專利名稱：殺菌能力得以提高的殺菌及殺病毒組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種消毒能力得以提高的殺菌及殺病毒組合物，更進(jìn)一步涉及一種在單過硫酸氫鉀復(fù)合物(potassium monopersulfate)及蘋果酸中包含檸檬酸及酒石酸從而消毒能力提高的殺菌及殺病毒組合物。

背景技術(shù)：
近幾年，在蓄牧業(yè)中成為問題的病原體有鳥類流感病毒，口蹄疫病毒、豬霍亂病毒、沙門氏菌、鏈球菌等。
尤其，主要給雞、火雞等家禽類帶來危害的鳥類流感病毒，根據(jù)病原性可分為高病原性、弱病原性、非病原性3類，國際獸疫事務(wù)局(OIE)將其中的高病原性列為A等級，在韓國列為第1類家畜傳染病。病原體是A型病毒，具有H血清型和N血清型。根據(jù)這兩類的蛋白質(zhì)可存在共135種的病毒血清型，不過到2004年現(xiàn)今報道為止在全世界有15種HA、9種NA。感染主要是在直接接觸鳥類分泌物時發(fā)生，還可以通過飛沫、水、人的腳、飼料車、器具、設(shè)備、沾在蛋殼上的糞便等傳播。雖然癥狀根據(jù)被感染病毒的病原性有所不同，但大部分會出現(xiàn)呼吸器官癥狀和腹泄、產(chǎn)蛋率的急劇減少。根據(jù)情況，在雞冠等頭部出現(xiàn)青色癥，還出現(xiàn)面部發(fā)生浮腫或長毛向一方聚集的現(xiàn)象。
根據(jù)病原性，死亡率在0～100％之間，不過由于和新城疫、傳染性喉氣管炎、支原體感染癥等癥狀類似，因此需要正確的診斷。
雖然在1930年代以后世界上沒有發(fā)生過，但在1983年在比利時、法國等歐洲國家開始發(fā)生以來，到2004年在世界各國都發(fā)生了包括弱病原性在內(nèi)的高病原性鳥類毒感。在高病原性的情況下，人類也會被感染，從而1997年在香港6人死亡，2004年在越南16人死亡。在韓國也從1996年到2003年12月間在忠清北道陰城發(fā)生鳥類毒感并擴(kuò)散到全國，但由于是弱病原性，因此確認(rèn)為沒有傳染到人體上。
如果發(fā)生鳥類毒感，則全世界大部分國家將進(jìn)行全部數(shù)量的撲殺處理，且發(fā)生國家將不能出口養(yǎng)雞產(chǎn)品。
因此，可以說鳥類流感病毒是危害畜牧業(yè)發(fā)展的罪魁禍?zhǔn)住?br> 口蹄疫是當(dāng)家畜被口蹄疫病毒感染時發(fā)生，2000年也曾發(fā)生在韓國、日本，從2001年開始發(fā)生在英國等全世界范圍內(nèi)。主要發(fā)生地區(qū)為非洲、南美、亞洲、東歐等，2001年8月30日現(xiàn)有OIE認(rèn)可的非發(fā)生國有，美國、加拿大、巴拿馬等北中美國家和挪威(西歐)、澳洲、新西蘭(大洋州)和印度尼西亞、日本(亞洲)等50多個國家，地區(qū)性的被認(rèn)可的有哥倫比亞北西部、菲律賓的棉蘭老島地區(qū)等，施行疫苗的國家有，巴拉圭和巴西、哥倫比亞的部分地區(qū)，就韓國的情況而言，原來僅認(rèn)可濟(jì)舟島地區(qū)，而在2001年9月19日與法國、荷蘭、愛爾蘭等一同被認(rèn)可為施行疫苗的非發(fā)生國(清癥國)，從而恢復(fù)了原來的地位。
上述口蹄疫會使動物的生產(chǎn)性低下，導(dǎo)致經(jīng)濟(jì)損失，故將口蹄疫列為國際貿(mào)易上的限制對象疾病，在國際獸疫事務(wù)局(OIE)歸為A級的15種疾病中，也作為首屈的惡性傳染病，一旦發(fā)生口蹄疫，則難以根治，也沒有特別的治療方法。
為了畜牧業(yè)的發(fā)展，需要開發(fā)一種不僅對上述羅列的病原體而且對成為各種疾病的病原菌和病毒具有高消滅力，并且可以自由地對畜體、飲水等進(jìn)行消毒的安全、適用范圍寬的消毒劑。
天然物意味著未經(jīng)加工的原自然狀態(tài)，歸為GRAS(GenerallyRecognized As Safe)的天然物的使用量或適用食品不受限制，在韓國國內(nèi)是將其歸為天然添加物，作為食品添加物使用。
在韓國以外的國家，天然物作為沒有特別的限定而根據(jù)使用者的意圖可以自由利用的物質(zhì)，其功能性優(yōu)異，因而被應(yīng)用為健康食品和醫(yī)藥品。
