專利名稱：用于培育和孵化蛋的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及培育和孵化早熟蛋(premature egg)的方法，特別是在 早熟蛋被轉(zhuǎn)移到鳥的泄殖腔之前從鳥中取出的在它們殼中的早熟蛋。
發(fā)明的背景
歐洲專利申請no.01650109涉及飼養(yǎng)無菌狀態(tài)的鳥的方法，該方法 包含將母體鳥關(guān)養(yǎng)，在早熟蛋被轉(zhuǎn)移至泄殖腔之前從母體鳥中取出在它
的殼中的早熟蛋并且在它的殼中培育該早熟蛋并且孵化該早熟蛋以生 產(chǎn)出產(chǎn)蛋鳥(laying bird)。
在培育和孵化過程期間，通風(fēng)、溫度控制和濕度是非常重要的。蛋 殼，特別是它的氣孔和角質(zhì)層(cuticle),調(diào)整發(fā)育胚胎的呼吸性氣體 交換和水合作用?；旧?，蛋殼是可呼吸的膜，同時胚胎發(fā)育蛋殼允許 二氧化碳和水從蛋中逸出和氧進(jìn)入蛋中。當(dāng)胚胎生長時，它需要增加的 氧供給。而且，在孵化期期間必須注意保持適當(dāng)?shù)臐穸人健?br> 正常的自然產(chǎn)下的蛋的成功培育和孵化所需條件是熟知的。這些條 件在物種之間是變化的。例如，對于家禽(如，雞)整個過程需要20-22 天， 一般地為21天，從第0天-第18天采用培育條件，第18天-第21 天采用孵化條件。在培育蛋期間，蛋應(yīng)該被定位，這樣的話包含空氣室 的圓頂端在最上面。 一般的培育箱條件是37.5。C的氣溫，50%的相對濕 度(RH)和定期的轉(zhuǎn)動(搖動)蛋，使得每45-180分鐘蛋的縱向軸被 十曼t曼地旋轉(zhuǎn)大約80°—次(垂直的40°每側(cè))。
在孵化之前的3天，在第18天或在第18天之后，胚胎一般地向蛋 內(nèi)的孵化位置移動。在這個階段蛋不再應(yīng)該被轉(zhuǎn)動。從第19天-第21 天，相對濕度應(yīng)該被升高到大約60%-70%。這種高濕度水平降低了蛋的 水分損失。在整個培育和孵化階段保持適當(dāng)通風(fēng)也是很重要的，以保證 在標(biāo)準(zhǔn)大氣壓(760mmHg)下正常空氣的二氧化碳和氧濃度得到保持。
通常，在蛋的培育期間和在孵化階段之前，到第18天或第19天， 這些蛋釋放了 (loose)它們的初始重量的大約13%。這個重量損失對蛋 的正常發(fā)育是必不可少的。歐洲專利no.0295964描述了鳥類胚胎體外培養(yǎng)技術(shù)。特別地，該說 明書涉及胚胎在它已經(jīng)從它的殼中取出之后在密閉容器中的培育。使用 的容器優(yōu)選地是蛋殼的 一部分，該蛋殼選自與所培養(yǎng)的物種相同的物 種，對此發(fā)明而言，選自相似的母雞。類似地，歐洲專利no.0511431公 開了母雞的受精卵的體外培養(yǎng)方法，其中剛被受精的胚胎在產(chǎn)卵之后大 約一個小時之內(nèi)從母雞的輸卵管的膨大部的上部取出并隨后進(jìn)行培養(yǎng)。 這兩個說明書僅僅公開了已被取出的無殼的蛋的人工培養(yǎng)。
本發(fā)明涉及培育和孵化通過手術(shù)獲得的在它們的殼中的早熟蛋的 特殊技術(shù)，特別是從歐洲專利申請no.01650109的方法得到的那些。這
些技術(shù)與傳統(tǒng)的蛋培育和孵化技術(shù)相比時，在通過手術(shù)取得的蛋的產(chǎn)率 方面得到了改善的結(jié)果。

發(fā)明內(nèi)容
根據(jù)本發(fā)明的 一般方面，提供了在消過毒的環(huán)境中培育和孵化在它 的殼中的早熟蛋的方法，包括任選的冷卻和預(yù)培育儲存蛋的步驟；將早 熟蛋放置在適于提供蛋的可變搖動的培育隔離器中；監(jiān)測通風(fēng)和蛋的重 量損失；在培育階段期間將隔離器中相對濕度(RH)降低到大約 15%-40%水平；在孵化階段期間將相對濕度提高到大約60%-75%,并且 停止搖動這些蛋；并將蛋保持在隔離器中直到孵化為止。
