一種促進(jìn)牡丹種苗生長(zhǎng)的方法及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種促進(jìn)牡丹種苗生長(zhǎng)的方法及其應(yīng)用。具體地，本發(fā)明提供了一種牡丹種苗處理液，所述處理液包括：牡丹種苗生長(zhǎng)活性劑(赤霉素和/或6-芐基腺嘌呤)以及表面活性劑，還可以包括農(nóng)學(xué)上可接受的可溶性鈣鹽。所述的生長(zhǎng)活性劑能夠打破牡丹種子上胚軸的休眠，提高牡丹種子發(fā)芽率/發(fā)芽勢(shì)，加快牡丹種子生長(zhǎng)進(jìn)程，促進(jìn)牡丹種子苗/組培苗成苗或成花；所述的表面活性劑能夠使得活性物質(zhì)充分進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)；所述的可溶性鈣鹽與細(xì)胞的多種生理功能緊密相關(guān)。
【專利說(shuō)明】一種促進(jìn)牡丹種苗生長(zhǎng)的方法及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物生物學(xué)領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及一種促進(jìn)牡丹種苗生長(zhǎng)的方法 及其應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 牡丹（Paeonia suffruticosa)，另lj名富貴花、百兩金、木巧藥、鼠姑、鹿亜，洛陽(yáng)花， 為芍藥科芍藥屬木本植物，落葉灌木，素有"國(guó)色天香"、"花中之王"的美譽(yù)，為我國(guó)國(guó)花之 首選。牡丹不僅有較高的觀賞價(jià)值，還具備很好的藥用價(jià)值。早在漢代，藥用植物典籍《神 農(nóng)本草經(jīng)》就有牡丹被馴化入藥的記載。隨著牡丹在園林綠化、藥材儲(chǔ)備中市場(chǎng)價(jià)值的增 大，催生了牡丹的經(jīng)濟(jì)市場(chǎng)。擴(kuò)大繁殖系數(shù)，提高擴(kuò)繁效率，開(kāi)展牡丹種苗規(guī)?；a(chǎn)，為市 場(chǎng)快速高效提供各級(jí)優(yōu)質(zhì)牡丹苗木，成為當(dāng)今牡丹生產(chǎn)與研究的主要關(guān)注點(diǎn)。
[0003] 牡丹種子在自然條件下具有休眠特性，具體表現(xiàn)在胚根（下胚軸）和胚芽（上胚 軸）的休眠，尤以上胚軸休眠較為深沉。通常情況下，牡丹種子因越冬低溫打破休眠而自然 萌發(fā)需兩年時(shí)間，成苗開(kāi)花需10年左右，時(shí)間跨度過(guò)長(zhǎng)，生產(chǎn)效率過(guò)低，生產(chǎn)成本過(guò)高，嚴(yán) 重制約牡丹經(jīng)濟(jì)的發(fā)展。因此，快速高效破除上胚軸休眠特性，有效提高種子的發(fā)芽率及發(fā) 芽勢(shì)，縮短牡丹種子成苗成花時(shí)間跨度，對(duì)日益升溫的牡丹經(jīng)濟(jì)來(lái)說(shuō)，意義重大。
[0004] 然而目前本領(lǐng)域尚缺乏有效的破除牡丹種子上胚軸休眠，促進(jìn)牡丹種苗生長(zhǎng)的有 效方法，因此迫切需要開(kāi)發(fā)相應(yīng)的技術(shù)方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的就是提供一種破除牡丹種子上胚軸休眠，促進(jìn)牡丹種苗生長(zhǎng)的方 法。
[0006] 本發(fā)明的另一目的就是提供一種破除牡丹種子上胚軸休眠，促進(jìn)牡丹種苗生長(zhǎng)的 處理液。
[0007] 本發(fā)明的第一方面，提供一種牡丹種苗處理液，包括：
[0008] 有效量的牡丹種苗生長(zhǎng)活性劑和表面活性劑；并且所述的活性劑為赤霉素（GA3)， 和/或6-芐基腺嘌呤（6-BA)。
