專利名稱：：常見灘涂貝類的家系建立方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種常見灘涂貝類的良種選育方法，具體的說是一種常見灘涂貝類的家系構(gòu)建的方法。
背景技術(shù)：
：家系選擇育種是新品種培育的有效方法，已經(jīng)在動植物的育種中取得廣泛的成功，通過建立家系并進行系統(tǒng)選擇是遺傳育種的重要手段。利用家系選擇技術(shù)對貝類經(jīng)濟性狀進行改良已有成功的報道。在國外，InnesandHaley(1977)建立了食用貽貝家系，并分析了幼體生長率的遺傳變異。Beattie等(1978)對長牡蠣抗夏季死亡的親本進行選擇，建立了7個全同胞家系，其中幾個家系的耐高溫能力明顯提高。Hedgecock等(1991)建立了太平洋牡蠣的雜交家系，通過不同家系間的比較，分析了雜種優(yōu)勢的原因。Langlon(2000)建立了太平洋牡蠣的全同胞家系，指出家系選擇有效地提高產(chǎn)量。在國內(nèi)，張國范等(2004)建立了海灣扇貝自交家系并研究了自交效應(yīng)；鄭懷平等(2003)以殼色作為標記，建立了不同殼色的海灣扇貝家系，對生長發(fā)育進行了比較；并利用兩個地理群體的海灣扇貝建立了雜交家系和自交家系，對雜交產(chǎn)生的雜種優(yōu)勢進行了分析；閆喜武等(2005)建立了菲律賓蛤仔家系，對其早期生長發(fā)育進行了比較；喻達輝等(2005)用RAPD標記了合珠母貝家系F,的分離方式；中國科學院南海海洋研究建立了IO多個馬氏珠母貝家系，并成功選育出一個紅殼家系——"南科珍珠紅"。何毛賢等(2007)對構(gòu)建的7個馬氏珠母貝家系的生長進行了比較，發(fā)現(xiàn)一個生長快，個體人的家系。張躍環(huán)等(2007)采用'雙列雜交法建立不同殼型的菲律賓蛤仔雜交家系，從中篩選出一個生長快、存活率高的F,家系1.5萬粒，并成功的獲得該家系的F2代3億粒，有效的提高了菲律賓蛤仔的產(chǎn)量?；糁颐鞯?2007，2008)采用巢式方法建立100多個了菲律賓蛤仔的同胞家系，計算了菲律賓蛤仔的遺傳力，并得到了產(chǎn)量高的家系。本發(fā)明根據(jù)常見的灘涂貝類的繁殖生物學，制定了一套適用于灘涂貝類家系建立的方法技術(shù)路線，為灘涂貝類的家系育種奠定了良好的基礎(chǔ)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明是一種常見灘涂貝類的家系建立方法，適用于各種高密度埋棲的灘涂貝類，本方法具體包括親本繁殖最小群體數(shù)量的確定、親本繁殖時間的確定、單體精卵的獲得、精卵放置有效時間的確定、建立家系。下面詳細敘述常見灘涂貝類的家系建立方法，具體步驟如下第一步、確定親本繁殖最小群體的數(shù)量為20~30枚。對于高密度埋棲的灘涂貝類，單獨放置性腺成熟的個體不會產(chǎn)卵，繁殖時具有群體效應(yīng)，這不同于其它的貝類，即繁殖時存在最小繁殖翁體數(shù)量，如果少于該群體數(shù)量，即使親本性腺成熟的再好，也不能產(chǎn)卵。第二步、在第一步的基礎(chǔ)上，當親本性腺成熟后，經(jīng)過陰干升溫的刺激，通過預(yù)實驗，確定親本的繁殖時間以及雌雄產(chǎn)卵排精的時間差。在這種條件下，貝類集中繁殖的時間一般是相對固定的。第三步、單體精卵的獲得，在第一、二步的基礎(chǔ)上，當群體繁殖時，將正在產(chǎn)卵排精的個體抓取出來，利用淡水沖洗干凈后，單獨放置在事先準備好的容器中，經(jīng)過530min,抓取出的個體可以繼續(xù)產(chǎn)卵或排精，即可獲得單體精卵。第四步、由于貝類精卵失活時間不僅與種類有關(guān)，而且還與溫度密切相關(guān)，根據(jù)其品種與水溫，通過精卵的失活時間，確定精卵放置的有效時間。