一種生產(chǎn)富含苯乳酸凝結(jié)芽孢桿菌固態(tài)發(fā)酵飼料及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及了利用固態(tài)發(fā)酵技術生產(chǎn)富含苯乳酸的凝結(jié)芽孢桿菌固態(tài)發(fā)酵飼料。利用凝結(jié)芽孢桿菌進行固態(tài)發(fā)酵，對發(fā)酵過程的控制，及發(fā)酵后期苯乳酸提取、檢測條件的探索，來確定樣品中苯乳酸的產(chǎn)量。最終，通過培養(yǎng)基優(yōu)化和底物的添加，獲取苯乳酸最高產(chǎn)量的凝結(jié)芽孢桿菌固態(tài)發(fā)酵飼料。該飼料有效的提高了產(chǎn)蛋雞的產(chǎn)蛋率，降低死淘率和料蛋比，最佳使用濃度為0.15%。苯乳酸是一種新型抑菌物質(zhì)，具有增強動物免疫力，提高畜禽肉質(zhì)，降低家畜體內(nèi)大腸桿菌數(shù)量等功能。固態(tài)發(fā)酵中苯乳酸的產(chǎn)生，使凝結(jié)芽孢桿菌更好的發(fā)揮益生功能，從而進一步提高了這種固態(tài)發(fā)酵飼料的利用價值，富含苯乳酸的凝結(jié)芽孢桿菌固態(tài)發(fā)酵飼料在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中具有更高的應用價值。
【專利說明】一種生產(chǎn)富含苯乳酸凝結(jié)芽孢桿菌固態(tài)發(fā)酵飼料及其制備
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于生物制劑領域，是一種利用固態(tài)發(fā)酵凝結(jié)芽孢桿菌提高苯乳酸的產(chǎn)量，從而獲取富含苯乳酸的固態(tài)發(fā)酵飼料，獲取具有更高應用價值的固態(tài)制劑的制備方法。
【背景技術】
[0002]微生態(tài)制劑又稱活菌制劑或生菌劑，主要是用于調(diào)節(jié)動物機體微生態(tài)平衡，具有直接通過增強動物對腸內(nèi)有害微生物的抑制作用或通過增強非特異性免疫功能來預防疾病，從而促進動物生長或提高飼料轉(zhuǎn)化率的一類藥物或飼料添加劑。微生態(tài)制劑具有無毒副作用、無耐藥性、無殘留、成本低、效果顯著、不污染環(huán)境等特點，可以促進動物胃腸道正常微生物區(qū)系的建立，阻礙有害物質(zhì)及廢物的吸收，改善畜產(chǎn)品的質(zhì)量等，克服了抗生素所產(chǎn)生的菌群失調(diào)、二重感染和耐藥性等缺點，具有顯著的經(jīng)濟效益和社會效益。
[0003]凝結(jié)芽孢桿菌是被美國，歐盟，日本批準做為飼料添加劑使用的微生物。它具有調(diào)節(jié)腸道功能紊亂，增加動物消化功能，維持腸道內(nèi)菌群平衡和提高機體健康水平以及生產(chǎn)性能，提聞動物免疫力等功能。另外，芽抱的廣生還使凝結(jié)芽抱桿菌具有耐酸喊，耐聞溫抗逆性強這些優(yōu)點，從而凝結(jié)芽孢桿菌能很好的適應培養(yǎng)環(huán)境，容易培養(yǎng)。
[0004]凝結(jié)芽孢桿菌主要以兩種方式來影響機體的消化作用:一是促進產(chǎn)生多種消化酶的分泌，提高對營養(yǎng)物質(zhì)的消化與吸收；二是通過該菌種在動物消化道內(nèi)生長、繁殖和定植，直接產(chǎn)生如維生素、氨基酸、短鏈脂肪酸等多種營養(yǎng)物質(zhì)，并明顯增加小腸蠕動的速度，改善腸道消化功能，促進對飼料中各種營養(yǎng)成分的消化與吸收。
[0005]苯乳酸最早發(fā)現(xiàn)存在蜂蜜里面，最近發(fā)現(xiàn)一些微生物例如大部分的乳酸菌，芽孢桿菌屬等也能產(chǎn)生苯乳酸。作為一種防腐劑，苯乳酸具有廣譜抑菌活性:能夠抑制許多細菌例如李斯特菌屬，葡萄球菌，大腸桿菌，沙門氏菌和許多真菌包括酵母，許多的霉菌(婁地青霉，桔青霉)；苯乳酸已經(jīng)用在了飼料中，它對母雞的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生一些積極的影響，最終有效提高產(chǎn)蛋量和蛋的質(zhì)量。苯乳酸添加在雞的飼料中時，能夠提高產(chǎn)量，在腸道內(nèi)產(chǎn)生抗病原體的活性，降低肉質(zhì)發(fā)黃；苯乳酸在剛斷奶的和增長的豬體內(nèi)能夠提高與免疫有關的血細胞的數(shù)量，降低大腸桿菌的數(shù)量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明提供了一種固態(tài)發(fā)酵凝結(jié)芽孢桿菌提高苯乳酸產(chǎn)量，從而獲取富含苯乳酸的固態(tài)發(fā)酵飼料的一種方法。
