專(zhuān)利名稱(chēng)：一種利用菊芋糟渣發(fā)酵生產(chǎn)蛋白飼料的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及菊芋生產(chǎn)乙醇后的廢糟渣的回收利用，具體的說(shuō)是一種利用菊芋糟渣發(fā)酵生產(chǎn)蛋白飼料的方法。
背景技術(shù)：
面對(duì)石油資源的日益減少，不斷加劇的能源危機(jī)和造成的環(huán)境污染，世界各國(guó)都在尋求以可再生、清潔的能源替代化石能源。以生物質(zhì)為原料發(fā)酵生產(chǎn)的燃料乙醇是一種可再生、清潔的能源。在我國(guó)，燃料乙醇主要由玉米生產(chǎn)，然而由于玉米乙醇以糧食為原料， 須占用大量耕地，與國(guó)家糧食安全存在矛盾，我國(guó)已叫停糧食乙醇的開(kāi)發(fā)，要求今后生物燃料的發(fā)展必須滿足不占用耕地、不消耗糧食和不破壞生態(tài)環(huán)境為前提。在這方面，菊芋具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)一是菊芋抗逆性強(qiáng)，耐貧瘠，耐寒，耐旱，特別適合在沙漠、灘涂、鹽堿荒地等非農(nóng)業(yè)耕地種植，不與糧爭(zhēng)地；二是產(chǎn)量高，其塊莖干物質(zhì)畝產(chǎn)可達(dá)1.2噸以上，超過(guò)玉米生物量單產(chǎn)水平，與甘薯的產(chǎn)量相當(dāng)；菊芋塊莖的菊粉含量很高，可占干重的80%左右，比甘蔗高出30% ；三是菊粉是由D-呋喃果糖經(jīng)β -2，1-糖苷鍵聚合而成的一種果聚糖，呈直鏈結(jié)構(gòu)，末端常含有一個(gè)葡萄糖基，易于轉(zhuǎn)化為可發(fā)酵的單糖， 不需液化，節(jié)省能耗。因此，菊芋作為一種新型的能源植物，由于其優(yōu)異的經(jīng)濟(jì)、環(huán)保和能源開(kāi)發(fā)價(jià)值，日益受到廣泛的關(guān)注和重視。利用菊芋為原料，采用酒精酵母發(fā)酵生產(chǎn)乙醇后會(huì)獲得大量的廢棄液，即菊芋糟液。菊芋糟液中含有豐富營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如蛋白質(zhì)和糖，具有很高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值及開(kāi)發(fā)價(jià)值，同時(shí)由于菊芋糟液屬于高濃度有機(jī)廢水，不經(jīng)處理直接排放，不僅浪費(fèi)了寶貴的資源，還會(huì)對(duì)生態(tài)環(huán)境造成嚴(yán)重的影響。目前，對(duì)淀粉質(zhì)原料酒糟的綜合利用主要是直接把酒糟干燥生產(chǎn)飼料，或是用來(lái)進(jìn)行沼氣發(fā)酵和生產(chǎn)飼料酵母。由于菊芋糟液蛋白含量低，直接干燥制成飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值偏低，而進(jìn)行沼氣發(fā)酵所需的設(shè)備較復(fù)雜，建設(shè)投資高，且廢水中主要含有菊粉，產(chǎn)甲烷細(xì)菌不能利用菊粉，需先把菊粉分解成單糖才能進(jìn)行沼氣發(fā)酵，增加了發(fā)酵環(huán)節(jié)，因此，我們針對(duì)菊芋原料燃料乙醇生產(chǎn)過(guò)程中產(chǎn)生的廢棄物主要是蒸餾乙醇后的高固含率廢水，含有大量纖維素和菊粉的特點(diǎn)，接入飼料酵母進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)蛋白飼料。

發(fā)明內(nèi)容