[0009] 在另一優(yōu)選例中，所述的處理液還包括：農(nóng)學(xué)上可接受的可溶性鈣鹽。
[0010] 在另一優(yōu)選例中，在所述處理液中，赤霉素（GA3)的含量為5-10000mg/L。
[0011] 在另一優(yōu)選例中，在所述處理液中，赤霉素（GA3)的含量為10-10000mg/L，較佳地， 在所述處理液中，赤霉素（GA 3)的含量為100-1000mg/L。
[0012] 在另一優(yōu)選例中，所述的在所述處理液中，赤霉素（GA3)的含量為5-1000mg/L。
[0013] 在另一優(yōu)選例中，在所述處理液中，6-芐基腺嘌呤（6-BA)的含量為0. l-100mg/L。
[0014] 在另一優(yōu)選例中，在所述處理液中，6-芐基腺嘌呤（6-BA)的含量為0. 2-10mg/L， 較佳的，為〇· 2-5mg/L，更佳地，為0· 5-2mg/L。
[0015] 在另一優(yōu)選例中，在所述處理液中，6-芐基腺嘌呤（6-BA)的含量為0. 5-10mg/L。
[0016] 在另一優(yōu)選例中，所述的表面活性劑任選自下組或其組合：
[0017] 陰離子表面活性劑(優(yōu)選硬脂酸或十二烷基苯磺酸鈉）；
[0018] 陽(yáng)離子表面活性劑(優(yōu)選季銨化物）；
[0019] 兩性離子表面活性劑(優(yōu)選卵磷脂、氨基酸型、或甜菜堿）；
[0020] 非離子表面活性劑(優(yōu)選脂肪酸甘油酯、脂肪酸山梨坦、吐溫）；
[0021] 在另一優(yōu)選例中，所述的表面活性劑為吐溫-20或吐溫-80。
[0022] 在另一優(yōu)選例中，在所述處理液中，表面活性劑含量為1-1000 μ 1/L，較佳地，為 1-500 μ 1/L，更佳地，為 1-150 μ 1/L。
[0023] 在另一優(yōu)選例中，在所述處理液中，表面活性劑為吐溫-20,且其含量為 1-1000 μ 1/L。
[0024] 在另一優(yōu)選例中，表面活性劑吐溫-20的含量為1-100 μ 1/L，較佳地為 10-100 μ1/L。
[0025] 在另一優(yōu)選例中，所述的農(nóng)學(xué)上可接受的可溶性鈣鹽選自下組：Ca (N03)2、Ca (Cl) 2、Ca (H2P04) 2。
[0026] 在另一優(yōu)選例中，在所述處理液中，所述的農(nóng)學(xué)上可接受的可溶性鈣鹽的含量為 0· 5_50mg/L (優(yōu)選 l_5mg/L)。
[0027] 在另一優(yōu)選例中，所述的處理液為任選自（a) - (c)的處理液：
[0028] (a) 1000mg/L 赤霉素（GA3)，100 μ 1/L 吐溫-20 ;
[0029] (b) 100mg/L 赤霉素（GA3)，lmg/L6-芐基腺嘌呤（6-BA)，5mg/L Ca(N03)2,10 μ 1/L 吐溫-20 ;
[0030] (c)10mg/L 赤霉素（GA3)，0.5mg/L6-芐基腺嘌呤（6-BA)，lmg/L Ca(N03)2、2y 1/L 吐溫-20。
[0031] 本發(fā)明的第二方面，提供第一方面所述處理液的用途，所述的處理液具有任選自 下組的用途或其組合：
[0032] (1)打破牡丹種子上胚軸的休眠；
[0033] (2)提高牡丹種子發(fā)芽率/發(fā)芽勢(shì)；
[0034] (3)加快牡丹種子生長(zhǎng)進(jìn)程；
[0035] (4)促進(jìn)牡丹種子苗/組培苗成苗；或
[0036] (5)促進(jìn)牡丹種子苗/組培苗成花。
[0037] 本發(fā)明的第三方面，提供一種促進(jìn)牡丹種苗生長(zhǎng)的方法，包括步驟：用第一方面所 述的處理液處理牡丹種子或牡丹種苗。
[0038] 在另一優(yōu)選例中，所述方法包括采用第一方面所述的處理液處理牡丹種子培養(yǎng) 物，所述培養(yǎng)物為河沙、菜園土、WPM基本培養(yǎng)基。