一般來說，隨著水溫的升高，精卵的放置時間縮短，在2025。C時，卵子的放置有效時間約為4h。在收集精卵不同步的時候，盡量縮短時間差，保證精卵的親和力，提高受精率。第五步、在以上步驟基礎(chǔ)上，采用巢式方法或雙列雜交法構(gòu)建常見灘涂貝類的家系。在構(gòu)建家系前，檢査卵子、精子是否被污染，被污染的個體棄掉，選用未受污染的個體建立家系。為了提高孵化率，可以選擇降低孵化密度來保證子代的存留數(shù)量。本發(fā)明的優(yōu)點在于能夠成功的構(gòu)建常見灘涂貝類的家系，克服了以往雌雄鑒別困難所帶來的弊端，從而為灘涂貝類的家系育種奠定良好的基礎(chǔ)。該方法具有簡單易行，成功率高的特點。具體實施例以菲律賓蛤仔、青蛤、四角蛤蜊、中國蛤蜊、薄片鏡蛤為實施例進一步說明本發(fā)明，但不構(gòu)成對本發(fā)明的限制。實施例l第一步、親本繁殖最小群體數(shù)量的確定對于菲律賓蛤仔而言，單獨放置性腺成熟的個體不會產(chǎn)卵，繁殖時具有群體效應(yīng)，存在最小繁殖群體數(shù)量為20~30枚。第二步、親本繁殖時間的確定在第一步的基礎(chǔ)上，當親本性腺成熟后，經(jīng)過陰干810h，升溫35。C刺激，經(jīng)過l4h，親貝開始產(chǎn)卵排精，雌雄產(chǎn)卵排精的時間差為2050min。第三步、單體精卵的獲得在第一、二步的基礎(chǔ)上，當群體繁殖時，將正在產(chǎn)卵排精的個體抓取出來，利用淡水沖洗干凈后，單獨放置在事先準備好的容器2L小桶中，抓取出的個體繼續(xù)產(chǎn)卵或排精，即獲得單體精卵。第四步、精卵放置有效時間的確定菲律賓蛤仔卵子有效放置時間不得超過4h，精子有效放置時間812h，放置時間越短越好。在收集精卵不同步的時候，盡量縮短時間差，保證精卵的親和力，提高受精率。第五步、構(gòu)建家系在以上步驟基礎(chǔ)上，采用雙列雜交和巢式方法構(gòu)建菲律賓蛤仔的家系。在構(gòu)建家系前，檢査卵子、精子是否被污染，被污染的個體棄掉，選用未受污染的個體建立家系。為了提高孵化率，可以選擇降低孵化密度為正常的2030%,來保證子代的存留數(shù)量。菲律賓蛤仔家系的建立情況如表1。表l、菲律賓蛤仔家系的建立<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>注2007年7月建立的大連群體采用雙列雜交法構(gòu)建家系，其它群體采用巢式方法建立家系。實施例2第一步、親本繁殖最小群體數(shù)量的確定對于青蛤而言，單獨放置性腺成熟的個體不會產(chǎn)卵，繁殖時具有群體效應(yīng)，存在最小繁殖群體數(shù)量為2030枚。第二步、親本繁殖時間的確定在第一步的基礎(chǔ)上，當親本性腺成熟后，經(jīng)過陰干12h升溫35。C刺激，經(jīng)過6h，親貝開始產(chǎn)卵排精，雌雄產(chǎn)卵排精的時間差為2030min。第三步、單體精卵的獲得在第一、二步的基礎(chǔ)上，當群體繁殖時，將正在產(chǎn)卵排精的個體抓取出來，利用淡水沖洗干凈后，單獨放置在事先準備好的容器2L小桶中，經(jīng)過1030min，抓取出的單體繼續(xù)產(chǎn)卵或排精，獲得單體的精卵。第四步、精卵放置有效時間的確定青蛤卵子有效放置時間不得超過3h，精子有效放置時間8~10h，放置時間越短越好。在收集精卵不同步的時候，盡量縮短時間差，保證精卵的親和力，提高受精率。第五步、構(gòu)建家系在以上步驟基礎(chǔ)上，采用雙列雜交法構(gòu)建青蛤的家系。在構(gòu)建家系前，檢査卵子、精子是否被污染，被污染的個體棄掉，選用未受污染的個體建立家系。