專利名稱：：脫氫醋酸鈉在飼料防霉中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及防霉劑
技術(shù)領(lǐng)域：
，更具體地，涉及飼料防霉劑
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別是指脫氫醋酸鈉在飼料防霉中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：飼料在儲(chǔ)存、運(yùn)輸、銷售和使用過程中，由于飼料中水分的變化和環(huán)境的影響，極易發(fā)生霉變，大量生長(zhǎng)和繁殖的霉菌污染祠料，飼料發(fā)霉和霉菌毒素中毒癥是世界范圍內(nèi)畜禽生產(chǎn)中普遍存在的嚴(yán)重問題，控制祠料霉變是祠料生產(chǎn)中不可忽視的環(huán)節(jié)。霉菌的防治主要有輻射滅菌、使用防霉劑、使用防霉包裝、化學(xué)消毒和輻射結(jié)合防霉、控制真菌遺傳密碼等方法。但目前應(yīng)用最為廣泛、效果較好而且成本較低的方法是使用防霉劑。目前常用的防霉劑品種有丙酸和丙酸鹽、山梨酸及其鉀鹽、苯甲酸及其鈉鹽和雙乙酸鈉等。這些防霉劑對(duì)保護(hù)飼料品質(zhì)、促進(jìn)畜牧業(yè)健康發(fā)展有著十分重要的作用，其經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益得到了人們的充分肯定。但也存在一定的問題，如丙酸有刺激性氣味以及很強(qiáng)的腐蝕性，受熱損失大，揮發(fā)快，使用不太方便；山梨酸及其鉀鹽防霉效果受pH值的影響，pH值大于7.5時(shí)，幾乎無抑菌作用，對(duì)乳酸菌幾乎無效，在水中易氧化，在塑料容器中其活性會(huì)降低，在空氣中不穩(wěn)定，能被氧化著色，有吸濕性；苯甲酸及其鈉鹽對(duì)pH值要求很窄，只能在酸性條件下發(fā)揮作用，pH值大于4時(shí)防霉作用開始下降，有苦澀等不良味道；當(dāng)飼料霉變嚴(yán)重時(shí)或雙乙酸鈉量達(dá)不到完全抑菌時(shí)，雙乙酸鈉它本身可作為微生物的營(yíng)養(yǎng)源反而促進(jìn)了霉菌的生長(zhǎng)，相應(yīng)增加雙乙酸鈉的量可完全抑菌，但又增加了防霉成本。脫氬醋酸鈉的最大特點(diǎn)是抗菌范圍廣，它通過滲透進(jìn)入微生物的細(xì)胞壁，干擾細(xì)胞內(nèi)各種酶體系而產(chǎn)生作用，主要抵抗常易使飼料、食品、飲料中繁殖而引起的腐敗變質(zhì)的細(xì)菌、酵母菌、霉菌等微生物，特別是假單孢子菌、葡萄球菌和大腸桿菌。耐光耐熱性好，受酸堿度影響較小，有效使用濃度較低，且水溶液穩(wěn)定，不會(huì)在加工過程中受熱分解，或隨水蒸氣揮發(fā)，但是不清楚不同條件下脫氫醋酸鈉對(duì)幾種霉菌的抑制濃度，妨礙了脫氫醋酸鈉在飼料生產(chǎn)中作為防霉劑的應(yīng)用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的主要目的就是針對(duì)以上存在的問題與不足，提供一種脫氬醋酸鈉在飼料防霉中的應(yīng)用，該應(yīng)用提供了不同條件下脫氫醋酸鈉對(duì)幾種霉菌的抑制濃度，為脫氫醋酸鈉在飼料生產(chǎn)中用作防霉劑奠定了基礎(chǔ)。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下一種脫氬醋酸鈉在飼料防霉中的應(yīng)用，其特點(diǎn)是，用于防治黃曲霉、煙曲霉、枯青霉、島青霉、串珠鐮刀菌、禾谷鐮刀菌或從霉變飼料中提取的混合霉菌。較佳地，所述脫氫醋酸鈉對(duì)混合霉菌的最低抑菌濃度為70mg/kg。較佳地，所述脫氫醋酸鈉對(duì)黃曲霉、煙曲霉的最低抑菌濃度為70mg/kg。