專利名稱：一種夏蠟梅組培快繁方法
一種夏蠟梅組培快繁方法
方法領域
本發(fā)明涉及夏蠟梅雜種 Sinocalycanthus chinensis X Calycanthus floridus組培快繁方法，屬于生物技術領域。
背景技術：
夏蠟梅雜種 Sinocalycanthus chinensis X Calycanthus floridus為江蘇省中國科學所自主培育的園藝花丼新品種，親本夏 蠟梅和美國蠟梅，雜種保持母本花型，繼承父本花色，觀賞價值高于 親本，且耐強光暴曬，適應性好于親本，表現(xiàn)雜種優(yōu)勢，但同時它又 表現(xiàn)為雜種不育，組培快繁技術正好解決了這一難題。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一種夏蠟梅雜種組培快繁方法，為夏蠟梅 雜種的規(guī)模化育苗提供 一 條有效途徑。
本發(fā)明的夏蠟梅雜種組培快繁方法，是通過對夏蠟梅雜種的離體培 養(yǎng)，建立起夏蠟梅雜種的快繁體系，步驟包括材料選擇、清洗、初代 接種、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和煉苗移栽，具體做法釆集夏蠟梅雜種 半木質化新技為外植體，去除葉片，剪成3-5cm長度，消毒后切成 lcm大小帶節(jié)間的莖段，吸干表面水分放入啟動培養(yǎng)基培養(yǎng)，待長出 不定芽后切下，放入增殖培養(yǎng)基培養(yǎng)，苗高2cm時轉入生根培養(yǎng)基培 養(yǎng)，生根后煉苗移栽。其特征在于最佳啟動培養(yǎng)基為 WPM+2. Omg/LZT+0. 05mg/L IBA+2。/。蔗糖+0. 8%瓊脂;最佳增殖培養(yǎng)基為WPM+2. Omg/LZT+0, 05mg/L IBA+2。/。蔗糖+0. 8%瓊脂和MS大量元素+WPM 其它成分+2. Omg/LZT+0. 05mg/L IBA+2。/。蔗糖+0. 8%瓊脂；最佳生根培 養(yǎng)基為3/5MS大量元素+WPM其它成分+0. 2 mg/L IBA+P/。蔗糖+0. 8%瓊 脂+0. 05%活性炭；培養(yǎng)條件為培養(yǎng)基pH5. 8,溫度26土2。C、光照16h/ 天、光強1600 ~ 20001x。增殖培養(yǎng)過程中交替使用培養(yǎng)基 WPM+2. Omg/LZT+0. 05mg/L IBA+2。/。蔗糖+0. 8%瓊脂和MS大量元素+WPM 其它成分+2. Omg/LZT+0. 05mg/L IBA+2M蔗糖+0. 8%瓊脂，增殖效果佳；
初代接種的消毒方法用75%酒精浸泡1分鐘，再用0.1% HgC12滅菌 8min,無菌水清洗3次；
本發(fā)明的優(yōu)越性在于成活率達95%以上，為夏蠟梅雜種的規(guī)模 化育苗提供了一條有效途徑。
具體實施例方式
1.4-5月上午釆集夏蠟梅雜種新技，去除葉片，自來水清洗備用。
2. 將清洗干凈的外植體材料置于超凈工作臺上，剪成3-5cm,放在三
角瓶內，用用75%酒精浸泡1-2分鐘，再用0. l%HgC12滅菌8-10min， 無菌水清洗2-4次，切成lcm大小帶節(jié)間的莖段，無菌濾紙吸干表面 水分，放入啟動培養(yǎng)基WPM+2. Omg/LZT+0. 05mg/L IBA+2。/。蔗糖+0. 8% 瓊脂pH5.8上培養(yǎng)，溫度26±2°C、光照16h/天以及光強1600 ~ 20001x。
3. 待長出不定芽后，切下，放入增殖培養(yǎng)基MS大量元素+WPM其它 成分+2. Omg/LZT+0. 05mg/L IBA+2"/。蔗糖+0. 8%瓊脂pH5. 8增殖，溫度 26士2。C、光照16h/天以及光強160Q 20001x。
54. 將增殖培養(yǎng)基中2cm以上的有效苗轉入生根培養(yǎng)基培養(yǎng)3/5MS大 量元素+WPM其它成為VO. 2 mg/L IBA+W蔗糖+0. 8%瓊脂pH5. 8培養(yǎng)，溫 度26±2°C、光照16h/天以及光強1600 ~ 20001x。
5. 根長l-2cm并有2條以上側根時煉苗2-3天移栽。
實施例1
1.2007年4月25日上午釆集夏蠟梅雜種新枝，去除葉片，自來水清 洗備用。
2. 將清洗干凈的外植體材料置于超凈工作臺上，剪成3-5cm,放在三 角瓶內，用用75%酒精浸泡1分鐘，再用0. 1% HgC12滅菌8min，無 菌水清洗3次，切成1 c m大小帶節(jié)間的莖段，無菌濾紙吸干表面水分， 放入啟動培養(yǎng)基WPM+2. Omg/LZT+0. 05mg/L IBA+2。/。蔗糖+0. 8%瓊脂
pH5. 8上培養(yǎng)，溫度26士2。C、光照16h/天、光強1600 ~ 20001x。
3. 15d后長出不定芽，切下，放入增殖培養(yǎng)基MS大量元素+WPM其它 成分+2. Omg/LZT+0. 05mg/L IBA+2"/。蔗糖+0. 8%瓊脂pH5. 8增殖，溫度 26±2°C、光照16h/天、光強1600 ~ 20001x。