為解決現(xiàn)有技術(shù)中廢糟渣和酒糟濾液回收利用中存在的問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種利用菊芋糟渣發(fā)酵生產(chǎn)蛋白飼料的方法，既解決了廢棄物處理及資源化利用的問(wèn)題，又提高了菊芋糟液的飼料價(jià)值，且對(duì)環(huán)境保護(hù)具有十分重要的意義。本發(fā)明為解決上述技術(shù)問(wèn)題采用的技術(shù)方案為一種利用菊芋糟渣發(fā)酵生產(chǎn)蛋白飼料的方法，將菊芋糟渣和麩皮按重量比為8. 5^9:1. 5^1的比例混合，再加入占菊芋糟渣和麩皮混合后總重量1%的尿素和0. 5%的磷酸二氫鉀，配制成發(fā)酵基質(zhì)，再按每IOOg發(fā)酵基質(zhì)中加入上清濃縮液5mL、營(yíng)養(yǎng)鹽液5mL和蒸餾水5mL的比例加入上清濃縮液、營(yíng)養(yǎng)鹽液和蒸餾水，攪拌混勻，用濃度為0. lmol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至5. 5，放入高壓滅菌鍋內(nèi)，在121°C條件下滅菌30min，制得固體發(fā)酵基質(zhì)，冷卻后在固體發(fā)酵基質(zhì)中接種混合菌液，接種的混合菌液的體積占接種后培養(yǎng)液總體積的5%，滅菌玻璃棒拌勻后，在30°C恒溫條件下培養(yǎng)5d，培養(yǎng)結(jié)束后，80°C恒溫至干燥，粉碎后制得菊芋糟渣蛋白飼料；
所述的菊芋糟渣和上清液濃縮液，其制備方法為取蒸餾提取乙醇后的糟液，在 4500r/min的條件下離心lOmin，獲得沉淀物即為菊芋糟渣；制備過(guò)程中獲得的上清液加熱濃縮，使其含糖量達(dá)到30%以上，即為上清液濃縮液；
所述的營(yíng)養(yǎng)鹽液為常規(guī)方法配制，其成分為每升營(yíng)養(yǎng)鹽液中含有MgSO4 · 7H2030g、 MnSO4 · H2O 0. 6g、FeSO4 · 7H20 0. 16g、ZnSO4 · 7H20 0. 5g 和 CaCl2 0. 7g，溶劑為蒸餾水；
所述的馬克斯克魯維酵母、白地霉和產(chǎn)朊假絲酵母組成的混合菌液，其組成成分的制備分別如下
所述的馬克斯克魯維酵母種子液的制備過(guò)程為馬克斯克魯維酵母經(jīng)斜面培養(yǎng)基活化48 72h，無(wú)菌操作條件下，用金屬接種環(huán)挑取1 2環(huán)菌種接種于已滅菌的裝液量為 50mL/250mL三角瓶種子培養(yǎng)基中，在150r/min、30°C恒溫條件下振蕩培養(yǎng)72h，即制得馬克斯克魯維酵母種子液；
其中，斜面培養(yǎng)基為常規(guī)方法制得，其成分為每升斜面培養(yǎng)基中含有酵母浸膏5g、牛肉膏Sg、葡萄糖IOg和瓊脂20g，溶劑為蒸餾水，配制好的斜面培養(yǎng)基在使用前需在121°C的條件下滅菌20min ；
種子培養(yǎng)基為豆芽汁蔗糖液體培養(yǎng)基，其制作方法為稱(chēng)新鮮豆芽100g，放入燒杯中， 加蒸餾水IOOOmL,煮沸0. 5h，用紗布過(guò)濾除去豆芽；將剩余的液體用蒸餾水補(bǔ)足IOOOmL,再加入蔗糖50g，加熱溶化，在121°C條件下滅菌20min，即制得種子培養(yǎng)基；
所述的白地霉種子液的制備過(guò)程為白地霉經(jīng)斜面培養(yǎng)基活化48 72h，無(wú)菌操作條件下，用金屬接種環(huán)挑取1 2環(huán)菌種接種于已滅菌的裝液量為SOmLASOmL三角瓶種子培養(yǎng)基中，在150r/min、3(TC恒溫的條件下振蕩培養(yǎng)72h，即制得白地霉種子液；
其中，斜面培養(yǎng)基為馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，其制備步驟為取馬鈴薯洗凈去皮，再稱(chēng)取200g，切成小塊，加水煮沸2(T30min，用八層紗布過(guò)濾除去馬鈴薯后，在過(guò)濾液中加入 20g葡萄糖和15 20g瓊脂，繼續(xù)加熱攪拌至瓊脂完全溶解，再補(bǔ)足蒸餾水至IOOOmL,然后在121°C條件下滅菌20min ；