[0007]本發(fā)明實現(xiàn)目的的技術方案如下:
[0008]凝結(jié)芽孢桿菌液體種子接入固態(tài)培養(yǎng)基中進行固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)，固態(tài)培養(yǎng)基的基本成分為豆柏，米糠，麥芽浸粉和水分組成，所述固態(tài)培養(yǎng)基中加入苯丙酮酸或者苯丙氨酸，來提高苯乳酸的產(chǎn)量；固態(tài)發(fā)酵55-65h，發(fā)酵溫度為33-38°C，發(fā)酵室內(nèi)的相對濕度控制在75-80%，發(fā)酵期間每隔12h翻勻一次。固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)后獲得固態(tài)發(fā)酵飼料。
[0009]固態(tài)培養(yǎng)基組分為水分，豆柏，米糠，麥芽浸粉；所述固態(tài)培養(yǎng)基中各組分的的添加量如下:水分，豆柏，米糠，麥芽浸粉分別為500-700g/kg，200-250g/kg，50_100g/kg, 20-50g/kg。
[0010]固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基接種量范圍為5-15%，接種量為10%時苯乳酸產(chǎn)量最大。苯丙酮酸的添加濃度為2-3g/kg ;苯丙氨酸的添加量為2.5-3.5g/kg時；
[0011]苯丙酮酸的最適添加濃度為2.7g/kg,苯乳酸產(chǎn)量最大為815mg/kg,此時的轉(zhuǎn)化率為98.7% ；
[0012]苯丙氨酸的添加量為3g/kg時，苯乳酸產(chǎn)量為752mg/kg，此時轉(zhuǎn)化率為94.9%。
[0013]優(yōu)選的固態(tài)培養(yǎng)基組分和添加量如下:水分的添加量為600g/kg。豆柏225g/kg，米糠75g/kg時，麥芽浸粉30g/kg。
[0014]本發(fā)明所述凝結(jié)芽孢桿菌的名稱為TQ33,分類名稱Bacillus coagulans,保藏編號為=CGMCC N0.5233保藏地址為:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，保藏單位:中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。
[0015]所述凝結(jié)芽孢桿菌的種子液培養(yǎng)基的組成(g/L):蛋白胨20.0、酵母膏10.0、葡萄糖 20.0，初始 ρΗ7.2-7.4。
[0016]種子液的培養(yǎng)條件:溫度37±1°C，轉(zhuǎn)速為ZOOr.mirT1，培養(yǎng)時間18h。
[0017]本發(fā)明使用生理鹽水(超純水配制)提取苯乳酸，將固態(tài)發(fā)酵樣品和超純水以1:4的比例混合，在4°C冰箱里放置4h后提取上清液，離心過膜后，利用高效液相測量苯乳酸的含量。
[0018]本發(fā)明所用的HPLC的條件
[0019]苯乳酸檢測的液相條件:Agilent ZorbaxSB_C18色譜柱，流動相為ImM H2SO4=Z腈90:10 (v/v)，進樣量為1(^1^，流速為0.7111171^11，柱溫為301:，檢測波長21011111。
[0020]苯丙酮酸檢測的液相條件:Agilent ZorbaxSB-C18色譜柱，流動相為ImM H2SO4:乙腈93:7 (v/v)，進樣量為1(^1^，流速為0.4111171^11，柱溫為301:，檢測波長21011111。