為了提高孵化率，可以選擇降低孵化密度為正常的20~30%，來保證子代的存留數(shù)量。于2006年10月，分兩次成功構(gòu)建18個青蛤家系，見表2。表2、青蛤家系的建立<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>實施例3第一步、親本繁殖最小群體數(shù)量的確定對于四角蛤蜊而言，單獨放置性腺成熟的個體不會產(chǎn)卵，繁殖時具有群體效應(yīng)，存在最小繁殖群體數(shù)量為20~30枚。第二步、親本繁殖時間的確定在第一步的基礎(chǔ)上，當親本性腺成熟后，經(jīng)過陰干8-12h，經(jīng)過0.5-1.0h，親貝開始產(chǎn)卵排精，雌雄產(chǎn)卵排精的時間差為1030min。第三步、單體精卵的獲得在第一、二步的基礎(chǔ)上，當群體繁殖時，將正在產(chǎn)卵排精的個體抓取出來，利用淡水沖洗干凈后，單獨放置在事先準備好的容器2L小桶中，經(jīng)過540min，抓取出的單體繼續(xù)產(chǎn)卵或排精，獲得單體的精卵。第四步、精卵放置有效時間的確定四角蛤蜊卵子有效放置時間不得超過2~3h，精子有效放置時間為S12h，放置時間越短越好。在收集精卵不同步的時候，盡量縮短時間差，保證精卵的親和力，提高受精率。第五步、構(gòu)建家系在以上步驟基礎(chǔ)上，采用巢式方法構(gòu)建四角蛤蜊的家系。在構(gòu)建家系前，檢査卵子、精子是否被污染，被污染的個體棄掉，選用未受污染的個體建立家系。為了提高孵化率，可以選擇降低孵化密度為正常的20~30%，來保證子代的存留數(shù)量。于2007年9月，成功建立15個四角蛤蜊家系，見表3。表3、四角蛤蜊家系的建立<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>實施例4第一步、親本繁殖最小群體數(shù)量的確定對于中國蛤蜊而言，單獨放置性腺成熟的個體不會產(chǎn)卵，繁殖時具有群體效應(yīng)，存在最小繁殖群體數(shù)量為20~30枚。第二步、親本繁殖時間的確定在第一步的基礎(chǔ)上，當親本性腺成熟后，經(jīng)過陰12h,經(jīng)過0.5~1.0h，親貝開始產(chǎn)卵排精，雌雄產(chǎn)卵排精的時間差為525miru第三步、單體精卵的獲得在第一、二步的基礎(chǔ)上，當群體繁殖時，將正在產(chǎn)卵排精的個體抓取出來，利用淡水沖洗干凈后，單獨放置在事先準備好的容器2L小桶中，經(jīng)過525min，抓取出的單體繼續(xù)產(chǎn)卵或排精，獲得單體的精卵。第四步、精卵放置有效時間的確定中國蛤蜊卵子有效放置時間不得超過3~4h，精子有效放置時間為8~10h,放置時間越短越好。在收集精卵不同步的時候，盡量縮短時間差，保證精卵的親和力，提高受精率。第五步、構(gòu)建家系在以上步驟基礎(chǔ)上，采用巢式方法構(gòu)建中國蛤蜊的家系。在構(gòu)建家系前，檢查卵子、精子是否被污染，被污染的個體棄掉，選用未受污染的個體建立家系。為了提高孵化率，可以選擇降低孵化密度為正常的20~30%，來保證子代的存留數(shù)量。于2008年7月，成功建立21個中國蛤蜊家系，見表4。表4、中國蛤蜊家系的建立'<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>實施例5第一步、親本繁殖最小群體數(shù)量的確定對于薄片鏡蛤而言，單獨放置性腺成熟的個體不會產(chǎn)卵，繁殖時具有群體效應(yīng)，存在最小繁殖群體數(shù)量為20~30枚。第二步、親本繁殖時間的確定在第一步的基礎(chǔ)上，當親本性腺成熟后，經(jīng)過陰干8h，經(jīng)過0.5~1.5h，親貝開始產(chǎn)卵排精，雌雄產(chǎn)卵排精的時間差為1020min。