專利名稱：用單一培養(yǎng)基生產(chǎn)羅漢果組培苗的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬用單一培養(yǎng)基生產(chǎn)羅漢果組培苗的方法。技術(shù)背景羅漢果S/ra/"flgmvve"w7'(Swingle) C.Jeffrey,又叫漢果、拉汗果、長壽果、神仙果、羅 晃子、假苦瓜、光果木鱉等，為葫蘆科Cucurbitaceae羅漢果屬SiraitiaMerr多年生草質(zhì)藤本， 雌雄異株植物，我國原產(chǎn)，也是我國、更是廣西最重要的傳統(tǒng)特產(chǎn)中藥材之一，在醫(yī)療與保 健方面有很高的應用價值和廣泛的開發(fā)前景。在廣西桂北地區(qū)多把羅漢果作為支柱產(chǎn)業(yè)發(fā) 展。廣東、江西、湖南、貴州等省的部分市縣也在積極發(fā)展羅漢果種植。由于組培苗可以在 平地種植，打破了千百年來羅漢果只能在一定海拔的山坡種植的傳統(tǒng)，而且在種植過程中能 有效控制病害、尤其是病毒的傳播，可實現(xiàn)當年栽種當年結(jié)果，適宜規(guī)模化種植，近年來在 羅漢果種源供應市場中已經(jīng)占據(jù)絕對的主導地位。但是，從上世紀末羅漢果組培苗商品化以 來，羅漢果組培苗的生產(chǎn)單位幾乎無一例外地都選用細胞分裂素中的6-BA (N6-BA, N^芐 基腺嘌呤)作為主導生長調(diào)節(jié)劑。然而6-BA卻不能單獨使用，還必須再添加IAA (吲哚乙 酸)、NAA (萘乙酸)或IBA (吲哚丁酸)等生長素類調(diào)節(jié)劑，分別復配成"腋芽外植體啟 動"、"增殖擴繁"和"增殖苗生根"等三種成分各不相同的培養(yǎng)基才能完成全部組培苗生產(chǎn) 程序。更麻煩的是，6-BA在羅漢果組培中的生物學效應與其在其他植物組培中有顯著不同， 只要是在有效使用濃度內(nèi)，就會難以避免地誘導大量愈傷組織的發(fā)生，并且出現(xiàn)在組培苗生 產(chǎn)的全過程。從遺傳學考慮，大量愈傷組織的發(fā)生會影晌組培苗的遺傳穩(wěn)定性，最終導致各 種劣質(zhì)變異和大田栽培中不良事件(如抗性低下、不能正常開花結(jié)果等)的發(fā)生，給組培苗 的生產(chǎn)者和種植者都帶來極大的潛在風險和損失。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種用單一培養(yǎng)基完成羅漢果組培苗生產(chǎn)的方法。 本發(fā)明以如下技術(shù)方案解決上述技術(shù)問題將狹霉素0.1 0.5mg 1/'加入到常規(guī)MS固體培養(yǎng)基中進行羅漢果組培苗生產(chǎn)。 由于單用狹霉素配制成的培養(yǎng)基可以同時用于"腋芽外植體啟動"、"增殖擴繁"及"增 殖苗生根"各技術(shù)環(huán)節(jié)，從而使得羅漢果組培苗的生產(chǎn)操作程序大為簡化。特別是狹霉素能有效控制羅漢果組織培養(yǎng)過程中愈傷組織的發(fā)生，有利于遺傳穩(wěn)定性，從而提髙組培苗的質(zhì)量。
具體實施方式
申請人經(jīng)多年反復研究，利用狹霉素同時具有植物細胞分裂素和生長素兩類生長調(diào)節(jié)劑 生物活性的特性，發(fā)現(xiàn)將狹霉素0.1 0.5mg'L—'添加到MS (Murashige-Skoog)固體培養(yǎng)基 中,無需再添加任何其他激素或調(diào)節(jié)劑，就能促進羅漢果腋芽外植體正常萌發(fā)生長，并誘導 不定根發(fā)生，同時顯著抑制和推遲愈傷組織的形成。因此，用MS+狹霉素0.1 0.5mg'L1 這種單一的培養(yǎng)基就能替代常規(guī)用的三種培養(yǎng)基才能完成的羅漢果組培苗生產(chǎn)全過程。既可簡化生產(chǎn)程序，又能提高組培苗質(zhì)量。以下是分別用單一培養(yǎng)基和常規(guī)的三種培養(yǎng)基進行羅漢果組培苗生產(chǎn)的方法和結(jié)果比較1. 