[0021]苯丙氨酸檢測的液相條件:Agilent ZorbaxSB_C18色譜柱,流動相為ImM H2SO4:乙腈95:5 (v/v)，進樣量為1(^1^，流速為0.2111171^11，柱溫為301:，檢測波長21011111。
[0022]有益效果:
[0023]本發(fā)明利用凝結(jié)芽孢桿菌固態(tài)發(fā)酵，通過底物的添加提高苯乳酸的產(chǎn)量，最終獲取富含苯乳酸的飼料。這是首次通過固態(tài)發(fā)酵來提高苯乳酸產(chǎn)量，并且將獲取的苯乳酸直接應用到發(fā)酵制劑中，省去了苯乳酸提取，分離等的下游處理工藝，既提高了這種飼料的利用價值，也不會增加這種固態(tài)發(fā)酵飼料的成本。
[0024]利用固態(tài)培養(yǎng)基發(fā)酵凝結(jié)芽孢桿菌獲得的固態(tài)制劑本身就具有益生菌的效果，添加在詞料里面，具有提聞動物的免疫力，促進動物生長等益生功能，在養(yǎng)殖業(yè)具有廣闊的應用價值。固態(tài)制劑中苯乳酸產(chǎn)量的提高增強了凝結(jié)芽孢桿菌的益生功能，提高了這種固態(tài)制劑的利用價值，使這種固態(tài)制劑擁有更廣泛的應用價值。
[0025]本發(fā)明的有益效果還在于通過凝結(jié)芽孢桿菌固態(tài)發(fā)酵提高了苯乳酸的產(chǎn)量，通過固態(tài)培養(yǎng)基的優(yōu)化以及底物的添加確定了固態(tài)發(fā)酵飼料中苯乳酸的最終產(chǎn)量為815mg/kg。凝結(jié)芽孢桿菌是一種益生菌，利用其固態(tài)發(fā)酵所得到的制劑具有益生菌的多重功效。苯乳酸是一種新型的抑菌物質(zhì)，具有增強動物免疫力，提高畜禽肉質(zhì)，降低家畜體內(nèi)的大腸桿菌數(shù)量等功能。固態(tài)發(fā)酵中苯乳酸含量的提高，使凝結(jié)芽孢桿菌能更好的發(fā)揮益生功能，從而進一步提高了這種固態(tài)發(fā)酵飼料的利用價值，這樣的固態(tài)制劑在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中具有更高的應用價值。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0026]圖1 (a)苯乳酸標樣和樣品的液相圖譜，(b)苯丙酮酸標樣和樣品的液相圖譜，(C)苯丙氨酸標樣和樣品的液相圖譜
[0027]圖2固態(tài)發(fā)酵生長曲線以及pH的變化
[0028]圖3苯乳酸取樣時間的確定
[0029]圖4水分添加量對苯乳酸產(chǎn)量的影響
[0030]圖5豆柏，米糠比例對苯乳酸產(chǎn)量的影響
[0031]圖6麥芽浸粉對苯乳酸產(chǎn)量的影響
[0032]圖7接種量對苯乳酸產(chǎn)量的影響
[0033]圖8苯丙酮酸不同添加量對苯乳酸產(chǎn)量的影響以及苯丙酮酸的轉(zhuǎn)化率
[0034]圖9苯丙氨酸的添加量對苯乳酸的影響以及苯丙氨酸的轉(zhuǎn)化率
【具體實施方式】
[0035]下面結(jié)合實施例，對本發(fā)明進一步說明，下述實施例是說明性的，不是限定性的，不能以下述實施例來限定本發(fā)明的保護范圍。
[0036]本發(fā)明使用的菌種為凝結(jié)芽孢桿菌TQ33,分類名稱Bacillus coagulans,保藏編號為:CGMCC N0.5233，保藏日期:2011年9月9日，保藏地址為:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，保藏單位:中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。
[0037]斜面培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基
[0038]斜面培養(yǎng)基(g/L):蛋白胨20.0、酵母膏5.0、葡萄糖12.0、瓊脂20.0初始ρΗ7.0-7.2。
[0039]種子培養(yǎng)基(g/L):蛋白胨20.0、酵母膏10.0、葡萄糖20.0，初始ρΗ7.2-7.4。
[0040]固態(tài)培養(yǎng)基