[0039] 在另一優(yōu)選例中，所述方法包括步驟：
[0040] (1)用處理液處理牡丹種子，并且所述的處理液包括1000mg/L的赤霉素（GA3)，和 100μ 1/L 的吐溫-20 ;
[0041] (2)將步驟（1)處理獲得的種子埋于沙中，并且所述的沙經(jīng)包括100mg/L的赤霉素 (GA 3)、lmg/L 的 6-芐基腺嘌呤（6-BA)、5mg/L 的 Ca (N03) 2、和 10 μ 1/L 的吐溫-20 的處理 液處理，使種子萌發(fā)，獲得萌發(fā)的葉片；和
[0042] (3)用包括 lOmg/L 赤霉素（GA3)、0.5mg/L6-芐基腺嘌呤（6-BA)、lmg/L Ca (N03) 2、和2 μ 1/L吐溫-20的處理液處理步驟（2)獲得的萌發(fā)的葉片，從而獲得具有主莖的牡丹 植株。
[0043] 在另一優(yōu)選例中，所述方法包括步驟：
[0044] (a)用處理液處理牡丹種子，并且所述的處理液包括1000mg/L的赤霉素（GA3)，和 100μ 1/L 的吐溫-20 ;
[0045] (b)去除步驟（a)獲得的種子的種殼，并且用包括100mg/L的赤霉素（GA3)、lmg/L 的6-芐基腺嘌呤（6-BA)、5mg/L的Ca (N03) 2、和10 μ 1/L的吐溫-20的處理液處理，獲得 處理后的帶胚乳的種子；
[0046] (c)從步驟（b)的帶胚乳的種子中獲得種胚，接種于培養(yǎng)基中，獲得具有主莖的牡 丹植株。
[0047] 應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文（如實(shí)施例）中具 體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0048] 下列附圖用于說(shuō)明本發(fā)明的具體實(shí)施方案，而不用于限定由權(quán)利要求書(shū)所界定的 本發(fā)明范圍。
[0049] 圖1顯示加速牡丹種子苗生產(chǎn)進(jìn)程結(jié)果；圖1A (對(duì)照）：自然萌發(fā)25月的牡丹種 苗，僅具葉柄和葉片，上胚軸仍處于休眠狀態(tài)；圖1B :處理后萌發(fā)6月的牡丹種苗，具葉柄、 葉片和明顯的主莖，上胚軸休眠被打破。
[0050] 圖2顯示加速牡丹組培苗生產(chǎn)進(jìn)程結(jié)果；圖2A (對(duì)照）：離體培養(yǎng)20周的牡丹種 胚，僅具真葉，上胚軸仍處于休眠狀態(tài)；圖2B :半量處理后離體培養(yǎng)6周的牡丹芽苗，具真 葉、葉柄、葉片和明顯的主莖，上胚軸休眠被打破。圖2C :全量處理后離體培養(yǎng)6周的牡丹 芽苗，具真葉、葉柄、葉片和明顯的主莖，上胚軸休眠被打破。

【具體實(shí)施方式】
[0051] 本發(fā)明人經(jīng)過(guò)廣泛而深入的研究，首次獲得一種破除牡丹種子上胚軸休眠，促進(jìn) 牡丹種苗生長(zhǎng)的處理液，以及促進(jìn)牡丹種苗生長(zhǎng)的方法。具體地，本發(fā)明的所述處理液包 括：牡丹種苗生長(zhǎng)活性劑(赤霉素和/或6-芐基腺嘌呤）以及表面活性劑，還可以包括農(nóng)學(xué) 上可接受的可溶性鈣鹽。所述的生長(zhǎng)活性劑能夠打破牡丹種子上胚軸的休眠，提高牡丹種 子發(fā)芽率/發(fā)芽勢(shì)，加快牡丹種子生長(zhǎng)進(jìn)程，促進(jìn)牡丹種子苗/組培苗成苗或成花；所述的 表面活性劑能夠使得活性物質(zhì)充分進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)；所述的可溶性鈣鹽與細(xì)胞的多種生理功能 緊密相關(guān)。在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。
[0052] 術(shù)語(yǔ)
[0053] 牡丹
