專利名稱：一種植物愈傷組織嫁接方法及其裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于細(xì)胞學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于嫁接基礎(chǔ)理論的細(xì)胞學(xué)和分子生物學(xué)研究的植物愈傷組織嫁接方法及其裝置。
背景技術(shù)：
植物嫁接是一門重要的植物繁殖技術(shù)。它被廣泛地應(yīng)用于園藝生產(chǎn)實(shí)踐中，在蔬菜、果樹和花卉生產(chǎn)上發(fā)揮著重要的作用:如保持品種的優(yōu)良特性、增強(qiáng)接穗的抗逆性和適應(yīng)性、促進(jìn)接穗開花結(jié)果、改變株型、克服不易繁殖的困難和擴(kuò)大繁殖系數(shù)等。同時(shí)它作為一種基礎(chǔ)理論研究的理想系統(tǒng)，也被廣泛用于細(xì)胞識別機(jī)制、物質(zhì)運(yùn)輸、信息傳遞、病毒侵染途徑和開花機(jī)理等重大理論問題上的研究。嫁接體的發(fā)育過程是一個(gè)復(fù)雜的生物過程，對這一過程進(jìn)行深入研究，不僅有著重要的理論意義，而且還有著廣泛的應(yīng)用前景。自上世紀(jì)至今，特別是上世紀(jì)70，80年代進(jìn)行了大量研究，相繼提出了一系列假說，試圖解釋嫁接的親和性機(jī)理。但眾說紛紜，意見不一，至今嫁接基礎(chǔ)理論的研究仍然是生物學(xué)上一大難題。造成嫁接理論研究不夠深入的一個(gè)主要原因是缺乏理想的研究系統(tǒng)。過去的研究多在整體條件下進(jìn)行，嫁接后環(huán)境條件難以控制，而環(huán)境條件的變化對嫁接組合的發(fā)育影響較大，給進(jìn)一步研究帶來很大困難。為此Parkinson和Yeoman(1982)(Graft formation in cultured, explanted internodes.New Phytologist, 91:711-719.)首先建立了離體莖段嫁接系統(tǒng)。該系統(tǒng)的建立及隨后的研究為闡明嫁接親和性機(jī)理奠定了重要基 礎(chǔ)。然而目前的研究認(rèn)為嫁接親和是生理適應(yīng)和細(xì)胞識別的雙重作用。而嫁接體在發(fā)育過程中首先在嫁接面上形成愈傷組織。這種愈傷組織很可能是細(xì)胞識別的直接界面和生理適應(yīng)中感應(yīng)物質(zhì)的直接生成區(qū)域。離體莖段嫁接系統(tǒng)仍然是一復(fù)雜系統(tǒng)，對于研究嫁接中愈傷組織的生理，生化及分子動(dòng)態(tài)顯然不適合。目前還沒有一種適合于嫁接面的細(xì)胞和分子動(dòng)態(tài)研究的植物愈傷組織嫁接方法及其裝置。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題與缺陷，本發(fā)明的目的在于提供一種植物愈傷組織嫁接方法，該方法使砧木愈傷組織從固體培養(yǎng)基中吸收養(yǎng)分和激素，接穗愈傷組織通過海綿條從液體培養(yǎng)基中吸收養(yǎng)分和激素，從而實(shí)現(xiàn)雙培養(yǎng)基培養(yǎng)，分別誘導(dǎo)，為嫁接基礎(chǔ)理論的細(xì)胞學(xué)和分子生物學(xué)研究提供了新的途徑。實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的的技術(shù)方案是一種植物愈傷組織嫁接方法，該方法將同一種植物或兩種植物的愈傷組織垂直嫁接，將砧木愈傷組織置于內(nèi)管底部的固體培養(yǎng)基上，接穗愈傷組織被固定在兩個(gè)海綿條之間，并通過海綿條吸收外瓶底部的液體培養(yǎng)基；
