專利名稱：：含有黃酮及花翠素的月季及其生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及人為地含有黃酮(flavone)及花翠素(delphinidin)的月季(arose)。本發(fā)明涉及通過用基因操作含有黃酮及花翠素所產(chǎn)生的輔色作用(co-pigmentationeffect)來改變月季花色的方法，特別是使花色向藍色方向變化的方法。
背景技術(shù)：
：花是植物的生殖器官，是為了產(chǎn)生作為下一代的種子所必需的。為了形成種子，花粉必須附著在雌蕊上進行受精。通?；ǚ鄣陌徇\由蜜蜂、蝴蝶等昆蟲、蜂鳥、偶爾由蝙蝠來執(zhí)行?；ò甑淖饔檬且T這些傳播花粉的生物，植物也因此而設(shè)法改變花色、形狀、圖案。在鑒賞花時，花色是花卉的最重要的性狀，所以從古至今各種顏色的花都是通過雜交來育種。但是，很少有一個植物種的花具有所有的顏色，例如通過雜交培育的月季(rose(Rosahybrida))、康乃馨(carnation(Dianthuscaryophyllus))、菊花(chrysanthemum(Chrysanthemummorifolium))、百合(lily(Liliumspp.))等中沒有從紫到藍的品種，花菖蒲(Japanesegardeniris(Irisensatathumb.))、龍膽(gentian(Gentianatriflora))中沒有鮮紅色的品種。在花色中，從淡黃色到紅色、藍色大多來自類黃酮(flavonoid)及花色素苷(anthocyanin)(屬于類黃酮中的有色糖苷)。類黃酮是植物的代表性次級代謝產(chǎn)物，如以下所示，具有C6C3C6的基本骨架，由苯丙氨酸和丙二酰CoA合成。根據(jù)C環(huán)的氧化狀態(tài)，分為黃酮、黃酮醇(flavonol)等。Off0山奈黃素OH0楊梅黃素黃酮醇OH0木犀草素OK0五羥黃酮黃酮類黃酮或吸收紫外線，或除去自由基，所以認為其原本擔負保護植物體免受各種脅迫的功能。并且近年來作為有益健康的成份受到了關(guān)注(參照HarborneandWilliams2000Phytochemistry55，481-504)。已知有色的花色素苷中有數(shù)百種分子，但如下所示，作為其發(fā)色團的花色素(anthocyanidin)中通常有以下6種，即(1)從橙黃色到紅色的花中較多的花葵素(pelargonidin)、(2)從紅色到鮮紅色的花中較多的花青素(cyanidin)及甲基花青素(peonidin)、以及(3)從紫色到藍色的花中較多的花翠素(delphinidin)、甲花翠素(petunidin)及二甲花翠素(malvidin)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>花色素苷的結(jié)構(gòu)對其顏色影響很大?；ㄉ剀盏腂環(huán)的羥基數(shù)量增加時藍色增加。因此，花翠素型花色素苷比花葵素型花色素苷、花青素型花色素苷更藍。包含花色素苷的類黃酮的生物合成，已超越了植物的種類而得到很好地保留。類黃酮在細胞質(zhì)中進行生物合成，在附加糖、?；螅惠斔偷揭喊麅?nèi)積累起來(參照Tanakaetal.2005PlantCell,TissueandOrganCulture80，1-24、及TanakaandBrugliera2006Ainsworth編、Floweringanditsmanipulation、pp.201—239，BlackwellPublishingLtd.)。與生物合成相關(guān)的酶的結(jié)構(gòu)基因已被全部克隆。如果能夠培育出重組植物，通過人為地調(diào)整這些基因的表達，則可改變在花中積累的類黃酮的結(jié)構(gòu)和量，可改變花色(參照Tanakaetal.2005PlantCell,TissueandOrganCulture80，1_24、及TanakaandBrugliera2006Ainsworth編、Floweringanditsmanipulationpp.201-239,BlackwellPublishingUd.)。例如有以下實例，在花瓣中不能產(chǎn)生花翠素的康乃馨、月季中，為了合成花翠素，通過使必需的類黃酮3'，5'—羥化酶(以下略稱為"F3'5'H")基因表達來產(chǎn)生花翠素，從而培育出了自然界中沒有的藍色的花(參照Tanaka2006PhytochemistryReviews5，283-291)。有時將這樣人為地改變植物代謝的方法稱為代謝工程學。為了改變代謝，使目的產(chǎn)物積累，雖然可以使產(chǎn)生目的產(chǎn)物的酶基因在重組植物中表達，但由于經(jīng)常與植物自身攜帶的內(nèi)源性酶發(fā)生競爭，因此完全或幾乎不產(chǎn)生目的物質(zhì)的積累，大多還不具有產(chǎn)業(yè)上有用的性狀。例如矮牽牛(Petuniahybrida)，因為其二氫黃酮醇還原酶(以下略稱為"DFR"。)的特異性而不能積累花葵素，因此不存在天然的橙黃色的花色的品種。雖然己報道了通過導入月季等的DFR基因使花葵素積累的橙黃色的矮牽牛，但為了使花葵素積累，必須使用與DFR發(fā)生競爭的類黃酮3'-羥化酶(以下略稱"F3，H")、F3，5，H、黃酮醇合成酶(以下略稱"FLS")的基因缺損的矮牽牛品種，在這些基因未缺損的矮牽牛中即使導入月季的DFR基因，也看不出表達型的變化(參照TanakaandBrugliera2006Ainsworth編、Floweringanditsmanipulation、pp.201-239，BlackwellPublishingLtd.)。因此，僅僅通過導入目的基因，不能預(yù)測目的化合物是否積累，是否出現(xiàn)表達型。進而，在代謝工程學中也會經(jīng)常出現(xiàn)預(yù)料之外的結(jié)果。例如抑制黃酮合成酶基因在蝴蝶草(Toreniahybrida)中的表達時，結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃酮量減少，黃烷酮(flavanone)有積累。如果黃烷酮積累那么花色素苷的量應(yīng)該增加，但是實際上花色素苷的量也減少了(Ueyamaetal.PlantScience,163，253-263，2002)。