較佳地，所述脫氫醋酸鈉對(duì)枯青霉、島青霉、串珠鐮刀菌、禾谷鐮刀菌的最j氐抑菌濃度為80mg/kg。較佳地，經(jīng)12rC高溫處理30min后，所述脫氫醋酸鈉的最低抑菌濃度為70mg/kg。較佳地，pH=5.5時(shí)所述脫氫醋酸鈉的最低抑菌濃度為80mg/kg。較佳地，pH-7.0時(shí)所述脫氫醋酸鈉的最低抑菌濃度為130mg/kg。較佳地，pH-7.5時(shí)所述脫氫醋酸鈉的最低抑菌濃度為140mg/kg。本發(fā)明主要以防治黃曲霉、煙曲霉、枯青霉、島青霉、串珠鐮刀菌或禾谷鐮刀菌或從霉變飼料中提取的混合霉菌為對(duì)象，提供了脫氫醋酸鈉對(duì)幾種不同霉菌的最低抑菌濃度，以及不同pH條件下的最低抑菌濃度，為脫氫醋酸鈉在飼料生產(chǎn)中用作防霉劑奠定了基礎(chǔ)。具體實(shí)施方式為更好的理解本發(fā)明的內(nèi)容，下面結(jié)合具體實(shí)施例作進(jìn)一步說明。測(cè)定最低抑制溶度釆用最低抑菌濃度(MIC)法，該方法根據(jù)防霉劑能夠抑制霉菌生長(zhǎng)的最低抑菌濃度來判斷防霉劑抑菌效果，抑菌濃度愈低，防霉效果愈佳。實(shí)施例中所用到的稀釋液0.85%生理鹽水，稱取分析NaC18.5g，定容1000ml，12rC高溫高壓滅菌30min。實(shí)施例中還具體用到了下列三種培養(yǎng)基①高鹽察氏培養(yǎng)基硝酸鈉2g、磷酸二氫鉀lg、疏酸鎂(MgS04.7H20)0.5g、氯化鉀0.5g、硫酸亞鐵0.01g、氯化鈉60g、蔗糖30g、瓊脂20g、蒸餾水1000ml;稀釋液0.85%生理鹽水。②查氏培養(yǎng)基蒸餾水1000ml、硝酸鈉3g、磷酸氫二鉀lg、硫酸鎂0.5g、氯化鉀0.5g、石克酸亞4失0.01g、蔗糖30g、瓊脂15g。③馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基馬鈴薯去皮切成薄片，每200g馬鈴薯加自來水1000ml，置電爐上80。C溫浸lh，用紗布過濾，稀釋到1000ml，15磅30min滅菌即為20。/。的馬鈴薯浸汁。每100ml馬鈴薯浸汁加葡萄糖2g,加瓊脂1.5-2g,15磅30min滅菌即得固態(tài)馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基。這三種培養(yǎng)基的pH值調(diào)成4.5。實(shí)施例l脫氫醋酸鈉對(duì)飼料中霉菌最低抑制溶度(MIC)測(cè)定1.1制備霉菌孢子懸液稱取有霉菌的雞飼料25g，該飼料購(gòu)自南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院飼料加工實(shí)驗(yàn)室，放入含有滅菌的生理鹽水250ml的三角瓶中，置振蕩器上振蕩30min，用10ml移液管吸取10ml的上述帶霉菌的生理鹽水l:10稀釋于25ml試管中，用洗耳球及l(fā)ml移液管反復(fù)吹吸50次，使霉菌孢子分散開。取lml此帶霉菌的稀釋液加入9ml生理鹽水，充分混合得l:IOO帶霉菌的稀釋液。取l:100帶霉菌的稀釋液lml，加到100ml滅菌生理鹽水中，充分混合得l:IOOOO帶有霉菌的稀釋液(此稀釋液每毫升含有霉菌菌落數(shù)大致100個(gè))。1.2制備含不同脫氫醋酸鈉溶度的平板分別取防霉劑脫氫醋酸鈉(江蘇天成生化制品有限公司，批號(hào)20071011，規(guī)格25kg/袋)0.1g、0.125g、0.15g、0.175g、0.2g置于250ml滅菌的三角瓶中，加滅菌后的生理鹽水100ml，放置振蕩器30min取下，置電爐上加溫至50。C左右3min5min，使防霉劑的有效成分充分溶解，分別加入無菌培養(yǎng)皿各lml，倒入約45。C滅菌的培養(yǎng)基①19ml，充分混勻待其凝固后，最終溶度為40mg/Kg、50mg/Kg、60mg/Kg、70mg/Kg、80mg/Kg。