專利名稱：一種天然檸檬消毒劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及檸檬消毒劑及其制備方法，具體說，是一種從檸檬中提取出抗病毒殺菌的消毒劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
現(xiàn)已有關(guān)于柑桔類果物(皮)的提取物含有大量功能性物質(zhì)，如黃酮類、類檸檬苦素、維生素類以及多糖、果膠、香精油等。有資料報道柑桔類果物(皮)具有殺菌、消毒、抗氧化等作用。但是，有關(guān)將鮮檸檬用水一甘油提取，并經(jīng)進(jìn)一步發(fā)酵制備成抗病毒殺菌的消毒劑，還未見文獻(xiàn)報道。由檸檬提取物制備的消毒劑，不含有毒、有害物質(zhì)。消毒劑可以廣泛應(yīng)用于醫(yī)院廢水廢物處理，屠宰場的殺菌、消毒、清除病毒。也可以應(yīng)用于養(yǎng)殖場的消毒以及養(yǎng)殖水以及畜牧業(yè)畜禽飲用水的消毒，還可以應(yīng)用于水果、蔬菜、水產(chǎn)品的保鮮等。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，提供一種制備高效無毒的應(yīng)用廣泛的天然檸檬消毒劑及其制備方法。
為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種天然檸檬消毒劑的制備方法，新鮮檸檬加入水一甘油提取液，并用熱帶假絲酵母-糞鏈球菌發(fā)酵，擠壓過濾，分離出的提取溶液經(jīng)檢驗酸度和維生素C含量合格后，灌裝，室溫保存。
具體地說，包括以下步驟
(I)將新鮮檸檬洗凈、去殘、絞碎，按質(zhì)量比加入10-15倍的水一甘油溶液，按質(zhì)量比接入1-1. 5倍的熱帶假絲酵母-糞鏈球菌的混合菌液，28-32°C，100-150r/min，發(fā)酵 20-24h ；
(2)無菌條件下，抽樣檢查，取IOmL檸檬發(fā)酵液稀釋100倍在660nm波長下測定吸光值0D，OD值達(dá)到O. 5-0. 7后，結(jié)束發(fā)酵過程，加熱至80-85°C保持10_15min殺菌；
(3)將檸檬發(fā)酵液擠壓過濾，棄濾渣，收集濾出液，檢驗酸度和維生素C含量合格后，灌封分裝，即制備成天然檸檬消毒劑。
所述熱帶假絲酵母-糞鏈球菌的混合菌液的制備方法包括以下步驟
(I)按微生物發(fā)酵工程工藝，先將斜面保存熱帶假絲酵母菌種用馬鈴薯培養(yǎng)基 (PDA)活化，經(jīng)三級逐級擴(kuò)大培養(yǎng)，制備成熱帶假絲酵母的一級種子菌液；同理，糞鏈球菌用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基活化，經(jīng)過三級逐級擴(kuò)大培養(yǎng)，制備成糞鏈球菌的一級種子菌液；
(2)將步驟(I)得到的熱帶假絲酵母和糞鏈球菌的一級種子菌液用玉米粉-豆柏-馬鈴薯-蔗糖培養(yǎng)基進(jìn)行二級、三級擴(kuò)大培養(yǎng)；
所述二級擴(kuò)大培養(yǎng)條件將熱帶假絲酵母和糞鏈球菌的一級種子液等體積混合， 按接種量質(zhì)量比1:10兩種菌的一級種子混合菌液，溫度28-30°C，轉(zhuǎn)速100-200r/min，壓力 O. 05MPa，發(fā)酵20-24h，抽取IOmL發(fā)酵液，稀釋100倍，檢查波長660nm吸光值，吸光值達(dá)到 O. 6-0. 8后，再轉(zhuǎn)入三級擴(kuò)大培養(yǎng)階段；
所述三級擴(kuò)大培養(yǎng)條件按接種量質(zhì)量比1:10 二級擴(kuò)大培養(yǎng)液，溫度28_30°C， 轉(zhuǎn)速200-300r/min，壓力O. 05MPa，發(fā)酵20_24h，抽取IOmL發(fā)酵液，稀釋100倍，檢查波長 660nm吸光值，達(dá)到O. 6-0. 8后，停止培養(yǎng)，有效菌菌落數(shù)2*109cfu. mL—1以上。
