專利名稱：轉(zhuǎn)Bt基因棉花抗棉鈴蟲性評價方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物防治領(lǐng)域，具體地涉及轉(zhuǎn)Bt基因棉花抗棉鈴蟲性評價方法。
背景技術(shù)：
上世紀(jì)九十年代棉鈴蟲連年暴發(fā)為害，給我國棉花生產(chǎn)帶來巨大威脅，棉花產(chǎn)量損失達(dá)40% 60%，局部棉區(qū)達(dá)80%以上，甚至絕產(chǎn)，全國棉花損失400多億元。1997年轉(zhuǎn)基因抗蟲棉在我國大面積應(yīng)用，有效的控制了棉鈴蟲的暴發(fā)為害，促進了我國棉花的持續(xù)穩(wěn)定發(fā)展。至2006年,全國抗蟲棉面積已達(dá)350萬公頃，占我國棉花面積的66%,其中黃河流域抗蟲棉面積占98%以上，河南、河北、山東、安徽等省抗蟲棉實現(xiàn)100%種植。由于轉(zhuǎn)Bt基因棉的毒素能在棉株內(nèi)持續(xù)表達(dá)，但隨著棉花植株的生長和發(fā)育，夕卜源蛋白在植株體內(nèi)的表達(dá)量一般呈現(xiàn)逐步下降的趨勢，同時也和棉田棉鈴蟲發(fā)生量和危害 程度呈一致的趨勢。棉花苗期、蕾期和花鈴期外源蛋白表達(dá)量在不同棉花材料上表現(xiàn)不一致，且下降幅度也不相同，而棉鈴蟲在二代、三代和四代的發(fā)生量和聚集程度呈逐步減輕的程度。因此棉花對棉鈴蟲的抗性評價應(yīng)根據(jù)轉(zhuǎn)基因棉花外源蛋白的表達(dá)量特性和棉鈴蟲的發(fā)生和危害程度變化進行綜合評價。由于現(xiàn)有的棉花抗棉鈴蟲性生物測定方法，取樣量和接蟲量均很大，費時費工?，F(xiàn)有的棉花抗棉鈴蟲性生物測定方法取樣量最少是設(shè)重復(fù)20片葉片，三次重復(fù)，每葉片接5頭試蟲。因為現(xiàn)有的生測方法是以試蟲的死亡率為評判指標(biāo)，如果接入試蟲5頭，每死I頭試蟲,死亡率為20%,還有其余4頭，則說明該葉片對試蟲的抗性死亡率為20%,如果每葉片只接I頭，則這個葉片的死亡率為100%，即該葉片對試蟲的抗性死亡率為100%，不能正確、客觀的反應(yīng)葉片對試蟲的抗性程度。本發(fā)明的方法是每葉片接I頭試蟲，調(diào)查結(jié)果時只登記試蟲的生長的齡期，如果試蟲死亡，則齡期記為0，更能體現(xiàn)在逆境條件下，試蟲的生長非正常情況，從而反映除了棉花對棉鈴蟲的抗性程度。此外，二代、三代和四代棉鈴蟲發(fā)生期，棉花植株外源Bt殺蟲蛋白表達(dá)量均呈現(xiàn)降低的趨勢，而現(xiàn)有的抗性鑒定方法為同一個判定標(biāo)準(zhǔn)，對于后期棉花外源蛋白整體下降造成評價上的誤差。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的發(fā)明人為了解決上述問題提出并完成了本發(fā)明。本發(fā)明的目的是提供一種采樣量少、方法簡便、易操作且客觀的棉花抗棉鈴蟲性評價方法。本發(fā)明的棉花抗棉鈴蟲性評價方法包括以下步驟I、棉花抗棉鈴蟲性評價方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟(I)在第二代、第三代和第四代棉鈴蟲發(fā)生期，分別采集棉花頂部第二片完全展開葉片，以非轉(zhuǎn)基因棉花品種為對照材料；(2)將采集的新鮮葉片置于實驗盒內(nèi)；(3)在放有葉片的實驗盒內(nèi)接棉鈴蟲初孵幼蟲，擰緊盒蓋，置于室溫下；
(4)接蟲后調(diào)查棉鈴蟲幼蟲死亡數(shù)和齡期；如果試蟲死亡,則齡期記為O ;(5)進行統(tǒng)計分析，計算棉鈴蟲齡期抑制率，以二、三代和四代棉鈴蟲發(fā)生期齡期
抑制率為判定抗性級別指標(biāo)，其中齡期抑制率計算公式如下
(對照材料棉鈴蟲齡期-轉(zhuǎn)基因棉花品種棉鈴蟲齡期)
齡期抑制率%= - X 100
非轉(zhuǎn)基因棉花品種棉鈴蟲齡期根據(jù)本發(fā)明的具體實施方式