蘋果酸作為富含于天然水果中的物質(zhì)，是被美國食品醫(yī)藥安全廳(FDA)認(rèn)證為一般來說安全的物質(zhì)(generally recognized as safe，GRAS)。蘋果酸還被注冊為食藥廳的醫(yī)藥品公告物質(zhì)，因此還可作為醫(yī)藥品的原料使用，在清涼飲料、果蔬罐頭、果汁、糖/口香糖等中作為添加物使用已久。
目前，全世界為了利用天然物質(zhì)開發(fā)出消毒劑而付出了很大的努力，在市售的類似的消毒劑中，作為代表有將蘋果酸、單過硫酸氫鉀復(fù)合物等作為主原料的Bayer Korea的VIRCON-S。
上述VIRCON-S是作為口蹄疫消毒劑最暢銷的、pirbright研究所鑒定的消毒劑，被認(rèn)為不僅對病毒、細(xì)菌、霉等各種病原體顯示出卓越的消滅效果，而且對幼狗、初生雛、乳豬、乳牛等需要安全性的幼家畜也可以直接進(jìn)行噴霧的安全的消毒劑。在每1kg上述消毒劑中含有單過硫酸氫鉀復(fù)合物500g、氯化鈉15g、蘋果酸100g，且消毒時用50～300倍的水稀釋后再使用。
但是，當(dāng)考慮到因化學(xué)制劑的長期使用及環(huán)境污染等眾多因素，病原體的抵抗性隨時間增強(qiáng)的情況時，就應(yīng)持續(xù)開發(fā)和發(fā)展天然物質(zhì)。因而，在本領(lǐng)域中，需要開發(fā)一種不僅與可以消滅各種疾病的病原菌及病毒的市售的消毒劑相比，具有高的殺菌能力和牲口圈消毒，而且可以自由進(jìn)行畜體、飲水消毒等的天然消毒劑。
因此，本發(fā)明者等為了制備對于各種病原體具有高的殺菌能力和畜體消毒能力的天然消毒劑而進(jìn)行潛心研究的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在蘋果酸及單過硫酸氫鉀復(fù)合物中以特定比率含有檸檬酸及酒石酸的組合物，與目前市售的VIRCON-S相比，其消毒能力明顯提高且維持穩(wěn)定性，以至完成了本發(fā)明。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，提供一種在蘋果酸及單過硫酸氫鉀復(fù)合物中以特定比率含有檸檬酸及酒石酸的殺菌及殺病毒組合物。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供包含單過硫酸氫鉀復(fù)合物、六偏磷酸鈉、蘋果酸、檸檬酸及酒石酸的消毒能力得以提高的殺菌及殺病毒組合物。
下面，詳細(xì)地說明本發(fā)明。
就本發(fā)明的殺菌及殺病毒組合物而言，優(yōu)選上述組合物包括單過硫酸氫鉀復(fù)合物(potassium monopersulfate)30～50重量份、六偏磷酸鈉1～20重量份、蘋果酸1～10重量份、檸檬酸1～10重量份、酒石酸1～10重量份。
作為本發(fā)明必需組分之一的單過硫酸氫鉀復(fù)合物(potassiummonopersulfate)作為potassium peroxymonosulfate、potassium sufate及potassium bisulfate的三合鹽，是作為商品名“

的玉手”廣為人知的物質(zhì)，其作為消毒劑的主要成分使用，且易溶于水，是非氯系氧化劑。與氯系氧化劑相比，沒有刺激性氣味，且通過強(qiáng)氧化作用而顯示出很強(qiáng)的消毒效果。
優(yōu)選上述單過硫酸氫鉀復(fù)合物的含量為30～50重量份。如果上述單過硫酸氫鉀復(fù)合物的含量低于30重量份，則存在殺菌及消毒能力微弱的問題，如果高于50重量份，則存在因毒性過強(qiáng)而給人體或家畜帶來危害的問題。
作為本發(fā)明必要成分之一的六偏磷酸鈉，具有易溶于水，且在高溫水溶液中可水解為正磷酸鹽，在聚合磷酸鹽中，其水溶液唯一顯示中性。已知其通常用于維持香腸的保水性、防止果汁的變色、pH緩沖劑、果膠防凝固劑、蛋白質(zhì)分散劑和蔬菜、水果、豆加工品等相關(guān)制品的穩(wěn)定劑中，還可抑制由金屬離子失活引起的微生物的生長。還有，當(dāng)家畜牲口圈或畜產(chǎn)器具及其周邊設(shè)施為金屬時，起到預(yù)防或消除金屬腐蝕的作用，且保護(hù)鐵質(zhì)體的表面而起到預(yù)防鐵質(zhì)體的腐蝕的作用。
