專(zhuān)利名稱(chēng)：一種防治黃瓜枯萎病的微生物復(fù)合菌劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種防治黃瓜枯萎病的微生物復(fù)合菌劑及其制備方法，特別涉及一 種抑制黃瓜枯萎病原菌(尖胞鐮刀菌等)增殖和繁衍，消除病原菌傳播和感染性能的微 生物防治枯萎病的微生物復(fù)合菌劑及其制備方法，屬于生防技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
瓜類(lèi)(黃瓜、西瓜和甜瓜)枯萎病的病原菌為尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum),是一類(lèi)主要經(jīng)土壤傳播的維管束病害，在我國(guó)瓜類(lèi)種植區(qū)普遍發(fā)生。病 發(fā)時(shí)，病原菌主要侵害植株根部和莖基部維管束，在維管束內(nèi)繁殖蔓延，通過(guò)堵塞維管 束導(dǎo)管和分泌有毒物質(zhì)毒害寄主細(xì)胞，破壞寄主正常吸收輸導(dǎo)機(jī)能，使養(yǎng)分水分轉(zhuǎn)運(yùn)受 阻，造成植株葉片枯萎；病害嚴(yán)重時(shí)，直接導(dǎo)致植株死亡，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。近年來(lái)，我國(guó)黃瓜枯萎病爆發(fā)嚴(yán)重，在多雨、多濕年份其危害更為嚴(yán)重，常常 造成枯萎病的大流行，造成驚人的損失。據(jù)相關(guān)報(bào)道，普通年份植株發(fā)病率為20%左 右，嚴(yán)重的田塊甚至高達(dá)80% 90%，枯萎病儼然成為黃瓜種植中的災(zāi)難性病害之一。 在一定程度上可以說(shuō)，黃瓜枯萎病的發(fā)病規(guī)模和程度直接關(guān)乎黃瓜種植的經(jīng)濟(jì)收益。目前，枯萎病的防治方法主要包括農(nóng)業(yè)防治和藥劑防治，農(nóng)業(yè)防治包括選用 抗病品種、種子消毒、換土、嫁接、土壤蓋膜高溫處理等方法；藥劑防治包括土壤滅 菌、灌根、噴灑藥劑等方法。然而現(xiàn)有的抗病品種僅具有相對(duì)的抗病能力，抗病效果不 顯著；輪作只能降低枯萎病的發(fā)病程度，加之換茬輪作的作物往往經(jīng)濟(jì)價(jià)值低，影響了 種植戶(hù)的直接經(jīng)濟(jì)收益；嫁接技術(shù)盡管能有效地防治枯萎病害，但是采用南瓜砧木嫁接 的黃瓜品質(zhì)下降，且砧木的連年使用后也逐漸出現(xiàn)砧木連作爛根死亡病癥，嫁接防病技 術(shù)遭遇到發(fā)展瓶頸?；瘜W(xué)農(nóng)藥的綜合應(yīng)用在一段時(shí)期內(nèi)對(duì)病害防治具有重要作用，但長(zhǎng) 期連續(xù)不合理的使用造成病菌和害蟲(chóng)的抗藥性不斷增強(qiáng)，形成用藥量與病害相互遞增的 惡性循環(huán)，增加了農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥的殘留量，對(duì)人畜安全和生態(tài)環(huán)境的平衡構(gòu)成極大的威 脅。另一方面，化學(xué)農(nóng)藥的大量投放在殺滅有害病原菌的同時(shí)，也殺死了土壤環(huán)境中的 有益微生物，而有益微生物的活動(dòng)往往與植株的生長(zhǎng)發(fā)育有著密切的關(guān)聯(lián)，農(nóng)要防治常 常伴隨有嚴(yán)重的并發(fā)癥等隱患。因而，尋求新的防病手段，有效地控制瓜類(lèi)枯萎病的危 害已成為生產(chǎn)實(shí)踐中迫切需要解決的課題。近年來(lái)微生物農(nóng)藥由于其高效、低毒、且不污染環(huán)境等諸多顯著的優(yōu)越性越來(lái) 越受到人們的關(guān)注，生防微生物制品因其安全及有效性成為植物病蟲(chóng)害防治的熱點(diǎn)。目 前，枯草芽孢桿菌是土壤和植物微生態(tài)區(qū)系的優(yōu)勢(shì)生物種群，許多性狀優(yōu)良的菌株表現(xiàn) 出對(duì)多種植物病原菌的拮抗作用?？莶菘莶菅挎邨U菌能產(chǎn)生多種抑制植物病原菌的抗菌 物質(zhì)，主要為低分子量的多肽類(lèi)抗生素和一些高分子亮的蛋白類(lèi)抗菌物質(zhì)。據(jù)試驗(yàn)研 究，沼澤紅假單胞菌、木霉菌以及鏈霉菌等均對(duì)抑制植物枯萎病、蔓枯病等土傳病害均 有效果，并且已經(jīng)開(kāi)發(fā)出了部分生防產(chǎn)品，用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)。