專利名稱：一種鱖魚幼魚肌肉生長(zhǎng)促進(jìn)劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新潁的具有抑制肌肉生成抑制素(myostatin, MSTN)表達(dá)的化學(xué)合成劑，其在鱖魚幼魚肌肉生長(zhǎng)中起促進(jìn)作用。
背景技術(shù)：
肌肉生成抑制素(myostatin，MSTN)作為一種新的生長(zhǎng)因子在1997年被發(fā)現(xiàn)，被命名為生長(zhǎng)分化因子-8 (⑶F-8)。McPherron和Grobet等報(bào)道Myostatin編碼序列發(fā)生突變的牛肌肉質(zhì)量增加顯著，呈現(xiàn)所謂的“雙肌現(xiàn)象”。敲除myostatin基因的轉(zhuǎn)基因小鼠的骨骼肌重量比正常的小鼠增加2-3倍。近年來人們?cè)噲D找到myostatin的抑制物來降低myostatin對(duì)肌肉成長(zhǎng)抑制功能的發(fā)揮。Bogdanovich和Kim等分別在雞和小鼠體內(nèi)注射myostatin蛋白抗體，實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)雞、小鼠的體重和肌肉量都增加。Lee等在2010年報(bào)道將虹鱒魚浸泡在含有體外表達(dá)MSTN抑制物的溶液中，魚體重能夠提高42%。Amali等在2004年通過給斑馬魚注射morpholino抑制MSTN表達(dá)觀察到魚體皆增大現(xiàn)象。鱖魚{Siniperea chuatsi)屬鱸形目，鯧科，鱖屬。鱖魚是原產(chǎn)于我國(guó)各主要江河湖泊的名貴食用魚。鱖魚味道鮮美，肉質(zhì)細(xì)嫩，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，深受廣大消費(fèi)者歡迎。上世紀(jì)80年代鱖魚人工繁殖成功并進(jìn)行大規(guī)模推廣養(yǎng)殖，使之成為我國(guó)主要名貴養(yǎng)殖魚類之一。目前我國(guó)鱖魚養(yǎng)殖年產(chǎn)量超過20萬噸，其產(chǎn)值每年在100億人民幣以上，而且近幾年其價(jià)格穩(wěn)中有升，人工養(yǎng)殖獲經(jīng)濟(jì)效益較大，現(xiàn)已成為水產(chǎn)品市場(chǎng)中重要中高檔產(chǎn)品。如何提高鱖魚養(yǎng)殖產(chǎn)量滿足市場(chǎng)需求穩(wěn)定鱖魚價(jià)格已成為當(dāng)務(wù)之急，也是保持我國(guó)鱖魚養(yǎng)殖業(yè)沿著優(yōu)質(zhì)高效方向持續(xù)快速健康發(fā)展的必要前提。開發(fā)MSTN抑制劑是促魚肉生長(zhǎng)新途徑，因此本發(fā)明通過化學(xué)合成一對(duì)特異抑制鱖魚MSTN表達(dá)的核苷酸短鏈，從抑制肌肉生成抑制素方面來促進(jìn)鱖魚魚肉生長(zhǎng)，為保持我國(guó)鱖魚高效健康養(yǎng)殖持續(xù)發(fā)展奠定基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種鱖魚幼魚肌肉生長(zhǎng)促進(jìn)劑，解決了上述背景技術(shù)中的問題。本發(fā)明所解決的技術(shù)問題采用以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn):
一種用于鱖魚幼魚肌肉生長(zhǎng)促進(jìn)劑，其成分是經(jīng)過標(biāo)記與化學(xué)修飾的化學(xué)合成的雙鏈小RNA分子，
雙鏈小 RNA 分子的正向序列為:5' -AACAUUCAACGCGTCGGTGAGTT-3'；
雙鏈小 RNA 分子的反向序列為:5' -AsAsCUCACCGACGCGTTGAATsGsTsTs-CholS'，
反向序列進(jìn)行化學(xué)修飾，反向序列的3'端膽固醇修飾-Chol，反向序列的5'端兩個(gè)硫代修飾AsAs,反向序列的3'端四個(gè)硫代修飾TsGsTsTs,反向序列的堿基全部甲基化修飾。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是:
