專利名稱：一種紅皮云杉體細(xì)胞胚誘導(dǎo)植株再生的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種云杉體細(xì)胞胚誘導(dǎo)植株再生的方法。
技術(shù)背景紅皮云杉(尸/c^/bm/ew&A^b/)又名紅皮臭，主要分布在中國的東北、朝 鮮、和俄羅斯的遠(yuǎn)東地區(qū)，大量用于建筑業(yè)、裝潢業(yè)、造紙業(yè)，是我國東北地 區(qū)的重要造林用材樹種之一。紅皮云杉分布區(qū)生態(tài)條件復(fù)雜，為種子園營建造 成困難，營建和運(yùn)營成本高；紅皮云杉的育種周期長達(dá)40年以上，繁殖率低， 且由于生態(tài)環(huán)境破壞和長期過量采伐使其優(yōu)質(zhì)的種質(zhì)資源嚴(yán)重流失，近年來營 建了一些種子園并選育出了一些15 20年即可成材的優(yōu)良無性系，但因受繁 殖材料等因素限制在實(shí)際生產(chǎn)中還沒有得到大量應(yīng)用。目前紅皮云杉可以通過 扦插進(jìn)行無性繁殖，但是，目前主要以3 6年生苗的插穗為材料生產(chǎn)扦插苗， 培育周期長，另外，因?yàn)閺拿總€(gè)幼樹可采集的插穗的數(shù)量有限，扦插繁殖的繁 殖率也低。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是為了解決紅皮云杉常規(guī)育種周期長、繁殖率低的問題，而 提供的一種紅皮云杉體細(xì)胞胚誘導(dǎo)植株再生的方法。一種紅皮云杉體細(xì)胞胚誘導(dǎo)植株再生的方法按以下步驟實(shí)現(xiàn) 一、取經(jīng)過 預(yù)處理的紅皮云杉合子胚接種于額外添加6-芐基氨基嘌呤、激動(dòng)素、萘乙酸、 谷氨酰胺、水解酪蛋白、蔗糖和膠立得的改良RJW培養(yǎng)基中，在溫度為21士1 'C的環(huán)境中進(jìn)行暗培養(yǎng)至出現(xiàn)胚性愈傷組織；二、將胚性愈傷組織轉(zhuǎn)培養(yǎng)接種 于額外添加脫落酸、谷氨酰胺、水解酪蛋白、蔗糖和膠立得的改良RJW培養(yǎng)基中，在溫度為2l士rc的環(huán)境中進(jìn)行暗培養(yǎng)至體細(xì)胞胚成熟，待體細(xì)胞胚子葉發(fā)育完全后，將培養(yǎng)瓶開蓋，在超凈工作臺(tái)內(nèi)選弱風(fēng)檔，用弱風(fēng)吹5 7天 進(jìn)行干燥處理；三、干燥處理后的成熟體細(xì)胞胚轉(zhuǎn)接到額外添加激動(dòng)素、萘乙 酸、膠立得和蔗糖的改良RJW培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在溫度為24士rC、光周期是明 16h/暗8h的環(huán)境中培養(yǎng)至體細(xì)胞胚萌發(fā)；四、將萌發(fā)的體細(xì)胞胚轉(zhuǎn)接到額外添加活性炭的1/2改良RJW培養(yǎng)基中，在溫度為24士1'C、明16h暗8h交替的 環(huán)境中培養(yǎng)至根和莖的形成，即得到紅皮云杉再生植株；步驟一改良RJW培 養(yǎng)基中6-芐基氨基嘌呤的濃度為0.0 1.0mg/L、激動(dòng)素的濃度為0.0 1.0mg/L、 萘乙酸的濃度為0.0 5.0mg/L、谷氨酰胺的濃度為450mg/L、水解酪蛋白的濃 度為750mg/L、蔗糖的濃度為20g/L、膠立得的濃度為2g/L;步驟二改良RJW 培養(yǎng)基中脫落酸的濃度為0.0 9.5mg/L、谷氨酰胺的濃度為450mg/L、水解酪 蛋白的濃度為500mg/L、蔗糖的濃度為60g/L、膠立得的濃度為2g/L;步驟三 改良RJW培養(yǎng)基中激動(dòng)素的濃度為0.02mg/L、萘乙酸的濃度為0.05mg/L、膠 立得的濃度為2g/L、蔗糖的濃度為25g/L;步驟四1/2改良RJW培養(yǎng)基中活性 炭的濃度為3g/L。本發(fā)明一種紅皮云杉體細(xì)胞胚誘導(dǎo)植株再生的方法，以紅皮云杉未成熟種 子為外植體誘導(dǎo)體細(xì)胞胚，獲得再生植株，使紅皮云杉的育種周期縮短了，且 可利用的繁殖材料豐富，使繁殖率增大，比自然狀態(tài)下紅皮云杉的育種周期提 高40倍以上，比扦插進(jìn)行無性繁殖的周期提高了3 6倍。