纖維素酶在飼料原料中的最適添加量配方的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種纖維素酶在飼料原料中的最適添加量配方。本發(fā)明公開的一種飼料，由飼料原料和纖維素酶組成。本發(fā)明的選擇纖維素酶在飼料原料中最適添加量的方法和得到的最適添加量配方在飼料酶制劑的添加中具有指導(dǎo)意義。
【專利說明】纖維素酶在飼料原料中的最適添加量配方
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種纖維素酶在飼料原料中的最適添加量配方。
【背景技術(shù)】
[0002]新陳代謝是生命活動(dòng)的基礎(chǔ)，而構(gòu)成新陳代謝的許多復(fù)雜而有規(guī)律的物質(zhì)變化和能量變化，都是在酶的催化下進(jìn)行的，可以說，沒有酶的參與，生命活動(dòng)一刻也不能進(jìn)行。
[0003]20世紀(jì)20年代開始有報(bào)道，在飼糧中添加酶制劑可提高動(dòng)物生長速度和飼料轉(zhuǎn)化效率，但是直到20世紀(jì)80年代人們才開始懂得如何在飼料工業(yè)中發(fā)揮酶的力量。飼用酶制劑一般來源于微生物，由木霉、曲霉、酵母和真菌等微生物發(fā)酵生產(chǎn)，它是集動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)、飼料學(xué)、動(dòng)物生理生化、微生物發(fā)酵與酶工程、基因工程等諸學(xué)科于一體的應(yīng)用于現(xiàn)代飼料工業(yè)中的一種綠色飼料添加劑，對(duì)提高飼料的轉(zhuǎn)化率、拓寬飼料原料的應(yīng)用范圍和比例、節(jié)約飼料資源、降低飼料成本和養(yǎng)殖成本，改善飼養(yǎng)環(huán)境等起著重要作用。從1984年歐洲在全球首次將酶制劑商品化應(yīng)用于大麥日糧上開始，到20世紀(jì)90年代中期，酶制劑在飼料工業(yè)中的應(yīng)用得到了普遍認(rèn)可。90年代初，我國開始自行生產(chǎn)銷售飼用酶制劑，2000年我國飼用酶制劑的銷售量已達(dá)到6000t。1998?2008年，動(dòng)物飼料酶制劑在全球市場每年都以平均13%的速度增長。尤其是2008年后，由于無機(jī)磷源的成本高漲，促進(jìn)了植酸酶在飼料中的普及應(yīng)用，大大提高了人們對(duì)酶制劑的認(rèn)識(shí)和接收程度，也推動(dòng)了其它酶制劑在飼料工業(yè)和養(yǎng)殖領(lǐng)域的應(yīng)用。
[0004]在動(dòng)物生產(chǎn)上復(fù)合酶制劑的作用顯然要大于單體酶，但單體酶作用效果的研究毫無疑問將直接對(duì)復(fù)合酶的研究起指導(dǎo)作用，復(fù)合酶制劑在生產(chǎn)上的應(yīng)用效果基本上已經(jīng)得到肯定，但為進(jìn)一步提高其性價(jià)比，更清楚地了解單體酶的作用機(jī)理和作用效果是很有必要的。不同的單酶都有其相對(duì)應(yīng)的降解底物，酶的降解作用具有高度的選擇性和專一性，目前用在飼料工業(yè)上的單酶制劑約有20多種。
[0005]飼用單酶制劑可以根據(jù)是否在動(dòng)物體內(nèi)大量分泌而分為外源酶和內(nèi)源酶兩種，夕卜源酶主要包括植酸酶和非淀粉多糖酶，其中非淀粉多糖酶又包括木聚糖酶、葡聚糖酶、甘露聚糖酶、果膠酶、纖維素酶等，而內(nèi)源酶則主要包括蛋白酶、淀粉酶、糖化酶和脂肪酶等。
[0006]纖維素酶(Cellulase)是由多種水解酶組成的一個(gè)復(fù)雜酶系，其主要由葡聚糖內(nèi)切酶、葡聚糖外切酶以及β -葡萄糖苷酶等組成，這類酶能將纖維二糖、三糖和纖維糊精等水解成單個(gè)葡萄糖。由于纖維素存在天然的特異性，纖維素酶必須用不同酶系協(xié)同作用才能完全將其分解，其中內(nèi)切葡萄糖酶進(jìn)入纖維素的非結(jié)晶區(qū)，形成外切纖維素酶所需的游離末端，然后外切纖維素酶從多糖鏈的非還原末端切下纖維二糖單位被β-葡萄糖苷酶水解形成葡萄糖。