目前公布的一項(xiàng)專(zhuān)利申請(qǐng)文件，名為“一株海洋枯草枯草芽孢桿菌及其分離和防治黃瓜枯萎病制劑”，申請(qǐng)?zhí)朇N200810011342，是采用一種海洋枯草枯草芽孢桿菌 發(fā)酵制成的微生物制劑，通過(guò)在土壤中深層施用，殺滅和抑制病原菌生殖，由于采用的 菌種單一，難以滿(mǎn)足復(fù)雜的土壤環(huán)境要求，使得制劑的環(huán)境適宜性和效果穩(wěn)定性受到限 制，因此對(duì)于黃瓜枯萎病的防治作用有限。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種防治黃瓜枯萎病的微生物復(fù)合菌劑及其制備方法，在 抑制枯萎病原菌生殖繁衍，控制發(fā)病規(guī)模和程度的同時(shí)，實(shí)現(xiàn)對(duì)土壤生態(tài)環(huán)境的修復(fù)和 改良，同時(shí)促進(jìn)黃瓜的生長(zhǎng)和產(chǎn)量的提高。為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明提供了一種防治黃瓜枯萎病的微生物復(fù)合菌劑，其 特征在于，由沼澤紅假單胞菌10-15重量份，枯草芽孢桿菌30-40重量份，鏈霉菌15-18 重量份，植物乳桿菌20-23重量份和釀酒酵母10-15重量份組成。本發(fā)明還提供了上述防治黃瓜枯萎病的微生物復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在 于，具體步驟為
第一步將沼澤紅假單胞菌、枯草芽孢桿菌、植物乳桿菌、鏈霉菌與釀酒酵母菌液 按以下比例混合沼澤紅假單胞菌10-15重量份，枯草芽孢桿菌30-40重量份，鏈霉菌 15-18重量份，植物乳桿菌20-23重量份和釀酒酵母10-15重量份；
其中沼澤紅假單胞菌、枯草芽孢桿菌、植物乳桿菌、鏈霉菌與釀酒酵母用其相應(yīng)的 常規(guī)培養(yǎng)基進(jìn)行液體擴(kuò)大培養(yǎng)機(jī)即可。第二步將第一步得到的混合菌液按照1 25-30的重量比例接種于在 120-130°C滅菌30-45min后的液體培養(yǎng)基中，在發(fā)酵罐中發(fā)酵，發(fā)酵條件溫度為 25-320C > pH值為6.8-7.0、轉(zhuǎn)速為220_240r/min、發(fā)酵通氣量維持在1 1、時(shí)間28-32 小時(shí)，發(fā)酵24小時(shí)后每隔2小時(shí)檢測(cè)發(fā)酵液的pH值和活菌總數(shù)，當(dāng)活菌總數(shù)達(dá)到100億
/ml停止發(fā)酵得到微生物復(fù)合菌劑。所述第二步中的液體培養(yǎng)基由玉米粉2-20重量份、豆粕粉1-10重量份、磷酸 二氫鉀0.2-2重量份、磷酸一氫鈉0.4-0.8重量份、硫酸錳0.001-0.01重量份、硫酸鎂 0.001-0.02重量份、酵母膏0.05-0.2重量份和無(wú)菌水32.2-39.2重量份組成。本發(fā)明采用多種菌種共同生長(zhǎng)發(fā)酵，同時(shí)產(chǎn)生較大含量的代謝物質(zhì)，活菌含量 10 億 / ml。沼澤紅假單胞菌、枯草芽孢桿菌以及鏈霉菌等可通過(guò)抗生、競(jìng)爭(zhēng)及重寄生等作 用，如直接分泌抗生物質(zhì)或細(xì)胞外酵素以及生長(zhǎng)位點(diǎn)和營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)等，直接殺滅或抑制黃 瓜枯萎病原菌的生殖。釀酒酵母群不僅細(xì)胞蛋白質(zhì)含量高，而且在生長(zhǎng)代謝過(guò)程中能形 成多種B族維生素和生理活性物質(zhì)，有助于其他微生物和動(dòng)植物的營(yíng)養(yǎng)吸收，增強(qiáng)了有 益菌的活性，也促進(jìn)了黃瓜根系的生長(zhǎng)和發(fā)育，有助于提高黃瓜自身的抗病能力，進(jìn)而 削弱了枯萎病的發(fā)病程度。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是
1、直接從健康土壤環(huán)境中篩選有益細(xì)菌和真菌，保證了菌種在土壤環(huán)境中的兼容 性，可以在土壤中迅速根植并持續(xù)作用于植物根系；
2、采用的菌種搖瓶技術(shù)選取高產(chǎn)菌種，可以顯著增加其菌種的生長(zhǎng)速度，有利于在土壤中迅速形成有益的根系微生物環(huán)境，限制枯萎病的發(fā)病；