出人意料地，在培育階段的首先的18天中所需要的相對濕度比正 常蛋所要求的相對濕度低得多。如果這種15-40%的低相對濕度用來孵
下的蛋)'，它將產(chǎn)生非常低的孵化率(<40%)'、,、'然而對于早熟蛋:'、:這
種低相對濕度是最佳的RH范圍。因此，在培育階段使用上述低的相對 濕度水平與本領(lǐng)域中的傳統(tǒng)教導(dǎo)相反。
根據(jù)本發(fā)明的第 一方面，提供用于在消過毒的環(huán)境中培育和孵化通 過手術(shù)取得的在它的殼中的早熟蛋的方法，包括以下步驟
a. 預(yù)培育儲存通過手術(shù)取得的早熟蛋；
b. 將蛋放置在適于提供蛋的可變化搖動的培育隔離器；
c. 控制在隔離器中的通風(fēng)；
d. 稱重這些蛋以監(jiān)測重量損失；
e. 在培育階l殳期間將相對濕度降^^'j大約15%-40%,并且改變培育隔離器中的溫度以獲得在培育階段期間的目標(biāo)重量損失；
f. 在孵化階段期間控制在培育隔離器中的相對濕度和溫度并且將
相對濕度提高到大約60%-75%并且停止搖動這些蛋；和
g. 保持這些蛋在該隔離器中處于無菌條件中直到孵化為止。 根據(jù)本發(fā)明，在整個方法期間保持通過手術(shù)取得的蛋的無菌狀態(tài)。
發(fā)明的詳細(xì)i兌明
本發(fā)明涉及用于通過手術(shù)取得的早熟蛋從任選的預(yù)培育儲存直到 培育和孵化可成活的鳥的培育和孵化方法。
通過手術(shù)取得的蛋(如，通過使用歐洲專利申請no.01650109的方 法獲得的那些)由它們的性質(zhì)來看是早熟的。在一些情況下，它們的發(fā) 育(例如原腸胚形成)可以被延遲。而且，有可能的是，這些早熟蛋可 能缺乏足月的自然產(chǎn)下的蛋的某些特征，例如在殼上可能有減少的角質(zhì) 膜和在殼內(nèi)的氣孔形成可能被損害。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，由于早熟蛋殼的形成和 夕卜牙+麻醉、安樂死方法(euthanasia methods )和定時(timing)的影響， 一些通過手術(shù)取得的蛋可能沒有足夠地釋放水分和相應(yīng)體重，而它們對 正確的胚胎發(fā)育和雛禽的生存能力必不可少的。因此，對正常產(chǎn)下的蛋 的標(biāo)準(zhǔn)孵化實踐不適合于獲得這些早熟的通過手術(shù)取得的蛋的最佳的 成活能力。
根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，提供用于培育和孵化通過手術(shù)取得的 在它的殼中的早熟蛋的方法，包括以下步驟
a. 預(yù)培育儲存通過手術(shù)取得的早熟蛋；
b. 將蛋放置在適于提供蛋的可變化搖動的培育隔離器；
c. 控制在隔離器中的通風(fēng)；
d. 稱重這些蛋以監(jiān)測重量損失；
e. 在培育階段期間將相對濕度降低到大約15%-40%,并且改變在 培育隔離器中的溫度以獲得在培育階段期間的目標(biāo)重量損失；
f. 在孵化階段期間控制在培育隔離器中的相對濕度和溫度并且將 相對濕度提高到大約60-75%并且停止搖動這些蛋；和
g. 保持這些蛋在該隔離器中處于無菌條件中直到孵化為止。
我們已經(jīng)出人意料地發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)的孵蛋技術(shù)不適合于通過手術(shù)取得 的早熟蛋。需要一種特別地用于早熟蛋的新方法以獲得從這類通過手術(shù)取得的蛋孵化出健康鳥的始終很高的孵化率。
特別地，我們已經(jīng)令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，在低濕度水平在限定時間培育 通過手術(shù)取得的蛋在可成活胚胎方面獲得了較好的結(jié)果。出人意料地，