在"腋芽外植體啟動"期除了培養(yǎng)基成分不同外，用單一培養(yǎng)基和常規(guī)的三種培養(yǎng)基進行羅漢果組培苗生產(chǎn)的培 養(yǎng)條件都相同，具體為從防蟲網(wǎng)內(nèi)的無病毒健康植株的2級或3級側(cè)蔓上采取帶腋芽的單節(jié)莖段作外植體，按 照植物組織培養(yǎng)的常規(guī)操作程序，分兩組分別作兩種不同培養(yǎng)基的實驗。每組30瓶，每瓶l個外植體。兩組培養(yǎng)基均含蔗糖3 %，瓊脂粉4.5g'L—'，調(diào)pH5.8 6.2。培養(yǎng)溫度晝 /夜28 /22 (±2) 。C，光照15001x, 11h/d。結(jié)果是-(1) 培養(yǎng)基是MS +狹霉素0.1 0. 5 mg *L—1的一組，培養(yǎng)20 25d，成苗率達80 100%，莖葉形態(tài)正常，株高達3 4cm,且很少發(fā)生愈傷組織。培養(yǎng)至15 25d，就陸續(xù)有 不定根發(fā)生，建成完整植株。(2) 培養(yǎng)基是MS + 6-BA0.1 0. 5 mg L—1的一組，培養(yǎng)20 25d,， 成苗率僅20 30% ，而且葉片奇小，不能正常建成，需再添加適量IAA等生長素，才能使葉片正常建成， 同時有大量愈傷組織發(fā)生，卻很難有不定根發(fā)生。2. 在"增殖擴繁"期將上述獲得的正常無菌苗在凈化工作臺上切去兩端，取+2 +4節(jié)，分切成單節(jié)帶芽莖 段，同時切除葉片，保留部分葉柄保護腋芽。繼續(xù)分別微扦插于上述兩組培養(yǎng)基進行增殖擴 繁培養(yǎng)。每組20瓶，每瓶5 6個莖段。培養(yǎng)條件相同。結(jié)果是(1) 培養(yǎng)基是MS +狹霉素0. 1 0. 5 mg L—1的一組，培養(yǎng)15d發(fā)根率可達50 %， 25d達80 100 %。平均每株有根3,5條，平均根長4.3on。莖葉生長正常，株高達4 cm左 右，建成根莖葉齊全的再生植株。這種再生植株可以直接出瓶移栽到營養(yǎng)杯進行育苗，亦可 繼續(xù)重復增殖。解剖證明，這種再生植株的不定根發(fā)生自髓部分生組織，洗苗時不易脫落， 移栽成活率高。(2) 培養(yǎng)基是MS + 6-BA0. 1 0.5mg，L—'的一組，必須另加適量的生長素才能增殖 擴繁。而愈傷組織則迅速增殖，威脅苗的質(zhì)量。最終也只能得到無根苗。3.在"增殖苗生根"期如上所述，由培養(yǎng)基是MS +狹霉素0.1 0.5mg'L—1的一組培養(yǎng)基得到的再生植株 已經(jīng)生根，無需再專門進入生根程序，只要苗增殖到足夠的數(shù)量，就可直接出瓶移栽。而由 培養(yǎng)基是MS + 6-BA0. 1 0.5mg'L—'的一組得到的增殖苗是無根苗，必須轉(zhuǎn)入另外專門配制的生根培養(yǎng)基，才能得到根莖葉齊全的再生植株，然后進行移栽育苗。但是，解剖證明， 這種再生植株的不定根至少有一部分是從愈傷組織分化而來的，所以洗苗時很容易脫落，直 接影響移栽成活率。
權(quán)利要求
1.一種用單一培養(yǎng)基生產(chǎn)羅漢果組培苗的方法，在生產(chǎn)過程中使用了MS固體培養(yǎng)基，其特征是將狹霉素0.1～0.5mg·L-1加入到常規(guī)MS固體培養(yǎng)基中進行羅漢果組培苗生產(chǎn)。
全文摘要
一種用單一培養(yǎng)基生產(chǎn)羅漢果組培苗的方法，在生產(chǎn)過程中使用了MS固體培養(yǎng)基，其特征是將狹霉素0.1～0.5mg·L^-1加入到常規(guī)MS固體培養(yǎng)基中進行羅漢果組培苗生產(chǎn)。由于單用狹霉素配制成的培養(yǎng)基可以同時用于“腋芽外植體啟動”、“增殖擴繁”及“增殖苗生根”各技術(shù)環(huán)節(jié)，從而使得羅漢果組培苗的生產(chǎn)操作程序大為簡化。特別是狹霉素能有效控制羅漢果組織培養(yǎng)過程中愈傷組織的發(fā)生，有利于遺傳穩(wěn)定性，從而提高組培苗的質(zhì)量。
文檔編號A01H4/00GK101218896SQ20081007343
公開日2008年7月16日 申請日期2008年1月24日 優(yōu)先權(quán)日2008年1月24日
發(fā)明者許鴻源 申請人:廣西大學