專利名稱：一種抗藥性胡瓜新小綏螨品系的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天敵捕食螨技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種抗藥性胡瓜新小綏螨品系及其選育方法。
背景技術(shù)：
胡瓜新小綏螨作為一種優(yōu)良天敵被發(fā)現(xiàn)以來已成為國際上各天敵公司的主要產(chǎn)品，目前在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中大量應(yīng)用的胡瓜新小綏螨均為敏感品系，對大多數(shù)農(nóng)藥非常敏感，但是各種農(nóng)作物都存在胡瓜新小綏螨所不能控制的病蟲害需要用農(nóng)藥進行防治，而在釋放敏感品系胡瓜新小綏螨的果園、大田如果使用農(nóng)藥則會將生防園的捕食螨殺死殺傷，使生防園重新又恢復(fù)成化防園。在長期大量使用化學(xué)農(nóng)藥的果園發(fā)現(xiàn)敏感品系的胡瓜新小綏螨釋放到果樹上(沒有再使用農(nóng)藥)在葉片上爬行十分鐘左右就死亡了。作用在使用捕食螨敏感品系時不能使用化學(xué)農(nóng)藥。胡瓜新小綏螨在我國農(nóng)作物上大面積推廣應(yīng)用的過程中遇到了如何與害蟲綜合治理中的其他防治方法合理結(jié)合，尤其是與化學(xué)防治方法相協(xié)調(diào)的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種抗藥性胡瓜新小綏螨品系及其選育方法，該品系不僅保留原有的胡瓜新小綏螨作為天敵優(yōu)良特性，而且該品系對大環(huán)內(nèi)酯抗生素類殺蟲殺螨劑阿維菌素的抗性提高到了原來的64. 62倍，對煙堿類超高效殺蟲劑吡蟲啉的抗性提高了18. 85倍，對有機磷類殺蟲殺螨劑毒死蜱的抗性提高了 27. 75倍；對菊酯類殺蟲劑高效氯氰菊酯的抗性提高了 58. 16倍。本發(fā)明的選育方法簡單，具備顯著的經(jīng)濟和社會效益。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案
一種抗藥性胡瓜新小綏螨品系的選育方法包括以下步驟
(1)抗性品系的選育采用胡瓜新小綏螨敏感品系為抗性品系篩選的原始材料，以90%阿維菌素原粉用噴霧法進行逐代篩選，稱取O. Ig阿維菌素原粉先用5ml丙酮溶解，再用清水配成與毒力測定中相同的6組濃度，每處理重復(fù)4次；用玻片浸潰法測定親代成螨對阿維菌素的毒力后，計算出LC5tl，再用此LC5tl濃度進行群體篩選；從敏感品系中取出5日齡的健壯成螨用該代LC5tl濃度處理，用直徑12 cm培養(yǎng)皿，內(nèi)置直徑10 cm吸滿水的海綿一塊，海綿上放入洗凈的甘薯葉片，葉緣用脫脂棉花圍成細(xì)圈以防止螨外逃或內(nèi)遷，再用零號毛筆輕輕挑起選出的成螨放入上述葉片上，每皿50只，共20皿；用華豐A-06手扣小型噴霧器裝入藥液對挑有胡瓜新小綏螨的培養(yǎng)皿進行噴霧至葉片全濕透，5s后立即用濾紙吸干藥液，處理后24h未死亡的個體繼續(xù)用粉螨飼養(yǎng)，當(dāng)雌成螨產(chǎn)卵后，挑取在24 h內(nèi)產(chǎn)下的卵分別飼養(yǎng)，以避免世代重疊，每3代處理一次，設(shè)4次重復(fù)；連續(xù)用同一 LC5tl濃度篩選3次后，即9代進行一次毒力測定，再用該測定所得LC5tl繼續(xù)篩選；共用阿維菌素原粉藥劑處理18次；獲得的抗性品系經(jīng)120代飼養(yǎng)檢測抗性衰退后，用相同方法對此品系進行抗性再篩選；