在培育的首先的約18天中，使用適合于自然產(chǎn)下的蛋的RH (大約 50%RH)得到非常低的早熟蛋的孵化率(<35%可成活的孵化)，而它 對于自然地產(chǎn)下的蛋提供>85%可成活的孵化。而且再出人意料地，在 培育的首先的大約18天中，使用低RH ( 15-40%)對于早熟蛋得到出人 意料好的孵化率(>70%可成活的孵化)，該低RH對于自然產(chǎn)下的蛋得 到非常低的孵化率(<40%)。保持這種低濕度水平是有利的，因為它 提供了所需要的重量損失以保證鳥的可成活的孵化。
理想地，通過手術(shù)取得的在它的殼中的早熟蛋是無菌的，并且本發(fā) 明的方法在無菌的氣氛中進(jìn)行以保證孵化和培育期間的無菌條件。
根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，控制在培育箱內(nèi)的通風(fēng)?？梢允?用采用HEPA過濾空氣和用消毒氧補(bǔ)充的消毒空氣結(jié)合的通風(fēng)。
根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方案，該隔離器裝備有稱重這些蛋的設(shè) 備。這可以直接監(jiān)測蛋重量損失。從培育的開始至孵化期之前對于單個 蛋的目標(biāo)重量損失為初始蛋重量的大約10-15%。
根據(jù)本發(fā)明的更優(yōu)選的實施方案，該隔離器可以配有 一 個或多個培 育箱，這樣的話，每個培育箱可以同時提供不同的對單個蛋優(yōu)化重量損 失和成活能力所必需的條件，特別是相對濕度水平。將獨立的培育箱用 于在蛋重量損失方面預(yù)期有寬變化的情況。
該培育期被定義為在培育箱中從第0天到第18天的時期。在這個 時間內(nèi)，搖動這些蛋是必需的。第O天相當(dāng)于蛋被放置于培育箱中的第 一天。孵化期被定義為從第19天至第21天的時期。在這個時間內(nèi)不需 要搖動這些蛋。
在培育和孵化期間的正常水平的相對濕度^f皮理解為大約50%-70%。 本方法認(rèn)識到需要將傳統(tǒng)的培育和孵蛋實踐改變到在本領(lǐng)域中沒有考 慮到的水平。通過手術(shù)取得的蛋的獨特特征提供了特定情況，在該特定 情況中本領(lǐng)域中的傳統(tǒng)教導(dǎo)沒有獲得所希望的孵化率/成活率。
根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，在培育階段期間相對濕度水平被 降低到15-35%，優(yōu)選地25-35%。
另外，培育階段在36-38。C的溫度下進(jìn)行。根據(jù)本發(fā)明的還 一 個優(yōu)選實施方案，在孵化階段期間相對濕度水平
被提高到60-75%,優(yōu)選地大約65%。另外，孵化階段可以在36-37.5°C 溫度下進(jìn)行。孵化階段(步驟(e))可以在或大約在第18天開始。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，和自然產(chǎn)下的蛋相比時，早熟蛋在首先的18天的培育 期間要求低很多的RH,對于在孵化階段中接下來的3天，所要求的RH 與自然產(chǎn)下的蛋的要求的RH相似。
本發(fā)明的方法在培育隔離器中實施。該培育箱可以是在標(biāo)準(zhǔn)孵蛋技 術(shù)中使用的傳統(tǒng)的培育箱或它可以是適于符合培育和孵化無菌蛋的消 毒要求的培育箱，即培育隔離器。理想地，該培育方法和培育隔離器保 持早熟蛋的消毒和無菌狀態(tài)。
培育隔離器可以配有設(shè)備以監(jiān)視與控制通風(fēng)速率、以除濕空氣和獲 得富氧空氣(在760mmHg時21-23% )。因此，理想地，使用已經(jīng):故改 進(jìn)并且能夠控制通風(fēng)的傳統(tǒng)的培育隔離器。該方法可以進(jìn)一步包括向培 育隔離器中加入氧的步驟。最優(yōu)選地，當(dāng)在培育箱中的濕度時被降低時 力口入氧。
優(yōu)選地，將通過手術(shù)取得的蛋從進(jìn)行手術(shù)取出的手術(shù)隔離器中移出 并且在短時間內(nèi)(例如在從手術(shù)的30分鐘之內(nèi))被轉(zhuǎn)移到培育隔離器 中。有利地，保證在培育開始之前使蛋由空氣進(jìn)行通風(fēng)。