[0054] 如本文所用，術(shù)語(yǔ)"牡丹"是指一種屬于芍藥科（Paeoniaceae)，芍藥屬 (Paeonia)，牡丹種（P. suffruticosa)的植物。
[0055] 本發(fā)明所述的牡丹包括(但不限于）：芍藥。
[0056] 牡丹種苗
[0057] 如本文所用，術(shù)語(yǔ)"牡丹種苗"包括：牡丹種子、牡丹苗、牡丹種胚、出苗后含明顯主 莖的幼苗。
[0058] 如本文所用，術(shù)語(yǔ)"牡丹種子"包括(但不限于）:牡丹新鮮種子，經(jīng)低溫儲(chǔ)存的牡丹 陳種子，包括種殼或去除種殼的牡丹種子。
[0059] 如本文所用，術(shù)語(yǔ)"牡丹苗"包括(但不限于）：具有葉柄和葉片的牡丹苗。
[0060] 牡丹種苗處理液
[0061] 本發(fā)明提供了一種牡丹種苗處理液，主要包括：（1)有效量的牡丹種苗生長(zhǎng)活性 齊U，并且所述的活性劑為赤霉素（GA3)，和/或6-芐基腺嘌呤（6-BA);以及（2)有效量的表 面活性劑；優(yōu)選地，所述的處理液還可以包括：農(nóng)學(xué)上可接受的可溶性鈣鹽。
[0062] 如本文所用，術(shù)語(yǔ)"有效量"或"有效劑量"是指可對(duì)牡丹種苗產(chǎn)生功能或活性的 且可被牡丹種苗所接受的量。
[0063] 本發(fā)明的所述處理液可以用于：（1)打破牡丹種子上胚軸的休眠；（2)提高牡丹種 子發(fā)芽率/發(fā)芽勢(shì)；（3)加快牡丹種子生長(zhǎng)進(jìn)程；(4)促進(jìn)牡丹種子苗/組培苗成苗；或（5) 促進(jìn)牡丹種子苗/組培苗成花。
[0064] 赤霉素
[0065] 如本文所用，術(shù)語(yǔ)"赤霉素"可以與"GA"互換使用。
[0066] 赤霉素是一類廣泛存在的植物激素，化學(xué)結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜，屬于二萜類酸，由四環(huán)骨 架衍生而得。赤霉素都含有赤霉素烷骨架。在高等植物中赤霉素的最近前體一般認(rèn)為是貝 殼杉烯。赤霉素的基本結(jié)構(gòu)是赤霉素烷，有4個(gè)環(huán)。在赤霉素烷上，由于雙鍵、羥基數(shù)目和 位置不同，形成了各種赤霉素，已知的赤霉素類至少有38種。不同的赤霉素生物活性不同， 赤霉酸（GA3)的活性最高?；钚愿叩幕衔锉仨氂幸粋€(gè)赤霉環(huán)系統(tǒng)(環(huán)AB⑶)，在C-7上有 羧基，在A環(huán)上有一個(gè)內(nèi)酯環(huán)。
[0067] 赤霉素目前廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)，如提高葡萄產(chǎn)量，或在雜交水稻制種中調(diào)節(jié)花 期以使父母本花期相遇等；對(duì)水稻、棉花、蔬菜、瓜果、綠肥等有顯著的增產(chǎn)效果。
[0068] 本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以使用常規(guī)方法獲得各種赤霉素，如市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)或用常規(guī) 方法制取。一種常規(guī)制取赤霉素的方法為用甲醇提取。不同的赤霉素可以用各種色譜分析 技術(shù)分開(kāi)。
[0069] 在本發(fā)明的處理液中，赤霉素（GA3)的含量為10-10000mg/L，優(yōu)選100-1000mg/L。
[0070] 6-芐基腺嘌呤
[0071] 如本文所用，術(shù)語(yǔ)"6-芐基腺嘌呤"、"6-芐腺嘌呤"、"6-苯甲基腺嘌呤"、"6-BA" 等均可以與互換使用。