同時(shí)設(shè)對(duì)照組，每組做兩個(gè)平板作重復(fù)。1.3接種用移液槍加入步驟l.l制備的lml1:IOOOO帶霉菌的稀釋液于平板中，涂布均勻后，將平板倒置于28。C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時(shí)后觀察，培養(yǎng)觀察一周。無微生物生長(zhǎng)的最低濃度為其最低防霉?jié)舛取?.4結(jié)果表l:脫氫醋酸鈉最低抑菌濃度脫氫醋酸鈉濃度mg/kg空白4050607080霉菌生長(zhǎng)情況++++++++++--Note:"+，，ispositive,meansmoldcangrow;"-，，isnegative,meansmoldcouldnotgrow.由表l可見，隨著脫氫醋酸鈉濃度的提高，霉菌數(shù)目逐漸減少；在脫氫醋酸鈉溶度達(dá)到70mg/kg時(shí)霉菌就不能生長(zhǎng)，所以得出當(dāng)培養(yǎng)劑的pH值在4.5時(shí)，脫氫醋酸鈉對(duì)飼料中霉菌最小抑制溶度為70mg/kg。實(shí)施例2脫氫醋酸鈉對(duì)六種不同霉菌的抑制效果六種標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)菌黃曲霉、煙曲霉、枯青霉、島青霉、串珠鐮刀菌、禾谷鐮刀菌購(gòu)于中國(guó)普通微生物保藏中心。1.1菌株恢復(fù)培養(yǎng)用無菌吸管，吸取0.3-0.4ml適宜的液體培養(yǎng)基葡萄糖蛋白胨湯，滴入買來的具有相應(yīng)菌林的安瓿管內(nèi)，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀；取約0.2ml菌體懸浮液，移植于指定的瓊脂斜面/平板培養(yǎng)基上，培養(yǎng)5d。1.2平板制備分別取脫氫醋酸鈉(江蘇天成生化制品有限公司，批號(hào)20071011，規(guī)格25kg/袋)0.1g、0,125g、0.15g、0.175g、0.2g置于250毫升滅菌的三角瓶中，加滅菌后的生理鹽水100毫升，放置振蕩器30min取下，置電爐上加溫至5(TC左右3min5min，使脫氬醋酸鈉充分溶解分別加入無菌培養(yǎng)皿各lml，倒入約45。C滅菌的培養(yǎng)基19ml，充分混勻待其凝固后，最終濃度為40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg、80mg/kg。其中，黃曲霉、煙曲霉、枯青霉、島青霉使用②培養(yǎng)基，串珠鐮刀菌、禾谷鐮刀菌使用③培養(yǎng)基。1.3接種將已活化的菌種分別接入無菌生理鹽水，制成含菌量(孢子量)為100cfu/ml的菌懸液，用移液沖倉(cāng)加入lml菌懸液涂布均勻后，霉菌于28。C培養(yǎng)72h，細(xì)菌于37。C培養(yǎng)24h,酵母于37。C培養(yǎng)72h后，觀察結(jié)果。1.4結(jié)果表2脫氫醋酸鈉對(duì)六種霉菌的抑制實(shí)驗(yàn)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>由表2可見，脫氫醋酸鈉對(duì)黃曲霉、煙曲霉的最低抑菌濃度為70mg/Kg,對(duì)枯青霉、島青霉、串珠鐮刀菌、禾谷鐮刀菌的最低抑菌濃度為80mg/Kg，脫氫醋酸鈉對(duì)這六種特定霉菌具有很好的抑制作用。實(shí)施例3pH值對(duì)脫氫醋酸鈉抑制效果的影響1.1不同pH值的培養(yǎng)基配制用0.1mol/L氫氧化鈉把培養(yǎng)基(種類)的pH分別調(diào)成5.5、7.0、7.5。1.2制備平板分別取脫氫醋酸鈉(江蘇天成生化制品有限公司，批號(hào)20071011，規(guī)格25kg/袋)0.1g、0.125g、0.15g、0.175g、0.2g、0.225g、0.25g、0.275g、0.3g、0.325g、0.35g置于250毫升滅菌的三角瓶中，加滅菌后的生理鹽水100毫升，放置振蕩器30min取下，置電爐上加溫至50。