(I)本發(fā)明是綜合運(yùn)用分子生物學(xué)、動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)和化學(xué)合成原理，對(duì)影響鱖魚肌肉生長(zhǎng)深入研究基礎(chǔ)上，研究開發(fā)的具有聞效、穩(wěn)定等特點(diǎn)的肌肉生長(zhǎng)促進(jìn)劑。(2)本發(fā)明生產(chǎn)工藝成熟、產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定、價(jià)格合理、核心技術(shù)先進(jìn)和經(jīng)濟(jì)效益顯著，是目前比較理想的鱖魚肌肉生長(zhǎng)促進(jìn)劑，具有廣闊的市場(chǎng)前景。(3)本發(fā)明的突出優(yōu)點(diǎn)是人工合成了促進(jìn)鱖魚幼魚肌肉生長(zhǎng)的新型小RNA化合物，制作的肌肉生長(zhǎng)促進(jìn)劑能夠明顯促進(jìn)養(yǎng)殖鱖魚的生長(zhǎng)，抑制MSTN表達(dá)，同時(shí)在使用肌肉生長(zhǎng)促進(jìn)劑后鱖魚肉質(zhì)不受影響。


圖1為肌肉生長(zhǎng)促進(jìn)劑對(duì)鱖魚肌肉MSTN表達(dá)的影響(n=5)的柱形圖。
具體實(shí)施例方式為了使本發(fā)明的技術(shù)手段、創(chuàng)作特征、工作流程、使用方法達(dá)成目的與功效易于明白了解，下面進(jìn)一步闡述本發(fā)明。實(shí)施例1
肌肉生長(zhǎng)促進(jìn)劑對(duì)鱖魚生長(zhǎng)的影響
通過鱖魚肌肉局部注射的方式，發(fā)揮肌肉生長(zhǎng)促進(jìn)劑在促肌肉生長(zhǎng)中的作用。以不注射任何試劑為陰性對(duì)照組，以注射PBS為陽性對(duì)照組，以注射肌肉生長(zhǎng)促進(jìn)劑為試驗(yàn)組，試驗(yàn)組注射劑量為20μ g/g體重，連續(xù)注射三天，每天一次，注射完成后一周測(cè)定魚體生長(zhǎng)指標(biāo)，具體結(jié)果如表1:注射肌肉生長(zhǎng)促進(jìn)劑的試驗(yàn)組鱖魚體長(zhǎng)增加和增重比陽性和陰性對(duì)照組顯著提高。陽性和陰性對(duì)照組鱖魚體長(zhǎng)和體重增加差異不顯著。因此注射肌肉生長(zhǎng)促進(jìn)劑能改善鱖魚生長(zhǎng)性能。表I肌肉生長(zhǎng)促進(jìn)劑對(duì)鱖魚生長(zhǎng)性能的影響(平均值土標(biāo)準(zhǔn)差)n=權(quán)利要求
1.一種用于鱖魚幼魚肌肉生長(zhǎng)促進(jìn)劑，其特征在于，其成分是經(jīng)過標(biāo)記與化學(xué)修飾的化學(xué)合成的雙鏈小RNA分子， 雙鏈小 RNA 分子的正向序列為:5' -AACAUUCAACGCGTCGGTGAGTT-3'； 雙鏈小 RNA 分子的反向序列為:5' -AsAsCUCACCGACGCGTTGAATsGsTsTs-CholS'， 反向序列進(jìn)行化學(xué)修飾，反向序列的3'端膽固醇修飾-Chol，反向序列的5'端兩個(gè)硫代修飾AsAs,反向序列的3'端四個(gè)硫代修飾TsGsTsTs,反向序列的堿基全部甲基化修飾。 ·
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于鱖魚幼魚肌肉生長(zhǎng)促進(jìn)劑，其成分是經(jīng)過標(biāo)記與化學(xué)修飾的化學(xué)合成的雙鏈小RNA分子，雙鏈小RNA分子的正向序列為5′-AACAUUCAACGCGTCGGTGAGTT-3′；雙鏈小RNA分子的反向序列為5′-AsAsCUCACCGACGCGTTGAATsGsTsTs-Chol3′，反向序列進(jìn)行化學(xué)修飾，反向序列的3′端膽固醇修飾-Chol，反向序列的5′端兩個(gè)硫代修飾AsAs，反向序列的3′端四個(gè)硫代修飾TsGsTsTs，反向序列的堿基全部甲基化修飾。本發(fā)明的突出優(yōu)點(diǎn)是人工合成了促進(jìn)鱖魚幼魚肌肉生長(zhǎng)的新型小RNA化合物，制作的肌肉生長(zhǎng)促進(jìn)劑能夠明顯促進(jìn)養(yǎng)殖鱖魚的生長(zhǎng)，抑制MSTN表達(dá)，同時(shí)在使用肌肉生長(zhǎng)促進(jìn)劑后鱖魚肉質(zhì)不受影響。
文檔編號(hào)A23K1/18GK103211099SQ201310120108
公開日2013年7月24日 申請(qǐng)日期2013年4月9日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月9日
發(fā)明者褚武英, 張建社, 李玉瓏 申請(qǐng)人:長(zhǎng)沙學(xué)院