[0072] 6-芐基腺嘌呤是一種廣譜性植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，可促進(jìn)植物細(xì)胞生長(zhǎng)，抑制植物葉 綠素、核酸、蛋白質(zhì)的分解，提高氨基酸的含量，延緩葉片衰老，將氨基酸、生長(zhǎng)素、無(wú)機(jī)鹽等 向處理部位調(diào)運(yùn)等多種效能，廣泛用在農(nóng)業(yè)、果樹(shù)和園藝作物的從發(fā)芽到收獲的各個(gè)階段。
[0073] 本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以使用常規(guī)方法獲得6-芐基腺嘌呤，如市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)或用 常規(guī)方法制取。
[0074] 在本發(fā)明的處理液中，優(yōu)選6-芐基腺嘌呤的含量為0. l-100mg/L ;優(yōu)選0. 5-10mg/ L〇
[0075] 表面活性劑
[0076] 本發(fā)明的處理液還包括表面活性劑。表面活性劑是一類即使在很低濃度時(shí)也能顯 著降低表(界）面張力的物質(zhì)。目前一般認(rèn)為只要在較低濃度下能顯著改變表(界）面性質(zhì) 或與此相關(guān)、由此派生的性質(zhì)的物質(zhì)，都可以劃歸表面活性劑范疇。無(wú)論何種表面活性劑， 其分子結(jié)構(gòu)均由兩部分構(gòu)成：分子的一端為非極親油的疏水基(親油基）；分子的另一端為 極性親水的親水基(疏油基或親水頭)。兩類結(jié)構(gòu)與性能截然相反的分子碎片或基團(tuán)分處于 同一分子的兩端并以化學(xué)鍵相連接，形成了一種不對(duì)稱的、極性的結(jié)構(gòu)，因而賦予了該類特 殊分子既親水、又親油，便又不是整體親水或親油的特性。表面活性劑的這種特有結(jié)構(gòu)通常 稱之為"雙親結(jié)構(gòu)"（amphiphilic structure),表面活性劑分子因而也常被稱作"雙親分 子"。
[0077] 在本發(fā)明中，所述的表明活性劑可以任選自下組或其組合：
[0078] 陰離子表面活性劑(優(yōu)選硬脂酸或十二烷基苯磺酸鈉）；
[0079] 陽(yáng)離子表面活性劑(優(yōu)選季銨化物）；
[0080] 兩性離子表面活性劑(優(yōu)選卵磷脂、氨基酸型、或甜菜堿）；
[0081] 非離子表面活性劑(優(yōu)選脂肪酸甘油酯、脂肪酸山梨坦、吐溫）；
[0082] 在另一優(yōu)選例中，所述的表面活性劑為吐溫-20或吐溫-80 ;其含量為1-1000 μ 1/ L ;優(yōu)選為 10-100 μ 1/L。
[0083] 可溶性鈣鹽
[0084] 在本發(fā)明的處理液中還包括農(nóng)學(xué)上可接受的可溶性鈣鹽，所述的鈣鹽選自下組： Ca (N03)2、CaCl2、Ca(H2P0 4)2 等。
[0085] 所述的農(nóng)學(xué)上可接受的可溶性鈣鹽的含量為0.5-50mg/L (優(yōu)選l-5mg/L)。
[0086] 如本文所用，"農(nóng)學(xué)上可接受的"的成分是適用于牡丹種苗而無(wú)過(guò)度不良副反應(yīng) 的，即具有合理的效益/風(fēng)險(xiǎn)比的物質(zhì)。
[0087] 應(yīng)用
[0088] 本發(fā)明提供了一種促進(jìn)牡丹種苗生長(zhǎng)的方法，包括步驟：用本發(fā)明所述的處理液 處理牡丹種子或牡丹種苗。
[0089] 在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選例中，所述方法具體地點(diǎn)，包括步驟：（1)用處理液處理牡丹 種子，所述的處理液包括l〇〇〇mg/L的赤霉素（GA 3)，和100 μ 1/L的吐溫-20 ; (2)將步驟（1) 處理獲得的種子埋于沙中，并且所述的沙經(jīng)包括l〇〇mg/L的赤霉素（GA3)、lmg/L的6-芐基 腺嘌呤（6-BA)、5mg/L的Ca(N0 3)2、和10μ 1/L的吐溫-20的處理液處理，使種子萌發(fā)，獲得 萌發(fā)的葉片；和⑶用包括l〇mg/L赤霉素（GA3)、0.5mg/L6-芐基腺嘌呤（6-BA)、lmg/L Ca (N03) 2、和2 μ 1/L吐溫-20的處理液處理步驟⑵獲得的萌發(fā)的葉片，從而獲得具有主莖 的牡丹植株。