[0007]纖維素酶作為飼料添加劑使用，其功能主要有以下幾點(diǎn):①摧毀植物細(xì)胞壁，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)吸收。纖維素酶可在木聚糖酶、半乳糖苷酶等半纖維素酶的協(xié)同作用下破壞植物細(xì)胞壁，使細(xì)胞內(nèi)容物釋放出來，以利于動(dòng)物進(jìn)一步降解吸收，同時(shí)也增加了非淀粉多糖的消化，進(jìn)而改善高纖維飼料原料的利用率；②補(bǔ)充動(dòng)物內(nèi)源消化酶的不足，剌激動(dòng)物內(nèi)源酶的分泌。纖維素酶可以改善動(dòng)物消化道酶系的組成、酶分泌量及活性，尤其對(duì)幼齡動(dòng)物及病態(tài)和應(yīng)激狀態(tài)下的成年畜禽；③改善動(dòng)物胃腸道中微生態(tài)環(huán)境，促進(jìn)小腸對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收。纖維素、半纖維素和果膠等會(huì)增加動(dòng)物胃腸道內(nèi)溶物的粘度，阻礙動(dòng)物體內(nèi)消化酶與營養(yǎng)物質(zhì)的接觸，導(dǎo)致動(dòng)物對(duì)飼料消化吸收利用率降低，黏稠的消化道食糜還會(huì)引起有害微生物滋生。而纖維素酶可降低食糜黏度，加強(qiáng)動(dòng)物胃腸道內(nèi)容物流動(dòng)性，降低有害微生物在動(dòng)物腸道附著可能性。纖維素酶還可促進(jìn)腸道有益微生物生長，提高微生物對(duì)飼料的分解；纖維素酶同時(shí)具有維持動(dòng)物小腸絨毛形態(tài)完整，提高營養(yǎng)物質(zhì)吸收率的功能。
[0008]要在飼料中發(fā)揮酶制劑的最佳效果，必須有精確的應(yīng)用體系。在一定日糧中如何精確的使用酶制劑，一是要考慮原料中酶的底物的種類，針對(duì)性地添加；二是要考慮其含量，確保有足夠的底物與酶作用才能發(fā)揮效果；三是要根據(jù)動(dòng)物的特異性來設(shè)計(jì)。目前，對(duì)于飼用酶制劑在飼料中的添加量研究，多以動(dòng)物養(yǎng)殖試驗(yàn)為主，市場上對(duì)于飼用酶制劑的添加量，主要通過在動(dòng)物試驗(yàn)的基礎(chǔ)上再結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)成本確定，很少有人從酶制劑作用關(guān)系入手，進(jìn)行系統(tǒng)的研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明的目的是提供一種纖維素酶在飼料原料中的最適添加量配方。
[0010]本發(fā)明提供的一種確定纖維素酶在飼料原料中最適添加量的方法，包括如下步驟:
[0011](I)得出每千克飼料原料中纖維素的量；
[0012](2)測量纖維素酶的酶活，所述纖維素酶的酶活定義為在37°C pH為5.5的條件下，每分鐘內(nèi)從過量底物中降解釋放I μ mol還原糖所需的酶量定義為I個(gè)酶活力單位，IU ；
[0013]所述底物為步驟(I)所述的飼料原料；
[0014](3)根據(jù)步驟(2)所得的酶活，及下述公式，計(jì)算出每克步驟(I)中所述飼料原料所需纖維素酶的量，即為理論添加量；
[0015]Q= (CXI UX Imin) / (I μ mol XMX 120min)
[0016]式中:
[0017]Q——酶的理論添加量，U/g ；
[0018]C——每千克所述飼料原料中纖維素的量，g/kg ；
[0019]M——葡萄糖的摩爾質(zhì)量，180g/mol ;
[0020]120min-酶的作用時(shí)間；
[0021]1U, Imin, I μ mol-酶活定義參數(shù)；
[0022](4)以步驟(3)所得酶的理論添加量為基數(shù)，記作Q ;n為Q的倍數(shù)，以nXQ組成該酶的梯度添加量，其中 η 為 1/2、1/4、1/6、1/8、1/10、1/20、1、2、4、6、8、10、20 ；
[0023]所述梯度添加量是針對(duì)飼料原料來說的，即每克飼料原料中應(yīng)添加多少U的酶；
[0024](5)進(jìn)行體外酶解實(shí)驗(yàn)，體外酶解實(shí)驗(yàn)的體系如下:
[0025]I)將2g飼料原料加入15.0mL pH3.0的0.2mol/L乙酸-乙酸鈉緩沖溶液中，再加入0.5mL濃度為70mg/mL的胃蛋白酶溶液，混勻，得食糜液；胃蛋白酶溶液中溶劑為0.01mol/L鹽酸水溶液；[0026]2)用1.0mol/L鹽酸水溶液調(diào)節(jié)食糜液的pH值至3.0 ;