(2)交互抗性的測定用煙堿類殺蟲劑、有機磷類殺蟲殺螨劑和菊酯類殺蟲劑進行毒力測定；在抗性汰選前，測定一系列藥劑的毒力基線值，待抗性選擇完成后，再用這些藥劑進行毒力測定；以敏感品系作對比，計算抗阿維菌素品系對這些農(nóng)藥抗性提高倍數(shù)。本發(fā)明的有益效果
該品系不僅保留原有的胡瓜新小綏螨作為天敵優(yōu)良特性，而且該品系對大環(huán)內(nèi)酯抗生素類殺蟲殺螨劑阿維菌素的抗性提高到了原來的64. 62倍，對煙堿類殺蟲劑的抗性提高了18. 85倍，對有機磷類殺蟲殺螨劑的抗性提高了 27. 75倍，對菊酯類殺蟲劑的抗性提高了58. 16倍。本發(fā)明的選育方法簡單，選育出的抗性品系作為優(yōu)良天敵可防治薊馬、紅蜘蛛、銹壁虱等害蟲害螨又解決了與化學(xué)防治方法相協(xié)調(diào)的問題，具備顯著的經(jīng)濟和社會效益。


圖I是胡瓜新小綏螨對阿維菌素的抗性發(fā)展趨勢。
圖2是胡瓜新小綏螨抗阿維菌素品系對阿維菌素抗性的衰退趨勢擬合曲線。
具體實施例方式材料與方法
I.I供試蟲源
胡瓜新小綏螨況cucumeris由福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所天敵產(chǎn)業(yè)化基地提供，以室內(nèi)飼養(yǎng)繁殖5年以上、不接觸任何藥劑的胡瓜新小綏螨種群作為實驗室敏感品系。2試驗方法
毒力測定參照FAO推薦的測定害螨抗藥性的標(biāo)準(zhǔn)方法一玻片浸潰法(slide-dipmethod)對胡瓜新小綏螨雌成螨進行毒力測定[17]。將雙面膠帶剪成2 cm長，貼在載玻片一端，用鑷子揭去粘膠上的紙片。用零號毛筆輕輕挑起5日齡的健壯雌成螨并將其背部輕輕粘在膠帶上，注意不要粘住螨足、口器及須肢，每塊載玻片粘40頭螨，排成數(shù)排。將粘有胡瓜新小綏螨雌成螨的載玻片放在大瓷盤上(瓷盤內(nèi)置一塊吸滿水的大海綿)，置于25± 1°C、RH 85%下，經(jīng)4 h后在雙目解剖鏡下觀察，挑去死亡或不活潑個體，再補充至30頭。接著將粘有螨的載玻片浸入相應(yīng)濃度待測藥液中并輕輕搖動，5 s后取出，迅速用吸水紙吸干螨體及周圍多余藥液。玻片按不同的濃度放回上述大瓷盤中，置于25±1°C、RH 85%下，經(jīng)24 h后在雙目解剖鏡下檢查死亡螨數(shù)及存活螨數(shù)，死亡標(biāo)準(zhǔn)是以小號毛筆輕輕觸動螨體，無任何反應(yīng)者為死亡。每次測定設(shè)6組藥劑濃度(阿維菌素原粉濃度設(shè)180，90，45，22. 5，11. 25和5. 625mg/L)和一組清水處理為對照，對照組死亡率在10%以內(nèi)為有效試驗，每處理重復(fù)4次。I. 2. 2 抗性品系的選育采用胡瓜新小綏螨敏感品系為抗性品系篩選的原始材料，以90%阿維菌素原粉用噴霧法進行逐代篩選，稱取O. Ig阿維菌素原粉先用5ml丙酮溶解，再用清水配成與毒力測定中相同的6組濃度，每處理重復(fù)4次。用玻片浸潰法測定親代成螨對阿維菌素的毒力后，計算出LC5tl，再用此LC5tl濃度進行群體篩選。從敏感品系中取出5日齡的健壯成螨用該代LC5tl濃度處理，用直徑12 cm培養(yǎng)皿，內(nèi)置直徑10 cm吸滿水的海綿一塊，海綿上放入洗凈的甘薯葉片，葉緣用脫脂棉花圍成細(xì)圈以防止螨外逃或內(nèi)遷，再用零號毛筆輕輕挑起選出的成螨放入上述葉片上，每皿50只，共20皿；用華豐A-06手扣小型噴霧器裝入藥液對挑有胡瓜新小綏螨的培養(yǎng)皿進行噴霧至葉片全濕透，5s后立即用濾紙吸干藥液，處理后24h未死亡的個體繼續(xù)用粉螨飼養(yǎng)，當(dāng)雌成螨產(chǎn)卵后，挑取在24 h內(nèi)產(chǎn)下的卵分別飼養(yǎng)，以避免世代重疊，每3代處理一次，設(shè)4次重復(fù)。