[0090] 在本發(fā)明的另一優(yōu)選例中，所述的方法包括步驟：(a)用處理液處理牡丹種子，并 且所述的處理液包括l〇〇〇mg/L的赤霉素（GA 3)，和100 μ 1/L的吐溫-20 ; (b)去除步驟（a) 獲得的種子的種殼，并且用包括l〇〇mg/L的赤霉素（GA3)、lmg/L的6-芐基腺嘌呤（6-BA)、 5mg/L的Ca(N0 3)2、和10 μ 1/L的吐溫-20的處理液處理，獲得處理后的帶胚乳的種子；（c) 從步驟（b)的帶胚乳的種子中獲得種胚，接種于培養(yǎng)基中，獲得具有主莖的牡丹植株。
[0091] 本發(fā)明提到的上述特征，或?qū)嵤├岬降奶卣骺梢匀我饨M合。本案說(shuō)明書(shū)所揭示 的所有特征可與任何組合物形式并用，說(shuō)明書(shū)中所揭示的各個(gè)特征，可以被任何提供相同、 均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特別說(shuō)明，所揭示的特征僅為均等或相似特 征的一般性例子。
[0092] 本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)如下：
[0093] (1)以牡丹種子為起始材料，經(jīng)過(guò)本發(fā)明處理液的一系列處理，能快速高效打破牡 丹種子休眠，大大縮短牡丹種子苗和組培苗成苗成花進(jìn)程；
[0094] (2)本發(fā)明處理所得牡丹植株與自然萌發(fā)植株的表型一致性高，遺傳穩(wěn)定性好，組 培苗生產(chǎn)進(jìn)程加速使外源目的基因的有效性狀導(dǎo)入牡丹這一珍貴物種成為可能；
[0095] (3)本發(fā)明方法重復(fù)三次試驗(yàn)，累計(jì)獲得牡丹種子苗185株，組培苗35株，兩種來(lái) 源的植株表型與同種親本實(shí)生苗表型一致性高。
[0096] 下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條 件如 Sambrook 等人，分子克?。簩?shí)驗(yàn)室手冊(cè)（New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說(shuō)明，否則百分比和 份數(shù)按重量計(jì)算。
[0097] 除非另行定義，文中所使用的所有專業(yè)與科學(xué)用語(yǔ)與本領(lǐng)域熟練人員所熟悉的意 義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于本發(fā)明方法中。文 中所述的較佳實(shí)施方法與材料僅作示范之用。
[0098] 實(shí)施例1
[0099] 加速牡丹種子苗生產(chǎn)進(jìn)程
[0100] 1.選取飽滿的牡丹種子，用處理液I【l〇〇〇mg/L的赤霉素（GA3)+100ul/L 土溫 (T20)溶液】浸泡24h，棄液，留種子，溫水洗3次，風(fēng)干，置于4°C或_20°C冰箱以備用。
[0101] 2.取干凈的河沙若干，121°C高溫滅菌lh，冷卻至常溫，用處理液II【100mg/L GA 3+lmg/L6-BA+5mg/L Ca (N03) 2+10ul/L T20】浸透河沙，將步驟（1)的牡丹種子埋藏于上述 濕沙中，黑暗條件下4°C儲(chǔ)藏2個(gè)月，現(xiàn)根，始萌發(fā)。
[0102] 3.將步驟（2)已發(fā)根的牡丹種子淺淺地播種于泥炭、菜園土和珍珠巖（3 : 6 : 1) 的基質(zhì)中，在28±2°C、自然光照的大棚中生長(zhǎng)1個(gè)月，始現(xiàn)葉柄和葉片。將步驟（1)的牡丹 種子埋藏于上述濕沙中，黑暗條件下4°C儲(chǔ)藏2個(gè)月，現(xiàn)根，始萌發(fā)。