在本發(fā)明中，優(yōu)選上述六偏磷酸鈉的含量為1～20重量份。如果上述六偏磷酸鈉的含量低于1重量份，則存在預(yù)防及消除鐵質(zhì)體腐蝕的效果微弱的問題，如果高于20重量份，則存在妨礙抑制金屬的腐蝕的作用的問題。
本發(fā)明的必要成分之一蘋果酸，是通過酸性其殺菌及殺病毒效果被廣為人之的物質(zhì)，美國食品醫(yī)藥安全廳(FDA)已認(rèn)證(Generally RecognizedAs Safe，GRAS)為通常安全，也被稱為馬來酸(maleic acid)。蘋果酸(DL-Maleic acid)的化學(xué)式為C4H6O5、分子量134.09、比重1.601、熔點(diǎn)133℃、沸點(diǎn)150℃(分解)。蘋果酸沒有潮解性，且其酸味度比檸檬酸約強(qiáng)20％，并富含于蘋果和葡萄等天然水果中。如果酸性的蘋果酸投入到微生物中，則微生物為了維持pH提高性而將有機(jī)酸拉進(jìn)微生物內(nèi)。因這一動作，微生物的細(xì)胞質(zhì)成酸性化，對酶促反應(yīng)和物質(zhì)傳遞過程帶來影響，還為提高pH而消耗能量，從而微生物被消滅。還有，蘋果酸具有緩和殺菌消毒劑的氣味和刺激的作用。
在本發(fā)明中，優(yōu)選上述蘋果酸的含量為1～10重量份。如果蘋果酸的含量低于1重量份，則存在緩和作用微弱的問題，如果高于10重量份，則存在反而殺菌及消毒劑的藥效下降的問題。
檸檬酸作為本發(fā)明的必要組分之一，是在眾多植物的核或果汁中以游離態(tài)酸含有的酸，其主要以水果香保存劑、保存性增效劑、pH調(diào)節(jié)劑等多種用途廣泛使用。還有，酒石酸包含于釀造葡萄酒時所沉淀的酒石中，作為清涼飲料廣泛用于糖漿、果汁等，作為醫(yī)藥品用于制劑、緩沖劑、pH調(diào)節(jié)劑等的混合中，但沒有作為消毒劑用途的報告。這些是被收錄于FDA認(rèn)定的通常被認(rèn)為安全的食品添加物(GRSA)目錄中的安全物質(zhì)，它們起到防腐劑的作用而具有防止由各種有機(jī)物引起的腐敗的功效，且與殺菌及消毒劑成分一同滲透時發(fā)揮更強(qiáng)的藥效。因而，通過將這些以適當(dāng)量添加到單過硫酸氫鉀復(fù)合物中，起到通過酸性增進(jìn)單過硫酸氫鉀復(fù)合物的消毒能力的作用。
在本發(fā)明中，優(yōu)選上述檸檬酸及酒石酸的含量分別為1～10重量份。如果檸檬酸及酒石酸的含量低于1～10重量份，則幾乎沒有消毒效果及防止腐敗的效果，如果高于10重量份，則存在殺菌及消毒劑的藥效下降的問題。
在本發(fā)明的殺菌及殺病毒組合物中，為了將殺菌及消毒劑的各種成分均勻地乳化分散于上述組合物中，可以再添加十二烷基磺酸鈉，這時，優(yōu)選上述十二烷基磺酸鈉含量為1～35重量份。
在本發(fā)明的殺菌及殺病毒組合物中，為了改善色香，可以向上述組合物進(jìn)一步添加色素、酯等。
本發(fā)明的殺菌及殺病毒組合物，通過向單過硫酸氫鉀復(fù)合物(potasiummonopersulfate)、六偏磷酸鈉及蘋果酸中添加檸檬酸及酒石酸，與由六偏磷酸鈉、十二烷基苯磺酸鈉、蘋果酸、氯化鈉及氨基磺酸(sulfamic acid)構(gòu)成的、目前廣泛使用的消毒劑VIRCON-S的殺菌能力相比，顯示出增加了約2～4倍的殺菌能力(參照表1～表9)。因而，由于本發(fā)明的殺菌及殺病毒組合物由天然物質(zhì)制備而成，故可以進(jìn)行微生物的生物降解，因此幾乎不會導(dǎo)致環(huán)境污染，且在進(jìn)行有機(jī)物大量處理的條件下，也對于廣泛圍的細(xì)菌及病毒的消毒效果優(yōu)異，因此不僅適用于牲口圈消毒，而且還可以適用于畜體、飲水消毒等。
本發(fā)明的殺菌及殺病毒組合物，可以消滅沙門氏菌、布魯氏菌、大腸菌、巴斯德菌、葡萄球菌等細(xì)菌，可以消除新城疫病毒、鳥類流感病毒、豬奧葉茲基氏病毒、豬霍亂病毒、口蹄疫病毒等病毒。