，本發(fā)明的抗蚜性鑒定方法包括以下步驟(I)在第二代、第三代和第四代棉鈴蟲發(fā)生期，分別采集棉花頂部第二片完全展開·葉10片-20片，以非轉(zhuǎn)基因棉花品種為對照材料；(2)將采集的新鮮葉片置于具有保鮮作用的實驗盒內(nèi)，每盒一片；(3)在放有葉片的實驗盒內(nèi)接I頭Id齡棉鈴蟲初孵幼蟲，擰緊盒蓋，置于室溫下；(4)接蟲后第5d調(diào)查棉鈴蟲幼蟲死亡數(shù)和齡期；如果試蟲死亡，則齡期記為O ;(5)進行統(tǒng)計分析，計算棉鈴蟲齡期抑制率，以二、三代和四代棉鈴蟲發(fā)生期齡期抑制率為判定抗性級別指標(biāo)。例如，根據(jù)本發(fā)明的具體實施方式
，抗性級別的判斷標(biāo)準(zhǔn)如下。
齡期抑制率(％)
抗性判定二代棉鈴蟲發(fā)生期三代棉鈴蟲發(fā)生期四代棉鈴蟲發(fā)生期
高抗》95%》80%》60%
抗大于等于75%，小于95% 大于等于60%，小于80% 大于等于40%,小于60%
中抗大于等于55%，小于75% 大于等于40%，小于60% 大于等于20%,小于40%
不抗小于55%小于40%小于20%根據(jù)本發(fā)明的方法，采樣量相對較少，可以只接I頭棉鈴蟲，既可以省工，也省試蟲，相當(dāng)于省工省時。本發(fā)明的方法從二代、三代和四代棉鈴蟲發(fā)生期單獨進行評價，能準(zhǔn)確反應(yīng)棉花生長發(fā)育過程中外源蛋白抗棉鈴蟲的作用和效果，同時對于延長抗蟲棉壽命。該方法用蟲量大幅減少，方法簡便，易操作，準(zhǔn)確、客觀、可靠。
具體實施例方式實施例I(I)在第二代、第三代和第四代棉鈴蟲發(fā)生期，分別采集棉花頂部第二片完全展開葉10片-20片；以非轉(zhuǎn)基因棉花品種為對照材料；(2)將采集的新鮮葉片置于具有保鮮作用的實驗盒內(nèi)，每盒一片；(3)在放有葉片的實驗盒內(nèi)接I頭Id齡棉鈴蟲初孵幼蟲，擰緊盒蓋，置于室溫下；(4)接蟲后第5d調(diào)查棉鈴蟲幼蟲死亡數(shù)和齡期；如果試蟲死亡，則齡期記為O ;(5)進行統(tǒng)計分析，計算棉鈴蟲齡期抑制率，以二、三代和四代棉鈴蟲發(fā)生期齡期抑制率為判定抗性級別指標(biāo)(參見表I)；(6)實驗結(jié)果如以下表2所示
表I抗性級別的判斷標(biāo)準(zhǔn)
權(quán)利要求
1.轉(zhuǎn)Bt基因棉花抗棉鈴蟲性評價方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟 (1)在第二代、第三代和第四代棉鈴蟲發(fā)生期，分別采集棉花頂部第二片完全展開葉片，以非轉(zhuǎn)基因棉花品種為對照材料； (2)將采集的新鮮葉片置于實驗盒內(nèi)； (3)在放有葉片的實驗盒內(nèi)接棉鈴蟲初孵幼蟲，擰緊盒蓋，置于室溫下； (4)接蟲后調(diào)查棉鈴蟲幼蟲死亡數(shù)和齡期，如果試蟲死亡，則齡期記為O; (5)進行統(tǒng)計分析，計算棉鈴蟲齡期抑制率，以二、三代和四代棉鈴蟲發(fā)生期齡期抑制率為判定抗性級別指標(biāo)，其中齡期抑制率計算公式如下(對照材料棉鈴蟲齡期-轉(zhuǎn)基因棉花品種棉鈴蟲齡期) 齡
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，在步驟(3)中，在放有葉片的實驗盒內(nèi)接1頭棉鈴蟲初孵幼蟲。
全文摘要
本發(fā)明涉及生物防治領(lǐng)域，具體地涉及轉(zhuǎn)Bt基因棉花抗棉鈴蟲性評價方法。所述方法包括以下步驟在第二代、第三代和第四代棉鈴蟲發(fā)生期，采集葉片，以非轉(zhuǎn)基因棉花品種為對照材料；將葉片置于盒內(nèi)；接棉鈴蟲初孵幼蟲；接蟲后調(diào)查棉鈴蟲幼蟲死亡數(shù)和齡期，進行統(tǒng)計分析，計算棉鈴蟲齡期抑制率。本發(fā)明的方法，采樣量相對較少，可以只接1頭棉鈴蟲，既可以省工，也省試蟲，相當(dāng)于省工省時。本發(fā)明的方法從二代、三代和四代棉鈴蟲發(fā)生期單獨進行評價，能準(zhǔn)確反應(yīng)棉花生長發(fā)育過程中外源蛋白抗棉鈴蟲的作用和效果，同時對于延長抗蟲棉壽命。該方法用蟲量大幅減少，方法簡便，易操作，準(zhǔn)確、客觀、可靠。
文檔編號A01G7/00GK102870612SQ20121033976
公開日2013年1月16日 申請日期2012年9月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月13日
發(fā)明者雒珺瑜, 崔金杰, 王春義, 張帥, 呂麗敏 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所