[0027]3)將食糜液混合均勻后置于40°C振蕩消化，消化75分鐘；
[0028]4)用1.0mol/L氫氧化鈉水溶液調(diào)整步驟3)所得消化液的pH值至6.3,然后加入50mg胰酶；
[0029]5)實(shí)驗(yàn)分兩組，第一組稱作加酶組，即向步驟4)所得體系中加入纖維素酶，所述酶的添加量為步驟(4)所設(shè)的梯度添加量；第二組稱作不加酶組，即向步驟4)所得體系中加入2.0mL 0.2mol/L pH6.3的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液；然后，第一組和第二組均置于40°C振蕩消化，消化時(shí)間為120min ；
[0030](6)還原糖測定，分別檢測加酶組和不加酶組的還原糖的濃度，分別記作Ye和\，單位為mg/mL ；
[0031](7)按照如下公式計(jì)算纖維素酶酶解產(chǎn)生的還原糖占飼料原料的質(zhì)量百分含量:
[0032]ΔΜ=(( (Ye-Y0) X D X V) /m) X 100
[0033]ΔΜ——酶解產(chǎn)生的還原糖占所加飼料原料的質(zhì)量百分含量，% ；
[0034]D—測定液稀釋倍數(shù)，等于ImL除以還原糖測定時(shí)離心上清液吸取量；
[0035]V-消化反應(yīng)體系總體積,27mL ;
[0036]m-消化反應(yīng)稱取飼料原料樣品的質(zhì)量，2000mg ；
[0037]100——百分比換算系數(shù)；
[0038](8)以η為橫坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)的ΛΜ為縱坐標(biāo)作圖，得到曲線的拐點(diǎn)，并取拐點(diǎn)前兩組和拐點(diǎn)后兩組的η值；
[0039](9)將步驟(8)得到的η對(duì)應(yīng)的組之間進(jìn)行ΛM差異分析，按照步驟(8)的η由小到大的順序，得到與步驟(8)的η最小的一組有顯著差異的第一組，纖維素酶在該組飼料中的添加量就是纖維素酶在所述飼料原料中的最適添加量；
[0040]所述酶為纖維素酶；
[0041]所述還原糖為葡萄糖。
[0042]上述方法中，所述還原糖測定步驟如下:
[0043](I)取出透析管，將消化液離心5min (5000r/min)，取一定量上清液，用水定容至
2.0mLjP 3.0mL DNS煮沸顯色，以水為空白調(diào)零，540nm測量加酶組和不加酶組的吸光值，分別記作Xe和X。；
[0044](2)用DNS法繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線，以葡萄糖含量(mg)為Y軸、吸光度OD值為X軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到公式Y(jié)=aX+b ；
[0045](3)分別將Xe和Xtl代入(2)的公式，計(jì)算加酶組和不加酶組的還原糖的濃度，分別記作Ye和Y0,單位換算為mg/mL ；
[0046]所述還原糖為葡萄糖。
[0047]上述任一所述的方法中，所述飼料原料為玉米、豆柏、小麥、麩皮、米糠柏、菜柏、棉柏和DDGS中任意一種。
[0048]一種飼料也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍，該飼料由飼料原料和纖維素酶組成。
[0049]上述飼料中，所述飼料原料為玉米、豆柏、小麥、麩皮、米糠柏、菜柏、棉柏和DDGS中任意一種。
[0050]上述任一所述的飼料中，所述玉米與所述纖維素酶的比例為lg:4.98U;所述豆柏與所述纖維素酶的比例為Ig:28.62U;所述小麥與所述纖維素酶的比例為Ig:8.88U；所述麩皮與所述纖維素酶的比例為Ig:19.44U ;所述米糠柏與所述纖維素酶的比例為Ig:
22.8U ;所述菜柏與所述纖維素酶的比例為Ig:27.78U ;所述棉柏與所述纖維素酶的比例為Ig:44.48U ;所述DDGS與所述纖維素酶的比例為Ig:9.72U ；
[0051]所述U的定義為:纖維素酶在37°C、pH為5.5的條件下，每分鐘從過量底物中降解釋放I μ mol還原糖所需的酶量定義為IU ；
[0052]所述底物為所述飼料原料；
[0053]所述還原糖為葡萄糖。