該培育方法還可以包括從母體鳥中手術(shù)取出之后冷卻這些蛋的附 加起始步驟。它還可以包括預(yù)培育儲存步驟，在該步驟中這些蛋可以被 儲存、靜止至少24小時，優(yōu)選地不超過72小時。 一般而言，預(yù)培育儲 存可以是0-72小時。早熟蛋的優(yōu)選的儲存條件是HEPA過濾空氣，15 °C -23 °C之間的溫度，50%-75%的相對濕度和無振動或突然震動的儲存。
根據(jù)本發(fā)明的另 一 個實施方案，這些蛋可以通過使用消毒設(shè)備和規(guī) 定的無污染或無菌空氣進(jìn)行培育。
根據(jù)本發(fā)明的進(jìn)一步特定的實施方案，該方法包括以下步驟對于 首先的24小時，可以使用用于蛋的物種的標(biāo)準(zhǔn)培育條件。此后，應(yīng)該 仔細(xì)地監(jiān)測每個蛋的重量損失、培育溫度、相對濕度，和，如果合適的 話，呼吸性氣體交換，特別是在空氣中的二氧化碳和氧濃度。該培育和 孵化條件可以根據(jù)本發(fā)明進(jìn)行調(diào)節(jié)。理想地，對于55g的通過手術(shù)取得 的早熟蛋，希望的目標(biāo)重量損失為大約0.4g/天。在最初培育的第O天直 到第18天，大約37.2-37.6。C的培育溫度是優(yōu)選的，然后大約36.5-37.5。C的溫度是所希望的直到孵化。相對濕度最初可以被設(shè)置在大約40%， 但是每天應(yīng)該根據(jù)通風(fēng)率和每天的蛋重?fù)p失進(jìn)行調(diào)節(jié)直到第18天，在 此時相對濕度應(yīng)該被j是高到大約65%。
根據(jù)本發(fā)明的還進(jìn)一步的實施方案，從鳥的子宮取出早熟蛋的手術(shù) 過程包括切割開鳥的皮膚和對子宮的操作。重要的是，蛋沒有被來自鳥 的內(nèi)臟的廢物污染并且蛋本身在方法期間沒有被損傷。蛋可以在完整 的、被封閉的(例如，夾住)子宮中取出或者直接地切割開子宮從鳥體 取出。應(yīng)該避免流體形式的消毒溶液的所有直接接觸以消除損害胚胎生 存能力的任何危險。無菌技術(shù)是是必要的。
或者，手術(shù)取出包括
進(jìn)行剖腹切割并且用縫合線在兩端結(jié)扎烏的輸卵管； 橫切輸卵管遠(yuǎn)端至每個縫線；
取出被包在輸卵管中的蛋； 消毒該輸卵管； 取出蛋；和 消毒該蛋。
優(yōu)選地，該鳥^皮麻醉，或者可以在取出在殼中的蛋之前進(jìn)行安樂死 或被殺死。雌性母體鳥可以是活的或者剛被殺死的。按照倫理的、合法 的和動物福利考慮，活鳥可以是完全有意識的、被鎮(zhèn)靜的或被麻醉的。 蛋和卵可以被受精或者未被受精。
優(yōu)選地，蛋的取出是在該蛋將自然地轉(zhuǎn)移到母體鳥中的泄殖腔中時 的轉(zhuǎn)移時間之前并盡可能靠近該轉(zhuǎn)移時間。
然后可以將通過手術(shù)取出的蛋放置于消過毒的容器中并封閉。容器 應(yīng)該可以使蛋冷卻并且具有適合蛋儲存的設(shè)計和尺寸。消過毒的容器是 一個體積大約是蛋的IO倍的、通過塑料框支持和保護(hù)該蛋以保證穩(wěn)定 性和通風(fēng)的容器。
一旦這些蛋已經(jīng)孵化，用于孵化出的小鳥、飼養(yǎng)鳥、產(chǎn)卵和繁殖活 性鳥合適的環(huán)境是具有HEPA過濾空氣的剛性器壁的隔離器?？諝獗痪S 持在正壓并且以頻繁的間隔(例如，考慮隔離器的立體容積和飼養(yǎng)密度， 對于成年鳥10次/小時)進(jìn)行交換。每只鳥的占地面積理想地為 0.2-0.4m2。保護(hù)進(jìn)口端上的手套不被烏損壞?？刂瓶諝鉁囟群凸饩€以提 供與用于相同物種和相同生命周期階段的常規(guī)鳥的條件相似的條件。根據(jù)本發(fā)明進(jìn)一步的實施方案， 一旦通過手術(shù)取得的蛋已經(jīng)孵化，
將銅養(yǎng)和繁殖得到的健康和生產(chǎn)(productive)狀態(tài)的鳥保持在規(guī)定的無 污染或消過毒的環(huán)境中?？赡苄枰獙︼嬍车臓I養(yǎng)含量的進(jìn)行調(diào)整。