所述的固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基的養(yǎng)分和激素配比是根據(jù)不同的砧木愈傷組織和接穗愈傷組織的生理狀態(tài)配制。本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供上述植物愈傷組織嫁接方法的專用裝置，包括封口膜、外瓶、固定卡、內(nèi)管，所述的內(nèi)管通過固定卡固定在外瓶內(nèi)，所述的封口膜蓋在外瓶的瓶口，所述的內(nèi)管的管壁上設(shè)有孔，L型海綿條的一端插入內(nèi)管內(nèi)，另一端延伸至外瓶瓶底；所述的內(nèi)管的管壁上對稱地設(shè)有兩孔；
所述的L型海綿條有兩條。在植物嫁接過程中砧木愈傷組織和接穗愈傷組織處于兩個(gè)完全不同的生理水平，其中養(yǎng)分供給和激素水平是影響嫁接是否成功的主要因素。故而在建立嫁接模型時(shí)必須使得砧木愈傷組織和接穗愈傷組織能夠在不同的養(yǎng)分和激素條件下嫁接。本發(fā)明采用一種特殊裝置將同一種植物或兩種植物的愈傷組織垂直嫁接，砧木愈傷組織接觸固體培養(yǎng)基，接穗愈傷組織被固定在兩個(gè)海綿條之間，并通過海綿條吸收液體培養(yǎng)基。固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基的養(yǎng)分和激素配比不同，可分別模擬砧木愈傷組織和接穗愈傷組織的生理狀態(tài)。使用時(shí)根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康南蚺囵B(yǎng)瓶中灌注所需的液體培養(yǎng)基，內(nèi)管中灌注固體培養(yǎng)基，封口膜封口，滅菌后備用。將砧木愈傷組織置于固體培養(yǎng)基上，不可與海綿條接觸，將接穗愈傷組織嫁接在砧木愈傷組織上，同時(shí)調(diào)整位置使其固定在海綿條縫隙中間。砧木愈傷組織從固體培養(yǎng)基中吸收養(yǎng)分和激素，接穗愈傷組織通過海綿條從液體培養(yǎng)基中吸收養(yǎng)分和激素。從而實(shí)現(xiàn)雙培養(yǎng)基培養(yǎng)，分別誘導(dǎo)。


圖1是本發(fā)明的植物愈傷組織嫁接方法的專用裝置的結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式
對本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。實(shí)施例1 一種植物愈傷組織嫁接方法，將同一種植物或兩種植物的愈傷組織垂直嫁接，將砧木愈傷組織置于內(nèi)管4底部的固體培養(yǎng)基7中，接穗愈傷組織被固定在兩個(gè)海綿條5之間，并通過海綿條5吸收外瓶2底部的液體培養(yǎng)基6 ；
所述的固體培養(yǎng)基7和液體培養(yǎng)基6的養(yǎng)分和激素配比是根據(jù)不同的砧木愈傷組織和接穗愈傷組織的生理狀態(tài)配制。實(shí)施例2
一種植物愈傷組織嫁接裝置，包括封口膜(I)、外瓶(2)、固定卡(3)、內(nèi)管(4)，所述的內(nèi)管(4)通過固定卡(3)固定在外瓶(2)內(nèi)，所述的封口膜(I)蓋在外瓶(2)的瓶口，其特征在于，所述的內(nèi)管(4)的管壁上設(shè)有孔，L型海綿條(5)的一端插入內(nèi)管(4)內(nèi)，另一端延伸至外瓶(2)瓶底；所述的內(nèi)管(4)的管壁上對稱地設(shè)有兩孔；所述的L型海綿條(5)有兩條。實(shí)施例3
以研究番茄與煙草嫁接過程愈傷組織嫁接面細(xì)胞生理生化的變化為例，番茄愈傷組織作為砧木愈傷組織，煙草愈傷組織作為接穗愈傷組織。外瓶2是一個(gè)三角瓶，瓶底盛有液體培養(yǎng)基，內(nèi)管4為一透明的玻璃或耐高溫塑料管，內(nèi)管中灌注固體培養(yǎng)基7 ;距內(nèi)管4底部4cm處開有兩個(gè)方形小口，將兩根L型的海綿條5穿過方孔固定，如圖1所示，兩海綿條5中間夾縫為0.5cm,砧木愈傷組織與內(nèi)管固體培養(yǎng)基7接觸，接穗愈傷組織卡在海綿條5的縫隙間通過海綿條5吸收外瓶2底部的液體培養(yǎng)基6，同時(shí)與砧木愈傷組織緊密接觸保持嫁接狀態(tài)。所述的液體培養(yǎng)基6為含有0.5毫克/升6-芐氨基嘌呤、650毫克/升硝酸銨、900毫克/升硝酸鉀、440毫克/升二水氯化鈣、370毫克/升七水硫酸鎂、170毫克/升磷酸二氫鉀、0.83暈克/升碘化鉀、6.2暈克/升硼酸、22.3暈克/升四水硫酸猛、8.6暈克/升七水硫酸鋅、0.25毫克/升二水鑰酸鈉、0.025毫克/升硫酸銅、0.025毫克/升六水氯化鈷、27.8毫克/升七水硫酸亞鐵、37.3毫克/升乙二胺四乙酸二鈉、100毫克/升肌醇、