3、采用液體高速培養(yǎng)的發(fā)酵工藝，既可以保證產(chǎn)品活菌數(shù)量在一個(gè)作用的高位， 又可以讓菌種在發(fā)酵過(guò)程中相互馴化，增加其兼容性；
4、由于復(fù)合菌種的共生共棲，既保證菌劑長(zhǎng)期儲(chǔ)存的生理活性和穩(wěn)定性，也保障 了對(duì)土壤環(huán)境適應(yīng)的廣泛性，較單一菌種更有推廣的可行性和價(jià)值。


圖1為枯萎病的發(fā)病率平均數(shù)的差異顯著性示意圖； 圖2為霜霉病的發(fā)病率平均數(shù)的差異顯著性示意圖3為黃瓜產(chǎn)量統(tǒng)計(jì)曲線(xiàn)示意圖。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。本發(fā)明中使用的各菌種中國(guó)農(nóng)業(yè)微生 物菌種保藏管理中心，菌種相關(guān)信息如下
權(quán)利要求
1.一種防治黃瓜枯萎病的微生物復(fù)合菌劑，其特征在于，由沼澤紅假單胞菌10-15重 量份，枯草芽孢桿菌30-40重量份，鏈霉菌15-18重量份，植物乳桿菌20-23重量份和釀 酒酵母10-15重量份組成。
2.權(quán)利要求1所述的防治黃瓜枯萎病的微生物復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在于，具 體步驟為第一步將沼澤紅假單胞菌、枯草芽孢桿菌、植物乳桿菌、鏈霉菌與釀酒酵母菌液 按以下比例混合沼澤紅假單胞菌10-15重量份，枯草芽孢桿菌30-40重量份，鏈霉菌 15-18重量份，植物乳桿菌20-23重量份和釀酒酵母10-15重量份；其中沼澤紅假單胞菌、枯草芽孢桿菌、植物乳桿菌、鏈霉菌與釀酒酵母用其相應(yīng)的 常規(guī)培養(yǎng)基進(jìn)行液體擴(kuò)大培養(yǎng)機(jī)即可；第二步將第四步得到的混合菌液按照1: 25-30的重量比例接種于在120-130°C滅 菌30-45min后的液體培養(yǎng)基中，在發(fā)酵罐中發(fā)酵，發(fā)酵條件溫度為30_32°C、pH值為 6.8-7.0、轉(zhuǎn)速為220-240r/min、發(fā)酵通氣量維持在1 1、時(shí)間28-32小時(shí)，發(fā)酵24小時(shí) 后每隔2小時(shí)檢測(cè)發(fā)酵液的pH值和活菌總數(shù)，當(dāng)活菌總數(shù)達(dá)到100億/ml停止發(fā)酵得到 微生物復(fù)合菌劑。
3.如權(quán)利要求2所述的防治黃瓜枯萎病的微生物復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在 于，所述第五步中的液體培養(yǎng)基由玉米粉2-20重量份、豆粕粉1-10重量份、磷酸二氫鉀 0.2-2重量份、磷酸一氫鈉0.4-0.8重量份、硫酸錳0.001-0.01重量份、硫酸鎂0.001-0.02 重量份、酵母膏0.05-0.2重量份和無(wú)菌水32.2-39.2重量份組成。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種防治黃瓜枯萎病的微生物復(fù)合菌劑及其制備方法。所述的防治黃瓜枯萎病的微生物復(fù)合菌劑，其特征在于，由沼澤紅假單胞菌10-15重量份，枯草芽孢桿菌30-40重量份，鏈霉菌15-18重量份，植物乳桿菌20-23重量份和釀酒酵母10-15重量份組成。所述的制備方法，其特征在于，具體步驟為篩選沼澤紅假單胞菌、枯草芽孢桿菌和鏈霉菌，分別轉(zhuǎn)接入裝有營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的茄子瓶中培養(yǎng)；將得到的菌種與植物乳桿菌和釀酒酵母混合；將混合菌苔接種于液體培養(yǎng)基中，在發(fā)酵罐中發(fā)酵得到微生物復(fù)合菌劑。本發(fā)明在抑制枯萎病原菌生殖繁衍，控制發(fā)病規(guī)模和程度的同時(shí)，實(shí)現(xiàn)對(duì)土壤生態(tài)環(huán)境的修復(fù)和改良，同時(shí)促進(jìn)黃瓜的生長(zhǎng)和產(chǎn)量的提高。
文檔編號(hào)A01N63/02GK102010825SQ20101027711
公開(kāi)日2011年4月13日 申請(qǐng)日期2011年1月20日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月20日
發(fā)明者江瀚 申請(qǐng)人:上海創(chuàng)博生態(tài)工程有限公司