[0054]與理論添加量對(duì)比表明，各飼料原料對(duì)纖維素酶的需要量都高于理論添加量，要想完全發(fā)揮酶制劑在飼料中的酶解效果，必須添加足量的酶。本發(fā)明的選擇纖維素酶在飼料原料中最適添加量的方法和得到的最適添加量配方在飼料酶制劑的添加中具有指導(dǎo)意義。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0055]圖1為不同濃度的纖維素酶酶解不同飼料原料生成產(chǎn)物量的曲線圖。
【具體實(shí)施方式】
[0056]下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0057]下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0058]纖維素酶購自北京挑戰(zhàn)生物技術(shù)有限公司，產(chǎn)品目錄號(hào)為YL-156。
[0059]DDGS (酒糟蛋白飼料)購自吉林省新天龍實(shí)業(yè)股份有限公司。
[0060]胃蛋白酶購自Sigma，貨號(hào)為P7000。
[0061]胰蛋白酶購自Sigma，貨號(hào)為P7545。
[0062]氫氧化鈉溶液(200g/L)按照如下方法配制:稱取氫氧化鈉20.0g，加水溶解，定容至 IOOml ο
[0063]乙酸溶液(0.lmol/L)按照如下方法配制:吸取冰乙酸0.60ml,加水溶解,定容至IOOml。
[0064]乙酸鈉溶液(0.lmol/L)按照如下方法配制:稱取三水乙酸鈉1.36g,加水溶解,定容至100ml。
[0065]乙酸-乙酸鈉緩沖溶液(0.lmol/L, pH5.5)按照如下方法配制:稱取三水乙酸鈉
23.14g，加入冰乙酸1.35ml，再加水溶解，定容至2000ml，測定溶液的pH值，如果pH值偏離
5.5，再用乙酸溶液(0.lmol/L)或乙酸鈉溶液(0.lmol/L)調(diào)節(jié)至ρΗ5.5。
[0066]10.0mg/ml葡糖糖溶液按照如下方法配制:
[0067]稱取無水葡萄糖1.000g，加乙酸-乙酸鈉緩沖液(0.lmol/L, pH5.5)溶解，定容至IOOml。
[0068]羧甲基纖維素鈉購自Sigma,貨號(hào)為C5678。
[0069]8.0g/Ι羧甲基纖維素鈉溶液按照如下方法配制:
[0070]稱取羧甲基纖維素鈉0.80g,加入80ml乙酸-乙酸鈉緩沖溶液(0.lmol/L,PH5.5)。磁力攪拌，同時(shí)緩慢加熱，直至羧甲基纖維素鈉完全溶解(注:在攪拌加熱的過程中可以補(bǔ)加適量的緩沖液，但是溶液的總體積不能超過100ml)。然后停止加熱，繼續(xù)攪拌30min，用乙酸-乙酸鈉緩沖溶液(0.lmol/L,pH5.5)定容至100ml。羧甲基纖維素鈉溶液能立即使用，使用前適當(dāng)搖勻。4°C避光保存，有效期為3天。
[0071]DNS試劑按照如下方法配制:稱取3，5-二硝基水楊酸3.15g(分析純)，加水500ml，攪拌5s，水浴至45°C。然后逐步加入IOOml氫氧化鈉溶液(200g/L)，同時(shí)不斷攪拌，直到溶液清澈透明(注意:在加入氫氧化鈉過程中，溶液溫度不要超過48°C)。再逐步加入四水酒石酸鉀鈉91.0g、苯酚2.50g和無水亞硫酸鈉2.50g。繼續(xù)45°C水浴加熱，同時(shí)補(bǔ)加水300ml,不斷攪拌,直到加入的物質(zhì)完全溶解。停止加熱,冷卻至室溫后,用水定容至1000ml。用燒結(jié)玻璃過濾器過濾。取濾液儲(chǔ)存在棕色瓶中，避光保存。室溫下存放7天后可以使用，有效期6個(gè)月。
[0072]下述實(shí)施例中纖維素酶活力的測定方法如下:
[0073](一)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
[0074]吸取乙酸一乙酸鈉緩沖溶液(0.lmol/L, pH5.5) 4.0mL，加入DNS試劑5.0mL，沸水浴加熱5min。用自來水冷卻至室溫,用水定容至25.0mL,制成標(biāo)準(zhǔn)空白樣。
[0075]分別吸取葡萄糖溶液(10.0mg/ml) 0、0.10,0.20,0.30,0.40,0.50,0.60 和0.70ml,分別用乙酸-乙酸鈉緩沖溶液(0.lmol/L, ρΗ5.5)定容至10ml,配制成濃度為0.10mg/ml-0.70mg/ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。