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了紅皮 云杉苗木的大規(guī)模、短周期、高繁殖率、低成本的工廠化生產(chǎn)，使一些優(yōu)質(zhì)的 種質(zhì)資源得到快速而廣泛的應(yīng)用，使豐富的種質(zhì)資源得到保護(hù)，還可為該樹種 的基因工程改良工作奠定基礎(chǔ)，從而培育出速生、豐產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、抗逆的紅皮云 杉新種質(zhì)，使該樹種的生態(tài)效益、經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益得到迅速、充分發(fā)揮。
具體實(shí)施方式
具體實(shí)施方式
一本實(shí)施方式紅皮云杉體細(xì)胞胚誘導(dǎo)植株再生的方法按以 下步驟實(shí)現(xiàn) 一、取經(jīng)過預(yù)處理的紅皮云杉合子胚接種于額外添加6-芐基氨基 嘌呤、激動(dòng)素、萘乙酸、谷氨酰胺、水解酪蛋白、蔗糖和膠立得的改良RJW培養(yǎng)基中，在溫度為2l土rc的環(huán)境中進(jìn)行暗培養(yǎng)至出現(xiàn)胚性愈傷組織；二、將胚性愈傷組織轉(zhuǎn)培養(yǎng)接種于額外添加脫落酸、谷氨酰胺、水解酪蛋白、蔗糖和膠立得的改良RJW培養(yǎng)基中，在溫度為21士1。C的環(huán)境中進(jìn)行暗培養(yǎng)至體細(xì)胞胚成熟，待體細(xì)胞胚子葉發(fā)育完全后，將培養(yǎng)瓶開蓋，在超凈工作臺(tái)內(nèi)選弱風(fēng)檔，用弱風(fēng)吹5 7天進(jìn)行干燥處理；三、干燥處理后的成熟體細(xì)胞胚轉(zhuǎn)接 到額外添加激動(dòng)素、萘乙酸、膠立得和蔗糖的改良RJW培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在溫 度為24士rC、光周期是明16h/暗8h的環(huán)境中培養(yǎng)至體細(xì)胞胚萌發(fā)；四、將萌的轉(zhuǎn)子和嚙合到環(huán)齒輪的另一轉(zhuǎn)子，以及嚙合負(fù)荷的托架。當(dāng)使用行星 嚙輪組時(shí)，從轉(zhuǎn)子的要求的輸入齒輪比將是不同的，但是，可以滿足與 齒輪耦合完全相同的數(shù)學(xué)條件。圖3表示Torser差速器齒輪箱50的局部視圖。該差速器齒輪箱50 被耦合到HP轉(zhuǎn)子54與LP轉(zhuǎn)子52以分配功率。設(shè)置軸60以便從差速器 運(yùn)行到發(fā)電機(jī)(未表示)。該差速器50允許HP轉(zhuǎn)子54和LP轉(zhuǎn)子變換 它們的速度到差速器并平均二轉(zhuǎn)子52、 54的速度以產(chǎn)生更有效工作的機(jī) 械10。盡管已經(jīng)參照優(yōu)選實(shí)施例描述了本發(fā)明，但技術(shù)人員要理解，可以 完成各種變化同時(shí)等效體可以替代其部件而不偏離本發(fā)明主要的范圍。 此處，可以進(jìn)行許多修改以適合本發(fā)明指出的情況與材料而不偏離其主 要范圍。因此，試圖不將本發(fā)明局限于作為想要施本發(fā)明的最佳模式公 開的特殊實(shí)施例，但是本發(fā)明將包括處于所附權(quán)利要求范圍內(nèi)的所有實(shí) 施例。部件列表 10 渦扇發(fā)動(dòng)機(jī)12中心線14向前的方向16向后的方向18核心發(fā)動(dòng)機(jī)20高壓壓縮機(jī)21高壓轉(zhuǎn)子22燃燒室23高壓渦輪(HPT)24高壓渦輪葉片26核心發(fā)動(dòng)機(jī)軸27低壓渦輪(LPT)28低壓渦輪葉片29低壓轉(zhuǎn)子30低壓軸31第一級(jí)風(fēng)扇萌發(fā)，培養(yǎng)約3天就可見有絨狀萌發(fā)根生成，15 20天根長達(dá)2.0 2.5cm, 這時(shí)生長點(diǎn)有新的針葉生成，約25天后有分根生成。
具體實(shí)施方式