具體實(shí)施例方式 下面，通過實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明。上述實(shí)施例只是為了例示本發(fā)明，本發(fā)明的范圍并不限定于實(shí)施例。
<實(shí)施例1>殺菌組合物的制備1 用單過硫酸氫鉀復(fù)合物500g、蘋果酸100g、檸檬酸15g、酒石酸10g、六偏磷酸鈉50g及十二烷基苯磺酸鈉319g、少量紅色素及檸檬香粉末，基于大韓藥典制劑總則中的散劑制法，制備了消毒劑。
<實(shí)施例2>殺菌組合物的制備2 除了單過硫酸氫鉀復(fù)合物500g、蘋果酸100g、檸檬酸100g、酒石酸50g、六偏磷酸鈉125g及十二烷基苯磺酸鈉25g以外，通過與實(shí)施例1同樣的方法制備了消毒劑。
<實(shí)驗例1>殺菌效果 <1-1>測定沙門氏菌的殺菌效果 從韓國微生物保存中心(KCCM)獲取作為普通細(xì)菌的代表菌株的沙門氏菌(Salmonella cholearsuis，KCCM41598)并用于試驗。
利用已進(jìn)行高壓滅菌的營養(yǎng)培養(yǎng)基，將試驗菌株在37℃下進(jìn)行22～26個小時的繼代培養(yǎng)后，根據(jù)McFaland方法測定濁度而測出了菌數(shù)，并使用了細(xì)菌的濃度為108CFU/mL以上的樣品。
將上述實(shí)施例1的組合物分為處理區(qū)1、處理區(qū)2、處理區(qū)3、處理區(qū)4、處理區(qū)5，并將處理區(qū)1設(shè)為蒸餾水條件(有機(jī)物無)，將處理區(qū)2設(shè)為硬水條件(有機(jī)物低濃度)，將處理區(qū)3設(shè)為有機(jī)物/硬水條件(有機(jī)物高濃度)，將處理區(qū)4設(shè)為處理區(qū)2及3的對照區(qū)，將處理區(qū)5設(shè)為處理區(qū)1的對照區(qū)，且與各處理區(qū)相對應(yīng)地利用蒸餾水、硬水、5％有機(jī)物稀釋液進(jìn)行了稀釋。這時，以1/100、1/150、1/200、1/250、1/300、1/350、1/400、1/800、1/900、1/1000、1/1100、1/1200及1/1400的稀釋倍數(shù)進(jìn)行了稀釋。
就硬水而言，將CaCl20.305g和MgCl26H2O 0.139g溶于蒸餾水1L后，進(jìn)行高壓滅菌，再保管于4℃，就細(xì)菌用有機(jī)物稀釋液而言，溶于硬水以使含有20％(w/v)酵母提取物后，進(jìn)行高壓滅菌，再保管于4℃。在稀釋消毒劑及稀釋細(xì)菌時，分別用蒸餾水、硬水、5％有機(jī)物進(jìn)行稀釋調(diào)制后，利用1N的NaOH及1N的HCl調(diào)節(jié)pH，使pH為7。就病毒用有機(jī)物稀釋液而言，溶于已滅菌的硬水后再使用，以使含有5％的胎牛血清。
接下來，將在37℃下培養(yǎng)的4ml細(xì)菌，與處理區(qū)相對應(yīng)地和96ml的蒸餾水、硬水、5％有機(jī)物稀釋液進(jìn)行混合，之后取2.5ml混合液，滴加到分別用蒸餾水、硬水、5％有機(jī)物稀釋液稀釋的4℃的消毒劑稀釋液中，并以1∶1混合。消毒劑和病原體的反應(yīng)是在各試管按順序以1分鐘的間隔進(jìn)行，并在4℃下準(zhǔn)確反應(yīng)30分鐘，每10分鐘混合一次，以使充分地發(fā)生反應(yīng)。
準(zhǔn)確反應(yīng)30分鐘后，為了中和消毒劑的效能，立即取出1.0ml，加入到37℃、9.0ml的中和培養(yǎng)基中進(jìn)行混合，之后按照各消毒劑的稀釋倍數(shù)，向裝有營養(yǎng)培養(yǎng)基的5個試管各加入0.1ml進(jìn)行混合，之后在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48個小時。用于中和消毒劑成分的中和培養(yǎng)基使用了在營養(yǎng)培養(yǎng)基中含有5％滅活馬血清的培養(yǎng)基。
對于每一個消毒劑稀釋倍數(shù)，分別在5個營養(yǎng)培養(yǎng)基進(jìn)行實(shí)驗而測定了細(xì)菌被發(fā)現(xiàn)的營養(yǎng)培養(yǎng)基數(shù)目。