C左右35min,使脫氳醋酸鈉充分溶解，分別加入無菌培養(yǎng)皿各lml，倒入約45。C滅菌的各pH培養(yǎng)基19ml，充分混勻待其凝固后，最終濃度為40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg、80mg/kg、90mg/kg、100mg/kg、110mg/kg、120mg/kg、130mg/kg、140mg/kg。分別設(shè)各pH值的對(duì)照組，每組做兩個(gè)平板作重復(fù)。1.3接種用移液槍加入實(shí)施例l制備的lml1:10000帶霉菌的稀釋液于平板中，涂布均勻后，將平板倒置于28。C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時(shí)后觀察，培養(yǎng)觀察一周。1.4結(jié)果表3pH-5.5時(shí)脫氫醋酸鈉的抑菌實(shí)驗(yàn)脫氫醋酸鈉濃度mg/kg空白405060708090100110霉菌生長(zhǎng)情況+++++++++++++__--表4pH-7.0時(shí)脫氬醋酸鈉的抑菌實(shí)驗(yàn)脫氫醋酸鈉濃度mg/kg空白608090100110120130140霉菌生長(zhǎng)情況++++++++++++++++--表5pH-7.5時(shí)脫氬醋酸鈉的抑菌實(shí)驗(yàn)脫氫醋酸鈉濃度mg/kg空白6080卯100110120130140霉菌生長(zhǎng)情況+++++++++++++++++-由表3、表4和表5可知，當(dāng)培養(yǎng)基pf^5.5時(shí)，脫氫醋酸鈉的最低抑菌濃度為80mg/kg;當(dāng)培養(yǎng)基pH-7.0時(shí)，脫氫醋酸鈉的最低抑菌濃度為130mg/kg;當(dāng)培養(yǎng)基pl^7.5時(shí)，脫氫醋酸鈉的最低抑菌濃度為140mg/kg。當(dāng)培養(yǎng)基呈弱酸性時(shí)，脫氬醋酸鈉的防霉效果最佳；當(dāng)培養(yǎng)基呈中性或弱堿性時(shí)，脫氫醋酸鈉的防霉效果減弱，隨著培養(yǎng)基pH值增大，脫氫醋酸鈉的防霉?jié)舛戎饾u升高；pH大于7.5時(shí)仍有一定的防霉作用，與常用的化學(xué)防霉劑的有效pH值(苯曱酸鈉pH^4,山梨酸鉀pH^7)相比脫氬醋酸鈉的防霉效果更具有實(shí)用性。實(shí)施4脫氬醋酸鈉抑制效果的熱穩(wěn)定性測(cè)定分別取脫氬醋酸鈉(江蘇天成生化制品有限公司，批號(hào)20071011，規(guī)格25kg/袋)0.1g、0.125g、0.15g、0.175g、0.2g置于250ml滅菌的三角瓶中，加滅菌后的生理鹽水100ml，放置振蕩器30min取下，置電爐上加溫至50。C左右35min，使脫氫醋酸鈉充分溶解；將所有三角瓶密封，置于高壓滅菌鍋中12rC處理30min,冷卻到室溫。分別加入無菌培養(yǎng)皿各lml，倒入約45。C滅菌的培養(yǎng)基①19ml，充分混勻待其凝固后，冷卻至室溫接種混合菌種(即實(shí)施例l制備的l:IOOOO帶霉菌的稀釋液)，每組做兩個(gè)平板作重復(fù)。將平板倒置于28'C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時(shí)后觀察，培養(yǎng)觀察一周。結(jié)果如下表6脫氫醋酸鈉抑制效果的熱穩(wěn)定性脫氫醋酸鈉濃度mg/kg空白4050607080霉菌生長(zhǎng)情況++++++++++--脫氫醋酸鈉經(jīng)過121。C處理后，其最低抑菌濃度為70mg/kg，與未高溫處理過最低抑菌濃度一樣，表明脫氫醋酸鈉的防霉效果不受高溫的影響。