特別地，可以加入有機(jī)微量營養(yǎng)素(如脂肪或水溶性維生素)以補(bǔ) 償在飲食的消毒期間發(fā)生的損失和由于缺少來自共生微生物的供應(yīng)的 損失。通過y輻射消毒的飲食具有降低的脂溶性和水溶性維生素的濃度。 此外，y輻射的飲食具有受限制的儲存期限并且應(yīng)該進(jìn)行監(jiān)測脂肪酸敗。
然后飲食含量的分析可以根據(jù)生命周期的階段計算烏所需要的適 當(dāng)補(bǔ)充量。取決于特定的營養(yǎng)素，它們可以腸胃外給予或在飼料中或在 水中口腔給予。飲用水也應(yīng)該進(jìn)行y輻射(uv輻射的水可能包含細(xì)菌 芽胞)。
根據(jù)本發(fā)明的更進(jìn)一步實施方案，提供用于飼養(yǎng)和培養(yǎng)通過手術(shù)取 得的蛋的方法，包括向在卵中的通過手術(shù)取得的早熟蛋給予抗生素。優(yōu) 選地，口服給予的會諾酮類(fluroqmnolones)被給予，并且視需要地， 為了消滅具體的微生物，其他抗微生物劑被給予?？股叵私?jīng)卵巢 的細(xì)菌性和支原體性感染，和對胚胎和隨后的小鳥的成活能力和無菌度 具有正面影響?？共《舅?、藥品、小分子、肽和單克隆抗體還可以被用 來消除或防止病毒感染。
應(yīng)當(dāng)理解的是，當(dāng)?shù)皬哪阁w鳥中取出時，培育和孵化蛋所要求的特 定條件隨例如物種和發(fā)育階段進(jìn)行變化。
雖然在上述中，本說明書已經(jīng)完全涉及家禽，特別是母雞，應(yīng)當(dāng)理 解的是本發(fā)明可以在其他鳥上進(jìn)行。
如果受精蛋被用來生產(chǎn)后代或衍生出(derived)鳥，那么這些蛋可 以在傳統(tǒng)的家禽詞養(yǎng)系統(tǒng)、無菌系統(tǒng)或者隔離器中控制微生物進(jìn)入來進(jìn) 行孵化、飼養(yǎng)、維持和繁殖。
根據(jù)本發(fā)明，為了最大限度地沒有微生物，蛋應(yīng)該優(yōu)選地?zé)o菌地從 母雌性體中取出(除非它們也是無菌的)并且生命周期應(yīng)該在隔離器中 完成。當(dāng)生產(chǎn)無菌蛋和烏時，生命周期可以在隔離器的外面完成。
在本說明書中術(shù)語"包含、包括、；波包含的和含有的"或其任何變化 和術(shù)語"包括、包含、被包括的和包括的"或其任何變化被認(rèn)為是完全可 互換的并且它們應(yīng)該全被提供最大可能的解釋，反之亦然。實施例1 才才泮+和方法
根據(jù)歐洲專利申請no.01650109的技術(shù)，在它們的殼中的早熟蛋從 母體鳥獲得。
早熟蛋在從母體鳥被手術(shù)取出之后被冷卻。然后將它們儲存、靜止 至少24小時但不多于72小時。儲存條件是HEPA過濾空氣，15°C-23 。C之間的溫度，50-75%的相對濕度并且這些蛋進(jìn)行無振動或無突然震動
的儲存。
這些蛋通過使用消過毒的設(shè)備和規(guī)定的無污染的空氣進(jìn)行培育。 最初在首先的24小時，使用標(biāo)準(zhǔn)的培育條件，而此后，應(yīng)該仔細(xì) 地監(jiān)測每個蛋的重量損失、培育溫度、相對濕度，和如果合適的話，呼 吸性氣體交換，特別是在空氣中的二氧化碳和氧濃度。因此調(diào)節(jié)培育和 孵化條件。例如，為了降低二氧化碳濃度，提高培育箱隔離器的通風(fēng)率， 在高環(huán)境溫度和高相對濕度的條件下，進(jìn)入隔離器的空氣被除濕以保證 相對濕度被維持在大約25%。
在第1天，隔離器的濕度從40%被降低到20-25%以提高通過蛋殼 的水分損失。這促使早熟蛋的重量損失。濕度被保持在這個水平直到第 13天，然后從第14天至第18天增加到40%以便從笫0天至第18天達(dá) 到13%的總的重量損失。在第18天之后，濕度被提高到65%正常的孵 化水平。