連續(xù)用同一 LC5tl濃度篩選3次后，即9代進行一次毒力測定，再用該測定所得LC5tl繼續(xù)篩選。共用阿維菌素原粉藥劑處理18次。獲得的抗性品系經(jīng)120代飼養(yǎng)檢測抗性衰退后，用相同方法對此品系進行抗性再篩選。交互抗性的測定用吡蟲啉、毒死蜱和高效氯氰菊酯進行毒力測定。在抗性汰選前，測定一系列藥劑的毒力基線值，待抗性選擇完成后，再用這些藥劑進行毒力測定(方法同I. 3. I)。以敏感品系作對比，計算抗阿維菌素品系對這三種農(nóng)藥抗性提高倍數(shù)。3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計及分析
EXCEL統(tǒng)計軟件進行分析與處理。以藥劑濃度的對數(shù)值為自變量，以對應(yīng)的死亡率機率值為應(yīng)變量，計算出毒力回歸方程、致死中濃度(LC5tl)及其95%置信區(qū)間、相關(guān)系數(shù)等參數(shù)?？顾幮员稊?shù)按式(I)計算，抗性衰退率按式(2)計算。以LC5tl的95%置信限是否有重疊作為判斷不同種群間藥劑敏感度差異是否顯著的標(biāo)準(zhǔn)。 =供試種群的LC5tl/敏感種群的LC5tl(I) 抗性衰退率(％)=(用藥后種群的LC5tl-停用藥后種群的LC5tl) X 100/用藥后種群的LC5tl
(2)
2結(jié)果與分析
胡瓜新小綏螨抗阿維菌素品系的選育
胡瓜新小綏螨對阿維菌素抗性發(fā)展動態(tài)在室內(nèi)用胡瓜新小綏螨敏感品系為抗性品系篩選的原始材料，用90%阿維菌素原粉進行逐代篩選，結(jié)果見表I。表I胡瓜新小綏螨對阿維菌素的抗性發(fā)展動態(tài)
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由表I可見，胡瓜新小綏螨抗性從敏感品系在飼養(yǎng)36代期間用藥篩選了 13次時抗性發(fā)展比較緩慢，在飼養(yǎng)從36代到54代期間用藥篩選了 5次的抗性發(fā)展迅速；在18次汰選54代的過程中，抗性倍數(shù)總體呈明顯的增加，其LC5tl值由敏感品系的2. 5270 mg/L上升到163. 2930 mg/L，抗性品系F54的抗藥性比敏感品系增加了 64. 62倍。2. I. 2 胡瓜新小綏螨對阿維菌素抗性發(fā)展趨勢以測定毒力的選育代數(shù)為自變量，抗性倍數(shù)為因變量，將胡瓜新小綏螨阿維菌素抗性品系的抗性發(fā)展趨勢進行方程擬合，結(jié)果表明其抗性發(fā)展符合邏輯斯蒂模型，擬合方程為尸120.4141/(l+e(4_88914_°_°935x))，相關(guān)系數(shù)R為O. 9951 (圖I)。這說明胡瓜新小綏螨對阿維菌素抗性發(fā)展趨勢與大多害蟲產(chǎn)生抗藥性的發(fā)展趨勢相同，開始時緩慢上升，上升到一定階段后有一個量的飛越，然后再緩慢上升。2.2胡瓜新小綏螨對阿維菌素的抗性的穩(wěn)定性
抗阿維菌素的胡瓜新小綏螨品系在溫度25土1°C、相對濕度RH85%人工氣候箱中飼養(yǎng)飼養(yǎng)繁殖，經(jīng)過30代不接觸藥劑后，抗性迅速衰退至原有抗性的1/2左右，抗性衰退率達(dá)52. 03%，在不接觸藥劑60代后，抗性衰退率達(dá)到78. 46%，此后抗性衰退速率緩慢，抗性品系不接觸任何藥劑繁殖90代和120代后的抗性仍時敏感品系的10倍以上。抗性品系在不接觸藥劑60代、90代和120代測得的抗性衰退率均在80%左右，致死中濃度置信區(qū)間大部分重疊。表2胡瓜新小綏螨抗阿維菌素品系對阿維菌素抗性的衰退趨勢
權(quán)利要求