這樣預(yù)測代謝物的增減很困難，為了獲得目的表達型還必須進行研究。花色素苷在結(jié)合的芳香族?；臄?shù)量增多時，因分子內(nèi)輔色作用而變藍。具有2個以上芳香族?；幕ㄉ剀毡环Q為聚酰基化花色素苷，呈現(xiàn)穩(wěn)定的藍色(參照HarborneandWilliams2000phytochemistry55，481-504)。除了根據(jù)作為必須色素的花色素苷色素本身的結(jié)構(gòu)外，還根據(jù)共存的類黃酮(也稱為輔色素)、金屬離子、液胞的pH等使花的顏色發(fā)生變化。例如黃酮、黃酮醇是代表性的輔色素，通過與花色素苷重疊成三明治的形狀，具有使花色素苷變藍，看起來更深的效果(參照Goto(1987)Prog.Chem.Org.Natl.Pr(xi.52)。在這一點上，可以說黃酮是無色的輔助色素成分。例如作為黃酮的一禾中的異牡荊黃素(isovitexirO，在花富蒲(Japanesegardeniris(IrisensataThunb.))中對花色素苷發(fā)揮輔色作用，使顏色變藍。此外還顯示，異牡荊黃素通過使花色素苷穩(wěn)定，從而使花菖蒲的花色穩(wěn)定(參照Yabuyaetal.Euphytica2000115，1-5)。此外，與黃酮醇相比，黃酮大多顯示強的輔色作用。例如在對基因重組康乃馨的分析中，與黃酮醇相比，黃酮顯示的輔色作用強(參照Fukuietal.Phytochemistry，63,15-23，2003)。因此黃酮的積累對于花色變藍很重要。但是，并不是所有的植物都可產(chǎn)生黃酮，已知月季、矮牽牛等不積累黃酮。并且還知道除了花色之外，黃酮還與紫外線的吸收、各種脅迫、與其他微生物的相互作用等有關(guān)，通過合成黃酮，可獲得具有新性狀的植物(作為與編碼黃酮合成酶的基因有關(guān)的專利文獻，參考日本特開2000-279182)。但是，尚不知在月季中使黃酮表達的例子。黃酮通過黃酮合成酶發(fā)生催化的反應(yīng)由黃垸酮來合成。也就是說，芹菜素(apigenin)由柚皮素(naringenin)合成、木犀草素(luteolin)由圣草酚(eriodictyol)合成、五羥黃酮(tricetin)由五羥基黃烷酮合成。黃酮合成酶中有黃酮合成酶I和黃酮合成酶n這2種。兩者都催化相同的反應(yīng)，但為不同類型的酶。黃酮合成酶I是2-酮戊二酸依賴性雙加氧酶(參照Britschetal.(1981)Z.Naturforsch36cpp.742-750、及Britsch(1990)Arch.Biochem.Biophys.282pp.152-160)中的1種，黃酮合成酶II是細胞色素P450型的單加氧酶。黃酮合成酶n的結(jié)構(gòu)基因從蝴蝶草、金魚草、紫蘇(Perillafrutescens)、非洲菊(gerbera(Gerberahybrida))、龍膽等中獲得(參照TanakaandBrugliera2006Ainsw8orth編、Floweringanditsmanipulation、pp.201-239，BlackwellPublishingLtd.)o預(yù)測如果使黃酮合成酶基因在不產(chǎn)生黃酮的基因重組植物中表達，即可合成黃酮。但是，也有報告指出使蝴蝶草的黃酮合成酶基因在矮牽牛中表達，結(jié)果深的藍紫色的花色變淺了(Tsudaetal.PlantBiotechnology,21，377-386，2004)。此外還有報告指出使來自龍膽的黃酮合成酶基因在煙草中表達，結(jié)果雖然合成了黃酮，但花色還是變淺了(Nakatsukaetal.2006，MolecularBreeding17:91-99)。這樣即使合成黃酮，花色也未必變藍。換言之，作為未顯示輔色作用的原因，可以例舉為花色素苷和黃酮的量、比例不適當，糖、?；鶎ㄉ剀蘸忘S酮的修飾不適當?shù)?。這些結(jié)果表明，僅僅使黃酮合成酶基因表達并使黃酮積累，并不能使花色變得更藍。月季是最受歡迎的花卉植物，有從公元前就開始栽培的記錄。而且經(jīng)歷數(shù)百年進行了人為的品種改良，其結(jié)果獲得了含有花葵素、花青素、黃酮醇等類黃酮的月季。此外，近年來采用基因重組的方法，還培育出了產(chǎn)生自然月季中所沒有的花翠素的月季。但是，積累黃酮的月季，不論是通過雜交還是通過基因重組，均未獲得。
發(fā)明內(nèi)容在植物的品種改良中使用基因重組的方法的最大優(yōu)點是，與通過雜交的品種改良不同，可利用不能雜交的植物、其他生物的基因來改良植物。也就是說，如使用基因重組的方法時，可將其它種的生物的任意基因?qū)肴我獾闹参锶缭录局校瑥亩x予該植物新的能力。但是，已知月季與擬南芥(Arabidopsisthaiiana)、煙草(tobacco(NicotianatabacumL.))等模型植物不同，導入的基因是否發(fā)揮功能，大大依賴于該基因的起源、使用的啟動子等。根據(jù)W02005/017147，將類黃酮3'，5'—羥化酶基因(F3'5'H)導入月季中時，在基因重組月季中來自矮牽牛、龍膽的相同基因不表達，也未檢測出花翠素，但是，有趣的是來自三色堇的相同基因進行表達，可賦予月季產(chǎn)生花翠素這樣的新能力。該結(jié)果表明，不能簡單類推在月季中導入來自何種植物的基因發(fā)揮功能。此外，即使在菊花中可以導入某種基因，但是也難于預(yù)測該基因在菊花中是否發(fā)揮功能，并且已知隨著重組菊花的增齡，導入的基因也會逐漸失去功能。還有報告指出，在重組植物中異種基因轉(zhuǎn)錄時經(jīng)常使用的花椰菜花葉病毒的35S啟動子，在龍膽中不發(fā)揮功能(參照Mishibaetal.PlantJournal2005，44:541-556)。為了在月季中合成黃酮，可簡單地類推為只要使黃酮合成酶基因進行表達即可，但是使雙加氧酶型或細胞色素P450型中的何種黃酮合成酶表達更好，使來自何種植物的黃酮合成酶基因表達更好，并不能簡單地類推，需要進行反復試驗。此外，輔色作用是在液胞中只要花色素苷和黃酮、黃酮醇以一定的濃度并存就可產(chǎn)生的現(xiàn)象，但也證明，對于作為發(fā)色源的花色素苷的糖苷化等的修飾狀態(tài)，需要對作為輔色素的黃酮、黃酮醇進行更加適當?shù)奶擒栈鹊男揎?