[0076]分別吸取上述濃度系列的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液各2.0Oml (做兩個(gè)平行)，分別加入到刻度試管中，再分別加入2ml乙酸-乙酸鈉緩沖溶液(0.lmol/L,pH5.5)和5ml DNS試劑。電磁振蕩3s，沸水浴加熱5min。然后用自來水冷卻到室溫，再用水定容至25mL。以標(biāo)準(zhǔn)空白樣調(diào)零，在540nm處測定吸光度OD值。
[0077]以葡萄糖濃度mg為Y軸、吸光度OD值為X軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。每次新配制DNS試劑均需要重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0078](二)酶活的測定
[0079]1、吸取10.0mL羧甲基纖維素鈉溶液(8.0g/l)，37°C平衡IOmin。
[0080]2、吸取10.0mL經(jīng)過適當(dāng)稀釋的酶液，37°C平衡lOmin。
[0081]3、吸取2.0OmL經(jīng)過適當(dāng)稀釋的酶液(已經(jīng)過37°C平衡)，加入到刻度試管中，再加入5mL DNS試劑，電磁振蕩3s。然后加入2.0mL羧甲基纖維素鈉溶液(8.0g/l )，37°C保溫30min,沸水浴加熱5min。用自來水冷卻至室溫,加水定容至25mL,電磁振蕩3s。以標(biāo)準(zhǔn)空白樣調(diào)零，檢測在540nm處吸光度，記作Ab。
[0082]4、吸取2.0OmL經(jīng)過適當(dāng)稀釋的酶液(已經(jīng)過37°C平衡)，加入到刻度試管中，再加入2.0mL羧甲基纖維素鈉(8.0g/l)(已經(jīng)過37°C平衡)，電磁振蕩3s，37°C精確保溫30min。加入5.0mL DNS試劑，電磁振蕩3s，以終止酶解反應(yīng)。沸水浴加熱5min，用自來水冷卻至室溫，加水定容至25mL，電磁振蕩3s。以標(biāo)準(zhǔn)空白樣調(diào)零，檢測在540nm處吸光度，記作AE。
[0083]5、根據(jù)各試樣的吸光度值以及步驟(一)得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程，計(jì)算各試樣中的還原糖(葡萄糖)的量。
[0084]按照公式I和2計(jì)算試樣在對(duì)應(yīng)溫度及pH條件下的酶活力。
[0085]
【權(quán)利要求】
1.一種確定纖維素酶在飼料原料中最適添加量的方法，包括如下步驟: (1)得出每千克飼料原料中纖維素的量； (2)測量纖維素酶的酶活，所述纖維素酶的酶活定義為在37°CpH為5.5的條件下，每分鐘內(nèi)從過量底物中降解釋放I μ mol還原糖所需的酶量定義為I個(gè)酶活力單位，IU ； 所述底物為步驟(1)所述的飼料原料； (3)根據(jù)步驟(2)所得的酶活，及下述公式，計(jì)算出每克步驟(1)中所述飼料原料所需纖維素酶的量，即為理論添加量；
Q= (CXI UX Imin) / (I μ mol XMX 120min) 式中: Q——酶的理論添加量，U/g ； C—每千克步驟(1)所述飼料原料中纖維素的量，g/kg ； M——葡萄糖的摩爾質(zhì)量，180g/mol ； 120min——酶的作用時(shí)間； 1U, Imin, I μ mol-酶活定義參數(shù)； (4)以步驟(3)所得酶的理論添加量為基數(shù)，記作Q;n為Q的倍數(shù)，以nXQ組成該酶的梯度添加量，其中 η 為 1/2、1/4、1/6、1/8、1/10、1/20、1、2、4、6、8、10、20 ； (5)進(jìn)行體外酶解實(shí)驗(yàn)，體外酶解實(shí)驗(yàn)的體系如下: 1)將2g飼料原料加入15.0mL pH3.0的0.2mol/L乙酸-乙酸鈉緩沖溶液中，再加入·0.5mL濃度為70mg/mL的胃蛋白酶溶液，混勻，得食糜液；胃蛋白酶溶液中溶劑為0.01mol/L鹽酸水溶液； 2)用1.0mol/L鹽酸水溶液調(diào)節(jié)食糜液的pH值至3.0 ; 3)將食糜液混合均勻后置于40°C振蕩消化，消化75分鐘； 4)用1.0mol/L氫氧化鈉水溶液調(diào)整步驟3)所得消化液的pH值至6.3，然后加入50mg胰酶； 