1.一種抗藥性胡瓜新小綏螨品系，其特征在于所述的品系對大環(huán)內(nèi)酯抗生素類殺蟲殺螨劑阿維菌素的抗性提高到了原來的64. 62倍，并對煙堿類殺蟲劑的抗性提高了 18. 85倍，對有機磷類殺蟲殺螨劑的抗性提高了 27. 75倍，對菊酯類殺蟲劑的抗性提高了 58倍；而該抗藥性品系在無藥劑選擇壓力來維持抗的條件下經(jīng)過繁殖2年種群對阿維菌素、煙堿類、有機磷類和菊酯類的抗藥性仍是敏感品系的10倍以上；該抗性品系的產(chǎn)卵量、存活率與壽命等生物學(xué)特性與敏感品系無顯著性差異，種群參數(shù)中的凈生殖率、內(nèi)稟增長率和周限增長率與敏感品系無顯著性差異，平均世代歷期和種群加倍時間比敏感品系略短一點，捕食功能反應(yīng)試驗結(jié)果該抗性品系對葉螨等害蟲害螨的捕食作用與敏感品系無顯著性差異。
2.一種抗藥性胡瓜新小綏螨品系的選育方法，其特征在于所述的選育方法包括以下步驟 (1)抗性品系的選育采用胡瓜新小綏螨敏感品系為抗性品系篩選的原始材料，以90%阿維菌素原粉用噴霧法進行逐代篩選，稱取O. Ig阿維菌素原粉先用5ml丙酮溶解，再用清水配成與毒力測定中相同的6組濃度，每處理重復(fù)4次；用玻片浸潰法測定親代成螨對阿維菌素的毒力后，計算出LC5tl，再用此LC5tl濃度進行群體篩選；從敏感品系中取出5日齡的健壯成螨用該代LC5tl濃度處理，用直徑12 cm培養(yǎng)皿，內(nèi)置直徑10 cm吸滿水的海綿一塊，海綿上放入洗凈的甘薯葉片，葉緣用脫脂棉花圍成細(xì)圈以防止螨外逃或內(nèi)遷，再用零號毛筆輕輕挑起選出的成螨放入上述葉片上，每皿50只，共20皿；用華豐A-06手扣小型噴霧器裝入藥液對挑有胡瓜新小綏螨的培養(yǎng)皿進行噴霧至葉片全濕透，5s后立即用濾紙吸干藥液，處理后24h未死亡的個體繼續(xù)用粉螨飼養(yǎng)，當(dāng)雌成螨產(chǎn)卵后，挑取在24 h內(nèi)產(chǎn)下的卵分別飼養(yǎng)，以避免世代重疊，每3代處理一次，設(shè)4次重復(fù)；連續(xù)用同一 LC5tl濃度篩選3次后，即9代進行一次毒力測定，再用該測定所得LC5tl繼續(xù)篩選；共用阿維菌素原粉藥劑處理18次；獲得的抗性品系經(jīng)120代飼養(yǎng)檢測抗性衰退后，用相同方法對此品系進行抗性再篩選； (2)交互抗性的測定用煙堿類殺蟲劑、有機磷類殺蟲殺螨劑和菊酯類殺蟲劑進行毒力測定；在抗性汰選前，測定一系列藥劑的毒力基線值，待抗性選擇完成后，再用這些藥劑進行毒力測定；以敏感品系作對比，計算抗阿維菌素品系對這些農(nóng)藥抗性提高倍數(shù)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種抗藥性胡瓜新小綏螨品系及其選育方法，包括毒力測定、抗性品系的選育、交互抗性的測定。該品系不僅保留原有的胡瓜新小綏螨作為天敵優(yōu)良特性，而且該品系對大環(huán)內(nèi)酯抗生素類殺蟲殺螨劑阿維菌素的抗性提高到了原來的64.62倍，對煙堿類殺蟲劑吡蟲啉的抗性提高了18.85倍，對有機磷類殺蟲殺螨劑毒死蜱的抗性提高了27.75倍；對菊酯類殺蟲劑高效氯氰菊酯的抗性提高了58.16倍。本發(fā)明的選育方法簡單，具備顯著的經(jīng)濟和社會效益。
文檔編號A01K67/033GK102823547SQ20121029911
公開日2012年12月19日 申請日期2012年8月22日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月22日
發(fā)明者陳霞, 張艷璇, 林堅貞, 季潔 申請人:福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所