)等生物技術(shù)對(duì)狐貍尾蘭類原球莖體誘導(dǎo)、增殖和催根，對(duì)組培苗壯苗、生根培養(yǎng)和移栽等。為狐貍尾蘭工廠化育苗提供一種新方法。【具體實(shí)施方式】
[0010]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的方法和效果進(jìn)一步說明。
[0011]實(shí)施例1
[0012]1、類原球莖體的萌發(fā)培養(yǎng)
[0013]將未成熟種子接種到培養(yǎng)基中培養(yǎng)約50d右開始膨大，60-70d化出白色、結(jié)構(gòu)疏松的前期原球莖胚狀體，繼續(xù)培養(yǎng)15d，胚狀體萌發(fā)形成綠色原球莖，上端有葉原基，下端有許多不定根，在 VW+6BA1.0mg/L+NAA0.1-0.2mg/L 和 MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1-0.2mg/L 的培養(yǎng)基中均能誘導(dǎo)類原球莖體的萌發(fā)。試驗(yàn)結(jié)果表明，誘導(dǎo)類原球莖體以MS附加6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L的激素配比較好，分化時(shí)間短，未成熟種子接種100d左右就能全部誘導(dǎo)原球莖(類原球莖體)的萌發(fā)。
[0014]3、類原球莖體的增殖培養(yǎng):類原球莖體萌發(fā)后，轉(zhuǎn)接到新鮮培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)約18d左右，頂部膨大并分化出子葉，同時(shí)在基部分化出1-2條粗狀的假根，繼續(xù)培養(yǎng)，可逐漸分化出真葉，培養(yǎng)60d左右，已經(jīng)形成具有2-3片真葉的不定芽。之后每50d轉(zhuǎn)接入相同的新鮮培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)，增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA0-3.0mg/L+NAA0-0.2mg/L，其中以MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.lmg/L最好，平均增殖系數(shù)為3_8，且生長健壯。繼代增殖培養(yǎng)中不斷分化出小芽，切分轉(zhuǎn)入新鮮培養(yǎng)基中，可保持不斷增殖的狀態(tài)。在植物的組織培養(yǎng)過程中常常會(huì)發(fā)生體細(xì)胞無性系變異，利`用體細(xì)胞無性系變異可以創(chuàng)造更多遺傳變異及擴(kuò)大可利用的種質(zhì)資源范圍，選育出新的物種或品系，為培養(yǎng)作物優(yōu)良品種開辟了新的途徑，這可以做為一種育種手段，但是對(duì)于商業(yè)生產(chǎn)來說卻是不利的。因此，必須在通過類原球莖體增殖培養(yǎng)時(shí)，特別是多代增殖培養(yǎng)時(shí)剔除褐變、玻璃化、細(xì)弱以及性狀、形態(tài)變異不正常的植株、組織。
[0015]4、生根培養(yǎng):把生長健壯并具有2-3片真葉的單個(gè)小芽，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基為1/2MS+NAA1.0mg/L,經(jīng)60d培養(yǎng)，即可獲得葉片長2cm，有2_3條粗壯的根，生長健壯的完整植株?；虬言陬愒蚯o萌發(fā)增殖時(shí)，就已經(jīng)形成具有2-3片真葉的不定芽，并帶有已經(jīng)發(fā)育的根的小苗，可直接轉(zhuǎn)接入的1/2MS+NAA1.0mg/L的培養(yǎng)基中做生根培養(yǎng)。
[0016]5、煉苗移栽
[0017]生根苗培養(yǎng)約60d后，根長到l_2cm時(shí)，可將瓶苗移入無直射陽光的地方煉苗5d ；打開瓶蓋，繼續(xù)練苗2d ;用鑷子輕輕將小苗從瓶中取出，用自來水洗凈根部附著的培養(yǎng)基，然后放置于室內(nèi)半天以晾干水珠，即可移栽到事先準(zhǔn)備好的砂床上，并適度遮陰。狐貍尾蘭試管苗移栽時(shí)，不宜太濕，否則易爛根，移栽基質(zhì)多以粗椰糠與河沙按一定的比例混合，保濕又透氣，其中以粗椰糠:河沙為1: 1的比例混合較好，濕度保持在80%-90%，移栽成活率達(dá)90%以上。
[0018]結(jié)論
[0019]試驗(yàn)以狐貍尾蘭種子作外植體，通過從種子一原球莖(類原球莖體)一叢生芽—完整植株的繁殖途徑進(jìn)行繁殖，結(jié)果表明，狐貍尾蘭種子在溫度(25±2)°C，光照強(qiáng)度1500-20001x，光照時(shí)間12h/d的條件下，最適培養(yǎng)基為MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L，增殖培養(yǎng)最適培養(yǎng)基為 MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.lmg/L,生根培養(yǎng)基為 1/2MS+NAA1.0mg/L。
【權(quán)利要求】
1.一種狐貍尾蘭原球莖快速繁殖方法，具體步驟如下:1)無菌材料的獲得:取狐貍尾蘭9成熟果實(shí)；先用自來水沖洗狐貍尾蘭果實(shí)表面，然后在超凈工作臺(tái)上用70%酒精表面消毒果實(shí)2min，無菌水沖洗1次，再用無菌濾紙吸干水分，然后用解剖刀切開莢果，取出細(xì)小種子，輕輕將種子均勻散落到固體培養(yǎng)基上，每瓶接種量為 100 粒左右；所述的培養(yǎng)基為 VW+6BA1.0mg/L+NAA0.1-0.2mg/L 或 MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1-0.2mg/L 的培養(yǎng)基；2) 類原球莖體誘導(dǎo):把狐貍尾蘭的種子分別接種于VW+6-BA-2.0mg/L+NAA0.2mg/L、MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)類原球莖體的形成；3)類原球莖體增殖培養(yǎng):類原球莖體萌發(fā)后，轉(zhuǎn)接到新鮮培養(yǎng)基中，繼續(xù)培養(yǎng)約20d左右，頂部膨大并分化出子葉，同時(shí)在基部分化出2-3粗狀的假根，在進(jìn)行增殖培養(yǎng)時(shí)，可把基部的假根切掉，增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L。4)生根培養(yǎng):當(dāng)小芽具有3-4，葉長2-3生長健壯的小芽單株切下，轉(zhuǎn)接入1/2MS+NAA1.0mg/L的生根培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)其生根；4)生根培養(yǎng):當(dāng)小芽具有3-4，葉長2-3生長健壯的小芽單株切下，轉(zhuǎn)接入1/2MS+NAA1.0mg/L的生根培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)其生根。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103651137SQ201310661012
【公開日】2014年3月26日 申請(qǐng)日期:2013年12月6日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月6日
【發(fā)明者】高宏秀, 強(qiáng)承魁, 張光琴, 張瑩 申請(qǐng)人:徐州生物工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院