就細(xì)菌繁殖與否的判定而言，在上述5個相同消毒劑稀釋倍數(shù)的營養(yǎng)培養(yǎng)基中，將被認(rèn)定為2個以上沒有發(fā)生繁殖的最終消毒稀釋階段作為稀釋倍數(shù)。
通過上述方法測定本發(fā)明的組合物的殺菌效果并表示在表1中。
[表1] 對于沙門氏菌的殺菌效果
如表1所示，可見本發(fā)明的組合物對于沙門氏菌來說，當(dāng)沒有有機(jī)物或有機(jī)物濃度低時(處理區(qū)1或處理區(qū)2)直到1/1100的稀釋倍數(shù)，一直具有殺菌效果，當(dāng)有機(jī)物濃度高時(處理區(qū)3)，直到1/200的稀釋倍數(shù)，一直具有殺菌效果。
<1-2>測定葡萄球菌的殺菌效果 為了評價對于特定細(xì)菌的消毒效力，從韓國微生物保存中心獲取葡萄球菌(Staphylococcus aureus，KCCM40050)并用于試驗中。
與<1-1>同樣的方法進(jìn)行試驗，并將其結(jié)果表示在表2中。
[表2] 對于葡萄球菌的殺菌效果
如表2所示，可見本發(fā)明的組合物對于葡萄球菌來說，當(dāng)沒有有機(jī)物或有機(jī)物濃度低時(處理區(qū)1或處理區(qū)2)直到1/1200的稀釋倍數(shù)，一直具有殺菌效果，當(dāng)有機(jī)物濃度高時(處理區(qū)3)，直到1/250的稀釋倍數(shù)，一直具有殺菌效果。
<1-3>測定大腸菌的殺菌效果 為了評價對于特定細(xì)菌的消毒效力，從韓國微生物保存中心獲取大腸菌(Escherichia coli，KCCM11234)并用于試驗中。
與<1-1>同樣的方法進(jìn)行試驗，并將其結(jié)果表示在表3中。
[表3] 對于大腸菌的殺菌效果
如表3所示，可見本發(fā)明的組合物對于大腸菌來說，當(dāng)沒有有機(jī)物或有機(jī)物濃度低時(處理區(qū)1或處理區(qū)2)直到1/1000的稀釋倍數(shù)，一直具有殺菌效果，當(dāng)濃度高時(處理區(qū)3)，直到1/150的稀釋倍數(shù)，一直具有殺菌效果。
<1-4>測定巴斯德菌的殺菌效果 為了評價對于特定細(xì)菌的消毒效力，從國立獸醫(yī)科學(xué)檢疫院獲取巴斯德菌(Pasteurella multocida type D4)并用于試驗中。
將巴斯德菌接種到已進(jìn)行高壓滅菌的由腦和心臟的浸液制成的培養(yǎng)基(brain hear infusion broth，BHI broth)中，并在37℃下進(jìn)行22～26個小時的繼代培養(yǎng)，之后根據(jù)McFaland等方法測定濁度而測出菌數(shù)，并使用了細(xì)菌的濃度為108CFU/mL以上的培養(yǎng)基上的細(xì)菌。
在試驗方法中，反應(yīng)結(jié)束后為了中和消毒劑的效能，立即取出1.0ml，加入到37℃、9.0ml的中和培養(yǎng)基中進(jìn)行混合，之后按照各消毒劑的稀釋倍數(shù)，向裝有BHI broth的5個試管中各加入0.1ml進(jìn)行混合，之后在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48個小時，除了用于中和消毒劑成分的中和培養(yǎng)基使用了在BHI broth中含有5％滅活馬血清的培養(yǎng)基之外，與<1-1>同樣的方法進(jìn)行試驗，并將其結(jié)果表示在表4中。
[表4] 對于巴斯德菌的殺菌效果
如表4所示，可見本發(fā)明的組合物對于巴斯德菌來說，當(dāng)沒有有機(jī)物或有機(jī)物濃度低時(處理區(qū)1或處理區(qū)2)直到1/1100的稀釋倍數(shù)，一直具有殺菌效果，當(dāng)有機(jī)物濃度高時(處理區(qū)3)，直到1/250的稀釋倍數(shù)，一直具有殺菌效果。