一旦蛋被孵化，應(yīng)用以下條件。對于孵出的雞、飼養(yǎng)的鳥、產(chǎn)卵的 和繁殖活性的鳥的適合環(huán)境是剛性器壁的隔離器，其具有HEPA過濾空 氣?？諝饩S持在正壓并且以頻繁間隔進(jìn)行交換(例如考慮隔離器的立體 容積和飼養(yǎng)密度，對于成年鳥為10次/小時)，占地面積為0.2-0.4m2/1 只鳥，保護(hù)進(jìn)入口上的手套不受鳥的損壞，和控制氣溫和光線以提供與 用于相同物種和相同生命周期階段的常規(guī)鳥的條件相似的條件。
結(jié)果
預(yù)培育儲存時間(0-5天)和條件(溫度、濕度、蛋朝向、通風(fēng)、 振動)、培育條件(溫度、濕度、通風(fēng)、朝向、重量損失)、處理和孵 化條件對胚胎成活能力的影響儲存時間
0天-孵化率為90% 1-3天-孵化率為90% 4-5天-孵化率為60%
用于3天儲存的溫度、通風(fēng)/振動
大約25°C同時振動/通風(fēng)-孵化率為60%, 大約2(TC沒有振動/通風(fēng)-孵化率為80%。
蛋朝向和重量損失
蛋一側(cè)平放-重量損失7.8%，孵化率30% 蛋圓頂端在最上面-重量損失10.2-13.1%,孵化率80-90%
這些結(jié)果證實，儲存最多三天對通過手術(shù)取得的蛋的孵化率不存在 不利影響，只要沒有振動作用和提供通風(fēng)。這些結(jié)果還證實在培育期間 蛋朝向的重要性。
實施例2
抗生素(例如，口腔給予的喹諾酮類)對消除經(jīng)卵巢細(xì)菌感染和支 原體性感染的影響和對胚胎和隨后雞的成活能力和無菌度(sterility)的影響。
結(jié)果
沒有抗生素-成活能力22-60%,和無菌度66-100%; 具有抗生素-成活能力13-57%，和無菌度89-100%。 這些結(jié)果證實使用抗生素對去除經(jīng)卵巢感染(例如，沙門氏菌)的 益處和對通過手術(shù)取得的蛋的成活能力不存在不利影響。
實施例3
使用微量營養(yǎng)素-補(bǔ)充的飲食(包含維生素A、 C、 E和K， B維生 素復(fù)合物)維持健康和繁殖效率結(jié)果
對于用25rads輻射的銷售的飲食，維生素?fù)p失，其中對于維生素A 和B6為最高(大約50%)。健康通過具有另外補(bǔ)充的飲食進(jìn)行維持。 證實從通過手術(shù)取得的蛋孵化出的鳥可以被維持整個生命周期并且生 產(chǎn)具有正常成活能力的蛋。
實施例4
在培育期(大約18天)，與非常低的RH水平(25%)相比，常規(guī) 的RH水平(50%)對通過手術(shù)取得的有殼的蛋的孵化率的影響。 蛋的初始重量為大約60g。
結(jié)果
50Q/oRH在培育期間的蛋重量損失5-9%,孵化率33% 25。/。RH在培育期間蛋重量損失8-13%,孵化率73% 這些結(jié)果證實當(dāng)通過較低的RH控制重量損失/水分損失時具有改 善的孵化率。
實施例5
麻醉或安樂死對通過手術(shù)取得的蛋的孵化率的影響。 和麻醉30分鐘相比，安樂死和在30分鐘之后取出蛋的影響，和32 小時預(yù)培育儲存相比，8小時儲存的影響。
結(jié)果
安樂死孵化率為25% (蛋被儲存32小時) 麻醉孵化率為75% (蛋被儲存32小時)；
孵化率為0% (蛋被儲存8小時) 通過使用氧和異氟烷的混合物來提供麻醉。
實施例6 材沖+和方法
具有已知的SPF狀態(tài)的五十只成熟的雌性和五只成熟的雄性雞維持在選定的飲食并使它們自然繁殖。使用定時和觸診的結(jié)合來測定從鳥 腹部取出蛋的最佳時間。
對于該過程，鳥通過頸部脫位被進(jìn)行安樂死并立即進(jìn)行準(zhǔn)備。從腹
側(cè)胸部和腹部去除羽毛并且通過使用50%的碘在醇中的溶液消毒暴露 的皮膚。然后將每只鳥放置在專門適用的用5%過乙酸的溶液消毒的包 括消過毒的儀器的手術(shù)隔離器下。該鳥用消過毒的粘合性布覆蓋，然后 將隔離器的無菌進(jìn)入口放置在該布的上方。進(jìn)行剖腹切割和隨后小心解 剖，從子宮/生殖道的遠(yuǎn)端面和最接近泄殖腔的地方取出蛋。然后將蛋在 無菌條件下轉(zhuǎn)移到適于作為孵蛋培育箱的隔離器。
在安樂死之后15-22分鐘，四十一個蛋一皮成功地收回，并且纟皮認(rèn)為 適合培育。