生產(chǎn)中，顆粒飼料的生產(chǎn)不會(huì)影響其防霉效果。綜上所述，本發(fā)明提供了不同條件下脫氫醋酸鈉對(duì)幾種霉菌的抑制濃度，為脫氫醋酸鈉在飼料生產(chǎn)中用作防霉劑奠定了基礎(chǔ)。需要說明的是，在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請(qǐng)中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú)引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，以上所述的是本發(fā)明的具體實(shí)施例及所運(yùn)用的技術(shù)原理，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改而不背離本發(fā)明的精神與范圍，這些等價(jià)形式同樣落在本發(fā)明的范圍內(nèi)。權(quán)利要求1.一種脫氫醋酸鈉在飼料防霉中的應(yīng)用，其特征在于，用于防治黃曲霉、煙曲霉、枯青霉、島青霉、串珠鐮刀菌、禾谷鐮刀菌或從霉變飼料中提取的混合霉菌。2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于，所述脫氫醋酸鈉對(duì)混合霉菌的最〗氐抑菌濃度為70mg/kg。3.根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于，所述脫氫醋酸鈉對(duì)黃曲霉、煙曲霉的最低抑菌濃度為70mg/kg。4.根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于，所述脫氫醋酸鈉對(duì)枯青霉、島青霉、串珠鐮刀菌、禾谷鐮刀菌的最低抑菌濃度為80mg/kg。5.根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于，經(jīng)121。C高溫處理30min后，所述脫氫醋酸鈉的最低抑菌濃度為70mg/kg。6.根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于，pl^5.5時(shí)所述脫氫醋酸鈉的最低抑菌濃度為80mg/kg。7.根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于，pH-7.0時(shí)所述脫氫醋酸鈉的最低抑菌濃度為130mg/kg。8.根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于，pH:7.5時(shí)所述脫氬醋酸鈉的最低抑菌濃度為140mg/kg。全文摘要本發(fā)明提供了一種脫氫醋酸鈉在飼料防霉中的應(yīng)用，用于防治黃曲霉、煙曲霉、枯青霉、島青霉、串珠鐮刀菌、禾谷鐮刀菌或從霉變飼料中提取的混合霉菌，脫氫醋酸鈉對(duì)混合霉菌的最低抑菌濃度為70mg/kg，對(duì)黃曲霉、煙曲霉的最低抑菌濃度為70mg/kg，對(duì)枯青霉、島青霉、串珠鐮刀菌、禾谷鐮刀菌的最低抑菌濃度為80mg/kg，經(jīng)121℃高溫處理30min后，脫氫醋酸鈉的最低抑菌濃度為70mg/kg，pH＝5.5、7.0、7.5時(shí)，脫氫醋酸鈉的最低抑菌濃度分別為80mg/kg、130mg/kg、140mg/kg，本發(fā)明提供了不同條件下脫氫醋酸鈉對(duì)幾種霉菌的抑制濃度，為脫氫醋酸鈉在飼料生產(chǎn)中用作防霉劑奠定了基礎(chǔ)。文檔編號(hào)A23K1/16GK101243826SQ20081002453公開日2008年8月20日申請(qǐng)日期2008年3月26日優(yōu)先權(quán)日2008年3月26日發(fā)明者敏陳,陳正榮申請(qǐng)人:江蘇天成獸藥飼料添加劑研發(fā)有限公司