[0103] 4.用處理液III【10mg/L GA3+0. 5mg/L6-BA+lmg/L Ca(N03)2+2ul/L T20】噴灑步驟 (3)獲得的小苗葉片，7天/次，3個(gè)月時(shí)，長(zhǎng)成具明顯主莖的牡丹小植株，見(jiàn)圖1B，圖1A為 對(duì)照。
[0104] 5.將下胚軸切成2-4毫米的切斷以備用，已發(fā)根的牡丹種子淺淺地播種于泥炭、 菜園土和珍珠巖（3 : 6 : 1)的基質(zhì)中，在28±2°C、自然光照的大棚中生長(zhǎng)1個(gè)月，始現(xiàn)葉 柄和葉片。
[0105] 若僅使用6-BA處理，效果差，而本實(shí)施例結(jié)果表明上述配方具有活體打破牡丹種 子休眠的功效。結(jié)果表明自然狀態(tài)下需2年才能成苗(見(jiàn)明顯主莖）的牡丹種子，在本實(shí)施 例的人工萌發(fā)處理?xiàng)l件下短時(shí)間內(nèi)即可成苗(見(jiàn)明顯主莖)。相比，具有活體打破牡丹種子 休眠的功效。
[0106] 實(shí)施例2
[0107] 加速牡丹組培苗生產(chǎn)進(jìn)程
[0108] 1.選取飽滿的牡丹種子，用處理液I【1000mg/L的赤霉素（GA3)+100ul/L 土溫 (T20)溶液】浸泡24h，棄液，留種子，溫水洗3次，風(fēng)干，置于4°C或_20°C冰箱以備用。
[0109] 2.剝除步驟（1)獲得的牡丹種子的種殼，用處理液II【100mg/L GA3+lmg/ L6-BA+5mg/L Ca(N03)2+10ul/L T20】浸泡24h，棄液，收集帶胚乳的種子，濾紙吸干表面水 分。
[0110] 3.將步驟（2)獲得的帶胚乳種子用自來(lái)水洗凈，吸干表面水珠，在超凈工作臺(tái)上 用70%的乙醇消毒30-90秒,0. 1%的升萊浸泡5-8分鐘，無(wú)菌水沖洗5-8次,無(wú)菌濾紙吸干 無(wú)菌材料表面水珠，剝出種胚，接種于WPM基本培養(yǎng)基(木本植物離體培養(yǎng)的通用培養(yǎng)基)添 加5mg/L GA3+0. 5mg/L BA+lmg/LCa(N03)2的培養(yǎng)基中，在光照、25±2°C的培養(yǎng)條件下，2星 期見(jiàn)心葉，4星期見(jiàn)明顯主莖，見(jiàn)圖2B和圖2C，圖2B為半量處理效果，圖2C為全量處理效 果，圖2A為對(duì)照，接種于WPM基本培養(yǎng)基。
[0111] 4.將步驟（3)獲得的無(wú)菌芽苗轉(zhuǎn)接至WPM基本培養(yǎng)基附件2mg/L脫落酸ABA+lmg/ L多效唑的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)2星期，即可轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)，見(jiàn)圖2C。
[0112] 結(jié)果表明：上述配方具有離體打破牡丹種子休眠的功效。自然狀態(tài)下需2年才能 成苗(見(jiàn)明顯主莖）的牡丹種子，在本實(shí)施例的離體培養(yǎng)及處理?xiàng)l件下僅需1個(gè)月即可成芽 苗(見(jiàn)明顯主莖)，經(jīng)生根誘導(dǎo)，可在3個(gè)月內(nèi)獲得具明顯主莖的土壤移栽苗。
[0113] 在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請(qǐng)中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú) 引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可 以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書(shū)所限定的范 圍。