所述玉米粉-豆柏-馬鈴薯-蔗糖培養(yǎng)基組成按質(zhì)量份數(shù)為玉米粉20-30份， 豆柏2份，馬鈴薯10-20份，蔗糖2份，氯化鈉O. 5份，磷酸氫二鉀O. 5份，硝酸鉀10份，硫酸鎂O. 5份，硫酸亞鐵O. 002份，自來水1000份，用過飽和氫氧化鈣調(diào)節(jié)pH值7. 4-7. 6。
所述經(jīng)檢驗酸度和維生素C含量合格是指酸度的pH值2. 5-3. 5 ;維生素C含量質(zhì)量濃度為150 200mg. L'
所述水一甘油溶液為按質(zhì)量比水甘油=1 :1。
上述方法制備的天然檸檬消毒劑。
本發(fā)明的有益效果是高效無毒，能廣泛應(yīng)用的天然消毒劑，該產(chǎn)品富含檸檬酸、 檸檬苦味素、維生素C、維生素P及其衍生物，以及多糖、維生素E和果膠等其它微量有機(jī)物。 可以廣泛應(yīng)用于醫(yī)院廢水處理，屠宰場的消毒，養(yǎng)殖場的消毒，養(yǎng)殖水以及畜牧業(yè)畜禽飲用水的消毒，還可以應(yīng)用于水果、蔬菜、水產(chǎn)品的保鮮等。
具體實施方式
本發(fā)明將新鮮檸檬(國產(chǎn)、進(jìn)口皆可)洗凈、去殘、絞碎，加入10-15倍的質(zhì)量比50% 水一甘油溶液，接入1-1. 5倍質(zhì)量比熱帶假絲酵母-糞鏈球菌(1:1)混合菌液，28-320C， 100-150r/min,發(fā)酵20_24h ;在無菌條件下抽取IOmL發(fā)酵液，稀釋100倍測定波長660nm的吸光值，吸光值達(dá)到O. 5-0. 7后，結(jié)束發(fā)酵過程，加熱至80-85°C保持10_15min，殺菌。將檸檬發(fā)酵液用雙層紗布擠壓過濾，棄濾渣，收集濾出液，灌封分裝，即制備成檸檬消毒劑成品。
熱帶假絲酵母-糞鏈球菌液的制備按微生物發(fā)酵工程常規(guī)工藝，先將斜面保存熱帶假絲酵母菌種用馬鈴薯培養(yǎng)基活化，經(jīng)試管(約IOmL)-三角瓶(約IOOmL)-大三角瓶 (約IOOOmL)逐級擴(kuò)大培養(yǎng)，制備成熱帶假絲酵母的一級種子菌液；同理糞鏈球菌用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基活化，經(jīng)過試管-三角瓶-大三角瓶逐級擴(kuò)大培養(yǎng)，制 備成糞鏈球菌的一級種子菌液。
將熱帶假絲酵母和糞鏈球菌的一級種子菌液用玉米粉-豆柏-馬鈴薯-蔗糖培養(yǎng)液進(jìn)行二級、三級擴(kuò)大培養(yǎng)。
二級擴(kuò)大培養(yǎng)條件(30L發(fā)酵罐)將熱帶假絲酵母和糞鏈球菌的一級種子液等體積混合(1:1)，接種量質(zhì)量比1:10兩種菌的一級種子混合菌液，溫度28-30°C，轉(zhuǎn)速 100-200r/min,壓力O. 05Mpa,發(fā)酵20_24h，抽取IOmL發(fā)酵液，稀釋100倍，檢查波長660nm 吸光值，吸光值達(dá)到O. 6-0. 8后，再轉(zhuǎn)入三級擴(kuò)大培養(yǎng)階段。
三級擴(kuò)大培養(yǎng)條件(300L發(fā)酵罐)接種量質(zhì)量比1:10 二級擴(kuò)大培養(yǎng)液，溫度 28-30°C，轉(zhuǎn)速 200-300r/min,壓力 O. 05Mpa，發(fā)酵 20_24h，抽取 IOmL 發(fā)酵液，稀釋 100 倍， 檢查波長660nm吸光值，達(dá)到O. 6-0. 8后，停止培養(yǎng)。有效菌菌落數(shù)2*109cfu. mL—1以上。
所述牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化鈉5g，蒸餾水 IOOOmL, pH 值 7. 2-7. 4.
所述馬鈴薯培養(yǎng)基(PDA):馬鈴薯200g，去皮、去殘，切成碎片或絲，加水IOOOmL, 小火煮20-30min,過濾，濾液補足IOOOmL,加入20g鹿糖，自然pH值。
所述玉米粉-豆柏-馬鈴薯-蔗糖培養(yǎng)基玉米粉20_30g，豆柏2g，馬鈴薯10_20g (去皮、去殘)，蔗糖2g，氯化鈉0.5g，磷酸氫二鉀O. 5g，硝酸鉀10g，硫酸鎂0.5g，硫酸亞鐵O.002g,自來水IOOOmL,用過飽和氫氧化鈣調(diào)節(jié)pH值7. 4-7. 6.