參照Nature.2005Aug11;436(7052):791、及Nature，358，515-518(1992))?？傊瑸榱耸贡匦璧纳{(diào)表達，需要使花色素苷和黃酮'黃酮醇成為最適當?shù)慕Y(jié)構(gòu)上的組合，而且，使進行何種修飾的花色素苷和黃酮"黃酮醇并存更好，對于這一點也需要進行反復試驗。進而，即使黃酮合成酶在月季中發(fā)揮功能，因為在天然月季中柚皮素等黃烷酮被黃垸酮3-羥化酶(以下略稱"F3H")快速羥基化，由黃烷酮不只限于合成黃酮。因此，本發(fā)明要提供為了使月季中的目的色調(diào)表達而含有適當色素的月季為了解決上述課題，本發(fā)明者進行了各種研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過人為地使月季中含有黃酮及花翠素，實現(xiàn)了目的色調(diào)的表達，完成了本發(fā)明。具體來說，本發(fā)明如下所述1.月季(arose),其特征在于，通過基因重組方法而含有黃酮及花翠素。2.根據(jù)所述l所述的月季，其中，所述黃酮通過導入的黃酮合成酶基因的表達而生成。3.根據(jù)所述2所述的月季，其中，所述黃酮合成酶基因為來自玄參科的黃酮合成酶基因。4.根據(jù)所述3所述的月季，其中，所述來自玄參科的黃酮合成酶基因為來自玄參禾斗金魚草(Scrophulariaceae，Antirrhinummajus)的黃酮合成酶基因。5.根據(jù)所述3所述的月季，其中，所述來自玄參科的黃酮合成酶基因為來自玄參科蝴蝶草(Scrophulariaceae,Toreniahybrida)的黃酮合成酶基因。6.根據(jù)所述4所述的月季，其中，所述來自玄參科金魚草的黃酮合成酶基因為編碼(1)(4)中任一項的基因，(1)具有序列號2記載的氨基酸序列的黃酮合成酶，(2)具有在序列號2記載的氨基酸序列中通過1個多個氨基酸的附加、缺失及/或被其他氨基酸取代而被修飾的氨基酸序列的黃酮合成酶，(3)具有與序列號2記載的氨基酸序列有90%以上的序列同一性的氨基酸序列的黃酮合成酶，或(4)由與具有序列號1所示的堿基序列的核酸在高嚴謹條件下雜交的核酸所編碼的黃酮合成酶。7.根據(jù)所述4所述的月季，其中，所述來自玄參科蝴蝶草的黃酮合成酶基因為編碼(1)(4)中任一項的基因，(1)具有序列號4記載的氨基酸序列的黃酮合成酶，(2)具有在序列號4記載的氨基酸序列中通過1個多個氨基酸的附加、缺失及/或被其他氨基酸取代而被修飾的氨基酸序列的黃酮合成酶，(3)具有與序列號4記載的氨基酸序列有90%以上的序列同一性的氨基酸序列的黃酮合成酶，或(4)由與具有序列號3所示的堿基序列的核酸在高嚴謹條件下雜交的核酸所編碼的黃酮合成酶。8.根據(jù)所述17中任一項所述的月季，其中，所述花翠素通過導入的來自三色堇(Violaxwittrockiana)的類黃酮3，，5，-羥化酶基因的表達而生成。9.根據(jù)所述8所述的月季，其中，所述來自三色堇的類黃酮3，，5，-羥化酶基因為編碼(1)(4)中任一項的基因，(1)具有序列號8記載的氨基酸序列的類黃酮3'，5'-羥化酶，(2)具有在序列號8記載的氨基酸序列中通過1個多個氨基酸的附加、缺失及/或被其他氨基酸取代而被修飾的氨基酸序列的類黃酮3'，5'-羥化酶，(3)具有與序列號8記載的氨基酸序列有90%以上的序列同一性的氨基酸序列的類黃酮3'，5'-羥化酶，或(4)由與具有序列號7所示的堿基序列的核酸在高嚴謹條件下雜交的核酸所編碼的類黃酮3'，5'-羥化酶。10.根據(jù)所述29中任一項所述的月季，其中，與導入黃酮合成酶基因及類黃酮3'，5'-羥化酶基因前的宿主相比花色發(fā)生了變化。11.根據(jù)所述10所述的月季，其中，所述花色的變化為趨向藍色的變化。12.根據(jù)所述10或11所述的月季，其中，所述花色的變化為在L*a*b表色系統(tǒng)色度圖中的色相角度(e)向藍色方向軸270。接近的變化。13.根據(jù)所述10所述的月季，其中，所述花色的變化為花瓣的反射光譜的最小吸收波長值向長波長側(cè)移動的變化。14.月季的部分、后代、組織、營養(yǎng)增殖體或細胞，其與所述113中任一項所述的月季具有相同的性質(zhì)。15.方法，其為通過基因重組方法含有黃酮及花翠素而產(chǎn)生的輔色作用來改變花色的方法。16.根據(jù)所述15所述的方法，其中，所述輔色作用為使花色向藍色方向變化的作用。具體實施例方式用語定義在本說明書中使用時，用語"月季(arose)"是指作為薔薇目薔薇科薔薇屬(Order,Rosales，F(xiàn)amily,Rosaceae，GenusRosa)的落葉灌木的鑒賞用植物的總稱，并不限定于特定的品種，還指植物的整體或通常包括花的部分。在本說明書中使用時，用語"月季"的"部分、后代、組織、營養(yǎng)增殖體或細胞"，只要保持有本發(fā)明涉及的"月季"所期望的遺傳性狀，是指來自該"月季"的一切，并沒有特別限定。在本說明書中使用時，用語"高嚴謹條件"是指在例如包含6XSSC(1XSSC的組成:0.15MNaCl、0.015M擰檬酸鈉、pH7.0)、0.5%SDS、5XDenhardt、100ug/ml經(jīng)變性并斷裂成片段的鮭精子DNA和50Q/。甲酰胺的溶液中，將反義鏈和對象核酸在55'C時保溫一夜，進行在O.1XSSC等條件及/或60"C以上等的條件下的洗滌的條件，特別是指非特異性背景信號實質(zhì)上不存在的條件。在本說明書中使用時，用語""a補表色系統(tǒng)色度圖中的色相角度(9)"是指1976年國際照明委員會(CIE)規(guī)定的、在日本國也作為JIS8729而采用的色相色度(e)，0°為紅色方向，90°為黃色方向，180°為綠色方向，以及270°為藍色方向。此外，花色可并用相關(guān)的色相角度和RHS(英國皇家園藝協(xié)會)的色譜標準的數(shù)據(jù)來表示。黃酮合成基因及類黃酮3'，5'—羥化酶基因的導入利用公知的方法，將來自紫蘇的黃酮合成酶II的基因和來自三色堇的F3'5'H基因等同時導入月季中，其結(jié)果在導入來自紫蘇的黃酮合成酶II的基因的月季中未檢測出黃酮，表明該基因在月季中不發(fā)揮功能。