種子培養(yǎng)基為馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，其制備步驟為取馬鈴薯洗凈去皮，再稱(chēng)取200g，切成小塊，加水煮沸2(T30min，用八層紗布過(guò)濾除去馬鈴薯后，在過(guò)濾液中加入 20g葡萄糖，繼續(xù)加熱攪拌均勻，冷卻后再補(bǔ)足蒸餾水至IOOOmL,然后在121°C條件下滅菌 20min ；
所述的產(chǎn)朊假絲酵母種子液的制備過(guò)程為產(chǎn)朊假絲酵母經(jīng)斜面培養(yǎng)基活化 48 72h，無(wú)菌操作條件下，用金屬接種環(huán)挑取1 2環(huán)菌種接種于已滅菌的裝液量為 50mL/250mL三角瓶種子培養(yǎng)基中，在150r/min、30°C恒溫的條件下振蕩培養(yǎng)72h ；
其中，斜面培養(yǎng)基由常規(guī)方法制得，其成分為每升斜面培養(yǎng)基中含有酵母浸膏5g、牛肉膏Sg、葡萄糖IOg和瓊脂20g，溶劑為蒸餾水，配制好的斜面培養(yǎng)基在使用前需在121°C的條件下滅菌20min ；
種子培養(yǎng)基為豆芽汁蔗糖液體培養(yǎng)基，其制作方法為稱(chēng)新鮮豆芽100g，放入燒杯中，加蒸餾水IOOOmL,煮沸0. 5h，用紗布過(guò)濾除去豆芽，然后將剩余的液體用蒸餾水補(bǔ)足 lOOOmL，再加入蔗糖50g，煮沸溶化，在121°C條件下滅菌20min，即制得種子培養(yǎng)基；
將按照上述方法制備的馬克斯克魯維酵母、白地霉和產(chǎn)朊假絲酵母種子液按照體積比為1:1:1混合制成混合菌液。本發(fā)明中，所述的馬克斯克魯維酵母、白地霉和產(chǎn)朊假絲酵母均為常規(guī)菌種，在各實(shí)驗(yàn)室和微生物保藏中心均可取得。本發(fā)明中，所述的pH自然，即為配制結(jié)束后無(wú)需加入酸或堿調(diào)整其pH值。有益效果
1、解決了菊芋原料燃料乙醇生產(chǎn)廢棄物處理及資源化利用的問(wèn)題。菊芋原料燃料乙醇生產(chǎn)過(guò)程中產(chǎn)生的廢棄物主要是蒸餾乙醇后的高固含率廢水， 是一種高濃度有機(jī)廢水，不加處理會(huì)嚴(yán)重污染環(huán)境，而對(duì)廢水進(jìn)行固液分離，清液經(jīng)濃縮后與濾渣和麩皮混合，添加適量尿素，接入按體積比1:1:1進(jìn)行混合的馬克斯克魯維酵母、白地霉和產(chǎn)朊假絲酵母的混合菌種進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)蛋白飼料，即有效地解決了菊芋原料燃料乙醇生產(chǎn)廢棄物處理問(wèn)題，又對(duì)廢水中有價(jià)值的纖維素和菊粉進(jìn)行了再利用。2、降低了菊芋原料燃料乙醇生產(chǎn)的廢物排放，減輕了對(duì)環(huán)境的污染。本發(fā)明提供的以菊芋糟液為原料，采用多菌種組合進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)蛋白飼料的方法能有效減少菊芋原料燃料乙醇生產(chǎn)過(guò)程中廢水的排放。廢水排放的減少則減輕了菊芋原料燃料乙醇產(chǎn)業(yè)的發(fā)展對(duì)環(huán)境造成的污染。3、提高了菊芋糟液的飼料價(jià)值。我國(guó)是飼料蛋白嚴(yán)重缺乏的一個(gè)國(guó)家，長(zhǎng)期依靠國(guó)外進(jìn)口魚(yú)粉等蛋白飼料來(lái)滿足國(guó)內(nèi)需要。菊芋糟液中含有蛋白質(zhì)，但直接干燥制成飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值偏低，然而經(jīng)微生物發(fā)酵可將其轉(zhuǎn)化為單細(xì)胞蛋白飼料，提高菊芋糟液的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述。實(shí)施例1