[0041]最終確定的固態(tài)培養(yǎng)基是由豆柏225g/kg，米糠75g/kg，麥芽浸粉30g/kg和水600g/kg苯丙酮酸2.7g/kg或者苯丙氨酸3.0g/kg組成；培養(yǎng)基混勻分裝后115°C滅菌20mino
[0042]實施例1
[0043]I菌種活化
[0044]挑取甘油管里面的菌體一平板培養(yǎng)24h —挑取菌體，接入斜面，培養(yǎng)24后，4°C冰箱保存。
[0045]2種子液培養(yǎng)
[0046]挑取斜面菌體2環(huán)，接入種子液，37± I°C，200r.mirT1通風培養(yǎng)，18h后轉(zhuǎn)接到固態(tài)
培養(yǎng)基。
[0047]3固態(tài)發(fā)酵
[0048]I)固態(tài)培養(yǎng)基組成:水分500g/kg，麥芽浸粉10g/kg，豆柏200g/kg，米糠200g/kg,混合均勻后分裝，115°C滅菌20min。[0049]2)固態(tài)培養(yǎng)基的培養(yǎng):按照固態(tài)培養(yǎng)基重量的5%接入種子液，37土 1°C，相對濕度80%左右培養(yǎng)，分別在0、3、6、12、24、36、48、60、72h取樣。
[0050]3)確定不同時間的菌體數(shù)以及pH變化:將不同時間所取樣品裝入三角瓶中(三角瓶裝有生理鹽水和玻璃珠)后，在搖床搖勻大約lh，吸取上清液移到試管(每根試管9ml生理鹽水)中進行梯度稀釋；稀釋好的液體，移到平板中與培養(yǎng)基混勻后37±1°C培養(yǎng)；另外，稀釋好的菌液，在80°C中水浴lOmin，測其的芽孢數(shù)；另外，利用pH儀測量三角瓶中樣品稀釋液，記錄其數(shù)值。
[0051]4)苯乳酸的提取:將不時間的發(fā)酵樣品與生理鹽水以1:4的比例混勻，在4°C冰箱里靜止4h后，提取上清液，離心過膜。
[0052]4苯乳酸濃度的檢測
[0053]苯乳酸檢測的液相條件:Agilent ZorbaxSB_C18色譜柱,流動相ImM H2SO4:乙腈90:10 (v/v)，進樣量為 1(^1^，流速為0.7111171^11，柱溫為301:，檢測波長21011111。 [0054]結(jié)果表明:從繪出的固態(tài)發(fā)酵生長曲線以及pH變化(附圖2)可以看出，凝結(jié)芽孢桿菌在固態(tài)培養(yǎng)基中培養(yǎng)48h左右達到穩(wěn)定期，48h以后菌體量變化不大；發(fā)酵過程中，pH的變化先下降，36h時pH最低，此后固態(tài)培養(yǎng)基的pH開始上升。從繪制的苯乳酸取樣時間(附圖3)可以看出:苯乳酸在對數(shù)期就開始產(chǎn)生，但是36h之前產(chǎn)量很少，并且不同時間的產(chǎn)量差異也小，36h后苯乳酸的產(chǎn)量開始升高，在60h苯乳酸的積累量達到最大為121mg/
kg ο
[0055]實施例2
[0056]I種子液培養(yǎng)
[0057]挑取斜面菌體2環(huán)，接入到種子液中，37°C，200r.mirT1通風培養(yǎng)，18h后轉(zhuǎn)接到固態(tài)培養(yǎng)基。
[0058]2固態(tài)發(fā)酵
[0059]I)固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基的組成:固態(tài)培養(yǎng)基中的水分添加量分別為500g/kg，550g/kg,600g/kg,700g/kg ;麥芽浸粉,豆柏與米糠添加量分別為10g/kg, 200g/kg, 200g/kg,混勻以后115°C滅菌20min。
[0060]2)固態(tài)發(fā)酵:按照固態(tài)培養(yǎng)基重量的5%接入種子液，37± 1°C,相對濕度80%左右培養(yǎng)，60h取樣；樣品與生理鹽水以1:4的比例混合，4°C冰箱里靜止4h，提取上清液，離心過膜。
[0061]3苯乳酸含量的測量
[0062]苯乳酸檢測的液相條件:Agilent ZorbaxSB_C18色譜柱,流動相ImM H2SO4:乙腈90:10 (v/v)，進樣量為 1(^1^，流速為0.7111171^11，柱溫為301:，檢測波長21011111。