另一方面，在導入了來自蝴蝶草或金魚草的黃酮合成酶n的基因的月季中，檢測出了黃酮，可知黃酮合成基因在月季中發(fā)揮功能。這樣就可以培育出以往不存在的積累了黃酮的月季。黃酮在總類黃酮中的含量(％)為1%以上、優(yōu)選5%以上、更優(yōu)選10%以上、并且最優(yōu)選30%以上即可。同時積累了花色素苷和黃酮的月季，與僅含有相同的花色素苷的月季相比，相對地顯示藍色，可知黃酮的積累對賦予藍色化這一新的性狀發(fā)揮了作用。此外，通過雜交試驗可知，同時積累花翠素型花色素苷和黃酮的性狀也傳遞給了后代。與本發(fā)明相關(guān)的酶，典型地為具有序列表中記載的特定氨基酸序列的酶。但是我們熟知，在酶中，不僅是特定的例如原有的氨基酸序列，即使在與酶活性相關(guān)的區(qū)域以外的區(qū)域的氨基酸序列被修飾，也可維持所期望的酶活性。因此，本發(fā)明的酶類包括具有在序列號所示的特定的氨基酸序列中通過1個多個氨基酸的附加、缺失及/或被其他氨基酸取代而被修飾的氨基酸序列，維持原來酶活性的蛋白質(zhì)；以及具有在與序列號所示的特定的氨基酸序列有90%以上的序列同一性的氨基酸序列，維持原來酶活性的蛋白質(zhì)。已知如果能夠獲得編碼某種酶的基因，在高嚴謹條件下與該基因雜交的核酸，編碼與該酶具有同樣活性的酶的可能性高。因此，由在高嚴謹條件下與具有特定序列號所示的堿基序列的核酸雜交的核酸編碼并且具有目的酶活性的酶，也包含在本發(fā)明的酶中。因此，作為與本發(fā)明相關(guān)的酶基因，可例舉下述基因。(A)來自金魚草(Antirrhinumma.jus)的黃酮合成酶基因其為編碼下述(1)(4)中任一項的基因，(1)具有序列號2記載的氨基酸序列的黃酮合成酶，(2)具有在序列號2記載的氨基酸序列中通過1個多個氨基酸的附加、缺失及/或被其他氨基酸取代而被修飾的氨基酸序列的黃酮合成酶，(3)具有與序列號2記載的氨基酸序列有90%以上的序列同一性的氨基酸序列的黃酮合成酶，或(4)由在高嚴謹條件下與具有序列號l所示的堿基序列的核酸雜交的核酸所編碼的黃酮合成酶。(B)來自蝴蝶草(Toreniahybrida)的黃酮合成酶基因其為編碼下述(1)(4)中任一項的基因，(1)具有序列號4記載的氨基酸序列的黃酮合成酶，(2)具有在序列號4記載的氨基酸序列中通過1個多個氨基酸的附加、缺失及/或被其他氨基酸取代而被修飾的氨基酸序列的黃酮合成酶，(3)具有與序列號4記載的氨基酸序列有90%以上的序列同一性的氨基酸序列的黃酮合成酶，或(4)由在高嚴謹條件下與具有序列號3所示的堿基序列的核酸雜交的核酸所編碼的黃酮合成酶。(C)來自紫蘇(Perillafrutescens)的黃酮合成酶基因其為編碼下述(1)(4)中任一項的基因，(1)具有序列號6記載的氨基酸序列的黃酮合成酶，(2)具有在序列號6記載的氨基酸序列中通過1個多個氨基酸的附加、缺失及/或被其他氨基酸取代而被修飾的氨基酸序列的黃酮合成酶，(3)具有與序列號6記載的氨基酸序列有90%以上的序列同一性的氨基酸序列的黃酮合成酶，或(4)由在高嚴謹條件下與具有序列號5所示的堿基序列的核酸雜交的核酸所編碼的黃酮合成酶。(D)來自三色堇(pansy(Violaxwittrockiana))的3，，5，一羥化酶基因其為編碼下述(1)(4)中任一項的基因，(1)具有序列號8記載的氨基酸序列的3'，5'—羥化酶，(2)具有在序列號8記載的氨基酸序列中通過1個多個氨基酸的附加、缺失及/或被其他氨基酸取代而被修飾的氨基酸序列的3'，5'—羥化酶，(3)具有與序列號8記載的氨基酸序列有90%以上的序列同一性的氨基酸序列的3'，5'—羥化酶，或(4)由在高嚴謹條件下與具有序列號7所示的堿基序列的核酸雜交的核酸所編碼的3'，5'—羥化酶。(E)來自蝴蝶草(Toreniahybrida)的甲基轉(zhuǎn)移酶基因其為編碼下述(1)(4)中任一項的基因，(1)具有序列號10記載的氨基酸序列的甲基轉(zhuǎn)移酶，(2)具有在序列號10記載的氨基酸序列中通過1個多個氨基酸的附加、缺失及/或被其他氨基酸取代而被修飾的氨基酸序列的甲基轉(zhuǎn)移酶。(3)具有與序列號10記載的氨基酸序列有90%以上的序列同一性的氨基酸序列的甲基轉(zhuǎn)移酶，或(4)由在高嚴謹條件下與具有序列號9所示的堿基序列的核酸雜交的核酸所編碼的甲基轉(zhuǎn)移酶。實施例根據(jù)以下實施例對本發(fā)明更加具體地說明。本實施例的目的僅僅是舉例說明本發(fā)明，并不限定本發(fā)明的范圍。實施例h黃酮對花色素苷的輔色作用的模擬為了進行黃酮對花色素苷的輔色作用的模擬，首先制備了花色素苷類?；?5青苷(Cyanin)是從月季品種"RoteRose"(rosecv."RoteRose")的花瓣中提取、純化而成?；ù渌囟咸擒?Delphin)是將從馬鞭草品種"TapienViolet，，(vberbenacv."TapienViolet"orvberbenavarietySunmaxefTP-V("TapienViolet，，)("T即ien，，isaTradeMarkregisteredinJapan))的花瓣中提取的色素進行堿水解后純化而成。二甲花翠苷(Malvin)、及木犀草素-7-0-葡萄糖苷(Luteolin7_0-glucoside)從日本funakoshi株式會社購入在這樣制備的各種花色素苷中，將黃酮(Luteolin7_0-glucoside)以在pH5.0的緩沖液中為0、1、2、4當量的摩爾濃度比添加，測定吸收光譜。作為花色素苷，使用花青苷(Cyanin)(矢車菊素-3，5-二葡萄糖苷(Cyanidin3，5-diglucoside))、花翠素二葡糖苷(Delphin)(花翠素3，5-二葡萄糖苷(Delphinidin3，5-diglucoside))、二甲花翠苷(Malvin)(二甲花翠素3，5-二葡萄糖苷(Malvidin3,5-diglucoside)?；ㄉ剀盏臐舛龋ㄇ嘬?Cyanin)、花翠素二葡糖苷(Delphin)及二甲花翠苷(Malvin)為lmM。如以下表1和2所示，通過添加黃酮，花色素苷水溶液的吸光度增大，其變化的比例(吸光度比)為二甲花翠苷(Malvin)為最大。且最大吸收波長(入max)也隨著黃酮的添加同時向長波長側(cè)移動。其變化的比例二甲花翠苷(Malvin)為最大，其次為花翠素二葡糖苷(Delphin)。