一種利用菊芋糟渣發(fā)酵生產(chǎn)蛋白飼料的方法，具體步驟如下 一)原材料的制取和菌種的培養(yǎng)
菊芋糟渣和上清液濃縮液的制備方法為取蒸餾提取乙醇后的糟液，在4500r/min的條件下離心lOmin，獲得沉淀物即為菊芋糟渣；制備過(guò)程中獲得的上清液加熱濃縮，使其含糖量達(dá)到30%以上，即為上清液濃縮液；
配制營(yíng)養(yǎng)鹽液，其成分為=MgSO4 · 7H20 30g/L、MnSO4 .H2O 0. 6g/L、FeSO4 · 7H20 0. 16g/ L、ZnSO4 · 7H20 0. 5g/L 和 CaCl2 0. 7g/L ；
馬克斯克魯維酵母種子液的制備過(guò)程為取馬克斯克魯維酵母，經(jīng)斜面培養(yǎng)基活化 48 72h，無(wú)菌操作條件下，用金屬接種環(huán)挑取1 2環(huán)菌種接種于已滅菌的裝液量為 50mL/250mL三角瓶種子培養(yǎng)基中，在150r/min、30°C恒溫條件下振蕩培養(yǎng)72h，即制得馬克斯克魯維酵母種子液；
其中，斜面培養(yǎng)基的成分為酵母浸膏5g/L、牛肉膏8g/L、葡萄糖10g/L和瓊脂20g/L， PH值自然，配制好的斜面培養(yǎng)基在121°C下滅菌20min ；種子培養(yǎng)基為豆芽汁蔗糖液體培養(yǎng)基，其制作方法為稱(chēng)新鮮豆芽100g，放入燒杯中， 加蒸餾水IOOOmL,煮沸0. 5h，用紗布過(guò)濾；用蒸餾水水補(bǔ)足原量，再加入蔗糖50g，煮沸溶化，在121°C條件下滅菌20min，即制得種子培養(yǎng)基；
白地霉種子液的制備過(guò)程為取白地霉，經(jīng)斜面培養(yǎng)基活化48 72h，無(wú)菌操作條件下，用金屬接種環(huán)挑取1 2環(huán)菌種接種于已滅菌的裝液量為SOmLASOmL三角瓶種子培養(yǎng)基中，在150r/min、3(TC恒溫的條件下振蕩培養(yǎng)72h，即制得白地霉種子液；
其中，斜面培養(yǎng)基為馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，其制備步驟為取馬鈴薯洗凈去皮，再稱(chēng)取200g，切成小塊，加水煮沸2(T30min，用八層紗布過(guò)濾后，在過(guò)濾液中加入20g葡萄糖和15 20g瓊脂，繼續(xù)加熱攪拌至瓊脂完全溶解，再補(bǔ)足水分至IOOOmL,然后在121°C條件下滅菌20min ；
種子培養(yǎng)基為馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，其制備步驟為取馬鈴薯洗凈去皮，再稱(chēng)取 200g，切成小塊，加水煮沸2(T30min，用八層紗布過(guò)濾后，在過(guò)濾液中加入20g葡萄糖，繼續(xù)加熱攪拌均勻，冷卻后再補(bǔ)足水分至IOOOmL,然后在121°C條件下滅菌20min ；
產(chǎn)朊假絲酵母種子液的制備過(guò)程為取產(chǎn)朊假絲酵母，經(jīng)斜面培養(yǎng)基活化48 72h，無(wú)菌操作條件下，用金屬接種環(huán)挑取1 2環(huán)菌種接種于已滅菌的裝液量為50mL/250mL三角瓶種子培養(yǎng)基中，在150r/min、3(TC恒溫的條件下振蕩培養(yǎng)72h，即制得產(chǎn)朊假絲酵母種子液；
其中，斜面培養(yǎng)基的成分為酵母浸膏5g/L、牛肉膏8g/L、葡萄糖10g/L和瓊脂20g/L， PH值自然，配制好的斜面培養(yǎng)基在121°C下滅菌20min;