0.5毫克/升煙酸、0.5毫克/升維生素B6、0.1毫克/升維生素Bl、2.0毫克/升甘氨酸和30000毫克/升蔗糖的水溶液(pH值為5.8)。所述的固體培養(yǎng)基7為含有0.05毫克/升2，4-二氯苯氧乙酸、0.02毫克/升6-芐氨基嘌呤、650毫克/升硝酸銨、900毫克/升硝酸鉀、440毫克/升二水氯化鈣、370毫克/升七水硫酸鎂、170毫克/升磷酸二氫鉀、0.83毫克/升碘化鉀、6.2毫克/升硼酸、22.3暈克/升四水硫酸猛、8.6暈克/升七水硫酸鋅、0.25暈克/升二水鑰酸鈉、0.025暈克/升硫酸銅、0.025毫克/升六水氯化鈷、27.8毫克/升七水硫酸亞鐵、37.3毫克/升乙二胺四乙酸二鈉、100毫克/升肌醇、0.5毫克/升煙酸、0.5毫克/升維生素B6、0.1毫克/升維生素B1、2.0毫克/升甘氨酸、30000毫克/升蔗糖和7000毫克/升瓊脂的固體培養(yǎng)基(pH值為5.8)。運(yùn)用此方法及其裝置 我們了通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，此方法及其裝置適合于研究嫁接過程愈傷組織嫁接面細(xì)胞生理與分子生物學(xué)的變化。
權(quán)利要求
1.一種植物愈傷組織嫁接方法，將同一種植物或兩種植物的愈傷組織垂直嫁接，其特征在于，將砧木愈傷組織置于內(nèi)管(4)底部的固體培養(yǎng)基(7)上，接穗愈傷組織被固定在兩個(gè)海綿條(5)之間，并通過海綿條(5)吸收外瓶(2)底部的液體培養(yǎng)基(6)； 所述的固體培養(yǎng)基(7)和液體培養(yǎng)基(6)的養(yǎng)分和激素配比是根據(jù)不同的砧木愈傷組織和接穗愈傷組織的生理狀態(tài)配制。
2.一種植物愈傷組織嫁接裝置，包括封口膜(I)、外瓶(2)、固定卡(3)、內(nèi)管(4)，所述的內(nèi)管(4)通過固定卡(3)固定在外瓶(2)內(nèi)，所述的封口膜(I)蓋在外瓶(2)的瓶口，其特征在于，所述的內(nèi)管(4)的管壁上設(shè)有孔，L型海綿條(5)的一端插入內(nèi)管(4)內(nèi)，另一端延伸至外瓶(2)瓶底； 所述的內(nèi)管(4)的管壁上對稱地設(shè)有兩孔； 所述的L型海綿條 (5)有兩條。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種植物愈傷組織嫁接方法，該方法是將同一種植物或兩種植物的愈傷組織垂直嫁接，將砧木愈傷組織置于內(nèi)管底部的固體培養(yǎng)基上，接穗愈傷組織被固定在兩個(gè)海綿條之間，并通過海綿條吸收外瓶底部的液體培養(yǎng)基；所述的固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基的養(yǎng)分和激素配比是根據(jù)不同的砧木愈傷組織和接穗愈傷組織的生理狀態(tài)配制。該方法使砧木愈傷組織從固體培養(yǎng)基中吸收養(yǎng)分和激素，接穗愈傷組織通過海綿條從液體培養(yǎng)基中吸收養(yǎng)分和激素，從而實(shí)現(xiàn)雙培養(yǎng)基培養(yǎng)，分別誘導(dǎo)，為嫁接基礎(chǔ)理論的細(xì)胞學(xué)和分子生物學(xué)研究提供了新的途徑。
文檔編號A01G1/06GK103155807SQ20111041478
公開日2013年6月19日 申請日期2011年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月13日
發(fā)明者胡鑫, 沈道銀 申請人:西北農(nóng)林科技大學(xué)