而且，通過1^*3*13*表色系統(tǒng)進行色彩值的評價時，發(fā)現(xiàn)通過添加黃酮，觀察到色彩趨向藍色的變化，彩度也上升了。其效果二甲花翠苷(Malvin)最為顯著。即證明，木犀草素-7-0-葡萄糖苷(Luteolin7_0-glucoside)對二甲花翠苷(Malvin)的輔色作用最大。表l添加黃酮時花色素苷水溶液的最大吸收波長(入max;單位nm)<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>實施例2(參考例):向月季品種"Lavande"中導入來自三色繭的F3'5，H#4O基因和來自紫蘇的黃酮合成酶基因?qū)⒑腥毡咎亻_2000-279182中記載的來自紫蘇的黃酮合成酶基因的質(zhì)粒、pYFS3用Xbal酶切后，進行末端平滑化，進一步用BamHI酶切，得到約1.8kb的紫蘇黃酮合成酶基因片段。另一方面，將W02005/017147中記載的pSPB906用Xho1酶切后，進行末端平滑化，進一步用BamHI酶切。在該平滑末端和BamHI切割位點之間，插入上述紫蘇的黃酮合成酶基因片段，得到906-pYFS3。906-pYES3在El235S啟動子和D8終止子(均記載于W02005/017147中)之間具有來自紫蘇的黃酮合成酶基因。在Ueyama等的報告(Uey,etal.PlantScience,163,253-263,2002)中記載的pSPB176的BamHI和Sail位點，插入從W02005/017147記載的pCGP1961中用BamHI和Xhol的部分酶切而切出的三色堇F3'5'H#40基因的片段，將得到的質(zhì)粒作為pSPB575。在該Ascl位點，插入用Ascl酶切上述906-pYFS3得到的約3.4kb的紫蘇的黃酮合成酶基因表達盒。在所得到的質(zhì)粒中，F(xiàn)3'5'Htt40基因的表達盒與紫蘇的黃酮合成酶的表達盒以相同方向連接形成的載體為pSPB1310。本質(zhì)粒在植物中組成型表達三色堇的F3'5'H#40基因和紫蘇的黃酮合成酶基因。將這樣制備的pSPB1310導入紫藤色系月季品種"Lavande"(mauverosevariety"Lavande")中，得到55個轉(zhuǎn)化體。在進行色素分析的50個個體中，可確認49個個體中有花翠素的積累，花翠素含有率最高為70%(平均26%)。但是完全未檢測出黃酮，推測來自紫蘇的黃酮合成酶基因在月季細胞內(nèi)未發(fā)揮功能。代表性的轉(zhuǎn)化體的分析值如下表3所示。表3Del(%)^(mg/g)翻DelCyaPelMQKTriLutApiTotal艦0.00.0000.0780.0000.000O.必l0.078a0000.0000.0000.000170.30.1050.0450.0000.2530.1520.0170.0000.000aooo0.000267.10.0980.0480.0000.3790.2910.0260.0000.000aooo0.000350.70.0600.0580.0000.3260.2890.0130.0000.000aooo0.000460.60.0500.0330.0000.2160.1880.0070.0000.000aooo0.000566.10.0730.0370.0000.6080.3800.0450.0000.0000.0000.000667.70.0550.0260.0000.5360.3190.0390.000aooo0.0000.000756.90.0620.0470.0000.2530.2010.0090.0000.0000.0000.000852.50.1090.0990.0000.3070.4380.034aooo0.000aooo0.000950.40.0730.0720.0000.2810.3620.0130.000aooo0.0000.0001061.90.085O.股0.0000.2280.1920.008aoooaooo0.0000.000對照Lavande對照Del:花翠素、Cya:花青素、Pel:花葵素、M:楊梅黃素、Q:槲皮素、K:山奈黃素、Tri:五羥黃酮、Lut:木犀草素、Api:芹菜素Del(%):總花色素中的花翠素的比例實施例3:向月季品種"Lavande"中導入來自三色堇的F3'5'Hft40基因和來自蝴蝶草的黃酮合成酶基因?qū)kashi等的報告(PlantCellPhysiol40，1182-1186，1999)中記載的來自蝴蝶草的黃酮合成酶基因插入質(zhì)粒pBluescriptIISK(-)的EcoRI和Xho18I位點，將得到的質(zhì)粒作為pSPB426。用KpnI將其酶切后，進行末端平滑化，進一步用BamHI酶切，得到約l.7kb來自蝴蝶草的黃酮合成酶基因片段。另一方面，將W02005/017147中記載的pSPB906用XhoI酶切后，進行末端平滑化，進一步用BamHI酶切。在該平滑末端和BamHI切割位點之間，插入上述蝴蝶草的黃酮合成酶基因片段，得到906-426。在Ueyama等的報告(Ueyamaetal.PlantScience,163，253-263，2002)中記載的pSPB176的BamHI和SalI位點，插入從W02005/017147記載的pCGP1961中用BamHI和XhoI的部分酶切而切出的三色堇-F3，5，Htt40基因的片段，將得到的質(zhì)粒作為pSPB575。在該AscI位點，插入用AscI酶切上述906-426得到的約3.3kb蝴蝶草的黃酮合成酶基因表達盒。在得到的質(zhì)粒中，F(xiàn)3'5，朋40基因的表達盒和蝴蝶草的黃酮合成酶的表達盒以相同方向連接形成的載體為pSPB1309。本質(zhì)粒在植物中組成型表達三色堇F3'5'H糾O基因和蝴蝶草的黃酮合成酶基因?qū)⑦@樣制備的pSPB1309導入紫藤色系月季品種"Lavande"中，得到50個轉(zhuǎn)化體。在進行色素分析的38個個體中，可確認36個個體中有花翠素的積累，花翠素含有率最高為45%(平均12%)。另一方面，由于來自蝴蝶草的黃酮合成酶基因的作用，可確認在35個個體中也有新的黃酮(木犀草素、芹菜素)的積累。黃酮總量最高在每lg新鮮花瓣重量中為l.68mg的高含量。