第三步、單體精卵的獲得在第一、二步的基礎(chǔ)上，當群體繁殖時，將正在產(chǎn)卵排精的個體抓取出來，利用淡水沖洗干凈后，單獨放置在事先準備好的容器2L小桶中，經(jīng)過530min，抓取出的單體繼續(xù)產(chǎn)卵或排精，獲得單體的精卵。第四步、精卵放置有效時間的確定薄片鏡蛤卵子有效放置時間不得超過3~4h,精子有效放置時間為8~12h，放置時間越短越好。在收集精卵不同步的時候，盡量縮短時間差，保證精卵的親和力，提高受精率。第五步、構(gòu)建家系在以上步驟基礎(chǔ)上，采用巢式方法構(gòu)建薄片鏡蛤的家系。在構(gòu)建家系前，檢查卵子、精子是否被污染，被污染的個體棄掉，選用未受污染的個體建立家系。為了提高孵化率，可以選擇降低孵化密度為正常的20~30%，來保證子代的存留數(shù)量。于2008年8月，成功建立24個薄片鏡蛤家系，見表5。表5、<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>權(quán)利要求1、一種常見灘涂貝類的家系建立方法，其特征在于具體包括親本繁殖最小群體數(shù)量的確定、親本繁殖時間的確定、單體精卵的獲得、精卵放置有效時間的確定、建立家系，具體步驟如下第一步、確定親本繁殖最小群體的數(shù)量為20～30枚；第二步、在第一步的基礎(chǔ)上，當親本性腺成熟后，經(jīng)過陰干升溫的刺激，通過預(yù)實驗確定親本繁殖時間及雌雄產(chǎn)卵排精的時間差；第三步、在上步基礎(chǔ)上，當群體繁殖時，將正在產(chǎn)卵排精的個體抓取出來，利用淡水沖洗干凈后，單獨放置在事先準備好的容器中，經(jīng)過5～30min獲得單體精卵；第四步、根據(jù)貝類的種類以及環(huán)境溫度，通過精卵的失活時間確定精卵放置的有效時間；第五步、檢查卵子、精子是否被污染，被污染的個體棄掉，選用未受污染的個體，在以上步驟基礎(chǔ)上，采用巢式方法構(gòu)建常見灘涂貝類的家系。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種常見灘涂貝類的家系建立方法，其特征在于該方法適用于各種高密度埋棲的灘涂貝類。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種常見灘涂貝類的家系建立方法，其特征在于第四步收集精卵不周步的時候，縮短時間差，保證受精率。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種常見灘涂貝類的家系建立方法，其特征在于第五步采用雙列雜交法構(gòu)建常見灘涂貝類的家系。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種常見灘涂貝類的家系建立方法，其特征在于降低孵化密度，保證子代的存留數(shù)量，提高孵化率。全文摘要本發(fā)明是一種常見灘涂貝類的家系建立方法，屬于一種良種選育方法，具體包括親本繁殖最小群體的確定、親本繁殖時間的確定、單體精卵的獲得、精卵放置有效時間的確定、最后建立家系。本發(fā)明的優(yōu)點在于能夠成功的構(gòu)建常見灘涂貝類的家系，克服了以往雌雄鑒別困難所帶來的弊端，從而為灘涂貝類的家系育種奠定良好的基礎(chǔ)。該方法具有簡單易行，成功率高的特點。文檔編號A01K61/00GK101347104SQ200810013220公開日2009年1月21日申請日期2008年9月12日優(yōu)先權(quán)日2008年9月12日發(fā)明者張國范,張躍環(huán),鳳楊,趙力強,閆喜武,霍忠明申請人:大連水產(chǎn)學院