<1-5>測定布魯氏菌的殺菌效果 為了評價對于特定細(xì)菌的消毒效力，從國立獸醫(yī)科學(xué)檢疫院獲取布魯氏菌(Brucella ovis ATCC25840)并使用，將菌株接種到已進(jìn)行高壓滅菌的含5％牛血清的布魯氏培養(yǎng)基(5％bovine serum contained brucellabroth)中，之后在37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行72個小時的繼代培養(yǎng)，之后根據(jù)McFaland等方法測定濁度而測出了菌數(shù)，并將細(xì)菌的濃度為108CFU/mL以上的用于試驗。
在試驗方法中，反應(yīng)結(jié)束后為了中和消毒劑的效能，立即取出1.0ml，加入到37℃、9.0ml的中和培養(yǎng)基中進(jìn)行混合，之后按照各消毒劑的稀釋倍數(shù)，向裝有布魯氏培養(yǎng)基的5個試管各加入0.1ml進(jìn)行混合，之后在37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72個小時，除了用于中和消毒劑成分的中和培養(yǎng)基使用了在布魯氏培養(yǎng)基中含有5％滅活馬血清的培養(yǎng)基之外，與<1-1>同樣的方法進(jìn)行試驗，并將其結(jié)果表示在表5中。
[表5] 關(guān)于布魯氏菌的殺菌效果
如表5所示，可見本發(fā)明的組合物對于布魯氏菌來說，當(dāng)沒有有機(jī)物或有機(jī)物濃度低時(處理區(qū)1或處理區(qū)2)直到1/1000的稀釋倍數(shù)，一直具有殺菌效果，當(dāng)濃度高時(處理區(qū)3)，直到1/200的稀釋倍數(shù)，一直具有殺菌效果。
<實(shí)驗例2>殺病毒效果 <2-1>測定鳥類流感病毒的殺病毒效果 為了評價消毒劑對于病毒的消毒效力，使用了從國立獸醫(yī)科學(xué)檢疫院獲取的病毒H9N2(MS96 strain)。
將病毒株接種到10日齡的SPF含胚卵的尿囊內(nèi)，進(jìn)行繼代培養(yǎng)。在已繁殖的病毒的活力最大的時點(diǎn)(病毒效價107.0/mL以上)采病毒并使用于試驗。
將上述實(shí)施例1的組合物分為處理區(qū)1、處理區(qū)2、處理區(qū)3，在處理區(qū)1準(zhǔn)備蒸餾水條件(有機(jī)物無)，在處理區(qū)2準(zhǔn)備硬水條件(有機(jī)物低濃度)，在處理區(qū)3準(zhǔn)備有機(jī)物/硬水條件(有機(jī)物高濃度)，且與各處理區(qū)相對應(yīng)地利用蒸餾水、硬水、5％有機(jī)物稀釋液進(jìn)行了稀釋。這時，以1/200、1/400、1/600、1/800、1/1000、1/1200、1/1400、1/1600、1/1800及1/2000的稀釋倍數(shù)進(jìn)行了稀釋。
接下來，將含有病毒的尿囊液1.0ml，與處理區(qū)相對應(yīng)地和24ml的蒸餾水、硬水及5％有機(jī)物稀釋液(5％胎牛血清)進(jìn)行混合，之后每隔一分鐘取2.5ml，加入到裝有用蒸餾水、硬水、5％有機(jī)物稀釋液進(jìn)行稀釋的4℃的消毒劑稀釋液的試管中并進(jìn)行混合，之后在4℃下準(zhǔn)確反應(yīng)30分鐘，每隔10分鐘混合一次，以使充分地發(fā)生反應(yīng)。消毒劑的反應(yīng)結(jié)束后，為了中和消毒劑的效能，立即將1份量的消毒液與1份量的50％的非同化胎牛血清混合并使其中和。接下來，利用PBS將上述中和液作為原液、以及稀釋為10-1、10-2、10-3、10-4及10-5，對于每一個消毒劑稀釋倍數(shù)，將中和液0.2ml接種到5個10日齡SPF含胚卵的尿囊內(nèi)，并在37℃的孵化箱內(nèi)培養(yǎng)了5天。每天進(jìn)行檢卵，將接種之后在24小時之內(nèi)死亡的含胚卵作為事故死亡而從試驗成績中除去。通過紅細(xì)胞凝集反應(yīng)最終判定了病毒的存在與否及病毒效價。利用下述數(shù)學(xué)式1的Karber法計算了病毒含量。
[數(shù)學(xué)式] (這時，L1是所測定的最低稀釋液的Log值， L是稀釋液之間Log值的差， S是各稀釋液中病毒的自然死亡％之和。) 重復(fù)進(jìn)行了3次試驗，測定結(jié)果表示在表6中。
[表6] 對于鳥類流感病毒的殺病毒效果