<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>接著，將日本特開2000-279182中記載的來自金魚草黃酮合成酶的基因ANFNS2用BamHI和XhoI從載體pBluescriptII中切出，將其與用BamHI和XhoI酶切WO2005/017147中記載的pSPB906而得到的啟動子和終止子連接。將其作為pSPB577。將用AscI切割pSPB577得到的金魚草的黃酮合成酶表達盒片段插入實施例2中記載的pSPB577的AscI位點，將其作為pSPB908。將這樣得到的pSPB908用AscI進行部分酶切，在此插入用AscI酶切pSPB1402得到的約3.5kb來自月季黃酮醇合成酶cDNA的雙鏈RNA表達盒。得到的質(zhì)粒pSPB1403是三色堇F3'5'H#40、金魚草FNS基因、月季FLS基因的雙鏈RNA表達盒以相同方向連接的雙元載體。將本質(zhì)粒設(shè)計成為在植物中組成型表達F3'5'Hft40基因和金魚草黃酮合成酶基因，進一步通過RNAi法抑制內(nèi)源性的黃酮醇合成酶基因的表達。向紫藤色系月季品種"Lavande"中導入pSPB1403，得到82個轉(zhuǎn)化體。進行色素分析的82個個體中，可確認在64個個體中有花翠素的積累，花翠素含有率最高為72%(平均1990。另一方面，由于來自金魚草黃酮合成酶基因的作用，可確認在70個個體中還有新的黃酮的積累(五羥黃酮、木犀草素、芹菜素)。黃酮總量最高在每lg新鮮花瓣重量中為2.50mg的高含量。代表性的轉(zhuǎn)化體的分析值如下表6所示。表6<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>對照Lavande對照Dei、:、花翠素、Cy::花青素、Pel:花葵素、M:楊梅黃素、Q:槲皮素、K:山奈黃素、Tri:五羥黃酮、Lut:木犀草素、Api:芹菜素Del(%):總花色素中的花翠素的比例實施例6:在月季品種"WKS124"中來自三色堇的F3'5'H#40基因和來自金魚草的黃酮合成酶基因的表達和月季內(nèi)源性黃酮醇合成酶基因的抑制將實施例5中記載的pSPB1403導入橙紅色系月季品種"WKS124"中，得到20個轉(zhuǎn)化體?？纱_認進行色素分析的20個個體中全部有花翠素的積累，花翠素含有率最高為89%(平均55%)。另一方面，由于來自金魚草黃酮合成酶基因的作用，可確認在20個個體中全部有新的黃酮(木犀草素、芹菜素)的積累。黃酮總量最高在每lg新鮮花瓣重量中為l.26mg的高含量。代表性的轉(zhuǎn)化體的分析值如下表7所示。<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>對照WKS124對照Del:花翠素、Cya:花青素、Pel:花葵素、M:楊梅黃素、Q:槲皮素、K:山奈黃素、Tri:五羥黃酮、Lut:木犀草素、Api:芹菜素Del(%):總花色素中的花翠素的比例實施例7:向月季品種"WKS124"中導入來自三色堇的F3'5'H井40基因和來自蝴蝶草的黃酮合成酶基因以及來自蝴蝶草的花色素苷甲基轉(zhuǎn)移酶基因?qū)嵤├?中記載的pSPB1309進行PacI處理，通過切割存在于來自蝴蝶草的黃酮合成酶表達盒和來自三色堇的F3'5'Htt40基因表達盒的連接位點附近(更加嚴密地說，存在于黃酮合成酶表達盒的D8終止子3'末端附近)的PacI位點和載體的多克隆位點內(nèi)的PacI位點，切出三色堇F3'5'H糾O基因表達盒。另一方面，將具有W02003-062428中記載的蝴蝶草的甲基轉(zhuǎn)移酶基因表達盒的雙元載體pSPB1530用PacI切割，在其中將上述三色堇F3'5'H糾0表達盒、甲基轉(zhuǎn)移酶基因表達盒以相同方向插入。將本質(zhì)粒作為TMT-BP40。另一方面，將pSPB1309用AscI切割，切出蝴蝶草的黃酮合成酶表達盒。將其在TMT-BP40的AscI位點與上述表達盒以相同方向插入，將得到的質(zhì)粒作為pSFL535。本質(zhì)粒在植物中組成型表達三色堇F3'5'Htt40基因和蝴蝶草的甲基轉(zhuǎn)移酶基因、以及蝴蝶草的黃酮合成酶基因。將這樣得到的pSFL535導入橙紅色系月季品種"WKS124"中，得到173個轉(zhuǎn)化體。在進行花色素分析的98個轉(zhuǎn)化體中，可確認88個個體中有二甲花翠素(花翠素的3'位和5'位被甲基化的花色素)的積累。根據(jù)生成物表明，在月季的花瓣中來自三色堇的F3'5'H#40基因和來自蝴蝶草的花色素苷甲基轉(zhuǎn)移酶基因發(fā)揮功能。此外，二甲花翠素含有率最高為84%(平均50%)。另一方面，由于來自蝴蝶草的黃酮合成酶基因的作用，可確認77個個體中有新的黃酮(五羥黃酮、木犀草素、芹菜素)的積累。黃酮總量最高在每lg新鮮花瓣重量中為4.58mg的高含量。此外，在51個個體中檢測出了甲基化五羥黃酮。代表性的轉(zhuǎn)化體的分析值如下表8所示。24<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>實施例8:向月季品種"Lavande"中導入來自三色堇的F3'5'Htt40基因和來自蝴蝶草的黃酮合成酶基因以及來自蝴蝶草的花色素苷甲基轉(zhuǎn)移酶基因?qū)嵤├?中記載的pSFL535導入紫藤色系月季品種"Lavande"中，得到13O個轉(zhuǎn)化體。在進行花色素分析的118個轉(zhuǎn)化體中，可確認37個個體中有二甲花翠素(在花翠素的3'位和5'位被甲基化的花色素)的積累，根據(jù)生成物表明，在月季的花瓣中來自三色堇的F3，5，H弁40基因和來自蝴蝶草的花色素苷甲基轉(zhuǎn)移酶基因發(fā)揮了功能。此外，二甲花翠素含有率最高為55.6%(平均20.5%)。另一方面，由于來自蝴蝶草的黃酮合成酶基因的作用，可確認在78個個體中有新的黃酮(五羥黃酮、木犀草素、芹菜素)的積累。黃酮總量最高在每lg新鮮花瓣重量中為5.llmg的高含量。此外，在產(chǎn)生黃酮的轉(zhuǎn)化體中，在20個個體中檢測出了被甲基化的五羥黃酮或木犀草素。代表性的轉(zhuǎn)化體的分析值如下表9所示。