4. 25d后將增殖培養(yǎng)基中2cm以上的有效苗切下，放入生根培養(yǎng)基 培養(yǎng)3/5MS大量元素+WPM其它成tO. 2 mg/L IBA+l。/。蔗糖+0. 8%瓊脂 pH5. 8培養(yǎng)，溫度26士2。C、光照16h/天、光強1600 ~ 20001x。
5. 當無菌苗根長1-2cm并有2條以上側根時，打開瓶蓋煉苗煉苗2天
移栽，30d后檢查成活率，成活率90%。 實施例2
1.2008年5月8日上午釆集夏蠟梅雜種新枝，去除葉片，自來水清 洗備用。
2.將清洗干凈的外植體材料置于超凈工作臺上，剪成3-5cm,放在三 角瓶內，用75%酒精浸泡2分鐘，再用0. 1% HgC12滅菌10min,無菌水清洗3次，切成lcm大小帶節(jié)間的莖段，無菌濾紙吸干表面水分， 放入啟動培養(yǎng)基WPM+2. Omg/LZT+0. 05mg/L IBA+2。/。蔗糖+0. 8%瓊脂
pH5. 8上培養(yǎng)，溫度26士2。C、光照16h/天、光強1600 ~ 20001x。
3. 5月"日切下不定芽，轉入增殖培養(yǎng)基MS大量元素+WPM其它成分 +2. Omg/LZT+0. 05mg/L IBA+2。/。蔗糖+0. 8%瓊脂pH5. 8增殖，溫度26 ± 2"C、光照16h/天、光強1600 ~ 20001x。
4.6月25d將增殖培養(yǎng)基中2cm以上的有效苗轉入生根培養(yǎng)基培養(yǎng) 3/5MS大量元素+WPM其它成tO. 2 mg/L IBA+W蔗糖+0. 8%瓊脂pH5. 8培 養(yǎng)，溫度26土2。C、光照16h/天、光強1600 ~ 20001x。 5. 7月10日選根長l-2cm并有2條以上側根的無菌苗，打開瓶蓋煉 苗煉苗3天移栽，8月10日檢查成活率，成活率100%。
權利要求
1.一種夏蠟梅雜種組培快繁方法，其特征在于所述的夏蠟梅雜種以以下方法組培快繁4-5月采集夏蠟梅雜種半木質化新枝為外植體，去除葉片，剪成3-5cm長度，清洗消毒后切成1cm大小帶節(jié)間的莖段，吸干表面水分放入誘導培養(yǎng)基培養(yǎng)，待長出不定芽后切下，放入增殖培養(yǎng)基培養(yǎng)，在培養(yǎng)基pH，溫度、光照的條件下，苗高2cm時轉入生根培養(yǎng)基培養(yǎng)，最后煉苗移栽。
2. 根據(jù)權利1要求所述的夏蠟梅雜種組培快繁方法，其特征在于最佳 啟動培養(yǎng)基為WPM+2. Omg/LZT+0. 05mg/L IBA+2。/。蔗糖+0. 8%瓊脂。
3. 根據(jù)權利1要求所述的夏蠟梅雜種組培快繁方法，其特征在于最佳 增殖培養(yǎng)基為WPM+2. Omg/LZT+0. 05mg/L IBA+2。/。蔗糖+0. 8%瓊脂和MS 大量元素+WPM其它成分+2. Omg/LZT+0. 05mg/L IBA+2Y。蔗糖+0. 8%瓊 脂。
4. 根據(jù)權利1要求所述的夏蠟梅雜種組培快繁方法，其特征在于最佳 生根培養(yǎng)基為3/5MS大量元素+WPM其它成分+0. 2 mg/L IBA+"感糖 +0. 8%瓊脂+0. 05%活性炭*
5. 根據(jù)權利1要求所述的夏蠟梅雜種組培快繁方法，其特征在于培養(yǎng) 條件為培養(yǎng)基pH5. 8，溫度26士2。C、光照16h/天、光強16Q0 20001x,
6. 根據(jù)權利1要求所述的夏蠟梅雜種組培快繁方法，其特征在于增殖 培養(yǎng)過程中交替使用培養(yǎng)基WPM+2. Omg/LZT+0. 05mg/L IBA+2。/。蔗糖 +0. 8"/。瓊脂和MS大量元素+WPM其它成分+2. Omg/LZT+0. Q5mg/L IBA+2% 蔗糖+0. 8%瓊脂，增殖效果佳。
7. 根據(jù)權利1要求所述的夏蠟梅雜種組培快繁方法，其特征在于初代 接種的消毒方法用75%酒精浸泡1-2分鐘，再用0.1% HgC12滅菌 6-10min,無菌水清洗2-4次。
8. 根據(jù)權利1要求所述的夏蠟梅雜種組培快繁方法，其特征在于將在 增殖培養(yǎng)基上長至2cm高的無菌苗轉接于生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，生根率 高。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種夏蠟梅雜種組培快繁方法，通過對夏蠟梅雜種離體培養(yǎng)，建立起夏蠟梅雜種組培快繁體系，包括材料選擇、材料清洗、初代接種、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和煉苗移栽，成活率達95％。夏蠟梅雜種組培快繁方法的建立，解決了夏蠟梅雜種不育問題，適用于夏蠟梅雜種產業(yè)化育苗。
文檔編號A01H4/00GK101574057SQ20091002796
公開日2009年11月11日 申請日期2009年5月14日 優(yōu)先權日2009年5月14日
發(fā)明者何樹蘭, 倪萬潮, 姚青菊, 張保龍, 寧 盛 申請人:江蘇省中國科學院植物研究所