[0063]結(jié)果表明:由附圖4可以看出，固態(tài)培養(yǎng)基中水分添加量為600g/kg時，苯乳酸產(chǎn)量最高，由此確定固態(tài)培養(yǎng)基中水分的添加量為600g/kg。
[0064]實施例3
[0065]I種子液培養(yǎng)
[0066]挑取斜面菌體2環(huán)，接入到種子液中，37°C，200r.mirT1通風培養(yǎng)，18h后轉(zhuǎn)接到固態(tài)培養(yǎng)基。
[0067]2固態(tài)發(fā)酵[0068]I)固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基組成:固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中水分的添加量為600g/kg，麥芽浸粉為 10g/kg,豆柏，米糠的添加量分別為 150g/kg, 150g/kg ；200g/kg, 100g/kg ；100g/kg, 200g/kg ；225g/kg, 75g/kg ；75g/kg, 225g/kg。
[0069]2)固態(tài)發(fā)酵:按照固態(tài)培養(yǎng)基重量的5%接入種子液，37土 1°C相對濕度80%左右培養(yǎng)，60h取樣；樣品與生理鹽水1:4的比例混合后4°C冰箱里靜止4h，提取上清液，離心過膜。
[0070]3苯乳酸含量的測定
[0071]苯乳酸檢測的液相條件:Agilent ZorbaxSB_C18色譜柱，流動相為ImM H2SO4:Zj腈90: 10 (v/v)，進樣量為IOyL,流速為0.7mL/min，柱溫為30°C，檢測波長210nm。
[0072]結(jié)果表明:根據(jù)結(jié)果繪制的圖(附圖5)可以看出，豆柏的含量對苯乳酸的產(chǎn)量有很大影響，豆柏225g/kg，米糠75g/kg時，苯乳酸的產(chǎn)量最大。
[0073]實施例4
[0074]I種子液培養(yǎng)
[0075]挑取斜面菌體2環(huán)，接入到種子液中，37°C，200r.mirT1通風培養(yǎng)，18h后轉(zhuǎn)接到固態(tài)培養(yǎng)基。
[0076]2固態(tài)發(fā) 酵
[0077]I)固態(tài)培養(yǎng)基的組成:固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中水分的添加量為600g/kg，豆柏225g/kg,米糠75g/kg,麥芽浸粉添加量分別為10g/kg, 20g/kg,30g/kg,40g/kg,混勻后分裝，115°C 滅菌 20min。
[0078]2)固態(tài)培養(yǎng)基的培養(yǎng):按照固態(tài)培養(yǎng)基重量的5%接入種子液，37± I°C，相對濕度80%左右培養(yǎng)，60h后取樣與生理鹽水以1:4的比例混合，混勻后4°C冰箱里靜止4h提取苯乳酸，過膜。
[0079]3苯乳酸含量的檢測
[0080]苯乳酸檢測的液相條件:Agilent ZorbaxSB_C18色譜柱，流動相為ImM H2SO4:Zj腈90:10 (v/v)，進樣量為1(^1^，流速為0.7111171^11，柱溫為301:，檢測波長21011111。
[0081]結(jié)果表明:(附圖6)可以看出，隨著麥芽浸粉添加量的增加，苯乳酸的產(chǎn)量逐漸增加，當麥芽浸粉的添加量為30g/kg時，苯乳酸產(chǎn)量最大，超過此添加量濃度時，苯乳酸產(chǎn)量降低。
[0082]實施例5
[0083]I種子液培養(yǎng)
[0084]挑取斜面菌體2環(huán)，接入到種子液中，37°C，200r.mirT1通風培養(yǎng)，18h后轉(zhuǎn)接到固態(tài)培養(yǎng)基。
[0085]2固態(tài)發(fā)酵
[0086]I)固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基組成:水分添加量為600g/kg，豆柏225g/kg，米糠75g/kg，麥芽浸粉30g/kg,混勻后滅菌。