如表6所示，可見本發(fā)明的組合物對于鳥類流感病毒來說，當(dāng)沒有有機(jī)物或濃度低時(處理區(qū)1或處理區(qū)2)直到1/1000的稀釋倍數(shù)，一直具有殺病毒效果，當(dāng)濃度高時(處理區(qū)3)，直到1/400的稀釋倍數(shù)，一直具有殺病毒效果。
<2-2>測定新城疫病毒的殺病毒效果 為了評價對于病毒的消毒效力，從國立獸醫(yī)科學(xué)檢疫院獲取新城疫病毒(Lasota strain)并用于試驗。
除了反應(yīng)后稀釋為10-1、10-2、10-3、10-4、10-5及10-6以外，與<2-1>同樣的方法進(jìn)行試驗，并將其結(jié)果表示在表7中。
[表7] 對于新城疫病毒的殺病毒效果

如表7所示，可見本發(fā)明的組合物對于新城疫病毒來說，當(dāng)沒有有機(jī)物或有機(jī)物濃度低時(處理區(qū)1或處理區(qū)2)直到1/1000的稀釋倍數(shù)，一直具有殺病毒效果，當(dāng)濃度高時(處理區(qū)3)，直到1/400的稀釋倍數(shù)，一直具有殺病毒效果。
<2-3>測定豬奧葉茲基氏病毒的殺病毒效果 為了評價對于病毒的消毒效力，從國立獸醫(yī)科學(xué)檢疫院獲取豬奧葉茲基氏病毒(Yangsan strain)并用于試驗。
使用了在PK-15細(xì)胞株中繼代培養(yǎng)而有活力的豬奧葉茲基氏病毒，預(yù)先試驗空時病毒的含量，并將含量為107.0/ml以上的培養(yǎng)基中的病毒用于試驗，反應(yīng)后使用PK-15細(xì)胞培養(yǎng)用培養(yǎng)基，將中和液稀釋為10-1、10-2、10-3、10-4、10-5及10-6，對于每一個稀釋倍數(shù)，將已中和的反應(yīng)液100μl接種到已形成PK-15單層細(xì)胞的有96個加樣孔(well)的組織培養(yǎng)平板上的5個加樣孔中，接種后在37℃下培養(yǎng)5天，每天用顯微鏡觀察CPE的形成與否，除了最終判定病毒的存在與否以外，與<2-1>同樣的方法進(jìn)行試驗，并將其結(jié)果表示在表8中。
[表8] 對于豬奧葉茲基氏病毒的殺病毒效果

如表8所示，可見本發(fā)明的組合物對于豬奧葉茲基氏病毒來說，當(dāng)沒有有機(jī)物或有機(jī)物濃度低時(處理區(qū)1或處理區(qū)2)直到1/1000的稀釋倍數(shù)，一直具有殺病毒效果，當(dāng)濃度高時(處理區(qū)3)，直到1/400的稀釋倍數(shù)，一直具有殺病毒效果。
<2-4>測定豬霍亂病毒的殺病毒效果 為了評價對于病毒的消毒效力，從國立獸醫(yī)科學(xué)檢疫院獲取豬霍亂病毒(LOM strain)并用于試驗。
使用了在PK-15細(xì)胞株中繼代培養(yǎng)而有活力的豬霍亂病毒，預(yù)先試驗空時病毒的含量，并將含量為107.0/ml以上的培養(yǎng)基中的病毒用于試驗，將病毒液1.0ml，如<2-1>，與各處理區(qū)相對應(yīng)地和19ml的蒸餾水、硬水及有機(jī)物稀釋液(5％胎牛血清)進(jìn)行混合，之后每隔一分鐘取2.5ml，與各處理區(qū)相對應(yīng)地加入到裝有用蒸餾水、硬水、5％有機(jī)物稀釋液進(jìn)行了稀釋的4℃的消毒劑稀釋液的試管中并進(jìn)行混合，之后在4℃下準(zhǔn)確反應(yīng)30分鐘，每隔10分鐘混合一次，以使充分地發(fā)生反應(yīng)。就對照組而言，代替消毒液使用了蒸餾水。接下來，如果反應(yīng)結(jié)束，則為了中和消毒劑的效能，立即向37℃的中和用溶液(含有10％FBS的細(xì)胞培養(yǎng)液)加入同量的反應(yīng)液并混合。
將中和液利用細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋為10-1、10-2、10-3、10-4、10-5及10-6后，對于每一種稀釋倍數(shù)，將已稀釋的溶液50μl接種到5個已形成PK-15單層細(xì)胞的有96個加樣孔(well)的組織培養(yǎng)平板上，在37℃的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5天。除去培養(yǎng)液后固定細(xì)胞，就病毒存在與否及病毒效價而言，利用已接合(conjugate)FITC的CSFV E2單克隆抗體(monoclonal antibody)，評價豬霍亂抗原的存在與否，并最終進(jìn)行了判定。