<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>實施例9:向月季品種"WKS82"中導入來自三色堇的F3'5，H#40基因和來自蝴蝶草的黃酮合成酶基因以及來自蝴蝶草的花色素苷甲基轉(zhuǎn)移酶基因?qū)嵤├?中記載的pSFL535導入紫藤色系月季品種"WKS82"(mauverosevariety"WKS82")中，得到250個轉(zhuǎn)化體。在進行花色素分析的232個轉(zhuǎn)化體中，可確認110個個體中有二甲花翠素(花翠素的3'位和5'位被甲基化的花色素)的積累，根據(jù)生成物表明，在月季的花瓣中來自三色堇的F3'5'H#40基因和來自蝴蝶草的花色素苷甲基轉(zhuǎn)移酶基因發(fā)揮了功能。此外，二甲花翠素含有率最高為65.2%(平均19.7%)。另一方面，由于來自蝴蝶草的黃酮合成酶基因的作用，可確認125個個體中有新的黃酮(五羥黃酮、木犀草素、芹菜素)的積累。黃酮總量最高在每lg新鮮花瓣重量中為4.71mg的高含量。此外，在產(chǎn)生了黃酮的轉(zhuǎn)化體中，在80個個體中檢出了被甲基化的五羥黃酮或木犀草素。代表性的轉(zhuǎn)化體的分析值如下表10所示。<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>實施例10:向月季品種"WKS140"中導入來自三色堇的F3'5'H弁40基因和來自蝴蝶草的黃酮合成酶基因以及來自蝴蝶草的花色素苷甲基轉(zhuǎn)移酶基因?qū)嵤├?中記載的pSFL535導入紫藤色系月季品種"WKS140"(mauverosevariety"WKS140")中，得到74個轉(zhuǎn)化體。在進行花色素分析的74個轉(zhuǎn)化體中，可確認20個個體中有二甲花翠素(花翠素的3'位和5'位被甲基化的花色素)的積累，根據(jù)生成物表明，在月季的花瓣中來自三色堇的F3'5'H#40基因和來自蝴蝶草的花色素苷甲基轉(zhuǎn)移酶基因發(fā)揮了功能。此外，二甲花翠素含有率最高為51.3%(平均33.5%)。另一方面，由于來自蝴蝶草的黃酮合成酶基因的作用，可確認在29個個體中有新的黃酮(五羥黃酮、木犀草素、芹菜素)的積累。黃酮總量最高在每lg新鮮花瓣重量中為3.04mg的高含量。此外，在產(chǎn)生黃酮的轉(zhuǎn)化體中，在20個個體中檢測出了被甲基化的五羥黃酮或木犀草素。代表性的轉(zhuǎn)化體的分析值如下表11所示。表11<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>對照WKS140對照Del:花翠素、Cya:花青素、Pet:甲花翠素、Pel:花葵素Peo:甲基花青素、Mai:二甲花翠素、M:楊梅黃素、Q:槲皮素K:山奈黃素、Tri:五羥黃酮、Lut:木犀草素、Api:芹菜素Del(%):總花色素中的花翠素類色素(花翠素、甲花翠素、二甲花翠素)的比例Mal(%):總花色素中的二甲花翠素的比例實施例ll:黃酮及二甲花翠素合成能力向后代的傳遞一導入來自三色堇的F3'5'H#40基因和來自蝴蝶草的黃酮合成酶基因和來自蝴蝶草的花色素苷甲基轉(zhuǎn)移酶基因的基因重組月季與栽培月季之間的雜交為了考察賦予月季的黃酮合成能力向后代遺傳的模式，使用實施例7培育的產(chǎn)生二甲花翠素及黃酮的月季(表8中、植物No.6)作為花粉親本進行雜交。種子親本使用中輪系栽培月季"Medeo"(floribundarosevariety"Medeo")對獲得的轉(zhuǎn)化體F1雜種后代中的10個個體進行色素分析，結(jié)果確認在7個個體中有二甲花翠素的積累，根據(jù)生成物表明，在月季的花瓣中來自三色堇的F3'5'H#40基因和來自蝴蝶草的花色素苷甲基轉(zhuǎn)移酶基因發(fā)揮了功能。此外，二甲花翠素含有率最高為68.2%(平均46.6%)。另一方面，由于來自蝴蝶草的黃酮合成酶基因的作用，可確認在8個轉(zhuǎn)化體后代中也有黃酮(五羥黃酮、木犀草素、芹菜素)的積累。黃酮總量最高在每lg新鮮的花瓣重量中為7.35mg的極高含量。此外，在產(chǎn)生黃酮的轉(zhuǎn)化體后代中，在6個個體中檢出了被甲基化的五羥黃酮。代表性的轉(zhuǎn)化體的分析值如下表12所示。<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>實施例12:黃酮合成能力向后代的傳遞導入來自三色堇的F3'5'H#40基因及來自蝴蝶草的花色素苷甲基轉(zhuǎn)移酶基因的月季品種"WKS124"與導入來自三色堇的F3'5'H#40基因和來自蝴蝶草的黃酮合成酶基因的月季品種"Lavande"的雜交為了考察賦予月季的黃酮合成能力向后代遺傳的模式，使用實施例3培育的黃酮生產(chǎn)株(表4中、植物No.4)作為花粉親本進行雜交。種子親本使用在月季品種WKS124中導入pSPB1532的在來自三色堇的F3，5'Htt40基因及來自蝴蝶草的花色素苷甲基轉(zhuǎn)移酶基因的作用下，花瓣中大量積累了二甲花翠素的轉(zhuǎn)化體WKS124/1532-12-1(記載于W02003/062428中)。對得到的轉(zhuǎn)化體后代中的149個體進行色素分析，結(jié)果可確認在88個個體中有黃酮(五羥黃酮、木犀草素、芹菜素)的積累。黃酮總量最高在每lg新鮮花瓣重量中為4.09mg的高含量。此外，在42個個體中檢測出了被甲基化的五羥黃酮，在ll個個體中檢測出了被甲基化的木犀草素(Chrysoeriol(3'Met-Lut))。此外，在進行色素分析的149個個體中，可確認在129個個體中有二甲花翠素的積累。二甲花翠素含有率最高為79%(平均36%)。代表性的轉(zhuǎn)化體的分析值如下表13所示。34<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>實施例13:對含有黃酮的月季花色的評價對于實施例4及7中培育出的轉(zhuǎn)化體(以月季品種"WKS124"為宿主)，分成下述3組，(1)積累的主要色素為花翠素，不含黃酮；(2)積累的主要色素為花翠素，含有黃酮；及(3)宿主(積累的主要色素為花葵素。對于各個花瓣的色彩使用分光測色計進行評價(n=10)。