在18-20°C,在無振動、通風(fēng)的塑料蛋托盤中儲存大約24小時之后， 這些蛋被稱重然后這些蛋中的40個被隨機(jī)分配到四個小的搖動培育箱 中的一個。兩個培育箱被維持在大約16-29%的RH (指定為25%RH) 和兩個培育箱被維持在大約43-54%的RH (指定為50%RH)。這些蛋 被保持為空氣室在最上面，并且在培育的第0天、7天和18天被分別地 稱重。在第18天，對所有的培育箱進(jìn)行調(diào)節(jié)以提供大約55-71%的RH。 記錄那些破殼并有活的可成活的小雞的蛋的數(shù)目。
在孵化的 一天之內(nèi)，活的雞從孵蛋隔離器中取出并且被轉(zhuǎn)移到兩個 適合于詞養(yǎng)多組雞的大型飼養(yǎng)隔離器。雞用通過輻射消毒的補(bǔ)充的商業(yè) 飲食進(jìn)行飼養(yǎng)。在成長18天后，五只雞從每個祠養(yǎng)隔離器中被取出， 進(jìn)行安樂死并通過需氧和厭氧培養(yǎng)制成細(xì)菌學(xué)樣品。樣品包含肝臟、脾、 心臟、血、陰道/泄殖腔、盲腸和小腸消化物和糞^更。
另外，將100個由50只經(jīng)挑選用于手術(shù)的雌鳥自然產(chǎn)下的蛋在標(biāo) 準(zhǔn)孵蛋條件下(第0-18天，大約50%RH;第18-21天，65%RH )進(jìn)行 培育以提供對照。所有的蛋在37.4。C進(jìn)行培育。
結(jié)果
可成活的雞被成功地從人工取得的早熟蛋中孵化出。沒有厭氧菌或 需氧菌從雞樣品中分離出。
自然產(chǎn)下的蛋具有91%的可成活雞孵化率。這證實了由雌鳥生產(chǎn)的 蛋的正?；蚋咚降淖匀簧沉?。和在50%RH下培育的類似的蛋相比，在首先的18天為25%RH下 培育的早熟蛋(通過手術(shù)取得)有明顯更大的孵化率(分別地可成活雞 孵化率73%vs.33% ) ( PO.05 )。
結(jié)論
建立了用于在雞中人工生產(chǎn)無菌受精蛋的安全和高效方法。蛋是可 成活的，并生產(chǎn)出可成活的無菌雞，其在隔離器中成功地進(jìn)行維持。然 而，為了獲得接近于自然產(chǎn)下的蛋的孵化率的可成活雞孵化率，需要使 用異常低的相對濕度。具體而言，如果使用常規(guī)的RH(50%)，那么 與自然產(chǎn)下的蛋的>90%和與早熟的通過手術(shù)取得的蛋的〉70%相比，蛋 的孵化率為<35%。這與關(guān)于常規(guī)蛋的充分記載的結(jié)果(其中低于40% 的RH與降低的孵化率有關(guān))相反，并且與在25%培育的早熟蛋發(fā)現(xiàn)有 提高的孵化率(相對于50y。RH)形成對比。
可以由本發(fā)明控制的傳染性生物包含那些可以是使有關(guān)物種致病 的或非致病的生物。相關(guān)物種包含鳥類物種(一般地為雞、家禽和火雞)、 人及其他哺乳動物(一般地為狗、貓、馬、牛、豬、綿羊、山羊、大鼠 和小鼠)。從本發(fā)明起見，微生物包含寄生蟲、細(xì)菌(包含厭氧的和需 氧的物種、共生物種和與消化道有關(guān)的物種)、類菌質(zhì)體、病毒(包含 反轉(zhuǎn)錄病毒)、朊病毒(prions)、真菌、酵母、霉菌和DNA和RNA 片段。
根據(jù)本發(fā)明，蛋的無菌衍生(derivation)和，如果合適的話，鳥的 孵化、飼養(yǎng)、維持和繁殖可以與另一種控制微生物污染方法組合使用。 上述方法包含消毒劑、抗微生物、抗生素、抗病毒劑、驅(qū)寄生蟲劑、免 疫調(diào)節(jié)劑和疫苗。
應(yīng)當(dāng)理解的是，根據(jù)本發(fā)明，基本上，那些蛋是人工或通過手術(shù)取 得的蛋，嚴(yán)格來說，其根據(jù)本發(fā)明表示在蛋被轉(zhuǎn)移到潛在污染的區(qū)域之 前從母體鳥中取出蛋。理想地，在消過毒的環(huán)境中通過用消過毒的食品
喂養(yǎng)來飼養(yǎng)作為母體鳥的鳥。然后，在蛋被轉(zhuǎn)移到母體鳥中有潛在污染 的區(qū)域之前從母體鳥中人工地取出蛋，然后對蛋進(jìn)行培育和孵化以生產(chǎn) 產(chǎn)蛋鳥，其被保持在該消過毒的環(huán)境中。