[0087]2)固態(tài)發(fā)酵:分別按照固態(tài)培養(yǎng)基重量的為5%，8%，10%, 12%接種；固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基37 ± I °C，相對濕度80%左右培養(yǎng)；60h后取樣與生理鹽水以1:4的比例混合，混勻后4°C冰箱里靜止4h提取上清液，過膜。
[0088]3苯乳酸含量的檢測[0089]苯乳酸檢測的液相條件:Agilent ZorbaxSB_C18色譜柱，流動相為ImM H2SO4:Zj腈90:10 (v/v)，進樣量為1(^1^，流速為0.7111171^11，柱溫為301:，檢測波長21011111。
[0090]結(jié)果表明:通過(附圖7)可以看出，接種量為10%的時候，苯乳酸的產(chǎn)量最大為137mg/kg。
[0091]實施例6
[0092]I種子液培養(yǎng)
[0093]挑取斜面菌體2環(huán)，接入到種子液中，37°C，200r.mirT1通風培養(yǎng)，18h后轉(zhuǎn)接到固態(tài)培養(yǎng)基。
[0094]2固態(tài)發(fā)酵
[0095]I)固態(tài)培養(yǎng)基成分:水分添加量600g/kg，豆柏225g/kg，米糠75g/kg，麥芽浸粉30g/kg ;另外，培養(yǎng)基中分別補加苯丙酮酸(g/kg)0.45,0.9,1.4,1.8,2.1 Λ.5混勻后115°C滅菌。
[0096]2)固態(tài)培養(yǎng)基成分:水分添加量600g/kg，豆柏225g/kg，米糠75g/kg，麥芽浸粉30g/kg ;另外，培養(yǎng)基中分別補加苯丙氨酸(g/kg)0.5、1.0、1.5,2.0,3.0、4.5混勻后115°C滅菌。
[0097]3)固態(tài)培養(yǎng)基的培養(yǎng):兩種培養(yǎng)都按照固態(tài)培養(yǎng)基重量的10%接入種子液，培養(yǎng)基37 ± I °C，相對濕度80%左右培養(yǎng)，60h后取樣與生理鹽水以1:4的比例混合，混勻后4°C冰箱里靜止4h提取苯乳酸，過膜。
[0098]3苯乳酸含量的檢測以及苯丙氨酸，苯丙酮酸剩余含量的檢測
[0099]苯乳酸檢測的液相條件:Agilent ZorbaxSB_C18色譜柱,流動相ImM H2SO4:乙腈為90:10 (v/v)，進樣量為1(^1^，流速為0.7111171^11，柱溫為301:，檢測波長21011111。
[0100]苯丙酮酸檢測的液相條件:Agilent ZorbaxSB-C18色譜柱，流動相為ImM H2SO4:乙腈為93:7 (v/v)，進樣量為1(^1^，流速為0.4111171^11，柱溫為301:，檢測波長21011111。
[0101]苯丙氨酸檢測的液相條件:Agilent ZorbaxSB_C18色譜柱,流動相為ImM H2SO4:乙腈為95:5 (v/v)，進樣量為1(^1^，流速為0.2111171^11，柱溫為301:，檢測波長21011111。
[0102]結(jié)果表明:(附圖8和9)可以看出苯丙酮酸和苯丙氨酸的添加有效的提高了苯乳酸的產(chǎn)量，但不同的是菌體對苯丙氨酸的利用比較好，其添加量為2.7g/kg時苯乳酸產(chǎn)量可達815mg/kg，是未添加底物時苯乳酸產(chǎn)量的6倍，此時苯丙酮酸的轉(zhuǎn)化率也最大，為98.7% ;而對于苯丙氨酸來說，其添加量為3g/kg時，苯乳酸產(chǎn)量最大為752mg/kg，是未添加底物苯乳酸產(chǎn)量的5.5倍，轉(zhuǎn)化率最大為94.9%。
[0103]實施例7凝結(jié)芽孢桿菌固態(tài)發(fā)酵飼料對高產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響
[0104]1.將最終獲得的固態(tài)發(fā)酵飼料進行動物試驗，選取34周齡健康商品代海蘭褐蛋雞600隨機分為5個處理組，每個處理組120只雞，每3只雞為I重復，即每處理組可以獲得40個重復觀察數(shù)據(jù)。
[0105]2.試驗進行49天，采用的基礎日糧組成以及營養(yǎng)成分見表1。
[0106]表1基礎日糧配方及營養(yǎng)水平
[0107]
【權利要求】