二本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一的不同是步驟二中在超凈 工作臺(tái)內(nèi)選弱風(fēng)檔，用弱風(fēng)吹6天進(jìn)行干燥處理。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施 方式一相同。
權(quán)利要求
1、一種紅皮云杉體細(xì)胞胚誘導(dǎo)植株再生的方法，其特征在于紅皮云杉體細(xì)胞胚誘導(dǎo)植株再生的方法按以下步驟實(shí)現(xiàn)一、取經(jīng)過預(yù)處理的紅皮云杉合子胚接種于額外添加6-芐基氨基嘌呤、激動(dòng)素、萘乙酸、谷氨酰胺、水解酪蛋白、蔗糖和膠立得的改良RJW培養(yǎng)基中，在溫度為21±1℃的環(huán)境中進(jìn)行暗培養(yǎng)至出現(xiàn)胚性愈傷組織；二、將胚性愈傷組織轉(zhuǎn)培養(yǎng)接種于額外添加脫落酸、谷氨酰胺、水解酪蛋白、蔗糖和膠立得的改良RJW培養(yǎng)基中，在溫度為21±1℃的環(huán)境中進(jìn)行暗培養(yǎng)至體細(xì)胞胚成熟，待體細(xì)胞胚子葉發(fā)育完全后，將培養(yǎng)瓶開蓋，在超凈工作臺(tái)內(nèi)選弱風(fēng)檔，用弱風(fēng)吹5～7天進(jìn)行干燥處理；三、干燥處理后的成熟體細(xì)胞胚轉(zhuǎn)接到額外添加激動(dòng)素、萘乙酸、膠立得和蔗糖的改良RJW培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在溫度為24±1℃、光周期是明16h/暗8h的環(huán)境中培養(yǎng)至體細(xì)胞胚萌發(fā)；四、將萌發(fā)的體細(xì)胞胚轉(zhuǎn)接到額外添加活性炭的1/2改良RJW培養(yǎng)基中，在溫度為24±1℃、明16h暗8h交替的環(huán)境中培養(yǎng)至根和莖的形成，即得到紅皮云杉再生植株；步驟一改良RJW培養(yǎng)基中6-芐基氨基嘌呤的濃度為0.0～1.0mg/L、激動(dòng)素的濃度為0.0～1.0mg/L、萘乙酸的濃度為0.0～5.0mg/L、谷氨酰胺的濃度為450mg/L、水解酪蛋白的濃度為750mg/L、蔗糖的濃度為20g/L、膠立得的濃度為2g/L；步驟二改良RJW培養(yǎng)基中脫落酸的濃度為0.0～9.5mg/L、谷氨酰胺的濃度為450mg/L、水解酪蛋白的濃度為500mg/L、蔗糖的濃度為60g/L、膠立得的濃度為2g/L；步驟三改良RJW培養(yǎng)基中激動(dòng)素的濃度為0.02mg/L、萘乙酸的濃度為0.05mg/L、膠立得的濃度為2g/L、蔗糖的濃度為25g/L；步驟四1/2改良RJW培養(yǎng)基中活性炭的濃度為3g/L。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紅皮云杉體細(xì)胞胚誘導(dǎo)植株再生的方法， 其特征在于步驟二中在超凈工作臺(tái)內(nèi)選弱風(fēng)檔，用弱風(fēng)吹6天進(jìn)行干燥處理。
全文摘要
一種紅皮云杉體細(xì)胞胚誘導(dǎo)植株再生的方法，它涉及一種云杉體細(xì)胞胚誘導(dǎo)植株再生的方法。它解決了紅皮云杉常規(guī)育種周期長、繁殖率低的問題。方法一、合子胚培養(yǎng)愈傷組織；二、培養(yǎng)體細(xì)胞胚至成熟并進(jìn)行干燥；三、培養(yǎng)成熟體細(xì)胞胚至體細(xì)胞胚萌發(fā)；四、繼續(xù)培養(yǎng)至根和莖的形成，即得到紅皮云杉再生植株。本發(fā)明一種紅皮云杉體細(xì)胞胚誘導(dǎo)植株再生的方法，以紅皮云杉未成熟種子為外植體誘導(dǎo)體細(xì)胞胚，獲得再生植株，使紅皮云杉的育種周期縮短了，比扦插進(jìn)行無性繁殖的周期提高了3～6倍，繁殖率高。
文檔編號(hào)A01H4/00GK101228848SQ20081006403
公開日2008年7月30日 申請(qǐng)日期2008年2月27日 優(yōu)先權(quán)日2008年2月27日
發(fā)明者劉寶光, 劉桂豐, 張含國, 李成浩 申請(qǐng)人:東北林業(yè)大學(xué)