應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明不局限于如上所述的實施方案和方法，而可 以在權(quán)利要求的范圍內(nèi)進(jìn)行變化。
權(quán)利要求
1. 用于在消過毒的環(huán)境中培育和孵化通過手術(shù)取得的在其殼中的早熟蛋的方法，包括以下步驟a. 預(yù)培育儲存該通過手術(shù)取得的早熟蛋；b. 將蛋放置在適于提供蛋的可變化搖動的培育隔離器中；c. 控制在隔離器中的通風(fēng)；d. 稱重這些蛋以監(jiān)測重量損失；e. 在培育階段期間將相對濕度降低到大約15％-40％，并且改變在培育隔離器中的溫度以獲得在培育階段期間的目標(biāo)重量損失；f. 在孵化階段期間控制在培育隔離器中的相對濕度和溫度并且將相對濕度提高到大約60％-75％并停止搖動這些蛋；和g. 保持這些蛋在該隔離器中處于無菌條件中直到孵化為止。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l的方法，其中早熟蛋從鳥，優(yōu)選地雞，通過手術(shù) 取得。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的方法，其中該隔離器裝備有一個 或多個培育箱，這樣每個培育箱同時地提供不同的相對濕度水平。
4. 權(quán)利要求l-3任一項的方法，其中步驟(a)進(jìn)行0-72小時，優(yōu) 選地至少約24至不超過約72小時。
5. 根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的方法，其中在培育開始之后，培育期 為第0天-第18天。
6. 根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的方法，其中蛋在培育期期間和在孵化 期之前目標(biāo)重量損失為初始蛋重量的大約8%-15%。
7. 根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的方法，進(jìn)一步包括向隔離器中加入氧。
8. 根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的方法，其中在步驟(f)中，濕度被才是高到60%-70%。
根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的方法，其中步驟(e)在36-38。C的溫度進(jìn)行。
9. 根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的方法，其中步驟(f)在36-37.5。C的溫度進(jìn)行。
10. 根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的方法，其中早熟蛋的培育和孵化在 消過毒的設(shè)備和規(guī)定的無污染的空氣中進(jìn)行。
11. 根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的方法，其中在卵中向通過手術(shù)取得 的早熟蛋給予抗微生物劑。
12. 飼養(yǎng)根據(jù)前述任一項權(quán)利要求獲得的孵化烏的方法，包含在它 們的飲食中向鳥提供額外營養(yǎng)補(bǔ)充劑的步驟。
13. 權(quán)利要求12的方法，其中補(bǔ)充劑選自脂肪或水溶性維生素。
全文摘要
本發(fā)明涉及培育和孵化早熟蛋的方法，特別地為在將早熟蛋轉(zhuǎn)移到鳥的泄殖腔之前從鳥取出的通過手術(shù)取得的早熟蛋。
文檔編號A01K41/00GK101437392SQ200780013528
公開日2009年5月20日 申請日期2007年2月22日 優(yōu)先權(quán)日2006年2月23日
發(fā)明者L·莫蘭 申請人:奧瓦根國際有限公司