種子培養(yǎng)基為豆芽汁蔗糖液體培養(yǎng)基，其制作方法為稱(chēng)新鮮豆芽100g，放入燒杯中， 加蒸餾水IOOOmL,煮沸0. 5h，用紗布過(guò)濾；用蒸餾水水補(bǔ)足原量，再加入蔗糖50g，煮沸溶化，在121°C條件下滅菌20min，即制得種子培養(yǎng)基；
將按照上述方法制備的馬克斯克魯維酵母、白地霉和產(chǎn)朊假絲酵母種子液按照體積比為1:1:1混合制成混合菌液。二)發(fā)酵培養(yǎng)
將鮮糟渣和麩皮按重量比為9: 1的比例混合，再加入重量為1%的尿素、0. 5%的磷酸二氫鉀，再按每IOOg發(fā)酵基質(zhì)中加入上清濃縮液5mL、營(yíng)養(yǎng)鹽液5mL和蒸餾水5mL的比例加入上清濃縮液、營(yíng)養(yǎng)鹽液和蒸餾水，攪拌混勻，再用0. lmol/L的鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH 值至5. 5，放入高壓滅菌鍋內(nèi)，在121°C條件下滅菌30min，冷卻后接種混合菌液，接種量5%， 滅菌玻璃棒拌勻后，在30°C恒溫條件下培養(yǎng)5d，培養(yǎng)結(jié)束后，80°C恒溫至干燥，粉碎后制得菊芋糟渣蛋白飼料。取制得的菊芋糟渣蛋白飼料IOg粉碎后溶于蒸餾水中，送入離心機(jī)中，以5000r/ min的離心速度離心20min，將沉淀物在60°C的條件下烘干，稱(chēng)取2g采用凱氏定氮法測(cè)粗蛋
白含量。在發(fā)酵前，鮮糟渣和麩皮的粗蛋白含量(％，干重)為15. 48%，發(fā)酵后制得的菊芋糟渣蛋白飼料的粗蛋白含量(％，干重)為30. 83%，發(fā)酵后的粗蛋白含量相比發(fā)酵前增長(zhǎng)了 99. 16% ο實(shí)施例2
一種利用菊芋糟渣發(fā)酵生產(chǎn)蛋白飼料的方法，具體步驟如下一)原材料的制取和菌種的培養(yǎng)
原材料的制取和菌種的培養(yǎng)與實(shí)施例1中相同；
二)發(fā)酵培養(yǎng)
將鮮糟渣和麩皮按重量比為8. 75 1. 25的比例混合，再加入重量為1%的尿素、0. 5%的磷酸二氫鉀，再按每IOOg發(fā)酵基質(zhì)中加入上清濃縮液5mL、營(yíng)養(yǎng)鹽液5mL和蒸餾水7. 5mL的比例加入上清濃縮液、營(yíng)養(yǎng)鹽液和蒸餾水，攪拌混勻，再用0. lmol/L的鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至5. 5，放入高壓滅菌鍋內(nèi)，在121°C條件下滅菌30min，冷卻后接種混合菌液， 接種量5%，滅菌玻璃棒拌勻后，在30°C恒溫條件下培養(yǎng)5d，培養(yǎng)結(jié)束后，80°C恒溫至干燥， 粉碎后制得菊芋糟渣蛋白飼料。取制得的菊芋糟渣蛋白飼料IOg粉碎后溶于蒸餾水中，送入離心機(jī)中，以5000r/ min的離心速度離心20min，將沉淀物在60°C的條件下烘干，稱(chēng)取2g采用凱氏定氮法測(cè)粗蛋
白含量。在發(fā)酵前，鮮糟渣和麩皮的粗蛋白含量(％，干重)為16. %，發(fā)酵后制得的菊芋糟渣蛋白飼料的粗蛋白含量(％，干重)為30.沈％，發(fā)酵后的粗蛋白含量相比發(fā)酵前增長(zhǎng)了 86. 33%。實(shí)施例3
一種利用菊芋糟渣發(fā)酵生產(chǎn)蛋白飼料的方法，具體步驟如下
一)原材料的制取和菌種的培養(yǎng)
原材料的制取和菌種的培養(yǎng)與實(shí)施例1中相同；
二)發(fā)酵培養(yǎng)