該檸檬提取液富含檸檬酸、檸檬苦味素、維生素C、維生素P及其衍生物，以及維生素E和果膠等其它微量有機(jī)物。
采用本發(fā)明的檸檬消毒劑，經(jīng)試驗確定，本發(fā)明的檸檬消毒劑抑制或殺滅細(xì)菌、真菌和病毒的劑量如表I 4所不
表I抑制細(xì)菌
權(quán)利要求
1.一種天然檸檬消毒劑的制備方法，其特征在于，新鮮檸檬加入水一甘油提取液，并用熱帶假絲酵母-糞鏈球菌發(fā)酵，擠壓過濾，分離出的提取溶液經(jīng)檢驗酸度和維生素C含量合格后，灌裝，室溫保存。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的天然檸檬消毒劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟(1)將新鮮檸檬洗凈、去殘、絞碎，按質(zhì)量比加入10-15倍的水一甘油溶液，按質(zhì)量比接入1-1. 5倍的熱帶假絲酵母-糞鏈球菌的混合菌液，28-320C，100-150r/min,發(fā)酵20_24h ；(2)無菌條件下,抽樣檢查,取IOmL朽1檬發(fā)酵液稀釋100倍在660nm波長下測定吸光值 0D, OD值達(dá)到O. 5-0. 7后，結(jié)束發(fā)酵過程，加熱至80-85°C保持10_15min殺菌；(3)將檸檬發(fā)酵液擠壓過濾，棄濾渣，收集濾出液，檢驗酸度和維生素C含量合格后，灌封分裝，即制備成天然檸檬消毒劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的天然檸檬消毒劑的制備方法，其特征在于，所述熱帶假絲酵母-糞鏈球菌的混合菌液的制備方法包括以下步驟(1)按微生物發(fā)酵工程工藝，先將斜面保存熱帶假絲酵母菌種用馬鈴薯培養(yǎng)基PDA活化，經(jīng)三級逐級擴(kuò)大培養(yǎng)，制備成熱帶假絲酵母的一級種子菌液；同理，糞鏈球菌用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基活化，經(jīng)過三級逐級擴(kuò)大培養(yǎng)，制備成糞鏈球菌的一級種子菌液；(2)將步驟(I)得到的熱帶假絲酵母和糞鏈球菌的一級種子菌液用玉米粉-豆柏-馬鈴薯-蔗糖培養(yǎng)基進(jìn)行二級、三級擴(kuò)大培養(yǎng)；所述二級擴(kuò)大培養(yǎng)條件將熱帶假絲酵母和糞鏈球菌的一級種子液等體積混合，按接種量質(zhì)量比1:10兩種菌的一級種子混合菌液，溫度28-30°C，轉(zhuǎn)速100-200r/min，壓力 O. 05MPa，發(fā)酵20-24h，抽取IOmL發(fā)酵液，稀釋100倍，檢查波長660nm吸光值，吸光值達(dá)到 O. 6-0. 8后，再轉(zhuǎn)入三級擴(kuò)大培養(yǎng)階段；所述三級擴(kuò)大培養(yǎng)條件按接種量質(zhì)量比1:10 二級擴(kuò)大培養(yǎng)液，溫度28-30°C，轉(zhuǎn)速 200-300r/min,壓力O. 05MPa,發(fā)酵20_24h，抽取IOmL發(fā)酵液，稀釋100倍，檢查波長660nm 吸光值，達(dá)到O. 6-0. 8后，停止培養(yǎng)，有效菌菌落數(shù)2*109cfu. πιΓ1以上。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的天然檸檬消毒劑的制備方法，其特征在于，所述玉米粉-豆柏-馬鈴薯-蔗糖培養(yǎng)基組成按質(zhì)量份數(shù)為玉米粉20-30份，豆柏2份，馬鈴薯10-20 份，蔗糖2份，氯化鈉O. 5份，磷酸氫二鉀O. 5份，硝酸鉀10份，硫酸鎂O. 5份，硫酸亞鐵 O. 002份，自來水1000份，用過飽和氫氧化鈣調(diào)節(jié)pH值7. 4-7. 6。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的天然檸檬消毒劑的制備方法，其特征在于，所述經(jīng)檢驗酸度和維生素C含量合格是指酸度的pH值2. 5-3. 5 ;維生素C含量質(zhì)量濃度為150 200mg.
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的天然檸檬消毒劑的制備方法，其特征在于，所述水一甘油溶液為按質(zhì)量比水甘油=1 :1。
7.—種權(quán)利要求1-6任一項方法制備的天然朽1檬消毒劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種天然檸檬消毒劑及其制備方法，把新鮮檸檬加入水－甘油中提取，并用熱帶假絲酵母-糞鏈球菌發(fā)酵，滅菌后，擠壓過濾，濾液具有顯著的殺菌滅病毒的消毒作用。以控制酸度和維生素C含量為提取液的質(zhì)量控制指標(biāo)。檢驗合格后，灌裝，室溫保存。
文檔編號A01N65/36GK103053626SQ20131000443
公開日2013年4月24日 申請日期2013年1月7日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月7日
發(fā)明者張清敏, 唐景春, 鐘金松, 劉冰 申請人:天津錦繡實業(yè)有限公司