1.一種生產(chǎn)富含苯乳酸凝結(jié)芽孢桿菌固態(tài)發(fā)酵飼料，由以下方法制得，凝結(jié)芽孢桿菌液體種子接入固態(tài)培養(yǎng)基中進行固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)，固態(tài)培養(yǎng)基的基本成分為豆柏，米糠，麥芽浸粉和水分，所述固態(tài)培養(yǎng)基中加入苯丙酮酸或者苯丙氨酸，固態(tài)發(fā)酵55-65h，發(fā)酵溫度為33-38°C，發(fā)酵室內(nèi)的相對濕度控制在75-80%，發(fā)酵期間每隔12h翻勻一次，固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)后獲得固態(tài)發(fā)酵飼料。
2.根據(jù)權利要求1所述的生產(chǎn)富含苯乳酸凝結(jié)芽孢桿菌固態(tài)發(fā)酵飼料，其特征在于，所述固態(tài)培養(yǎng)基中各組分的的添加量如下:水分，豆柏，米糠，麥芽浸粉分別為500-700g/kg, 200-250g/kg, 50-100g/kg, 20_50g/kg。
3.根據(jù)權利要求1所述的生產(chǎn)富含苯乳酸凝結(jié)芽孢桿菌固態(tài)發(fā)酵飼料，其特征在于，所述固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基接種量范圍為5-15%。
4.根據(jù)權利要求3所述的生產(chǎn)富含苯乳酸凝結(jié)芽孢桿菌固態(tài)發(fā)酵飼料，其特征在于，所述固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基接種量為10%。
5.根據(jù)權利要求1所述的生產(chǎn)富含苯乳酸凝結(jié)芽孢桿菌固態(tài)發(fā)酵飼料，所述苯丙酮酸的添加濃度為2-3g/kg。
6.根據(jù)權利要求1所述的生產(chǎn)富含苯乳酸凝結(jié)芽孢桿菌固態(tài)發(fā)酵飼料，其特征在于，所述苯丙氨酸的添加量為2.5-3.5g/kg時。
7.根據(jù)權利要求1所述的生產(chǎn)富含苯乳酸凝結(jié)芽孢桿菌固態(tài)發(fā)酵飼料，其特征在于，所述固態(tài)培養(yǎng)基組分和添加量如下:水分的添加量為600g/kg，豆柏225g/kg，米糠75g/kg時，麥芽浸粉30g/kg。
8.根據(jù)權利要求1所述的生產(chǎn)富含苯乳酸凝結(jié)芽孢桿菌固態(tài)發(fā)酵飼料，其特征在于，所述凝結(jié)芽孢桿菌的名稱為TQ33，分類名稱Bacillus coagulans，保藏編號為=CGMCCN0.5233。
9.根據(jù)權利要求1-8所述的生產(chǎn)富含苯乳酸凝結(jié)芽孢桿菌固態(tài)發(fā)酵飼料的制備方法，包括如下步驟:凝結(jié)芽孢桿菌液體種子接入固態(tài)培養(yǎng)基中進行固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)，固態(tài)培養(yǎng)基的基本成分為豆柏，米糠，麥芽浸粉和水分，所述固態(tài)培養(yǎng)基中加入苯丙酮酸或者苯丙氨酸，固態(tài)發(fā)酵55-65h，發(fā)酵溫度為33-38°C，發(fā)酵室內(nèi)的相對濕度控制在75_80%，發(fā)酵期間每隔12h翻勻一次，固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)后獲得固態(tài)發(fā)酵飼料。
10.根據(jù)權利要求1所述所述的生產(chǎn)富含苯乳酸凝結(jié)芽孢桿菌固態(tài)發(fā)酵飼料，所述固態(tài)發(fā)酵制劑在飼料中的最佳添加濃度為0.15%。
【文檔編號】A23K1/14GK103636923SQ201310544807
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2013年11月6日 優(yōu)先權日:2013年11月6日
【發(fā)明者】王海寬, 路福平, 張會圖, 高雪芹 申請人:天津科技大學