將鮮糟渣和麩皮按重量比為8. 5:1. 5的比例混合，再加入重量為1%的尿素、0. 5%的磷酸二氫鉀，再按每IOOg發(fā)酵基質(zhì)中加入上清濃縮液5mL、營(yíng)養(yǎng)鹽液5mL和蒸餾水IOmL的比例加入上清濃縮液、營(yíng)養(yǎng)鹽液和蒸餾水，攪拌混勻，再用0. lmol/L的鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至5. 5，放入高壓滅菌鍋內(nèi)，在121°C條件下滅菌30min，冷卻后接種混合菌液，接種量5%，滅菌玻璃棒拌勻后，在30°C恒溫條件下培養(yǎng)5d，培養(yǎng)結(jié)束后，80°C恒溫至干燥，粉碎后制得菊芋糟渣蛋白飼料。取制得的菊芋糟渣蛋白飼料IOg粉碎后溶于蒸餾水中，送入離心機(jī)中，以5000r/ min的離心速度離心20min，將沉淀物在60°C的條件下烘干，稱(chēng)取2g采用凱氏定氮法測(cè)粗蛋
白含量。在發(fā)酵前，鮮糟渣和麩皮的粗蛋白含量(％，干重)為16. 91%，發(fā)酵后制得的菊芋糟渣蛋白飼料的粗蛋白含量(％，干重)為29. 14%，發(fā)酵后的粗蛋白含量相比發(fā)酵前增長(zhǎng)了 72. 32%o
權(quán)利要求
1. 一種利用菊芋糟渣發(fā)酵生產(chǎn)蛋白飼料的方法，其特征在于將菊芋糟渣和麩皮按重量比為8. 5、1. 5^1的比例混合，再加入占菊芋糟渣和麩皮混合后總重量1%的尿素和0. 5% 的磷酸二氫鉀，配制成發(fā)酵基質(zhì)，再按每IOOg發(fā)酵基質(zhì)中加入上清濃縮液5mL、營(yíng)養(yǎng)鹽液 5mL和蒸餾水5mL的比例加入上清濃縮液、營(yíng)養(yǎng)鹽液和蒸餾水，攪拌混勻，用濃度為0. Imol/ L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至5. 5，放入高壓滅菌鍋內(nèi)，在121°C條件下滅菌30min，制得固態(tài)發(fā)酵基質(zhì)，冷卻后在固態(tài)發(fā)酵基質(zhì)中接種混合菌液，接種的混和菌液的體積占接種后培養(yǎng)液總體積的5%，滅菌玻璃棒拌勻后，在30°C恒溫條件下培養(yǎng)5d，培養(yǎng)結(jié)束后，80°C恒溫至干燥，粉碎后制得菊芋糟渣蛋白飼料；所述的菊芋糟渣和上清液濃縮液，其制備方法為取蒸餾提取乙醇后的糟液，在 4500r/min的條件下離心lOmin，獲得沉淀物即為菊芋糟渣；制備過(guò)程中獲得的上清液加熱濃縮，使其含糖量達(dá)到30%以上，即為上清液濃縮液；所述的營(yíng)養(yǎng)鹽液為常規(guī)方法配制，其成分為每升營(yíng)養(yǎng)鹽液中含有MgSO4 · 7H2030g、 MnSO4 · H2OO. 6g、FeSO4 · 7Η200· 16g、ZnSO4 · 7H20 0. 5g 和 CaCl2 0. 7g,溶劑為蒸餾水；所述的馬克斯克魯維酵母、白地霉和產(chǎn)朊假絲酵母組成的混合菌液，其組成成分的制備分別如下所述的馬克斯克魯維酵母種子液的制備過(guò)程為馬克斯克魯維酵母經(jīng)斜面培養(yǎng)基活化48 72h，無(wú)菌操作條件下，用金屬接種環(huán)挑取1 2環(huán)菌種接種于已滅菌的裝液量為 50mL/250mL三角瓶種子培養(yǎng)基中，在150r/min、30°C恒溫條件下振蕩培養(yǎng)72h，即制得馬克斯克魯維酵母種子液；其中，斜面培養(yǎng)基為常規(guī)方法制得，其成分為每升斜面培養(yǎng)基中含有酵母浸膏5g、牛肉膏Sg、葡萄糖IOg和瓊脂20g，溶劑為蒸餾水，配制好的斜面培養(yǎng)基在使用前需在121°C的條件下滅菌20min ；種子培養(yǎng)基為豆芽汁蔗糖液體培養(yǎng)基，其制作方法為稱(chēng)新鮮豆芽100g，放入燒杯中， 加蒸餾水IOOOmL,煮沸0. 