試驗重復(fù)三次進(jìn)行，并將其結(jié)果表示在表9中。
[表9] 對于豬霍亂病毒的殺病毒效果

如表9所示，可見本發(fā)明的組合物對于豬霍亂病毒來說，當(dāng)沒有有機(jī)物或有機(jī)物濃度低時(處理區(qū)1或處理區(qū)2)直到1/1000的稀釋倍數(shù)，一直具有殺病毒效果，當(dāng)濃度高時(處理區(qū)3)，直到1/400的稀釋倍數(shù)，一直具有殺病毒效果。
因而，本發(fā)明的殺菌及殺病毒組合物，由于在消毒時，如果存在的有機(jī)物多，則以400倍的稀釋倍數(shù)消毒，如果有機(jī)物少，則可以稀釋為1000倍以上再使用，因此與廣泛地作為現(xiàn)有消毒劑使用的VIRCON-S的消毒能力(50～300倍的稀釋倍數(shù))相比，顯示出更優(yōu)異的殺菌及殺病毒效果，從而適用于各種動物用消毒劑、牲口圈消毒劑、口蹄疫、鳥類毒感預(yù)防消毒劑等。
如上面所述，由于本發(fā)明的殺菌及殺病毒組合物由天然物制成，故可以進(jìn)行微生物的生物降解，因此幾乎不會導(dǎo)致環(huán)境污染，且在進(jìn)行有機(jī)物大量處理的條件下，也比起以往廣泛使用的VIRCON-S，對于廣泛的細(xì)菌及病毒的消毒效果更加優(yōu)異，從而不僅可以適用于牲口圈消毒，而且還可以適用于畜體、飲水消毒等中。
權(quán)利要求
1.一種消毒能力得以提高的殺菌及殺病毒組合物，其中包含單過硫酸氫鉀復(fù)合物、六偏磷酸鈉、蘋果酸、檸檬酸及酒石酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的消毒能力得以提高的殺菌及殺病毒組合物，其特征在于，
上述組合物包括單過硫酸氫鉀復(fù)合物30～50重量份、六偏磷酸鈉1～20重量份、蘋果酸1～10重量份、檸檬酸1～10重量份、酒石酸1～10重量份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的消毒能力得以提高的殺菌及殺病毒組合物，其特征在于，
還包含十二烷基磺酸鈉。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的消毒能力得以提高的殺菌及殺病毒組合物，其特征在于，
上述十二烷基磺酸鈉的含量為1～35重量份。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的消毒能力得以提高的殺菌及殺病毒組合物，其特征在于，
上述菌是從沙門氏菌、布魯氏菌、大腸菌、巴斯德菌及葡萄球菌選擇的任意一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的消毒能力得以提高的殺菌及殺病毒組合物，其特征在于，
上述病毒是從鳥類流感病毒、新城疫病毒、豬奧葉茲基氏病毒及豬霍亂病毒、口蹄疫病毒中選擇的至少一種。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種消毒能力得以提高的殺菌及殺病毒組合物，更進(jìn)一步涉及包含單過硫酸氫鉀復(fù)合物、六偏磷酸鈉、蘋果酸、檸檬酸及酒石酸的消毒能力得以提高的殺菌及殺病毒組合物。由于本發(fā)明的殺菌及殺病毒組合物由天然物質(zhì)制成，故可以進(jìn)行微生物的生物降解，因此幾乎不會導(dǎo)致環(huán)境污染，且在進(jìn)行有機(jī)物大量處理的條件下，也比起以往廣泛使用的VIRCON-S對于廣泛的細(xì)菌及病毒的消毒效果更加優(yōu)異，從而不僅適用于牲口圈消毒，而且還可以適用于畜體、飲水消毒等。
文檔編號A01N59/02GK101347126SQ20071018161
公開日2009年1月21日 申請日期2007年10月19日 優(yōu)先權(quán)日2007年7月20日
發(fā)明者李海旻, 吳優(yōu)鉉, 申任澈, 柳洙連 申請人:東部高科技株式會社