在主要色素為花翠素型的月季、二甲花翠素型的月季的任一種中，在黃酮共存時花瓣的色相角度向藍色方向移動。此外，在主要色素為二甲花翠素型的月季中，這種趨勢更加顯著，反射光譜的最小吸收波長(AMin)也向長波長側(cè)大幅移動。由上述結(jié)果可以確認，黃酮共存使花瓣的色彩變藍。結(jié)果如下表14所示。表14<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>色相角度(hue):在"&*1)*表色系統(tǒng)中，將&*(紅色方向)的軸作為0°,由此向逆時針方向的色相所移動的角度，設(shè)計為便于明白顏色位置的方式。90°為黃色方向，180°為綠色方向，270°為藍色方向，0°(=360°)為紅色方向。即數(shù)值越接近270°時色相越藍。根據(jù)本發(fā)明，在作為鑒賞植物深受人們喜愛的月季中，通過基因重組方法使其含有黃酮及花翠素，可利用輔色作用使月季的花色向藍色方向變化。推測具有藍色花色的月季作為鑒賞植物有商品需求。在此，將本說明書中所引用的所有專利文獻、非專利文獻，個別或整體地引用于本說明書中。以上對本發(fā)明進行了說明，但本發(fā)明在不脫離本質(zhì)的情況下可進行修改、變更，本發(fā)明的范圍，并不是根據(jù)實施例的記載、而是根據(jù)權(quán)利要求書來界定的。權(quán)利要求1.月季，其特征在于，通過基因重組方法而含有黃酮及花翠素。2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的月季，其中，所述黃酮通過導入的黃酮合成酶基因的表達而生成。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的月季，其中，所述黃酮合成酶基因為來自玄參科的黃酮合成酶基因。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的月季，其中，所述來自玄參科的黃酮合成酶基因為來自玄參科金魚草的黃酮合成酶基因。5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的月季，其中，所述來自玄參科的黃酮合成酶基因為來自玄參科蝴蝶草的黃酮合成酶基因。6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的月季，其中，所述來自玄參科金魚草的黃酮合成酶基因為編碼(1)(4)中任一項的基因，(1)具有序列號2記載的氨基酸序列的黃酮合成酶，(2)具有在序列號2記載的氨基酸序列中通過1個多個氨基酸的附加、缺失及/或被其他氨基酸取代而被修飾的氨基酸序列的黃酮合成酶，(3)具有與序列號2記載的氨基酸序列有90%以上的序列同一性的氨基酸序列的黃酮合成酶，或(4)由與具有序列號1所示的堿基序列的核酸在高嚴謹條件下雜交的核酸所編碼的黃酮合成酶。7.根據(jù)權(quán)利5所述的月季，其中，所述來自玄參科蝴蝶草的黃酮合成酶基因為編碼(1)(4)中任一項的基因，(1)具有序列號4記載的氨基酸序列的黃酮合成酶，(2)具有在序列號4記載的氨基酸序列中通過1個多個氨基酸的附加、缺失及/或被其他氨基酸取代而被修飾的氨基酸序列的黃酮合成酶，(3)具有與序列號4記載的氨基酸序列有90%以上的序列同一性的氨基酸序列的黃酮合成酶，或(4)由與具有序列號3所示的堿基序列的核酸在高嚴謹條件下雜交的核酸所編碼的黃酮合成酶。8.根據(jù)權(quán)利要求17中任一項所述的月季，其中，所述花翠素通過導入的來自三色堇的類黃酮3'，5，-羥化酶基因的表達而生成。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的月季，其中，所述來自三色堇的類黃酮3，，5，-羥化酶基因為編碼(1)(4)中任一項的基因，(1)具有序列號8記載的氨基酸序列的類黃酮3'，5'-羥化酶，(2)具有在序列號8記載的氨基酸序列中通過1個多個氨基酸的附加、缺失及/或被其他氨基酸取代而被修飾的氨基酸序列的類黃酮3'，5'-羥化酶，(3)具有與序列號8記載的氨基酸序列有90%以上的序列同一性的氨基酸序列的類黃酮3'，5'-羥化酶，或(4)由與具有序列號7所示的堿基序列的核酸在高嚴謹條件下雜交的核酸所編碼的類黃酮3'，5'-羥化酶。10.根據(jù)權(quán)利要求29中任一項所述的月季，其中，與導入黃酮合成酶基因及類黃酮3'，5'-羥化酶基因前的宿主相比花色發(fā)生了變化。11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的月季，其中，所述花色的變化為趨向藍色的變化。12.根據(jù)權(quán)利要求10或11所述的月季，其中，所述花色的變化為在L*a*b表色系統(tǒng)色度圖中的色相角度向藍色方向軸270°接近的變化。13.根據(jù)權(quán)利要求10所述的月季，其中，所述花色的變化為花瓣的反射光譜的最小吸收波長值向長波長側(cè)移動的變化。14.月季的部分、后代、組織、營養(yǎng)增殖體或細胞，其特征在于，其與權(quán)利要求113中任一項所述的月季具有相同的性質(zhì)。15.方法，其特征在于，其為通過基因重組方法含有黃酮及花翠素而產(chǎn)生的輔色作用來改變花色的方法。16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中，所述輔色作用為使花色向藍色方向變化的作用。全文摘要本發(fā)明提供以通過基因重組的方法而含有黃酮及花翠素為特征的月季。具體為，該黃酮及花翠素，典型的是分別通過導入的黃酮合成酶基因及類黃酮3’，5’-羥化酶基因的表達而生成。上述黃酮合成酶基因例如為來自玄參科的黃酮合成酶基因，具體為來自玄參科金魚草的黃酮合成酶基因、以及來自玄參科蝴蝶草的黃酮合成酶基因。此外，類黃酮3’，5’-羥化酶基因例如為來自三色堇(Violaxwittrockiana)的類黃酮3’，5’-羥化酶基因。文檔編號A01H5/00GK101688198SQ20088002060公開日2010年3月31日申請日期2008年6月19日優(yōu)先權(quán)日2007年6月20日發(fā)明者中村典子,戶上純一,水谷正子,田中良和,福井祐子,勝元幸久申請人:國際花卉開發(fā)有限公司