5h，用紗布過(guò)濾除去豆芽；將剩余的液體用蒸餾水補(bǔ)足IOOOmL,再加入蔗糖50g，煮沸溶化，在121°C條件下滅菌20min，即制得種子培養(yǎng)基；所述的白地霉種子液的制備過(guò)程為白地霉經(jīng)斜面培養(yǎng)基活化48 72h，無(wú)菌操作條件下，用金屬接種環(huán)挑取1 2環(huán)菌種接種于已滅菌的裝液量為SOmLASOmL三角瓶種子培養(yǎng)基中，在150r/min、3(TC恒溫的條件下振蕩培養(yǎng)72h，即制得白地霉種子液；其中，斜面培養(yǎng)基為馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，其制備步驟為取馬鈴薯洗凈去皮，再稱(chēng)取200g，切成小塊，加水煮沸2(T30min，用八層紗布過(guò)濾除去馬鈴薯后，在過(guò)濾液中加入 20g葡萄糖和15 20g瓊脂，繼續(xù)加熱攪拌至瓊脂完全溶解，補(bǔ)足蒸餾水至IOOOmL,然后在 121°C條件下滅菌20min ；種子培養(yǎng)基為馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，其制備步驟為取馬鈴薯洗凈去皮，再稱(chēng)取200g，切成小塊，加水煮沸2(T30min，用八層紗布過(guò)濾除去馬鈴薯后，在過(guò)濾液中加入 20g葡萄糖，繼續(xù)加熱攪拌均勻，冷卻后再補(bǔ)足蒸餾水至IOOOmL,然后在121°C條件下滅菌 20min ；所述的產(chǎn)朊假絲酵母種子液的制備過(guò)程為產(chǎn)朊假絲酵母經(jīng)斜面培養(yǎng)基活化 48 72h，無(wú)菌操作條件下，用金屬接種環(huán)挑取1 2環(huán)菌種接種于已滅菌的裝液量為 50mL/250mL三角瓶種子培養(yǎng)基中，在150r/min、30°C恒溫的條件下振蕩培養(yǎng)72h，即制得產(chǎn)朊假絲酵母種子液。
2.其中，斜面培養(yǎng)基由常規(guī)方法制得，其成分為每升斜面培養(yǎng)基中含有酵母浸膏5g、 牛肉膏8g、葡萄糖IOg和瓊脂20g，溶劑為蒸餾水，配制好的斜面培養(yǎng)基在使用前需在121°C 的條件下滅菌20min ；種子培養(yǎng)基為豆芽汁蔗糖液體培養(yǎng)基，其制作方法為稱(chēng)新鮮豆芽100g，放入燒杯中，加蒸餾水IOOOmL,煮沸0. 5h，用紗布過(guò)濾除去豆芽，然后將剩余的液體用蒸餾水補(bǔ)足 lOOOmL，再加入蔗糖50g，加熱溶化，在121°C條件下滅菌20min，即制得種子培養(yǎng)基；將按照上述方法制備的馬克斯克魯維酵母、白地霉和產(chǎn)朊假絲酵母的種子液按照體積比為1:1:1混合制成混合菌液。
全文摘要
一種利用菊芋糟渣發(fā)酵生產(chǎn)蛋白飼料的方法，用離心機(jī)將酒精酵母發(fā)酵菊芋生產(chǎn)乙醇蒸餾后的糟液固液分離，獲得糟渣，然后將離心所得清液通過(guò)加熱濃縮使其總糖含量達(dá)到30%以上；將糟渣、清液濃縮液和麩皮混和，添加尿素、接入馬克斯克魯維酵母、白地霉和產(chǎn)朊假絲酵母的混合菌種，30℃培養(yǎng)5d，培養(yǎng)結(jié)束后，80℃恒溫至干燥，粉碎制得菊芋糟液蛋白飼料。本發(fā)明利用菊芋糟渣發(fā)酵生產(chǎn)蛋白飼料，解決了菊芋原料燃料乙醇生產(chǎn)廢棄物處理及資源化利用的問(wèn)題，降低了菊芋原料燃料乙醇生產(chǎn)的廢物排放，減輕了對(duì)環(huán)境的污染，提高了菊芋糟液的飼料價(jià)值。
文檔編號(hào)A23K1/06GK102511650SQ20111040334
公開(kāi)日2012年6月27日 申請(qǐng)日期2011年12月7日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月7日
發(fā)明者尤曉巖, 張勇法, 李凈凈, 汪倫記, 糾敏 申請(qǐng)人:河南科技大學(xué)