5)實(shí)驗(yàn)分兩組，第一組稱作加酶組，即向步驟4)所得體系中加入纖維素酶，所述酶的添加量為步驟(4)所設(shè)的梯度添加量；第二組稱作不加酶組，即向步驟4)所得體系中加入·2.0mL 0.2mol/L pH6.3的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液；然后，第一組和第二組均置于40°C振蕩消化，消化時(shí)間為120min ； (6)還原糖測定，分別檢測加酶組和不加酶組的還原糖的濃度，分別記作Ye和\，單位為 mg/mL ； (7)按照如下公式計(jì)算纖維素酶酶解產(chǎn)生的還原糖占飼料原料的質(zhì)量百分含量: ΔΜ=(( (Ye-Y0) X D X V) /m) X 100 ΔΜ——酶解產(chǎn)生的還原糖占所加飼料原料的質(zhì)量百分含量，% ； D——測定液稀釋倍數(shù)，等于ImL除以還原糖測定時(shí)離心上清液吸取量； V-消化反應(yīng)體系總體積，27mL ； m-消化反應(yīng)稱取飼料原料樣品的質(zhì)量，2000mg ； 100—百分比換算系數(shù)； (8)以η為橫坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)的AM為縱坐標(biāo)作圖，得到曲線的拐點(diǎn)，并取拐點(diǎn)前兩組和拐點(diǎn)后兩組的η值；(9)將步驟(8)得到的η對(duì)應(yīng)的組之間進(jìn)行AM差異分析，按照步驟(8)的η由小到大的順序，得到與步驟(8)的η最小的一組有顯著差異的第一組，纖維素酶在該組飼料中的添加量就是纖維素酶在所述飼料原料中的最適添加量； 所述酶為纖維素酶； 所述還原糖為葡萄糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述還原糖測定步驟如下: (1)取出透析管，將消化液離心5min(5000r/min )，取一定量上清液，用水定容至2.0mLjP 3.0mL DNS煮沸顯色，以水為空白調(diào)零，540nm測量加酶組和不加酶組的吸光值，分別記作Xe和X。； (2)用DNS法繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線，以葡萄糖含量(mg)為Y軸、吸光度OD值為X軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到公式Y(jié)=aX+b ； (3)分別將Xe和Xtl代入(2)的公式，計(jì)算加酶組和不加酶組的還原糖的濃度，分別記作Ye和Y。,單位換算為mg/mL ； 所述還原糖為葡萄糖。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于:所述飼料原料為玉米、豆柏、小麥、麩皮、米糠柏、菜柏、棉柏和DDGS中任意一種。
4.一種飼料，由飼料原料和纖維素酶組成。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的飼料，其特征在于:所述飼料原料為玉米、豆柏、小麥、麩皮、米糠柏、菜柏、棉柏和DDGS中任意一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的飼料，其特征在于:所述玉米與所述纖維素酶的比例為Ig:4.98U ;所述豆柏與所述纖維素酶的比例為Ig:28.62U ;所述小麥與所述纖維素酶的比例為Ig:8.88U ;所述麩皮與所述纖維素酶的比例為Ig:19.44U ;所述米糠柏與所述纖維素酶的比例為Ig:22.8U ;所述菜柏與所述纖維素酶的比例為Ig:27.78U ;所述棉柏與所述纖維素酶的比例為Ig:44.48U ;所述DDGS與所述纖維素酶的比例為Ig:9.72U ； 所述U的定義為:纖維素酶在37°C、pH為5.5的條件下，每分鐘從過量底物中降解釋放Iμ mol還原糖所需的酶量定義為IU ； 所述底物為所述飼料原料； 所述還原糖為葡萄糖。
【文檔編號(hào)】A23K1/165GK103518976SQ201310484374
【公開日】2014年1月22日 申請(qǐng)日期:2013年10月16日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月16日
【發(fā)明者】湯海鷗, 蔡輝益, 楊祿良, 謝寧, 王曉睿 申請(qǐng)人:天津博菲德科技有限公司