【權(quán)利要求】
1. 一種牡丹種苗處理液，其特征在于，所述的處理液包括： 有效量的牡丹種苗生長(zhǎng)活性劑和表面活性劑；并且所述的活性劑為赤霉素（ga3)，和/ 或6-芐基腺嘌呤（6-BA)。
2. 如權(quán)利要求1所述的處理液，其特征在于，所述的處理液還包括：農(nóng)學(xué)上可接受的可 溶性鈣鹽。
3. 如權(quán)利要求1-2任一所述的處理液，其特征在于，在所述處理液中，赤霉素（GA3)的 含量為 5-10000mg/L。
4. 如權(quán)利要求1-2任一所述的處理液，其特征在于，在所述處理液中，6-芐基腺嘌呤 (6-BA)的含量為 0· l-100mg/L。
5. 如權(quán)利要求1-2任一所述的處理液，其特征在于，所述的表面活性劑任選自下組或 其組合： 陰離子表面活性劑(優(yōu)選硬脂酸或十二烷基苯磺酸鈉）； 陽(yáng)離子表面活性劑(優(yōu)選季銨化物）； 兩性離子表面活性劑(優(yōu)選卵磷脂、氨基酸型、或甜菜堿）； 非離子表面活性劑(優(yōu)選脂肪酸甘油酯、脂肪酸山梨坦、吐溫)。
6. 如權(quán)利要求2所述的處理液，其特征在于，所述的農(nóng)學(xué)上可接受的可溶性鈣鹽選自 下組：Ca (N03)2、Ca (Cl)2、Ca(H2P04)2。
7. 權(quán)利要求1所述處理液的用途，其特征在于，所述的處理液具有任選自下組的用途 或其組合： (1) 打破牡丹種子上胚軸的休眠； (2) 提高牡丹種子發(fā)芽率/發(fā)芽勢(shì)； (3) 加快牡丹種子生長(zhǎng)進(jìn)程； (4) 促進(jìn)牡丹種子苗/組培苗成苗；或 (5) 促進(jìn)牡丹種子苗/組培苗成花。
8. -種促進(jìn)牡丹種苗生長(zhǎng)的方法，其特征在于，包括步驟：用權(quán)利要求1所述的處理液 處理牡丹種子或牡丹種苗。
9. 如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，包括步驟： (1) 用處理液處理牡丹種子，并且所述的處理液包括l〇〇〇mg/L的赤霉素（GA3)，和 100μ 1/L 的吐溫-20 ; (2) 將步驟（1)處理獲得的種子埋于沙中，并且所述的沙經(jīng)包括100mg/L的赤霉素 (GA3)、lmg/L 的 6-芐基腺嘌呤（6-BA)、5mg/L 的 Ca (N03) 2、和 10 μ 1/L 的吐溫-20 的處理 液處理，使種子萌發(fā)，獲得萌發(fā)的葉片；和 ⑶用包括 l〇mg/L 赤霉素（GA3)、0.5mg/L6-芐基腺嘌呤（6-BA)、lmg/L Ca (Ν03)2、和 2μ 1/L吐溫-20的處理液處理步驟（2)獲得的萌發(fā)的葉片，從而獲得具有主莖的牡丹植株。
10. 如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，包括步驟： (a) 用處理液處理牡丹種子，并且所述的處理液包括1000mg/L的赤霉素（GA3)，和 100μ 1/L 的吐溫-20 ; (b) 去除步驟（a)獲得的種子的種殼，并且用包括100mg/L的赤霉素（GA3)、lmg/L的 6_芐基腺嘌呤（6-BA)、5mg/L的Ca (N03)2、和10 μ 1/L的吐溫-20的處理液處理，獲得處理 后的帶胚乳的種子； (C)從步驟（b)的帶胚乳的種子中獲得種胚，接種于培養(yǎng)基中，獲得具有主莖的牡丹植 株。
【文檔編號(hào)】A01P21/00GK104206417SQ201310221153
【公開(kāi)日】2014年12月17日 申請(qǐng)日期:2013年6月4日 優(yōu)先權(quán)日:2013年6月4日
【發(fā)明者】朱木蘭, 奉樹(shù)成, 胡永紅, 秦俊 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院